1、實驗診斷實習(xí)(shx)二紅細(xì)胞、網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測第一頁，共三十三頁。實習(xí)二紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測目的(md)和要求熟悉正常紅細(xì)胞和網(wǎng)織紅細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特點掌握(zhngw)血紅蛋白測定方法、參考值和臨床意義 掌握血細(xì)胞多參數(shù)報告單的正常值及其增減的臨床意義第二頁，共三十三頁。實習(xí)二紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測紅細(xì)胞計數(shù)(j sh)(red blood cell count)紅細(xì)胞計數(shù)是取一定微量血液，經(jīng)稀釋后計算出血液內(nèi)所含紅細(xì)胞數(shù)目原理(yunl)：用等滲稀釋液將全血稀釋至一定倍數(shù)，充入血細(xì)胞計數(shù)池，在光學(xué)顯微鏡下計數(shù)一定體積內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)，經(jīng)換算求出每升血液中的紅細(xì)胞數(shù)量方法：顯微鏡計數(shù)法第三頁，共三十三

2、頁。實習(xí)二紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測器材(qci)及試劑： 取血吸管，一次性定量(dngling)采血管 (20ul) 計數(shù)板：是一塊厚玻璃制成，板上刻度分為 9 個大方格面積為 Imm 2 。中央大方格用于紅細(xì)胞計數(shù)，被雙線等分成 25 個中方格，每個中方格又劃分為 16 個小方格 。計數(shù)板與蓋玻片組成計數(shù)池，計數(shù)池深度為 0.1mm 顯微鏡 、蓋玻片、刺血針、棉花等 小試管、刻度吸管 、紅細(xì)胞稀釋液。 其它 : 75% 酒精棉球及干棉球第四頁，共三十三頁。實習(xí)二紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測操作(cozu) : 取血： 選擇耳垂邊緣或指端，先用75%酒精(jijng)棉球消毒局部皮膚。等待干后，用消毒后的

3、刺血針刺入皮膚，深約 2 毫米。待血液從針孔流出，用于棉花擦去第一滴血 輕輕擠壓，使血液流出形成綠豆大小的血滴。操作者用右手平拿取血吸管尖端浸入血滴中，緩緩吸血恰至“ 10 ”刻度處為止。然后用干棉花擦凈吸管外沾附的血液第五頁，共三十三頁。實習(xí)二紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測稀釋及混勻 先準(zhǔn)備一清潔小試管，精確滴入紅細(xì)胞稀釋液 1.99 毫升，備用 將取好的血液立即擠入上述試管中，并來回吸取小量稀釋液數(shù)次，以便將殘余在吸管中的血液全部(qunb)洗凈 搖動試管，充分混勻。此時血液被稀釋 200 倍第六頁，共三十三頁。實習(xí)二紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測充池先將計數(shù)板及蓋玻片擦干凈，并將蓋玻片復(fù)蓋于計數(shù)池上面。 用

4、吸管吸取己充分混勻的稀釋血液一滴，滴于蓋玻片的下方邊緣處，稀釋血液即充填入計數(shù)池中。注意勿發(fā)生(fshng)氣泡或使稀釋血液流入計數(shù)池旁小槽內(nèi) 靜置 2 3 分鐘，待紅細(xì)胞完全下沉穩(wěn)定后進(jìn)行計數(shù)第七頁，共三十三頁。實習(xí)二紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測計數(shù)平放計數(shù)板于顯微鏡臺上，先用低倍鏡找到計數(shù)池的中央大方格。觀察紅細(xì)胞是否均勻，并調(diào)整至視野中間(zhngjin)。 再轉(zhuǎn)換高倍鏡計數(shù)。鏡下紅細(xì)胞為圓形或盤形、略帶黃色的細(xì)胞。如將上側(cè)線和左側(cè)線上的紅細(xì)胞都計數(shù)在內(nèi)，則不要再將下側(cè)和右側(cè)線上的細(xì)胞計入 。計數(shù)時必須按一定方向和順序，以免將紅細(xì)胞重復(fù)計數(shù)或漏數(shù)。 計數(shù) 5 個中方格 ( 即四角的及中央的中方格

5、 ) 由紅細(xì)胞總共的個數(shù)，將其結(jié)果乘以 10 。即得每立方毫米血液中所含紅細(xì)胞數(shù)目，再乘以 10 。即得每升血液中所含紅細(xì)胞數(shù)目。第八頁，共三十三頁。實習(xí)二紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測每升血液中紅細(xì)胞數(shù)目 = 五個中方格內(nèi)紅細(xì)胞個數(shù) 5( 變?yōu)?0.1u1) 10 ( 變?yōu)?1 u1) 10 6 ( 變?yōu)?1L) 200( 稀釋倍數(shù) )= 五個中方格內(nèi)紅細(xì)胞個數(shù) 10 10 清潔儀器： 計數(shù)后，將蓋玻片及計數(shù)板用水沖洗干凈，再用綢或細(xì)布擦干吸管先用蒸餾水，繼用 95% 酒精(jijng)，后用乙醚洗滌干凈，保存?zhèn)溆玫诰彭?，共三十三頁。實?xí)二紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測注意事項不能在有水腫、炎癥、淤血等部位或刺

6、血過淺處采血 所用吸管、試管、滴管及血細(xì)胞計數(shù)板須干凈無水 操作迅速，充池一次完成，不能有氣泡 紅細(xì)胞分布不均，每個中方格(fn )之間相差大于 20 個時要重新充池計數(shù)第十頁，共三十三頁。實習(xí)二紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測血紅蛋白(xuhng dnbi)測定方法：氰化高鐵血紅蛋白(xuhng dnbi)測定法原理：血紅蛋白(Hb)被高鐵氰化鉀K3Fe(CN)6氧化為高鐵血紅蛋白（Hi），Hi與氰離子結(jié)合成氰化高鐵血紅蛋白（HiCN） HiCN在540nm有一吸收峰測定其光密度而得血紅蛋白濃度第十一頁，共三十三頁。實習(xí)二紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測試劑(shj)與器材器材：分光光度計試管(shgun)，試管(

7、shgun)架取血吸管:一次性定量采血管 (20ul)刺血針 蒸餾水75%酒精及干棉球試劑：氰化高鐵血紅蛋白稀釋劑高鐵氰化鉀(ti qn hu ji)K3Fe(CN)6200mg氰化鉀（KCN）50mg無水磷酸二氫鉀140mgTriton X-100 1.0ml用蒸餾水溶解并稀釋 至1L第十二頁，共三十三頁。實習(xí)二紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測該試劑應(yīng)呈透明、淡黃色，pH在7.07.4之間，以蒸餾水作空白，在540nm比色，讀數(shù)是0溶液應(yīng)放置棕色試劑瓶中，塞緊后保存于冰箱中（但不宜凍結(jié)），至少可穩(wěn)定數(shù)月如發(fā)現(xiàn)試劑變綠、渾濁則不能使用(shyng)其中非離子表面活性劑可加速溶血，縮短轉(zhuǎn)化時間，防止血漿蛋白

8、改變引起的渾濁第十三頁，共三十三頁。實習(xí)二紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測實驗(shyn)步驟 在試管中準(zhǔn)確加入HiCN稀釋試劑5.0ml，作為測定管 用血紅蛋白吸管準(zhǔn)確吸取全血20u1，擦去管端血跡，置于試劑中，沖洗3次，混勻 將混合液放置(fngzh)3分鐘以后，倒入光徑1cm比色皿，用分光光度計在540nm進(jìn)行比色以蒸餾水或HiCN稀釋試劑作空白管，校正光密度到0點，讀取測定管光密度讀數(shù) 第十四頁，共三十三頁。實習(xí)二紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測計算： 血紅蛋白（g/L）= 測定管光密度（64458/44000）251 = 測定管光密度A 367.7 式中： （1）64458 是目前國際(guj)公認(rèn)的血紅蛋

9、白分子量 （2）44000 是國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會公布的血紅蛋白摩爾吸光度 （3）251是稀釋倍數(shù) 第十五頁，共三十三頁。實習(xí)二紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測方法(fngf)評估 HiCN法操作簡便，試劑單一，顯色快且穩(wěn)定，可以根據(jù)吸光度直接(zhji)計算結(jié)果被列為國際血紅蛋白測定的參考方法，也是我國推薦的首選方法高球蛋白血癥和白細(xì)胞明顯增高可導(dǎo)致反應(yīng)液渾濁而影響結(jié)果 第十六頁，共三十三頁。實習(xí)二紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測注意事項 用吸血管吸血過程應(yīng)仔細(xì)、認(rèn)真，準(zhǔn)確把握住吸入的血液量是初學(xué)者的一個難點，也是實驗結(jié)果準(zhǔn)確與否的一個關(guān)鍵HiCN稀釋液不能貯存在塑料瓶中，否則會使CN含量下降(xijing)，測

10、定結(jié)果偏低應(yīng)貯存在棕色有塞玻璃瓶中4冰箱保存一般可用數(shù)月，但不能在0以下保存，因為結(jié)冰可引起高鐵氰化鉀還原，使溶液褪色失效第十七頁，共三十三頁。實習(xí)二紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測注意事項 分光(fn un)光度計使用要點1、開啟電源，指示燈亮，選擇開關(guān)置于“T”，波長調(diào)置使用波長。儀器預(yù)熱20分鐘。 2、打開試樣室蓋（光門自動關(guān)閉），調(diào)節(jié)“0”旋鈕，使數(shù)字顯示為“00.0”。蓋上試樣室蓋，將比色皿架處于蒸餾水校正位置，使光電管受光，調(diào)節(jié)透過率“100%”旋鈕，使數(shù)字顯示為“100.0”。 3調(diào)整儀器的“00.0”和“100%”，將選擇開置于“A”，調(diào)節(jié)吸光度調(diào)零旋鈕，使得數(shù)字顯示為“.000”，然后將

11、被測樣品移入光路，顯示值即為被測樣品的吸光度的值。第十八頁，共三十三頁。實習(xí)二紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測注意事項氰化鉀是劇毒品，配制稀釋液時要按劇毒品管理程序保管、操作配制好的HiCN稀釋液中因氰化鉀含量低，又有高鐵氰化鉀存在，毒性不是很大。若進(jìn)入體內(nèi)，高鐵氰化鉀氧化血紅蛋白，生成高鐵血紅蛋白。后者結(jié)合CN，起到一定的解毒(ji d)作用，但仍應(yīng)妥善保管測定后的廢液不能與酸性溶液混合氰化鉀遇酸可產(chǎn)生劇毒的氰氫酸氣體為防止氰化鉀污染環(huán)境，比色測定后的廢液集中于廣口瓶中應(yīng)注意廢液處理，可用除毒液除毒第十九頁，共三十三頁。實習(xí)二紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測除毒方法取硫酸亞鐵（FeSO47H2O）二份加NaOH一份

12、，在研缽中研細(xì)，配成100g/L的懸液。每1000ml廢液加上述除毒液5ml，放置3小時，不時(bsh)攪拌，使劇毒的氰化鉀成為無毒的亞鐵氰化鉀廢液加入等量的水，混合后每升加次氯酸鉍液 ( 安替?；?)35 毫升，充分混勻后敞開容器，置室溫 15 小時后，排入下水道第二十頁，共三十三頁。實習(xí)二紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測參考值多次檢查(jinch)紅細(xì)胞數(shù)血紅蛋白成年男性（4.05.5）1012/L (400550萬/mm3)120160g / L(1216g / dl)成年女性（3.55.0）1012/L (350500萬/mm3)110150g / L (1115g /dl)新生兒（6.07.0）

13、1012/L (600700萬/mm3)170200g / L (1720g /dl)第二十一頁，共三十三頁。實習(xí)二紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測臨床意義紅細(xì)胞及血紅蛋白增多單位容積血液中 RBC 及血紅蛋白量高于參考高限可分為相對性增多和絕對性增多兩大類 紅細(xì)胞及血紅蛋白減少單位容積循環(huán)血液中 RBC 、血紅蛋白量及紅細(xì)胞比積低于參考值低限，稱為(chn wi)貧血。貧血可概括為兩大類：即生理性減少和病理性減少 各種貧血紅細(xì)胞與血紅蛋白的減低不一定呈平行關(guān)系第二十二頁，共三十三頁。實習(xí)二紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測RBC與Hb小結(jié)(xioji)RBCHb增多(zn du)減少(jinsho)相對增多絕對增多原

14、發(fā)增多繼發(fā)增多Epo代償性增多Epo非代償性增多缺氧腫瘤真性紅細(xì)胞增多癥脫水生理性減少病理性減少兒童，孕婦，老人生成減少破壞增加丟失過多各種溶血各種失血造血干C障礙DNA合成障礙再障巨貧Hb合成障礙多種機制缺鐵貧白血病造血原料缺乏第二十三頁，共三十三頁。實習(xí)二紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測RBC與Hb小結(jié)(xioji)紅細(xì)胞（1012/L）血紅蛋白（g/L）增多正常減少增多正常減少男性6.04.0-5.54.0170g120-160g120g女性5.53.5-5.03.5160g110-150g110g類型MCVMCHMCHC臨床意義大細(xì)胞性貧血100343236巨幼細(xì)胞貧血正細(xì)胞性貧血80100273

15、43236再障、骨髓病性急性失血性貧血小細(xì)胞性貧血80 27 32缺鐵性貧血鐵粒幼細(xì)胞性貧血海洋性貧血單純小細(xì)胞貧血80 273236慢性感染，肝病，尿毒癥，惡性腫瘤，風(fēng)濕病第二十四頁，共三十三頁。實習(xí)二紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)(j sh)原理網(wǎng)織紅細(xì)胞是晚幼紅細(xì)胞脫核后但尚未完全成熟的紅細(xì)胞胞質(zhì)中尚有核糖體、核糖核酸等嗜堿性物質(zhì)殘存,經(jīng)煌焦油藍(lán)或新亞甲藍(lán)活體染色(rns)后,胞質(zhì)中可見藍(lán)或藍(lán)綠色枝點狀甚至網(wǎng)織狀結(jié)構(gòu)第二十五頁，共三十三頁。實習(xí)二紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測取材：人的外周血液（涂片）方法：煌焦油(jioyu)藍(lán)活體染色法近年來還可通過某些血液自動分析儀及流式細(xì)胞術(shù)檢測法進(jìn)行網(wǎng)

16、織紅細(xì)胞計數(shù)操作：取一滴血與煌焦油藍(lán)染液混合，制成涂片在油鏡下，觀察紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)藍(lán)色的絲網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)計數(shù)1000個紅細(xì)胞，求得其中網(wǎng)織紅細(xì)胞百分?jǐn)?shù)第二十六頁，共三十三頁。實習(xí)二紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測染色(rns)及涂片要點在潔凈(jijng)載玻片上加1煌焦油蘭酒精液一滴；待干取新鮮血液一滴，滴于載玻片的染液上，輕輕攪拌保持載玻片上血液不致干涸，染色5分鐘或更長常規(guī)涂片方法，推成薄而均勻的血膜片，自然干燥第二十七頁，共三十三頁。實習(xí)二紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測89.5 m，Wright染色(rns)呈嗜多色性紅細(xì)胞第二十八頁，共三十三頁。實習(xí)二紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測RC小結(jié)(xioji)RC參考值絕對值百分?jǐn)?shù)0.5-1.5，平均(pngjn)12484109/L臨床意義觀察(gunch)病情鑒別診斷診斷減少增多觀察病情鑒別診斷診斷造血不良造血良好營養(yǎng)性貧血溶血性貧血失血性貧血再障性貧血試治有效高變低示好轉(zhuǎn)，反之亦然試治無效由低逐漸增高示好轉(zhuǎn)第二十九頁，共三十三頁。實習(xí)二紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測第三十頁，共三十三頁。實習(xí)二紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測第三十一頁，共三十三頁。實習(xí)二紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測The End!第三十二頁，共三