實體腫瘤細胞免疫治療第一頁，共四十六頁，2022年，8月28日第一節(jié)腫瘤抗原抗原：抗原（antigen，縮寫Ag）為任何可誘發(fā)免疫反應的物質。外來分子可經(jīng)過B細胞產(chǎn)生的免疫球蛋白所辨識或經(jīng)抗原呈現(xiàn)細胞的處理并與主要組織相容性復合體結合成復合物再活化T細胞，引發(fā)連續(xù)的免疫反應。腫瘤抗原是指：細胞惡變過程中出現(xiàn)的新的抗原物質總稱。第二頁，共四十六頁，2022年，8月28日腫瘤腫瘤（tumour）是指機體在各種致瘤因子作用下，局部組織細胞增生所形成的新生物，因為這種新生物多呈占位性塊狀突起，也稱贅生物。第三頁，共四十六頁，2022年，8月28日細胞惡性變過程中由于基因突變或正常靜止基因的激活都可以產(chǎn)生新的蛋白質。這些蛋白質在細胞內(nèi)降解后，某些降解的短肽物質可與MHCI類分子在內(nèi)質網(wǎng)中結合，并共表達于細胞表面，成為被CD8+CTL識別和殺傷的腫瘤特異抗原。

此外，某些細胞在惡變后，可使正常情況下處于隱蔽狀態(tài)的抗原決定簇暴露出來，成為腫瘤相關抗原，可被B細胞識別并產(chǎn)生抗腫瘤抗體。第四頁，共四十六頁，2022年，8月28日第五頁，共四十六頁，2022年，8月28日目前在動物自發(fā)性腫瘤和人類腫瘤細胞表面都發(fā)現(xiàn)了腫瘤抗原。為了敘述方便，一般將腫瘤抗原進分類，下面介紹兩種腫瘤抗原分類方法。

第六頁，共四十六頁，2022年，8月28日例如——紅細胞血型（ABO血型）第七頁，共四十六頁，2022年，8月28日第八頁，共四十六頁，2022年，8月28日一、根據(jù)腫瘤抗原特異性的分類法(一)腫痛特異抗原

腫瘤特異抗原(tumorspecificantigen，TSA)是指只存在于某種腫瘤細胞表面而不存在于正常細胞的新抗原。這類抗原是通過在近交系小鼠間進行腫瘤移植的方法來證明的，先用化學致癌劑甲基膽蒽（MCA）誘發(fā)小鼠皮膚發(fā)生肉瘤，當肉瘤生長至一定大小時，予以手術切除。將此切除的腫瘤移植給正常同系小鼠后可生長出腫瘤。但是，將此腫瘤植回原來經(jīng)手術切除腫瘤的小鼠，則不發(fā)生腫瘤，表明該腫瘤具有可誘導機體產(chǎn)生免疫排斥反應的抗原。

鑒于此類抗原一般是通過動物腫瘤移植排斥實驗所證實，故又稱為腫瘤特異移植抗原（TSTA）或腫瘤排斥抗原（TRA）第九頁，共四十六頁，2022年，8月28日第十頁，共四十六頁，2022年，8月28日

以往曾對人腫瘤細胞是否有特異抗原（TSA)存在爭議，但最近已在人黑色素瘤等腫瘤細胞表面證實了存在這類TSA，它是一個靜止基因活化的產(chǎn)物，以9個氨基酸的短肽或與HLA-A1分子共同表達于某些黑色素瘤細胞表面，稱為MAGE-1，它是第一個證實并清楚其結構的人腫瘤特異抗原。TSA只能被CD8+CTL所識別，而不能被B細胞識別，因此是誘發(fā)T細胞免疫應答的主要腫瘤抗原。第十一頁，共四十六頁，2022年，8月28日（二）腫瘤相關抗原腫瘤相關抗原（TAA）是指一些腫瘤細胞表面糖蛋白或糖脂成分，它們在正常細胞上有微量表達，但在腫瘤細胞表達明顯增高。此類抗原一般可被B細胞識別并產(chǎn)生相應的抗體。第十二頁，共四十六頁，2022年，8月28日二、根據(jù)腫瘤發(fā)生的分類法(一)化學或物理因素誘發(fā)的腫瘤抗原

動物實驗的研究證明，某些化學致癌劑或物理因素可誘發(fā)腫瘤，這些腫瘤抗原的特點是特異性高而抗原性較弱，常表現(xiàn)出明顯的個體獨特性。即用同一化學致癌劑或同一物理方法如紫外線、X-射線等誘發(fā)的腫瘤，在不同的宿主體內(nèi)，甚至在同一宿主不同部位誘發(fā)腫瘤都具有互不相同的抗原性。由于人類很少暴露于這種強烈化學、物理的誘變環(huán)境中，因此大多數(shù)人類腫瘤抗原不是這類抗原。第十三頁，共四十六頁，2022年，8月28日（二）病毒誘發(fā)的腫瘤抗原

動物實驗及人類腫瘤的研究證明，腫瘤可由病毒引起，例如EB病毒(EBV)與B淋巴細胞瘤和鼻咽癌的發(fā)生有關，乳頭狀瘤病毒（HPV)與人宮頸癌的發(fā)生有關。EBV和HPV均屬于DNA病毒，而屬于RNA病毒的人T淋巴細胞白血病病毒(HTLV-1)可導致成人T淋巴細胞白血?。ˋTL)。同一種病毒誘發(fā)的不同類型腫瘤（無論其組織來源或動物種類如何不同），均可表達相同的抗原且具有較強的抗原性。動物實驗研究已發(fā)現(xiàn)了幾種病毒基因編碼的抗原，例如SV40病毒轉化細胞表達的T抗原和人腺病毒誘發(fā)腫瘤表達的ELA抗原。二、根據(jù)腫瘤發(fā)生的分類法第十四頁，共四十六頁，2022年，8月28日（三）自發(fā)腫痛抗原

自發(fā)腫瘤是指一些無明確誘發(fā)因素的腫瘤，大多數(shù)人類腫瘤屬于這一類。自發(fā)腫瘤的抗原有二種：一種是TAA（腫瘤相關抗原），另一種是TSA（腫瘤特異性抗原）。TAA被B細胞識別誘發(fā)體液免疫應答，TSA被CD8+CTL識別誘發(fā)細胞免疫應答。目前已證明小鼠自發(fā)腫瘤和人腫瘤細胞表面具有腫瘤特異性抗原。二、根據(jù)腫瘤發(fā)生的分類法第十五頁，共四十六頁，2022年，8月28日（四）胚胎抗原

胚胎抗原是在胚胎發(fā)育階段由胚胎組織產(chǎn)生的正常成分，在胚胎后期減少，出生后逐漸消失，或僅存留微量。當細胞惡性變時，此類抗原可重新合成。胚胎抗原可分為兩種，一種是分泌性抗原，由腫瘤細胞產(chǎn)生和釋放，如肝細胞癌變時產(chǎn)生的甲胎蛋白（AFP)：另一種是與腫瘤細胞膜有關的抗原，疏松地結合在細胞膜表面，容易脫落，如結腸癌細胞產(chǎn)生癌胚抗原（CEA）。AFP和CEA是人類腫瘤中研究最為深人的兩種胚胎抗原，它們的抗原性均很弱，因為曾在胚胎期出現(xiàn)過，宿主對其已經(jīng)形成免疫耐受性，因此不能引起宿主免疫系統(tǒng)對這種抗原的免疫應答。但作為一種腫瘤標志物，通過檢測腫瘤患者血清中AFP和和CEA的水平，分別有助于肝癌和結腸癌的診斷。

二、根據(jù)腫瘤發(fā)生的分類法第十六頁，共四十六頁，2022年，8月28日三、根據(jù)腫瘤抗原分布和表達特性的分類法(—)C-T抗原（cancer-testisantigens)

此種抗原表達于多種腫瘤組織中，而在正常組織中，除睪丸精原細胞外，均不表達，如MAGE

家族、BAGE、NY-ESO-1、SSX家族等。第十七頁，共四十六頁，2022年，8月28日（二）組織特異性分化抗原

此種抗原在特定腫瘤組織細胞中高表達，而在相應的正常組織中低表達，在其他正常組織和腫瘤組織中不表達，如黑色素細胞分化抗原MART1/MelanA，qp100，TRP-1，以及乳腺癌中新發(fā)現(xiàn)的NY-BR-1等。三、根據(jù)腫瘤抗原分布和表達特性的分類法第十八頁，共四十六頁，2022年，8月28日（三）基因突變所致的抗原

由于正常基因發(fā)生變異而導致在腫瘤細胞中產(chǎn)生氨基酸改變了的新的抗原肽。而且這些新的抗原肽能夠被患者的免疫細胞識別，從理論上講，此類抗原的免疫原性最強，不易產(chǎn)生免疫耐受性，如M3突變產(chǎn)生的異常蛋白子；CDK4是控制細胞周期的一種激酶，由于在腫瘤細胞中其基因核酸序列存在一個C-T的點突變，導致CDK4第24位的半胱氨酸被精氨酸取代，從而產(chǎn)生新的抗原表位；caspase-S是誘導細胞凋亡的重要信號轉導分子，其突變體是鱗狀細胞癌的特異性抗原。三、根據(jù)腫瘤抗原分布和表達特性的分類法第十九頁，共四十六頁，2022年，8月28日（四）過量表達的抗原

此類抗原在腫瘤組織中高表達，在正常組織中低表達，由于其表達量超出了維持機體免疫耐受所需要的量而誘發(fā)免疫應答。如霍奇金病中發(fā)現(xiàn)的galectin及HSP105等。三、根據(jù)腫瘤抗原分布和表達特性的分類法第二十頁，共四十六頁，2022年，8月28日（五）病毒抗原

病毒感染導致細胞發(fā)生惡變的腫瘤細胞中，因病毒的產(chǎn)物具有一定的免疫原性而形成的抗原，如子宮頸癌中的HPV16E7抗原。三、根據(jù)腫瘤抗原分布和表達特性的分類法第二十一頁，共四十六頁，2022年，8月28日第二節(jié)腫瘤細胞免疫治療的基本原理一、免疫監(jiān)視學說

免疫監(jiān)視學說：機體在生長發(fā)育過程中，體細胞時常發(fā)生突變，有些突變可能會導致細胞惡性轉化。當具有異常增殖能力的腫瘤細胞在體內(nèi)形成時，它們攜帶著新的抗原決定簇，隨著腫瘤細胞的增殖，當新的抗原達到一定數(shù)量時，就開始產(chǎn)生胸腺依賴性免疫反應，像機體清除同種異體移植物那樣，最終被機體所排斥。

免疫監(jiān)視的作用在于識別和破壞那些在臨床上不能識別的原位腫瘤；當腫瘤的生長超過了機體免疫監(jiān)視功能的控制時，腫瘤細胞可以在體內(nèi)繼生長并形成腫瘤。第二十二頁，共四十六頁，2022年，8月28日腫瘤免疫監(jiān)視學說1.當組織內(nèi)有癌變細胞時，大量免疫細胞識別并將其清除。第二十三頁，共四十六頁，2022年，8月28日2.腫瘤細胞發(fā)生變異并逐漸耐受機體的殺傷作用。腫瘤免疫監(jiān)視學說第二十四頁，共四十六頁，2022年，8月28日3、一段時間后，產(chǎn)生大量的腫瘤變異體

腫瘤免疫監(jiān)視學說第二十五頁，共四十六頁，2022年，8月28日4、逃脫機體殺傷的變異體株不斷增值，募集調節(jié)性免疫細胞維持免疫耐受，成為腫瘤。

腫瘤免疫監(jiān)視學說第二十六頁，共四十六頁，2022年，8月28日二、免疫雕刻在腫瘤發(fā)生過程中的作用

腫瘤往往帶有其起源免疫環(huán)境的印跡，“免疫印跡”導致產(chǎn)生能更好地承受機體免疫系統(tǒng)抗腫瘤作用的腫瘤細胞，在這個過程中免疫原性高的腫瘤細胞被清除，遺留下來的是那些能夠在有免疫能力的個體中生存的變異體（它們的免疫原性下降，或者是獲得了其他的一些能夠逃避或抑制機體免疫攻擊的機制），稱為免疫系統(tǒng)對腫瘤的免疫雕刻。第二十七頁，共四十六頁，2022年，8月28日三、腫瘤免疫編輯

假說認為，免疫系統(tǒng)既可能清除腫瘤細胞或對腫瘤細胞產(chǎn)生非保護性免疫反應，又可能促進免疫無反應性或免疫耐受性的產(chǎn)生。先天性免疫和獲得性免疫都參與了這一過程。

一般將免疫編輯分為3個過程：免疫清除、免疫平衡和免疫逃逸，又稱為腫瘤免疫編輯的“三E過程”第二十八頁，共四十六頁，2022年，8月28日第二十九頁，共四十六頁，2022年，8月28日（一）免疫清除

腫瘤“免疫監(jiān)視”假說的基本觀點包含在免疫清除過程之中。如果機體免疫系統(tǒng)能夠成功的清除發(fā)展中的腫瘤，該過程稱為“完全的編輯過程”，免疫編輯的后續(xù)過程將不再發(fā)生。在免疫清除的過程中，一旦實體瘤生長達到一定的大小將開始呈現(xiàn)侵襲性生長，并將需要更多的血供，這個過程會引起一系列的連鎖反應，如腫瘤間質及腫瘤血管的生成。腫瘤侵襲性生長造成其周圍組織出現(xiàn)微小破壞，產(chǎn)生炎癥信號，引起免疫細胞(NKT細胞、NK、γδT細胞、Mφ、DC)募集到腫瘤局部。轉化后細胞的結構，能夠被局部浸潤的淋巴細胞所識別，并剌激它們分泌IFN-γ。在第二階段，最初產(chǎn)生的IFN-γ通過抗增殖或誘導凋亡引起部分腫瘤細胞死亡，也引起腫瘤細胞本身或腫瘤周圍的正常組織細胞釋放趨化因子，如：CXCL10、IL-10、CXCL-9、MIG、CXCL11、ITAC、干擾素誘導的T細胞a化學引誘物等。炎癥過程所產(chǎn)生的趨化因子招募更多的NK和巨噬細胞到腫瘤局部發(fā)揮非特異性抗腫瘤作用。在第三階段，腫瘤浸潤的NK和巨噬細胞能夠分泌IFN-γ

和IL-12反式激活對方，通過多種機制殺傷更多的腫瘤細胞，如腫瘤壞死因子相關的凋亡途徑、穿孔素誘導的凋亡途徑及活性氮氧介質誘導的凋亡途徑等。第四階段，腫瘤抗原特異性的CD4+T細胞和CD8+T細胞遷移到腫瘤組織。IFN-γ

提高腫瘤細胞的免疫原性，遷移到腫瘤組織的細胞毒性T淋巴細胞特異殺傷帶有腫瘤抗原的腫瘤細胞。第三十頁，共四十六頁，2022年，8月28日（二）免疫平衡

如果免疫細胞和細胞因子不能完全殺傷腫瘤細胞，免疫系統(tǒng)和腫瘤細胞的相互作用進入動態(tài)平衡過程，稱為免疫平衡。在這個過程中，部分淋巴細胞和IFN-y繼續(xù)向腫瘤細胞施加免疫選擇的壓力，抑制但并不能完全清除那些殘存的腫瘤細胞。殘存的腫瘤細胞因其基因組的不穩(wěn)定性，不斷產(chǎn)生新的變異，在這個“達爾文”式的選擇過程中，最初逃逸出的腫瘤細胞的變異株大多數(shù)還是被破壞掉了，但是又產(chǎn)生了新的、帶有不同的突變的變異株，這些突變可賦予它們更高的抵抗免疫攻擊的能力。免疫平衡過程可能是腫瘤免疫編輯中時間最長的階段，有時甚至長達數(shù)年。第三十一頁，共四十六頁，2022年，8月28日（三）免疫逃逸殘存的腫瘤細胞通過遺傳學或表達遺傳學變化的后果是獲得對免疫監(jiān)測和免疫清除的不敏感性，并開始具有不受控制的自主增殖能力，稱為免疫逃逸。此時，免疫系統(tǒng)不僅對腫瘤無能為力，而且出現(xiàn)免疫細胞或免疫因子促進腫瘤細胞生長和轉移的可能性。第三十二頁，共四十六頁，2022年，8月28日第三節(jié)腫瘤的免疫應答腫瘤一直被認為是一種細胞性疾病，但是近年來隨著對腫瘤微環(huán)境的深人研究，人們認識到機體免疫系統(tǒng)在腫瘤形成過程中扮演著重要的角色。早在20世紀70年代，Burnet就在大量臨床和實驗證據(jù)的基礎上提出了“腫瘤免疫監(jiān)視學說”。他認為機體細胞在生長過程中發(fā)生惡性突變后會攜帶新的抗原決定簇，淋巴細胞在體內(nèi)巡視過程中遇到攜帶這些抗原決定簇的惡性細胞時，就會與其發(fā)生反應并加以清除。然而，無胸腺的裸鼠和同種野生型小鼠在腫瘤的發(fā)生上沒有明顯差別，使這一學說受到質疑。在研究了機體免疫系統(tǒng)與腫瘤的相互關系后，又有人提出了“免疫編緝學說”。第三十三頁，共四十六頁，2022年，8月28日第三節(jié)腫瘤的免疫應答Shankaran等人認為免疫反應可以有效地殺傷腫瘤，但是又可以導致對腫瘤細胞的選擇，這一過程使得那些在免疫功能上正常的宿主體內(nèi)容易存活的腫瘤細胞得以保留下來形成腫瘤，這便解釋了為什么免疫發(fā)生。在腫瘤的發(fā)生及發(fā)展過程中，宿主的免疫系統(tǒng)可通過多種機制發(fā)揮抗腫瘤作用。當宿主體細胞發(fā)生突變或腫瘤發(fā)生后，免疫系統(tǒng)可識別并激活產(chǎn)生免疫應答，特異性免疫和非特異性免疫都參與其中。由于不同組織來源的腫瘤細胞免疫原性存在差別，所以不同的腫瘤組織誘導的免疫應答也有所不同。對于某些免疫原性較弱的腫瘤來說，非特異性免疫應答可能發(fā)揮更重要的作用，如NK細胞等。腫瘤細胞表達的特異性和相關性抗原可誘導宿主發(fā)生特異性免疫應答。一般認為，在腫瘤免疫中細胞免疫的作用更為重要，體液免疫僅發(fā)揮輔助作用。第三十四頁，共四十六頁，2022年，8月28日一、自然殺傷細胞(NK)對腫瘤的殺傷作用作為非特異性免疫的重要效應細胞，NK細胞被認為是機體抗感染、抗腫瘤的第一道天然防線，是機體重要的免疫細胞。NK細胞可通過其表面的多種受體而被活化，主要包括細胞因子受體、膜整合素分子、天然細胞毒受體（CD16,NKp46,NKp30,NKp44,NKp80)、免疫球蛋白樣殺傷受體（NKG2)家族、DNAM-1/CD226家族、SLAMs家族/SLAM、2B4、NTB-A(CD84)/識別非己抗原分子的受體（Ly49H)以及一些其他受體(如CD18，CD2，TLR-3/-9等）。第三十五頁，共四十六頁，2022年，8月28日一、自然殺傷細胞(NK)對腫瘤的殺傷作用在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中，NK細胞既直接識別惡性轉化細胞并被活化，也可以經(jīng)輔助細胞如樹突狀細胞、單核細胞、巨噬細胞等作用被活化。研究表明腫瘤發(fā)生過程中NK細胞的活化也可以由DC細胞引發(fā)，觸發(fā)后的NK細胞在8小時以內(nèi)會進人外周血，到達腫瘤組織部位，再在其他活化信號的作用下成為效應細胞。NK細胞殺傷腫瘤細胞不受MHC限制，也不需預先與抗原接觸或顯示任何記憶反應，NK細胞對腫瘤的殺傷優(yōu)勢表現(xiàn)為直接溶解和分泌細胞因子兩個方面。首先，激活的NK細胞能分泌多種效應細胞因子，如NK細胞可以產(chǎn)生TNF-a、IFN-y和IL-12等，這些細胞因子在NK細胞抗腫瘤反應中有十分重要作用。通過細胞因子對機體的免疫功能進行調節(jié)，增強機體的抗腫瘤免疫反應。同時，死亡受體介導的靶細胞凋亡和NK介導的ADCC也是NK抗腫瘤的兩個重要途徑。一般而言，NK細胞對靶細胞的殺傷機制有三種:①通過NK細胞上的CD27和腫瘤細胞的CD70作用，使NK細胞釋放穿孔素和細胞因子，并激活細胞毒T細胞（cytotoxicTlymphocytes，CTL)進一步殺傷腫瘤細胞;②通過NK細胞表面的NKG2D和T細胞的DAP10相互識別，作為共同刺激信號激活T細胞，從而引起特異性的免疫反應;③通過NK細胞表面的受體和靶細胞的配體識別激活NK細胞，產(chǎn)生細胞毒性作用。NK的抗腫瘤作用受許多因素的調控，TNF、IFN-γ和IL-12等細胞因子可促進NK的殺傷作用;TGF-β、IL-10則抑制NK活性。第三十六頁，共四十六頁，2022年，8月28日一、自然殺傷細胞(NK)對腫瘤的殺傷作用目前，基于NK細胞的腫瘤免疫治療途徑主要包括:①促進NK細胞活化性受體的表達和加強殺傷分子如穿孔素等的表達和功能，主要利用細胞因子的作用，如干擾素、IL-2、IL-12、IL-15等;②抑制NK細胞的抑制性受體，主要利用的方法包括人源化單克隆抗體、RNA干擾技術等;③對NK細胞的活化受體進行改造，使其活化受體含有超高活性的胞內(nèi)信號功能區(qū)而易于高度活化，或者使該細胞活化受體具有特定的識別特性而靶向癌細胞;④與放/化療聯(lián)合應用，研究證明，適度放療和化療可以使腫瘤細胞上的NK細胞活化受體NKG2D的配體表達升高，使得腫瘤細胞對NK殺傷的敏感性增加;還有研究提示阿糖胞苷(Ara-c)耐藥的白血病細胞的NKG2D的配體表達升髙，使其對NK細胞的殺傷更為敏感；⑤基于NK細胞的ADCC的治療方法，治療性抗體與NK細胞聯(lián)合應用，以提高臨床腫瘤生物治療的療效。

除NK細胞外，非特異性免疫的其他效應細胞，如：巨噬細胞和中性粒細胞等都參與抗腫瘤的免疫反應。而目前對巨噬細胞的研究多傾向于其在腫瘤病灶內(nèi)發(fā)揮雙重作用，既有一定的抗腫瘤作用，又有促進腫瘤生長的作用。第三十七頁，共四十六頁，2022年，8月28日二、T細胞免疫應答

T細胞是參與腫瘤細胞免疫應答的主要效應細胞，包括CD8+細胞毒性T淋巴細胞（CTL)和CD4+輔助性T淋巴細胞（Th)。腫瘤特異性CTL在細胞免疫中承擔主要的殺傷作用，而Th細胞的主要作用為輔助CTL殺傷腫瘤細胞，CTL與Th的激活方式基本相同。T細胞的激活是一個復雜的過程，首先TCR要與抗原多肽相互識別，這個過程中APC呈遞抗原，并且受MHC限制，然后還需要共同剌激信號才能被活化。具體表述為:首先，TCR特異性識別結合于MHC分子凹槽中的抗原肽，由CD3將信號傳人胞內(nèi)，提供T細胞活化的第一信號。同時APC和T細胞表面多種黏附分子結合，提供T細胞活化的第二信號（即共刺激信號），其中CD28/B7是重要的共剌激分子，在識別并結合抗原肽的過程中，若缺乏協(xié)同刺激信號，特異性T細胞不能充分活化，可進入不應答狀態(tài)(anergy)或發(fā)生凋亡;除CD28外T細胞表面的CTLA4與B7結合可啟動抑制性信號。除上述雙信號外，T細胞的充分活化還有賴于細胞因子參與，活化的APC和T細胞可分泌IL-1、IL-2、IL-6、IL-12等多種細胞因子，它們在T細胞激活中發(fā)揮重要作用。第三十八頁，共四十六頁，2022年，8月28日第三十九頁，共四十六頁，2022年，8月28日(一）細胞毒性T淋巴細胞(CTL)對大量腫瘤組織標本的研究證實，在腫瘤組織中浸潤有腫瘤特異性的CTL。并且多數(shù)腫瘤細胞有MHCI類分子的表達，CTL可識別同源抗原多肽，并殺傷清除表達該抗原的腫瘤細胞，發(fā)揮抗腫瘤作用?，F(xiàn)有研究已從三個方面證實了CTL的抗腫瘤作用：首先，在體外腫瘤抗原激活特異性的CD8+T細胞，回輸腫瘤患者可誘導宿主的抗腫瘤免疫應答。另外，對腫瘤患者接種佐劑或攜帶腫瘤抗原的樹突狀細胞可誘發(fā)宿主體內(nèi)MHCI類分子限制性的免疫應答；而通過抗體或基因敲除的方法移除小鼠體內(nèi)的CD8+T細胞后，大多數(shù)腫瘤疫苗誘發(fā)的抗腫瘤免疫應答至少會有所減弱。第四十頁，共四十六頁，2022年，8月28日CTL細胞經(jīng)其表面受體與靶細胞上的抗原肽MHCⅠ類分子結合后，在共刺激分子的協(xié)同作用下，向細胞內(nèi)傳遞活化信號。效應CTL細胞識別抗原活化后，釋放兩種主要的細胞毒素——穿孔素和顆粒酶，其中穿孔素是導致靶細胞溶解的重要介質，可以使靶細胞形成跨膜孔道并導致其解體；顆粒酶是胰蛋白酶或糜蛋白酶類物質，CTL細胞活化后，很快就有顆粒內(nèi)容物釋放至胞外，靶細胞在數(shù)分鐘內(nèi)迅速被溶解。CTL細胞活化后也可誘導靶細胞凋亡，主要依賴兩種機制：①CTL活化后大量表達FasL，F(xiàn)asL與靶細胞表面Fas結合，通過Fas胞內(nèi)段的死亡結構域激活caspae-8,最終激活內(nèi)源性DNA內(nèi)切酶，導致細胞結構破壞和死亡；②CTL通過釋放的顆粒酶，激活caspase~10,引發(fā)caspase（細胞凋亡蛋白酶）級聯(lián)反應，使靶細胞調亡。第四十一頁，共四十六頁，2022年，8月28日

CTL細胞也可通過分泌某些細胞因子（如IFN-γ，TFN-α等)發(fā)揮作用，其中IFN-γ可增強MHCI類分子對腫瘤抗原的呈遞作用和Fas介導的溶細胞作用，而TFN-a與腫瘤細胞表面受體結合后可啟動級聯(lián)反應，誘導腫瘤凋亡。

目前，CTL細胞在免疫治療當中的應用主要通過兩種形式，一是以腫瘤疫苗或DC細胞接種，使其在體內(nèi)誘導CTL細胞活化，產(chǎn)生抗腫瘤效應；二是CTL細胞過繼免疫治療，即在體外用細胞因子等激活CTL細胞后回輸。

CTL對腫瘤的殺傷作用是特異性的，依賴于識別特定的抗原。Weninger等對攜帶表達E7抗原腫瘤的小鼠接種能誘導E7特異性CTL的腺病毒，用表達卵清蛋白(OVA)的腫瘤細胞接種小鼠后，輸注OVA特異性的CTL細胞后，追蹤腫瘤細胞和CTL細胞在體內(nèi)的分布，結果顯示CTL在腫瘤微環(huán)境中隨機運動，并且在沒有同源抗原存在的情況下不能持續(xù)移動;識別抗原后有些CTL可持續(xù)發(fā)揮作用，而有些則作用時間很短，造成這種差別的機制目前還不明確，可能與那些持續(xù)作用的CTL能生成細胞毒性顆粒有關。某些情況下，CTL的浸潤發(fā)生在腫瘤細胞凋亡的初始階段，證實了在體外實驗中觀察到CTL殺傷腫瘤細胞的作用。Amigorena實驗室也用這種方法證實腫瘤浸潤性CTL最初浸潤在癌灶邊緣，然后滲人至癌灶的中央部位。同時，研究者發(fā)現(xiàn)CTL在殺傷腫瘤細胞后會再次遷移找尋作用細胞。CTL浸潤在癌灶中必須識別其同源抗原，并且依賴于MHC和輔助剌激雙信號。第四十二頁，共四十六頁，2022年，8月28日

通過觀察大量CTL的作用發(fā)現(xiàn)，單一CTL細胞殺傷一個腫瘤細胞平均需要6小時，但是實際一個CTL細胞需要多于6個小時的時間才能對下一個腫瘤細胞產(chǎn)生作用，因為CTL細胞在殺傷腫瘤后會與已凋亡細胞結合幾個小時。而CTL在淋巴結中發(fā)揮作用只需15分鐘，為何CTL對腫瘤細胞的殺傷需要如此長的時間仍有待進一步研究。臨床上有些患者雖然浸潤性CTL的水平較高但是腫瘤仍持續(xù)生長，可能CTL在腫瘤組織中的低效率是原因之一。第四十三頁，共四十六頁，2022年，8月28日(二）輔助性T淋巴細胞(Th)CD8+CTL在腫瘤免疫應答中發(fā)揮重要作用，但是將CTL用于臨床治療腫瘤卻沒能取得人們預想的結果，所以更多的研究者開始把目光投向Th細胞。大量研究表明幼稚的CD8+T淋巴細胞被激活成為細胞毒性細胞的過程需要CD4+T淋巴細胞的參與。在敲除或缺乏CD4+T細胞的小鼠模型中不能檢測到抗腫瘤反應，因此Th細胞也可能在腫瘤免疫中發(fā)揮多種作用。

CD4+T細胞的亞型主要包括Th1和Th2，Th1細胞主要分泌