ICS65020010

B16..

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T31796—2015

南美大豆猝死綜合癥病菌和北美大豆

猝死綜合癥病菌檢疫鑒定方法

DetectionandidentificationofFusariumtucumaniaeand

Fusariumvirguliforme

2015-07-03發(fā)布2015-11-27實(shí)施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

GB/T31796—2015

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國植物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會提出并歸口

(SAC/TC271)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院中華人民共和國深圳出入境檢驗(yàn)檢疫局

:、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人吳品珊王穎章桂明陳枝楠

:、、、。

Ⅰ

GB/T31796—2015

南美大豆猝死綜合癥病菌和北美大豆

猝死綜合癥病菌檢疫鑒定方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了南美大豆猝死綜合癥病菌和北美大豆猝死綜合癥病菌的檢疫鑒定方法

。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于田間大豆和大豆粒攜帶的土壤和病殘體中南北美大豆猝死綜合癥病菌的鑒定

、。

2儀器和用具

21儀器

.

生物顯微鏡超凈工作臺光照培養(yǎng)箱電子天平高壓滅菌鍋冰箱擴(kuò)增儀熒光

、、、(1/1000g)、、、PCR、

擴(kuò)增儀電泳儀凝膠成像儀高速冷凍離心機(jī)恒溫水浴鍋搖床

PCR、、、、、。

22用具

.

燒杯三角瓶量筒試管培養(yǎng)皿酒精燈鑷子剪刀解剖刀接種針載玻片蓋玻片塑料研杵

、、、、、、、、、、、、、

移液器移液器吸頭離心管液氮罐

、、、。

3試劑和培養(yǎng)基

31試劑

.

瓊脂粉馬鈴薯葡萄糖乳酸瓊脂糖無菌雙蒸水液氮蛋白胨磷酸二氫鉀硫酸鎂鏈霉素新

,,,,,,,,,,,

霉素五氯硝基苯氯四環(huán)素利福平

,,,,Tris-HCl,MgCl2,HCl,EDTA,NaOH,NaOAc,KCl,Tris,

無水乙醇苯酚溴化乙錠三氯甲烷異丙醇

CTAB,TAE,(Ethanol),(Phenol),(EB),(Chloroform),

異戊醇蛋白酶Taq聚合酶相對分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

(Isopropanol),(Isoamylalcohol),K,DNA,dNTP,DNA

物雙重特異性引物和實(shí)時熒光特異性引物及探針和

,PCRFu1/2Fsg-α-1/2,PCR16-FP/16-RP

Taq

16-AG,ManUniversalPCRMasterMix。

32培養(yǎng)基

.

水瓊脂培養(yǎng)液選擇性培養(yǎng)基馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基低營養(yǎng)合成培養(yǎng)基

0.2%,PCNB,(PDA),

具體配方參見附錄

(SNA)。A。

4檢疫鑒定方法

41癥狀檢查

.

南北美大豆猝死綜合癥在癥狀上區(qū)別不大病害典型的癥狀是葉片的葉肉枯黃壞死葉脈有時保

、,,

持綠色根部維管束組織有褐色病變髓部白色參見附錄病害癥狀描述

,,。A。

采集田間疑似癥狀大豆植株的根部植株周圍的土壤備用在大豆粒中篩選其攜帶的土壤并挑

、,。