1、細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)2、絨毛、羊水細(xì)胞培養(yǎng)基配置 胎牛血清 20% 1640、HamF10培養(yǎng)基原液 80%二、細(xì)胞培養(yǎng)方法1、人外周血淋巴細(xì)胞染色體制備 1）方法 靜脈血0.3/5ml培養(yǎng)基 37培養(yǎng)72小時(shí) 收細(xì)胞前2-3小時(shí)加秋水仙素 制片，染色2）特點(diǎn) 取材方便、方法穩(wěn)定、易掌握和推廣3）意義 檢查該個(gè)體體細(xì)胞核型2、羊水細(xì)胞染色體制備 羊水細(xì)胞主要來(lái)自胎兒皮膚、胃腸道、呼吸道、泌尿生殖道的粘膜上皮。1）方法：培養(yǎng)15天左右2）特點(diǎn)： （1）孕期為16-20周取材，B超監(jiān)測(cè)取材，專人操作。 （2）培養(yǎng)15天左右 （3）方法復(fù)雜、設(shè)備較昂貴、成功率較低。3）安全性： 流產(chǎn)率約1%左右4) 意義

2、：檢測(cè)胎兒核型3、絨毛細(xì)胞染色體制備 絨毛為受精卵經(jīng)有絲分裂衍生出來(lái)的胎兒附屬結(jié)構(gòu)1）方法：直接法 培養(yǎng)法：短期和長(zhǎng)期培養(yǎng)2）特點(diǎn)： （1）孕8-10周取材，B超檢測(cè)，嚴(yán)格無(wú)菌，專人操作。 （2）培養(yǎng)15天左右或直接制片 （3）直接法較為簡(jiǎn)單，可避免母體污染，但染色體形態(tài)較差，分裂期細(xì)胞少。3）安全性： 流產(chǎn)率約2-4%4）意義： 檢測(cè)胎兒核型，進(jìn)行早期診斷。4、骨髓細(xì)胞染色體制備技術(shù) 直接法或培養(yǎng)法 意義： （1）血液病的染色體異常檢測(cè) （2）骨髓細(xì)胞染色體畸變作為遺傳物質(zhì)受損檢測(cè)指標(biāo)較為靈敏。三、染色體顯帶技術(shù)1、Q顯帶1）特點(diǎn)： 熒光染料染色 1、9、16號(hào)染色體著絲粒區(qū)和Y染色體長(zhǎng)臂部

3、分區(qū)域熒光明顯2）優(yōu)點(diǎn)：帶紋清晰3) 缺點(diǎn): 試劑儀器價(jià)高,帶紋易退色2、G顯帶1）特點(diǎn)： 胰酶處理、Giemsa染色、帶紋與Q帶相似2）優(yōu)點(diǎn)： 制作方便、費(fèi)用低廉、標(biāo)本易保存3）缺點(diǎn)： 帶紋不及Q顯帶清晰3、C顯帶 著絲粒區(qū)深染 確定著絲粒數(shù)目和位置 1、9、16著絲粒區(qū)深染而大 Y染色體長(zhǎng)臂部分深染四、熒光原位雜交技術(shù)fluorescence in-situ hybridization, FISH 1、基本原理 指利用已進(jìn)行熒光標(biāo)記的探針與細(xì)胞、組織切片上的核酸進(jìn)行雜交，檢測(cè)特異序列的DNA或RNA。 它是在細(xì)胞遺傳學(xué)、分子遺傳學(xué)和免疫學(xué)相結(jié)合的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)技術(shù)。2、探針標(biāo)記的方法

4、 直接法進(jìn)行標(biāo)記 間接法進(jìn)行標(biāo)記3、 FISH技術(shù)的特點(diǎn) 操作操作簡(jiǎn)便,探針標(biāo)記后穩(wěn)定,一次標(biāo)記后可使用二年. 方法敏感,能迅速得到結(jié)果. 在同一標(biāo)本上,可同時(shí)檢測(cè)幾種不同探針. 不僅可用于分裂期細(xì)胞染色體數(shù)量或結(jié)構(gòu)變化的研究,而且還可用于間期細(xì)胞的染色體數(shù)量及基因改變的研究. 4、FISH在細(xì)胞遺傳學(xué)中的應(yīng)用（1）重復(fù)序列的探針（衛(wèi)星(satellite)探針） 衛(wèi)星DNA探針主要檢測(cè)人染色體的著絲粒 衛(wèi)星DNA位于端著絲粒染色體及各號(hào)染色體的異染色體質(zhì)周圍 經(jīng)典衛(wèi)星DNA(classic-saiellite DNA)位于染色體1、9、15、16和Y染色體長(zhǎng)臂異染色質(zhì)周圍 臨床應(yīng)用： 羊水細(xì)

5、胞可不培養(yǎng)直接篩查21三體Down氏綜 合片）18三體（Edward綜合征），13體（Patau 綜合征），45、XO(Torner氏綜合征)和47XXY（Klinfelter綜合征）。 （2）單一序列探針 確定堿基突變、基因缺失、基因定位 （3）全染色體探針(whole chromosome painting probe,WCP) 又稱染色體涂染探針 確定染色體結(jié)構(gòu)畸變 染色體分析技術(shù)一、選擇分散程度較好、形態(tài)規(guī)整的分裂相。 能區(qū)分染色體的大小和著絲粒位置二、對(duì)20-30個(gè)分裂相進(jìn)行染色體計(jì)數(shù)。 對(duì)不同染色體數(shù)目的分裂相進(jìn)行記錄 辨別制片時(shí)染色體丟失還是核型異常三、選擇分裂相進(jìn)行核型分析。 外周血淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)分析20個(gè)分裂相，分析5個(gè)核型，骨髓細(xì)胞分析20個(gè)核型。 染色體數(shù)目異常時(shí)，2個(gè)以上分裂相具有相同核型視為異常。四、染色體檢測(cè)報(bào)告 報(bào)告單位 姓名、性別、年齡 主要臨床癥狀、本人有害有毒射線等接觸史、親屬中流產(chǎn)和遺傳病史 核型圖 結(jié)果、分析者、復(fù)