ICS11220

B41.

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T36875—2018

豬瘟病毒RT-nPCR檢測方法

MethodofRT-nPCRfordetectionofclassicalswinefevervirus

2018-09-17發(fā)布2019-04-01實施

國家市場監(jiān)督管理總局發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

中華人民共和國

國家標(biāo)準(zhǔn)

豬瘟病毒RT-nPCR檢測方法

GB/T36875—2018

*

中國標(biāo)準(zhǔn)出版社出版發(fā)行

北京市朝陽區(qū)和平里西街甲號

2(100029)

北京市西城區(qū)三里河北街號

16(100045)

網(wǎng)址

:

服務(wù)熱線

:400-168-0010

年月第一版

20189

*

書號

:155066·1-61269

版權(quán)專有侵權(quán)必究

GB/T36875—2018

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部提出

。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國動物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口

(SAC/TC181)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院軍事獸醫(yī)研究所中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所

:、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人郭煥成王琴徐璐馮燁張乾義趙啟祖鄒興啟朱元源涂長春

:、、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T36875—2018

豬瘟病毒RT-nPCR檢測方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬瘟病毒特異的反轉(zhuǎn)錄套式聚合酶鏈反應(yīng)方法的技術(shù)要求

-(RT-nPCR)。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于可能感染豬瘟病毒的豬臟器血液糞便和細胞培養(yǎng)物中豬瘟病毒核酸的檢測可用

、、,

于豬瘟的診斷和監(jiān)測

。

本標(biāo)準(zhǔn)的豬瘟病毒方法不能區(qū)分感染的豬瘟病毒野毒株和免疫的疫苗株

RT-nPCR。

2縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

焦碳酸二乙酯

DEPC:(diethylpyrocarbonate)

乙二胺四乙酸二鈉

EDTA-2Na:(ethylenediaminetetraaceticaciddisodiumsalt)

核糖核酸

RNA:(ribonucleicacid)

反轉(zhuǎn)錄套式聚合酶鏈反應(yīng)

RT-nPCR:-(reversetranscriptionandnestedpolymerasechainreac-

tion)

3實驗前準(zhǔn)備

31實驗室條件

.

311實驗室分區(qū)

..

實驗室分區(qū)包括核酸提取區(qū)反應(yīng)體系配制區(qū)配液區(qū)擴增區(qū)電泳區(qū)流程順序為

PCR、PCR———、、。

核酸提取區(qū)配液區(qū)擴增區(qū)電泳區(qū)各區(qū)儀器和耗材專用

→→→。。

312實驗室應(yīng)配備的儀器及器材

..

3121儀器級生物安全柜臺式高速冷凍離心機普通冰箱和分析天平擴增

...:Ⅱ、、(-20℃4℃)、、PCR

儀電泳儀電泳槽紫外凝膠成像儀或紫外分析儀組織研磨器扁桃體采樣器微波爐單道可調(diào)移

、、、()、、、、

液器

(2μL、10μL、200μL、1000μL)。

3122器材無菌注射器眼科剪眼科鑷稱量紙棉拭子滅菌牙簽量筒錐形瓶

...:、、、、、、500mL、500mL、

一次性無酶吸頭無酶離心管薄壁管

RNA(10μL、200μL、1000μL)、1.5mLRNA、0.2mLPCR。

32化學(xué)藥品及試劑

.

321總提取試劑

..RNATrizol。

322電泳緩沖液的制備配制方法見附錄

..TAE,A。

323瓊脂糖凝膠配制方法見附錄

..1%,A。

324其他試劑反轉(zhuǎn)錄酶緩沖液酶抑制劑

..:200U/μLM-MLV,5×M-MLV,40U/μLRNA,DEPC-

聚合酶緩沖液2+堿基隨機引物

H2O,5U/μLExTaqDNA,10×ExTaq(MgPlus),6(50μmol/L),

上樣緩沖液