1、微生物檢測手段及留意事項微生物的檢測，無論在理論爭辯還是在生產實踐中都具有重要的意義，本文對生長量測定法、微生物計數法、生理指標法和商業(yè)化快速微生物檢測簡要介紹了利用微生物重量，體積，大小，生理代謝物等指標優(yōu)缺點。一個微生物細胞在適宜的外界條件下，不斷的吸取養(yǎng)分物質，并按 自己的代謝方式進展陳代謝。假設同化作用的速度超過了異化作用， 則其原生質的總量重量，體積，大小就不斷增加，于是消滅了個體 長時，則到達肯定程度后就會發(fā)生生殖，從而引起個體數目的增加，這 長，就引起了這一群體的生長，這可從其體積、重量、密度或濃度作指 質含量的增加，所以測定的方法也都直接或間接的以次為依據，而測定 體積，密度，

2、濃度，做指標來進展衡量。微生物計量法體積測量法又稱測菌絲濃度法，通過測定肯定體積培育液中所含菌絲的量來反映微生物的生長狀況。方法是，取肯定量的待測培育液如10 mL放5 min如 500010-v/10 偏差。稱干重法可用離心或過濾法測定。一般干重為濕重的 1020%。在離心法中，15 次，進展枯燥。枯燥可用烘箱在 105 100 80 40 下真空枯燥，枯燥后稱重。如用過濾法，絲狀真菌可用濾紙過濾，細菌可用醋酸纖維40 發(fā)法較為煩瑣，通常獵取的微生物產品為菌體時，常承受這種方法，如活性干酵母Activity Dry Yeast, ADY,一些以微生物菌體為活性物質的飼料和肥料。比濁法微生物的

3、生長引起培育物混濁度的增高。通過紫外分光光度計測定肯定波長下的吸光值，推斷微生物的生長狀況。對某一培育物內的菌體光電比色計的比色座孔中，即可隨時測定其生長狀況，而不必取菌液。該法主要用于發(fā)酵工業(yè)菌體生長監(jiān)測。如使用UNICO 公司的紫外-可見 600 nm 處用比色管定時測定發(fā)酵液的吸光光度值OD，以此監(jiān)控E.coli 的生長及誘導時間。600菌絲長度測量法對于絲狀真菌和一些放線菌，可以在培育基上測定肯定時間內菌絲的培育基，臥放，在開口的一端接種微生物，一段時間后記錄其菌絲生長長度，借此衡量絲狀微生物的生長。微生物計數法血球計數板法血球計數板是一種有特別構造刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四0.

4、1 mm0.1 mm2 面積上刻有400 個小方格。通過油鏡觀看，統計肯定大格內微生物的數量，即可算1 mL 菌液中所含的菌體數。這種方法簡便，直觀，快捷，但只適宜結果是包括死細胞在內的總菌數。染色計數法為了彌補一些微生物在油鏡下不易觀看計數，而直接用血球計數板數。如酵母活細胞計數可用美藍染色液，染色后在顯微鏡下觀看，活細胞為無色，而死細胞為藍色。比例計數法將顆粒如霉菌孢子或紅細胞濃度的液體與一待測細胞濃度未知菌液的細胞濃度。這種計數方法比較粗放。并且需要配制顆粒濃度的懸液做標準。液體稀釋法對未知菌樣做連續(xù)十倍系列稀釋，依據估量數，從最適宜的三個連10 5 mL 1 mL 3 15 只裝培育液

5、的試管中，經培育后記錄每個稀釋度消滅生長的試管數，然后查最大或然數表MPNMostProbableNumber得出菌樣的含菌數，依據樣品稀釋倍數計算出活菌含量。該法常用于食品中微生物的檢測，例如飲用水和牛奶的微生物限量檢查。平板菌落計數法這是一種最常用的活菌計數法。將待測菌液進展梯度稀釋，取肯定9 cm 的平板上消滅50500 菌進展了一次分別培育，獲得了單克隆。試劑紙在平板計數法的根底上，進展了小型商品化產品以供快速計數用。 2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑TTC，無色待蘸取測試法計數快捷準確，相比而言避開了平板計數法的人為操作誤差。膜過濾法用特別的濾膜過濾肯定體積的含菌樣品，經丫叮橙染色，

6、在紫外顯3.間接測定法微生物的生長伴隨著一系列生理指標發(fā)生變化，例如酸堿度，發(fā)酵液中的含氮量，含糖量，產氣量等，與生長量相平行的生理指標很多， 生物量。測定含氮量12.5%7.5%6.0%。依據含氮量6.25，即可測定粗蛋白的含量。含氮量的測定方法有很多，222如用硫酸，過氯酸，碘酸，磷酸等消化法和Dumas 測N 氣法。Dumas 測N 氣法是將樣品與CuO 混合，在CO 氣流中加熱后產生氮氣，收集在呼吸計中，用KOH吸去CO 后即可測出N222測定含碳量22將少量0.22.0 mg1 mL 水或無機緩沖液中，2 mL 2%的K Cr O 100 30 5mL580 nm 22復原糖測定法復

7、原糖通常是指單糖或寡糖，可以被微生物直接利用，通過復原糖3 分鐘，取出加少許鹽酸酸化，參加Na S O接近終點時加2 23入淀粉溶液，連續(xù)加NS O 至終點，查表讀出復原糖的含量。氨基氮的測定a2230.02 mol/L的NaOH 18%的中性甲醛，反響數刻，0.02 mol/L NaOH 培育液中氨基氮的含量，可間接反映微生物的生長狀況。其他生理物質的測定產CO2用標記葡萄糖做基質，耗氧，黏度，產熱等指標，都可用于生長量的測定。也可以依據反響前后的基質濃度變化，最終產氣量，微生物活性三方面的測定反映微生物的生長。如在BMP-2 的發(fā)酵生產上，隨時監(jiān)測溶氧量的變化和酸堿度的變化，推斷細菌的長勢

8、。商業(yè)化快速微生物檢測法微生物的檢測，其進展方向是快速，準確，簡便，自動化，當前很多和科學爭辯領域。例如：試劑盒，培育基等手段抗干擾培育基和微生物數量快速檢測技術結合解決了傳統微生物 定了堅實的根底。如：抗干擾微生物培育基，型生化鑒定管，微生物計數卡，環(huán)境質量檢測試劑盒等，可便利的用于多項檢測。借助型先進儀器BACTOMETER 全自動各類總菌數及快速細菌檢測系統可以數小時內同樣高度敏感原理是利用電阻抗法Impedance Technology將待測樣本與培育基置于反響試劑盒內，底部有一對不銹鋼電極，測定因微生物生長大腸桿菌群，霉菌，乳酸菌，嗜熱菌，革蘭氏陰性菌，金黃色葡萄球菌等。微生物OD

9、值是反映菌體生長狀態(tài)的一個指標，OD 是Optical Density光密度400700 nm 都的是：505 nm 測菌絲菌體、560 nm 測酵母、600 nm 測細菌。用測OD 方依據10 10 管，然后每個點取一管出來測OD值就行了。一般測菌體密度的OD 580 nm-660 nm，如枯草芽孢桿 200 nm400 nm 為紫外光區(qū)，400 nm800 nm 為可見光區(qū)?？瞻兹缬盟?，需要離心洗滌菌體；空白如用不以求條件全都，最終留意一般OD 0.10.4 OD 1.0OD 太大，分光光度計的靈敏度就會顯著降低。一般都測吸光值，而且最好是整個試驗過程中，保持發(fā)酵液或菌體3 次的數最好。

10、OD 600 nm600 nm 處對濁度的反響比較靈敏。測吸取峰的實際意義并不大，比方LB 搖瓶培育過夜的大400 多納米處的吸取最大，但那很可能是培育液的吸取峰。局部發(fā)酵產品配方和工藝(二)纖維素酶GD-6。 3040 h。1.00.2(N42HPO40.22HPO40.02， 0.08%，MgSO4 0.09%，pH 5.56.0，2830140 h。黃原膠菌種：黃單孢菌。4%0.05%0.02% 115轉/0.5 公斤，最高通1:0.5/7.0 ,72 14600 mPas左右。 MgSO4 0.15%。發(fā)酵參考環(huán)境：5100 140 轉/1:0.5/分，罐壓 細菌纖維素菌種：Aceto

11、bacter xylinum NUST4。2.4%2.2%1.6%，醋酸 0.24%， Na2HPO4 3.5%，KH2PO4 0.1%，MgSO4 0.6%，FeSO40.0015%，pH6.0。Mg2+最 g/L Fe2+0.003 g/L煙酸、0.02 9.87 g/L。1.1812。5.0%1.5%0.2%，Na2HPO4 0.2%， 0.03%1%。pH 6.828 62 g/。 0.5%乙酸反復沖洗，即獲細菌纖維素。頭孢菌素菌種：頂頭孢霉。 6.6。CaCO3MgS4，(NH4)2S04，FeSO4，MnSO4，ZnSO4，CuSO4，pH6.06.1。發(fā)酵參考環(huán)境：5100 11

12、5轉/0.5 公斤，最高通1:1/分，pH6 150 小時。螺旋霉素菌種：螺旋霉素鏈霉菌。發(fā)酵參考環(huán)境：5100 115轉/0.5 公斤，最高通 小時左右。依據螺旋霉素生物合成的爭辯結果，短鏈48 h 0.5%濃度的乙10%效價。在培育 48 h 時參加較在根底料中參加更能提高螺旋霉素發(fā)酵效價，豆油1%為好。利福霉素菌種：地中海諾卡氏菌。各種無機鹽適量。 115轉/0.5 公斤，最高通1:1/130 小時左右。紅霉素菌種：紅色鏈霉菌。4%1%，無機鹽適量。442%，CaCO3 0.6，(NH4)2SO4 0.15%，KH2PO4 0.02，NaC10.2%，MgSO4 0.02%。發(fā)酵參考環(huán)境

13、：10100噸罐，攪拌轉速115轉/分，最高通風量1:1/分，pH 潔霉素菌種：鏈霉菌。2.5%0.6%，(NH4)2SO4 0.5%，NaNO3 4%， 0.9%2.5%3%，KH2PO4 0.07%。發(fā)酵參考環(huán)境：5100 100 轉/1:0.5/分，罐壓0.7公斤，pH6.57，培育溫度：060h，31；60130h，30；130h至31 130 mPas150 小時。土霉素30.658%(N42SO41.2NaCl 0.2， 0.015%CoCl2 510 g/噸。發(fā)酵參考環(huán)境：5100 140 轉/1:0.7/分，罐壓0.7公斤。環(huán)孢素 0.15%，KH2PO4 0.2%，KCl 0

14、.05%，MgSO4 0.005%，CaCO30.2%。發(fā)酵參考環(huán)境：5100 140 轉/1:0.7/分，罐壓 CyA的生物合成量影響格外大。納他霉素菌種：褐黃孢鏈霉菌。培育基：大豆蛋白胨l.8%0.45%3.6%，pH 7.5。發(fā)酵時間96 h左右。慶大霉素菌種：慶大小單孢菌。4230.3(N42SO40.1， 0.5%CoCl2 810 g/噸。 轉/1:1/0.5 小時。金霉素菌種：金色鏈霉菌。 0.004%，NaCl 0.25%，(NH4)2SO4 0.5%，CaCO3 0.7%，蛋白1.00.2MgS4 0.0254.0 mL/100m290.5 166 h。小諾霉素菌種:棘孢小單

15、孢0.1%2%0.2%，淀粉4%，pH7.5。4%1.5%2.5%，0.05%，pH7.2。四環(huán)素KH2PO4，每罐外加二巰基NaBr。發(fā)酵參考環(huán)境：5100 140 轉/1:0.7/分，罐壓0.7公斤，pH6.0左右。局部發(fā)酵產品配方和工藝(一)赤霉素發(fā)酵1060 115 轉/1:1/29 32 pH 5.5 pH 3.54.5之間為宜。1.5%1.5%1.0%，KH2PO4 0.1%， 0.05%，MgSO4 0.1%pH值。7.0%1.0%，KH2PO4 0.15%，MgS40.08，0.003，pH 5.5.5 130 小時阿維菌素：3.02.00.2CoC262O 0.5 ppm，

16、pH 7.07.2。5.0l.0l.01.0CaCO30.2， CoCl26H2O0.5 ppm，pH 7.07.2。妥布霉素發(fā)酵菌種：黑暗鏈霉菌。(N42SO40.50.4MgS40.61.0ZnS40.05CaCO30.6，37 112 h 左右。氫化可的松菌種：藍色犁頭霉(AS365)1.0%0.23%1.5%0.5%，pH 6.6.5。28 24 h0.25RSA醋酯化合物：17羥基孕甾醋酸酯，RSA，3642 h。寧南霉素菌種：諾爾斯鏈霉菌西昌變種21.0%1.02HPO40.5， 0.5%，NaCl 0.5%，CaCO3 0.5%0.01%2.0%，滅菌前pH 7.27.4。2.0

17、3.00.012HPO4 0.02%，CaCO30.03%pH 7.0。2.0%1.0%3.5%0.05%，K2HPO40.02%，MgSO40.05%，(NH4)2SO40.25%，CaCO30.5%，初始pH7.0。發(fā)48 h 到達發(fā)酵頂峰。多抗霉素 0.1%，CaCO3 0.3%，pH 6.5。10接種量，28，120h。BT30；發(fā)酵前期pH7.01:2.0 v/(vmin)1:2.0 v/(vmin)高 1010/mL)；1:0.5、1:1.0v/(vmin)，更有利于菌體向芽孢及伴孢晶體轉化(98以上)。 0.5%1.5%，NaCl 0.5%1.0%，pH7.2。衣康酸菌種：土曲霉

18、。發(fā)酵參考環(huán)境：5100 100 轉/1:0.2/分，罐壓0.7公斤，pH4.0左右。90 小時。曲酸菌種：黃曲霉。發(fā)酵參考環(huán)境：5100 100 轉/1:0.2/分，罐壓0.7公斤，pH4.0左右。130 小時。菌種：米曲霉。利用豆渣的發(fā)酵培育基：豆渣 80%，麩皮 24%，酵母膏 1.2%，MgSO47H2O0.16%，pH自然；30發(fā)酵培育，56 d 菌體生長量和曲酸產量最大。120.5MgS47H2O 曲酸產量最大。檸檬酸菌種：黑曲霉。 轉/1:1/0.7pH3 左右；143436 90 小時。谷氨酸菌種：谷氨酸棒桿菌。 轉/1:1/0.7pH7.0 左右；培育基主要成分：葡萄糖 13

19、%，MgSO47H2O 0.08%，KH2PO4 0.08%，玉米0.5%1%3%5%，KCl 0.1%30 小時。賴氨酸菌種：谷氨酸棒桿菌。 轉/1:1/0.7pH7.0 左右。種子培育基：葡萄糖 1.5%，(NH4)2SO4 0.4%，MgSO47H2O 40 mg，玉米漿，尿素 ，豆?jié)鈖H 7.27.4，11515 min。發(fā)酵培育基：葡萄糖 15.0%，(NH4)2SO4 3.5%，MgSO47H2O 20 mg，玉米漿2.5，乙酸銨0.920 g2HP40.15，豆?jié)?.6pH7.7.4。 11515 min。堿性蛋白酶菌種：芽孢桿菌10.5N2HPO40.4K2PO40.03， 0.1%，pH中性，12125 min。II2%3%3%，Na2HPO4 0.4%， 0.1%，pH 8.0，12125 min。5%2.5%，KH2PO4 0.03%， 0.4%，Na2CO3 0.1%pH。36 1:0.151:0.240 h 左右。低溫堿性蛋白酶菌種：黃海黃桿菌。I：豆餅粉(0.5% NaOH，121 30 min，冷卻、 0.4%，KH2PO40.03%，Na2CO3 0.1%， 0.02%，CaCl2 0.2%，泡敵適量，