ICS6502001

B16..

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T31807—2015

棉花根腐病菌檢疫鑒定方法

DetectionandidentificationofPhymatotrichopsisomnivoraDuarHennebert

(gg)

2015-07-03發(fā)布2015-11-27實(shí)施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

中華人民共和國

國家標(biāo)準(zhǔn)

棉花根腐病菌檢疫鑒定方法

GB/T31807—2015

*

中國標(biāo)準(zhǔn)出版社出版發(fā)行

北京市朝陽區(qū)和平里西街甲號

2(100029)

北京市西城區(qū)三里河北街號

16(100045)

網(wǎng)址

:

服務(wù)熱線

:400-168-0010

年月第一版

20159

*

書號

:155066·1-49877

版權(quán)專有侵權(quán)必究

GB/T31807—2015

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國植物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口

(SAC/TC271)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中華人民共和國寧波出入境檢驗(yàn)檢疫局中華人民共和國珠海出入境檢驗(yàn)檢疫

:、

局中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院

、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人張慧麗張衛(wèi)東段維軍徐瑛陳先鋒崔俊霞杜洪忠吳品珊

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T31807—2015

棉花根腐病菌檢疫鑒定方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了棉花根腐病菌的檢疫鑒定方法

。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于棉花根腐病寄主植物的植株種子及介質(zhì)的檢疫鑒定

、。

2儀器設(shè)備和主要試劑

21儀器設(shè)備

.

顯微鏡解剖鏡天平感量計(jì)制冰機(jī)純水儀渦旋振蕩器臺式離心

、、(1/100g,1/10000g)、pH、、、、

機(jī)高速冷凍離心機(jī)低溫冰箱冷藏冷凍冰箱超凈工作臺儀電泳儀水平電泳槽凝膠成像儀

、、、、、PCR、、、、

微量移液器

(2μL、20μL、100μL、200μL、1000μL)。

22主要試劑

.

除另有規(guī)定外所有試劑均采用分析純包括無菌雙蒸水次氯酸鈉液氮蛋白酶氯化鎂氫氧

,。、、、K、、

化鈉醋酸銨氯化鉀無水乙醇溴化乙錠三氯甲烷異丙醇異戊醇Taq聚合酶混合

、、、、、、、、DNA、dNTP

物緩沖液瓊脂糖相對分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)物提取緩沖液

、10×PCR、、DNA、CTAB、Tris/EDTA/SDS

硼酸鹽緩沖液緩沖液等分離培養(yǎng)基產(chǎn)孢培養(yǎng)基馬

(TES)、TrisEDTA(TBE)、Tris/EDTA(TE)。、、

鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基配制方法及步驟見附錄

(PDA)C。

3病菌的鑒定

31癥狀檢查

.

將可疑植株的根部在解剖鏡下鏡檢將帶有菌絲索或菌核的病根挑出種子類樣品從中挑選夾帶

,。,

的植株殘?bào)w尤其是根部病殘?bào)w介質(zhì)土借助濕篩挑出其中的菌核參見附錄

,。(B)。

32病原菌的分離培養(yǎng)

.

321病根上菌絲索的分離培養(yǎng)

..

在解剖鏡下將病根上覆蓋的菌絲索挑下用無菌水洗滌菌絲片段洗凈后置于分離培養(yǎng)基上

,,,,

黑暗培養(yǎng)每天觀察待長出菌絲后挑取菌絲尖端轉(zhuǎn)移到平板上純化

28℃,,,PDA。

322病殘?bào)w上病原菌的分離培養(yǎng)

..

在自來水下將病殘?bào)w洗凈切取病健交界處組織用次氯酸鈉進(jìn)行表面消毒無菌水沖洗

,,1%3min,

次滅菌濾紙吸干表面水分后置于分離培養(yǎng)基上黑暗培養(yǎng)每天觀察待長出菌絲后挑取菌

3,,,28℃,,