標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 5009.118-2003 小麥中T-2毒素的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)》是一項(xiàng)國家標(biāo)準(zhǔn)，旨在通過酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）方法來檢測(cè)小麥樣品中的T-2毒素含量。該標(biāo)準(zhǔn)適用于小麥及其制品中T-2毒素濃度的定量分析，其檢測(cè)范圍通常在0.1至5微克/千克之間。

根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)過程包括但不限于以下幾個(gè)關(guān)鍵步驟：

  1. 樣品準(zhǔn)備：首先需要對(duì)小麥樣本進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚?，如研磨成粉末，并按照指定的比例加入提取液以溶解可能存在的T-2毒素。
  2. 提取與凈化：使用特定的溶劑從樣品中提取T-2毒素，并通過固相萃取柱等手段去除干擾物質(zhì)，得到較為純凈的目標(biāo)物溶液。
  3. ELISA測(cè)定：將經(jīng)過預(yù)處理的樣品溶液加入到預(yù)先包被有特異性抗體的微孔板中，在適宜條件下讓待測(cè)抗原（即T-2毒素）與固定化抗體結(jié)合；隨后加入標(biāo)記了酶的二抗，形成“抗原-抗體-酶標(biāo)二抗”復(fù)合物；最后添加底物溶液，通過酶催化反應(yīng)產(chǎn)生顏色變化，利用分光光度計(jì)測(cè)量吸光度值。
  4. 結(jié)果計(jì)算：基于標(biāo)準(zhǔn)曲線法，通過比較未知樣品與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品所產(chǎn)生的吸光度差異，可以推算出樣品中T-2毒素的具體含量。

整個(gè)操作流程需嚴(yán)格按照規(guī)定條件執(zhí)行，比如溫度控制、時(shí)間設(shè)定以及試劑的選擇和配制等，以確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。此外，對(duì)于每批次測(cè)試都應(yīng)設(shè)立空白對(duì)照、陽性對(duì)照及陰性對(duì)照，以此驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的有效性和重復(fù)性。


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  • 2003-08-11 頒布
  • 2004-01-01 實(shí)施
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ICS67.040C53中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T5009.118一2003代替GB/T14933-1994小麥中T-2毒素的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）DeterminationofT-2toxininwheatwithenzyme-linkedimmunosorbentassay（ELISA)2003-08-11發(fā)布2004-01-01實(shí)施中華人民共和國衛(wèi)生部發(fā)布中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

中華人民共和國國國家標(biāo)準(zhǔn)小麥中T-2毒素的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）GB/T5009.118-2003中國標(biāo)準(zhǔn)出版社出版發(fā)行北京西城區(qū)復(fù)興門外三里河北街16號(hào)郵政編碼：100045電話：63787337、637874472004年8月第一版2004年11月電子版制作書號(hào)：155066·1-21534版權(quán)專有浸權(quán)必究舉報(bào)電話：010)68533533

GB/T5009.118-2003前本標(biāo)準(zhǔn)代替GB/T14933—1994《小麥中T2毒素的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定方法(ELISA))。本標(biāo)準(zhǔn)與GB/T14933—1994相比主要修改如下：-修改了標(biāo)準(zhǔn)的中文名稱.標(biāo)準(zhǔn)中文名稱改為《小麥中T-2毒素的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA)》：-按GB/T20001.4—2001《標(biāo)準(zhǔn)編寫規(guī)則第4部分：化學(xué)分析方法》對(duì)原標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)進(jìn)行丁修改。本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國衛(wèi)生部提出并歸口本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗(yàn)所本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：陽傳和、羅雪云、計(jì)融。原標(biāo)準(zhǔn)于1994年首次發(fā)布，本次為第一次修訂

GB/T5009.118—2003小麥中T-2毒素的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了小麥中T-2毒素的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定方法(ELISA)本標(biāo)準(zhǔn)適用于小麥及其制品中T2毒素的測(cè)定本方法的檢出限為1Pg/kg.第一法間接法2原理將已知抗原吸附在固相載體表面.洗除未吸附抗原.加人一定量抗體與待測(cè)試樣(含有抗原)提取液的混合液，竟?fàn)帨赜?，在固相載體表面形成抗原-抗體復(fù)合物。洗除多余抗體成分·然后加人酶標(biāo)記的抗球蛋白的第二抗體結(jié)合物,與吸附在固體表面的抗原-抗體復(fù)合物相結(jié)合，再加人酶的底物。在酶的催化作用下，底物發(fā)生降解反應(yīng).產(chǎn)生有色產(chǎn)物，通過酶標(biāo)檢測(cè)儀.測(cè)出酶底物的降解量，從而推知被測(cè)試樣中的抗原量。3試劑3.1甲醇。3.2石油醚3.3三氯甲烷。3.4無水乙醉。3.5乙酸乙酯。3.6二甲基甲酰胺、37四甲基聯(lián)茶胺（TMB）3.8吐溫-20。3.930%過氧化氫(30%H.0.)。3.10抗體：雜交瘤細(xì)胞系1D7產(chǎn)生的抗「-2毒素的特異性單克隆抗體。3.11抗原：T-2毒素與載體蛋白-牛血清白蛋白(BSA)的結(jié)合物。3.12免抗鼠免疫球蛋白與辣根過氧化酶的結(jié)合物(酶標(biāo)二抗)。3.13ELISA緩沖液系統(tǒng)。3.13.1包被緩沖液為pH9.6的碳酸鹽緩沖液,稱取1.59g碳酸鈉(NaCO.）.2.93g碳酸氫鈉（NaHCO.），加水稀釋至1000mL。3.13.2洗液為含0.05%吐溫-20的pH7.4的磷酸鹽緩沖液(簡(jiǎn)稱為PBS-T)。配制方法為：稱取0.2g磷酸二氫鉀(KH.PO,）.2.9g磷酸氫二鈉(NaHPO,·12H.O).8.0g氯化鈉(NaCl)0.2g氯化鉀(KCl).0.5mL吐溫-20,加水至1000mL.3.13.3底物緩沖液為pH5.0的磷酸-檸檬酸緩沖液，配制方法為：0.1mol/L檸檬酸(C,H.O，·H.O),即稱取檸檬酸19.2g.加水至1000mL,為甲液；0.2mol/L磷酸氫二鈉(Na.HPO,),即稱取磷酸氫二鈉71.7g.加水至1000ml,為乙液；取甲液

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