ICS11220

B41.

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T27533—2011

犬細(xì)小病毒病診斷技術(shù)

Diagnostictechniquesforcanineparvovirusdisease

2011-11-21發(fā)布2012-03-01實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

GB/T27533—2011

前言

本標(biāo)準(zhǔn)的附錄和附錄為資料性附錄

AB。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出

。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國動物防疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口

(SAC/TC181)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院中華人民共和國上海出入境檢驗檢疫局

:、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人單虎溫建新熊煒黃娟秦曉冰于鵬程

:、、、、、。

Ⅰ

GB/T27533—2011

犬細(xì)小病毒病診斷技術(shù)

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了犬細(xì)小病毒病的臨床檢查血凝與血凝抑制試驗檢測的操作方法

、、PCR。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于犬細(xì)小病毒病的鑒定及其流行病學(xué)調(diào)查診斷和監(jiān)測其中病毒分離血凝與血凝抑

、。、

制試驗檢測適用于犬細(xì)小病毒病的病原診斷

、PCR。

2試劑和材料

21細(xì)胞貓腎細(xì)胞

.FK81()。

22生理鹽水配制參見附錄中

.0.9%:AA.1。

23豬紅細(xì)胞液配制參見附錄中

.1%:AA.2。

24犬細(xì)小病毒陽性血清

.。

25孔形微量反應(yīng)板

.96“v”。

26酶及倍酶反應(yīng)緩沖液酶濃度為保存

.Taq10Taq:Taq5U/μL,-20℃。

27管

.1.5mLEppendorf。

28薄壁管

.0.2mLPCR。

29含各保存

.dNTP:dCTP、dGTP、dATP、dTTP10mmol/L,-20℃。

210引物濃度為其序列如下

.:20μmol/L,:

上游引物

(CPVF):5′GAATCTGCTACTCAGCCACCAAC3′;

下游引物

(CPVR):5′GTGCACTATAACCAACCTCAGC3′。

211十二烷基硫酸鈉配制參見附錄

.10%:A。

212蛋白酶貯備液配制參見附錄中

.K:AA.4。

213電泳緩沖液配制參見附錄中

.5×TBE:AA.6。

3器材和設(shè)備

31儀

.PCR。

32高速臺式冷凍離心機(jī)可控溫至離心速度可達(dá)g以上

.:4℃、12000。

33水平電泳儀

.。

34凝膠成像系統(tǒng)

.。

4臨床檢查

41臨床特征

.

411潛伏期周到周病初無任何癥狀食欲減退或廢絕體溫以上粉紅色黏稠血樣物

..12,,,40℃,。

412病犬先出現(xiàn)嘔吐嘔吐出白色泡沫或黃色液體繼而腹瀉糞便稀薄而惡臭劇烈的腹瀉呈噴射

..,,,,

狀糞便呈紅色混有大量黏液或假膜后期排番茄汁樣稀便并有特殊的腥臭味

,,。,。

413患犬迅速消瘦倦臥不起目光呆滯眼窩下陷腹圍緊縮機(jī)體脫水皮膚干燥彈性降低

..,,,,,,、。

42病理變化

.

421心臟腫大呈灰黃色切面外翻質(zhì)地松軟心肌有出血性斑紋

..,,,。

422肝臟腫大包膜緊張多呈黃褐色質(zhì)地松軟有局灶性壞死斷面有豆蔻狀花紋

..,,,,。

423胃空虛黏膜輕度潮紅附有大量黏液小腸壁增厚腸管變粗