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第第頁(yè)動(dòng)物細(xì)胞的幾種轉(zhuǎn)染方法對(duì)比脂質(zhì)體法采納陽(yáng)離子脂質(zhì)轉(zhuǎn)染體,具有較高的轉(zhuǎn)染效率,不但可以轉(zhuǎn)染其他化學(xué)方法不易轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系,而且還能轉(zhuǎn)染從寡核苷酸到人工酵母染色體不同長(zhǎng)度的DNA,以及RNA,和蛋白質(zhì).此外,脂質(zhì)體體外轉(zhuǎn)染同時(shí)適用于瞬時(shí)表達(dá)和穩(wěn)定表達(dá),與以往不同的是脂質(zhì)體還可以介導(dǎo)DNA和RNA轉(zhuǎn)入動(dòng)物和人的體內(nèi)用于基因治療。人工合成的陽(yáng)離子脂質(zhì)體和帶負(fù)電荷的核酸結(jié)合后形成復(fù)合物,當(dāng)復(fù)合物接近細(xì)胞膜時(shí)被內(nèi)吞成為內(nèi)體進(jìn)入細(xì)胞質(zhì),隨后DNA復(fù)合物被釋放進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi).利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法最重要的就是防止其毒性,因此脂質(zhì)體與質(zhì)粒的比例,細(xì)胞密度以及轉(zhuǎn)染的時(shí)間長(zhǎng)短和培育基中血清的含量都是影響轉(zhuǎn)染效率的重要問(wèn)題.
電穿孔法常用來(lái)轉(zhuǎn)染如植物原生質(zhì)體這樣的常規(guī)方法不簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。電穿孔靠脈沖電流在細(xì)胞膜上打孔而將核酸導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)。導(dǎo)入的效率與脈沖的強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間有關(guān)系,基因槍依靠攜帶了核酸的高速粒子而將核酸導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi),這種方法適用于培育的細(xì)胞核在體的細(xì)胞.
DEAE葡聚糖是最早應(yīng)用哺乳動(dòng)物細(xì)胞(小鼠細(xì)胞、大鼠細(xì)胞各類傳代細(xì)胞等)轉(zhuǎn)染試劑之一,DEAE-葡聚糖是陽(yáng)離子多聚物,它與帶負(fù)電的核酸結(jié)合后接近細(xì)胞膜而被攝取,用DEAE-葡聚糖轉(zhuǎn)染勝利地用用于瞬時(shí)表達(dá)的討論,但用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染卻不是非常牢靠。
磷酸鈣共沉淀法由于試劑易取得、價(jià)格廉價(jià)而被廣泛用于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的討論,先將DNA和CaCl2混合,然后加入到PBS中漸漸形成DNA磷酸鈣沉淀,最終把含有沉淀的混懸液加到培育的細(xì)胞上,通過(guò)細(xì)胞胞膜的內(nèi)吞作用攝入DNA。磷酸鈣好像還通過(guò)抑制血清中和細(xì)胞內(nèi)的核酸酶活性而愛(ài)護(hù)外源DNA免受降解.
磷酸鈣法穩(wěn)轉(zhuǎn),瞬轉(zhuǎn)不適用于原代細(xì)胞,操作簡(jiǎn)便但重復(fù)性差,有些細(xì)胞不適用;
陽(yáng)離子脂質(zhì)體法穩(wěn)轉(zhuǎn),瞬轉(zhuǎn)全部細(xì)胞適用性廣,轉(zhuǎn)染效率高,重復(fù)性好,但轉(zhuǎn)染時(shí)需除血清。轉(zhuǎn)染效果隨細(xì)胞類型變化大;
電穿孔法穩(wěn)轉(zhuǎn),瞬轉(zhuǎn)全部細(xì)胞適用性廣但細(xì)胞致死率高,DNA和細(xì)胞用量大;
DEAE-右旋糖苷法瞬轉(zhuǎn)相對(duì)簡(jiǎn)便、結(jié)果可重復(fù),但對(duì)細(xì)胞有肯定的毒副作用,轉(zhuǎn)染時(shí)需除血清;
病毒介導(dǎo)法穩(wěn)轉(zhuǎn)可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、原代細(xì)胞,體內(nèi)細(xì)胞等;
腺病毒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染特定宿主可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞需考慮平安因素;
Biolistic顆粒傳遞法瞬轉(zhuǎn)可用于人的表皮細(xì)胞,纖維原細(xì)胞,淋巴細(xì)胞系以及
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