實驗細菌的簡單染色和革蘭氏染色第一頁，共二十三頁，2022年，8月28日革蘭氏染色C.Gram（革蘭）于1884年發(fā)明的一種鑒別不同類型細菌的染色方法。第二頁，共二十三頁，2022年，8月28日◆用堿性染料結(jié)晶紫對菌液涂片進行初染◆用碘溶液進行媒染，其作用是提高染料和細胞間的相互作用從而使二者結(jié)合得更牢固?！粲靡掖蓟虮獩_洗進行脫色。在經(jīng)歷脫色后仍將結(jié)晶紫保留在細胞內(nèi)的為革蘭氏陽性細菌，而革蘭氏陰性細菌的結(jié)晶紫被洗掉，細胞呈無色。◆用一種與結(jié)晶紫具有不同顏色的堿性染料對涂片進行復染。例如沙黃，它使原來無色的革蘭氏陰性細菌最后呈現(xiàn)桃紅到紅色，而革蘭氏陽性細菌繼續(xù)保持深紫色第三頁，共二十三頁，2022年，8月28日第四頁，共二十三頁，2022年，8月28日實驗三

細菌的簡單染色和

革蘭氏染色第五頁，共二十三頁，2022年，8月28日細菌的簡單染色和革蘭氏染色一目的要求二基本原理三實驗材料四無菌操作過程五操作步驟六實驗報告七思考題第六頁，共二十三頁，2022年，8月28日一目的要求1學習制染色片技術(shù)，學習簡單染色\革蘭氏染色原理，理解著色機理。學習并掌握無菌操作的技術(shù)。3掌握簡單染色\革蘭氏染色的方法，并能正確染色4鞏固顯微鏡油鏡的使用方法。第七頁，共二十三頁，2022年，8月28日（一）細菌的簡單染色原理（二）革蘭氏染色基本原理二基本原理第八頁，共二十三頁，2022年，8月28日細菌細胞微小，且含水量較多，在普通光鏡下表現(xiàn)為無色透明，不易觀察，所以必須進行染色處理，使細胞著色，便于觀察。簡單染色是使用單一染料染色，可用于觀察細菌形態(tài)、大小、及排列方式.染色前一般要將細胞固定，其目的是殺死菌體并使之粘附于玻片上，還可以增強菌體的著色能力。固定有加熱法和化學法兩種，無論采用何種方法均應(yīng)維持細胞原有形態(tài)。（一）細菌的簡單染色原理第九頁，共二十三頁，2022年，8月28日（二）革蘭氏染色基本原理革蘭氏染色是用于細菌鑒別的一種重要染色方法。它是根據(jù)革蘭氏陽性細菌、陰性細菌細胞壁結(jié)構(gòu)、組成的不同而使用一系列的染色處理使之差別顯色。其染色方法是先將細菌分別用結(jié)晶紫和碘液初染媒染后，乙醇脫色，再經(jīng)復染劑復染。最終被染成紅色的是革蘭氏陰性細菌；被染成紫色的是革蘭氏陽性細菌。第十頁，共二十三頁，2022年，8月28日占細胞壁的10%占細胞壁的90%第十一頁，共二十三頁，2022年，8月28日第十二頁，共二十三頁，2022年，8月28日1、細胞壁

革蘭氏陽性細菌的細胞壁第十三頁，共二十三頁，2022年，8月28日革蘭氏染色與細胞壁：革蘭氏陽性\陰性細菌的細胞壁對比第十四頁，共二十三頁，2022年，8月28日革蘭氏染色原理：第一步：結(jié)晶紫使菌體著上紫色第二步：碘和結(jié)晶紫形成大分子復合物，分子大，能被細胞壁阻留在細胞內(nèi)。第三步：酒精脫色，細胞壁成分和構(gòu)造不同，出現(xiàn)不同的反應(yīng)。G+菌：細胞壁厚，肽聚糖含量高，交聯(lián)度大，當乙醇脫色時，肽聚糖因脫水而孔徑縮小，故結(jié)晶紫-碘復合物被阻留在細胞內(nèi)，細胞不能被酒精脫色，仍呈紫色。Gˉ菌：肽聚糖層薄，交聯(lián)松散，乙醇脫色不能使其結(jié)構(gòu)收縮，因其含脂量高,乙醇將脂溶解，縫隙加大，結(jié)晶紫-碘復合物溶出細胞壁，酒精將細胞脫色，細胞無色，蕃紅復染后呈紅色。第十五頁，共二十三頁，2022年，8月28日1234？第十六頁，共二十三頁，2022年，8月28日三實驗材料大腸桿菌（24h培養(yǎng)）斜面菌種枯草桿菌（16h培養(yǎng)）斜面菌種第十七頁，共二十三頁，2022年，8月28日四無菌操作過程無菌操作：不讓除我們接種的微生物以外

其它微生物侵入的技術(shù)。第十八頁，共二十三頁，2022年，8月28日第十九頁，共二十三頁，2022年，8月28日（一）簡單染色操作步驟1涂片：載玻片、無菌水、斜面菌種、無菌操作、均勻的薄層2干燥：3固定：加熱固定4染色：結(jié)晶紫染1min或蕃紅染2-3min或石炭酸復紅染1min。5

水洗：6干燥：7鏡檢：低倍鏡觀察以確定目標和范圍，再換用油鏡觀察繪圖。

五操作步驟第二十頁，共二十三頁，2022年，8月28日第二十一頁，共二十三頁，2022年，8月28日（二）革蘭氏染色操作步驟1涂片：方法同單染色，然后干燥、固定。2初染：滴加結(jié)晶紫染色1min，后用水沖洗。3媒染：滴加碘液染色1---2min，后用水沖洗，甩盡殘余水4脫色：用95%乙醇沖洗30秒（需要嚴格控制時間和濃度），然后立即用水沖洗。5復染：用蕃紅或石炭酸復紅覆蓋涂片進行復染，蕃紅染2--