課題目標(biāo)本課題通過嘗試對植物或動物組織中的dna進(jìn)行粗提取 了解dna的物理化學(xué)性質(zhì) 理解dna粗提取以及dna鑒定的原理 課題重點與難點課題重點 dna的粗提取和鑒定方法 課題難點 dna的粗提取和鑒定方法 基礎(chǔ)知識 知識要點 1 dna的物理化學(xué)性質(zhì) 尤其是dna的溶解性 2 二苯胺法鑒定dna的方法和原理 1 為什么加入蒸餾水能使雞血細(xì)胞破裂 答 蒸餾水對于雞血細(xì)胞來說是一種低滲液體 水分可以大量進(jìn)入血細(xì)胞內(nèi) 使血細(xì)胞脹裂 再加上攪拌的機械作用 就加速了雞血細(xì)胞的破裂 細(xì)胞膜和核膜的破裂 從而釋放出dna 2 加入洗滌劑和食鹽的作用分別是什么 答 洗滌劑是一些離子去污劑 能溶解細(xì)胞膜 有利于dna的釋放 食鹽的主要成分是nacl 有利于dna的溶解 3 如果研磨不充分 會對實驗結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響 答 研磨不充分會使細(xì)胞核內(nèi)的dna釋放不完全 提取的dna量變少 影響實驗結(jié)果 導(dǎo)致看不到絲狀沉淀物 用二苯胺鑒定不顯示藍(lán)色等 4 此步驟獲得的濾液中可能含有哪些細(xì)胞成分 答 可能含有核蛋白 多糖和rna等雜質(zhì) 5 為什么反復(fù)地溶解與析出dna 能夠去除雜質(zhì) 答 用高鹽濃度的溶液溶解dna 能除去在高鹽中不能溶解的雜質(zhì) 用低鹽濃度使dna析出 能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì) 因此 通過反復(fù)溶解與析出dna 就能夠除去與dna溶解度不同的多種雜質(zhì) 6 方案二與方案三的原理有什么不同 答 方案二是利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白 從而使提取的dna與蛋白質(zhì)分開 方案三利用的是dna和蛋白質(zhì)對高溫耐受性的不同 從而使蛋白質(zhì)變性 與dna分離 觀察你提取的dna顏色 如果不是白色絲狀物 說明dna中的雜質(zhì)較多 二苯胺鑒定出現(xiàn)藍(lán)色說明實驗基本成功 如果不呈現(xiàn)藍(lán)色 可能所提取的dna含量低 或是實驗操作中出現(xiàn)錯誤 需要重新制備 本實驗提取的dna粗制品有可能仍然含有核蛋白 多糖等雜質(zhì) 對于不同的實驗方法 本課題可以采用分組的方法進(jìn)行研究 首先選取不同的實驗材料 其次同種材料還可以采用不同方法 從多方面比較實驗結(jié)果 如dna的純度 dna的顏色 二苯胺顯色的深淺等 看看哪種實驗材料 哪種提取方法的效果更好 答 提取dna的第一步是材料的選取 其目的是一定要選取dna含量較高的生物材料 否則會由于實驗過程中或多或少的損失而造成檢測的困難 第二步是dna的釋放和溶解 這一步是實驗成功與否的關(guān)鍵 要盡可能使細(xì)胞內(nèi)的dna全部溶解 第三步是dna的純化 即根據(jù)dna的溶解特性 對酶及高溫的耐受性的不同等特性 最大限度地將dna與雜質(zhì)分開 最后一步是對dna進(jìn)行鑒定 這是對整個實驗的結(jié)果的檢測 答 提取蛋白質(zhì)比提取dna的難度大 這是因為 與dna相比 蛋白質(zhì)對溫度 鹽濃度 ph等條件要敏感得多 很容易失活 并且蛋白質(zhì)的空間