1、 一一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?二二 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理(yunl)(yunl) 三三 實(shí)驗(yàn)材料與儀器實(shí)驗(yàn)材料與儀器 四四 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 五五 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 六六 思考題思考題第1頁/共12頁第一頁，共13頁。 一 實(shí)驗(yàn)(shyn)目的 學(xué)習(xí)BCA法測定蛋白質(zhì)濃度的基本 原理(yunl) 掌握BCA法測定蛋白質(zhì)的技術(shù)第2頁/共12頁第二頁，共13頁。二 實(shí)驗(yàn)(shyn)原理BCA (bicinchoninic acid，二辛可酸)法測定蛋白質(zhì)即在堿性條件下蛋白質(zhì)與Cu2+絡(luò)合，并將其還原成Cu1+。Cu1+和BCA試劑(shj)反應(yīng),使其由原來的蘋果綠形成穩(wěn)定的紫藍(lán)色復(fù)合物，在562 nm有強(qiáng)

2、烈的光吸收，且吸光值和蛋白質(zhì)濃度在廣泛范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，因此可用于蛋白質(zhì)濃度測定。第3頁/共12頁第三頁，共13頁。其反應(yīng)式為: 蛋白質(zhì)+BCA試劑+Cu2+ 復(fù)合物 混合物由蘋果綠變?yōu)樽咸m色復(fù)合物BCA測定蛋白質(zhì)的范圍是20g/ml200g/ml，微量BCAg/ml 10g/ml。 此方法被科研工作者廣泛(gungfn)選用第4頁/共12頁第四頁，共13頁。 三 實(shí)驗(yàn)(shyn)器材與試劑1器材: 分光光度計(jì)；恒溫水浴箱；槍式移液管；試管13支；吸管2ml 1支、0.1ml 3支試劑: 試劑A；試劑B；蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)(biozhn)液；待測樣品第5頁/共12頁第五頁，共13頁。 四 實(shí)驗(yàn)(

3、shyn)步驟1. 取試管(shgun)13支，編號(hào)（除空白管只做1管外，其它各號(hào)測定管均重復(fù)做兩管），按下表操作并記錄：第6頁/共12頁第六頁，共13頁。管號(hào)試劑(l)空白管標(biāo)準(zhǔn)管測定管21222324252蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液(1.5mg/ml)20406080100蒸餾水(ml)100604020待測樣品(ml)100BCA工作液(ml)2.02.02.02.02.02.02.0 混勻后，在攝氏度下保溫(bown) 分鐘，比色測定BCA法測定蛋白質(zhì)含量(hnling)第7頁/共12頁第七頁，共13頁。2以蛋白質(zhì)含量為橫坐標(biāo)，光吸收值為縱坐標(biāo)繪制(huzh)標(biāo)準(zhǔn)曲線3用測定管平均光吸收值在標(biāo)準(zhǔn)曲線

4、上查出相應(yīng)的蛋白質(zhì)含量，計(jì)算求出該待測血清(xuqng)蛋白質(zhì)的含量(g/L)。4從標(biāo)準(zhǔn)管中選擇一管與測定管光吸收值相接近者，按比色法計(jì)算公式計(jì)算求出該待測血清(xuqng)的蛋白質(zhì)濃度(g/L)。第8頁/共12頁第八頁，共13頁。 試比較法、雙縮脲法、Lowery法的異同.為什么法常用(chn yn)與科研？與其他方法相比它有什么特點(diǎn)和優(yōu)勢？第9頁/共12頁第九頁，共13頁。 特點(diǎn)：1.操作簡便( jinbin)快速，比經(jīng)典的lowry法快4倍2.靈敏度高ug3.準(zhǔn)確，試劑穩(wěn)定性好，在20ug/ml2000ug /ml 濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系4.經(jīng)濟(jì)實(shí)用，可在微孔板中進(jìn)行，待測樣品體積為1ul20ul，大大節(jié)約樣品和試劑用量5.抗干擾能力較強(qiáng)，不受絕大部分樣品中的去污劑、尿素等化學(xué)物質(zhì)影響第10頁/共12頁第十頁，共13頁。第11頁/共12頁第十一頁，共13頁。感謝您的觀看(gunkn)！第12頁/共12頁第十二頁，共13頁。NoImage內(nèi)容(nirng)總結(jié)一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?。?頁/共12頁。第2頁/共12頁。BCA (bicinchoninic acid，二辛可酸)法測定蛋白質(zhì)即在堿性條件下蛋白質(zhì)與Cu2+絡(luò)合，并將其還原成Cu1+。Cu1+和BCA試劑反應(yīng)(fnyng),使其由原來的蘋果綠形成穩(wěn)定的紫藍(lán)色復(fù)合物，在562 nm有強(qiáng)烈的光吸