生命科學(xué)與技術(shù)學(xué) 本科課液相色譜Liquid楊 講 21、液相色譜法的

流動(dòng)相在常壓下輸送，所用的固定相柱效低，分析周期常壓柱層析、紙層析、薄層層析高效液相色譜(HighPerformanceLiquidChromatography,借鑒氣相色譜理論，流動(dòng)相改為高壓輸色譜柱用小粒徑的填料填充而成，柱效大大提3HPLC

高壓(~107Pa)、高速(~mL/min)、高效(柱效幾萬(wàn)到幾十萬(wàn)4HPLC

正相/反相層析技離子交換層析技凝膠過濾層析技親和層析技疏水作用層析技??52、液固

(adsorption 液固色

73、分配

8正相色譜與反相色

正相(normalphase)：固定相為極性，流動(dòng)相為反相(reversephase9反相層析的

4、離子交換色

陽(yáng)離子交換：R—SO3H =R—SO3M+H陰離子交換：R—NR4OH =R—NR4X+ 思考題離子交換層析的

5、凝膠色

凝膠色譜的

6、親和色

應(yīng)用：ProtinA/G、抗原-抗體、生物素-親和素、 、親和色譜的

7、疏水

疏水層析與反相層

1、液相色譜的固

硅氧硅碳鍵型：≡Si—O—Si—C,穩(wěn)定，耐水、耐光、 化學(xué)鍵合固定相的

2、液相色譜的流

水(最大)>甲酰胺>乙腈>甲醇>乙醇>丙醇 乙酸乙酯梯度洗

525梯度洗脫

低壓梯度與高壓

1、HPLC的組

2、高壓輸

部件，壓力10～35高壓輸液泵工作

2、真空脫

溶劑在泵的抽取過真空箱內(nèi)的特殊塑料膜(氣透膜)。當(dāng)溶劑經(jīng)真空脫氣機(jī)工作

3、進(jìn)樣

自動(dòng)進(jìn)

自動(dòng)進(jìn)樣器工作

4、柱溫箱與色

液相色

5、檢測(cè)

??二極管陣列檢測(cè)器

選擇性強(qiáng)：適用于多環(huán)芳烴、酶、氨基酸、蛋白質(zhì)等熒光物質(zhì)的測(cè)靈敏度高：比UV-Vis光度法高2－3個(gè)數(shù)量線性范圍較示差折光檢測(cè)器

44蒸發(fā)光散射檢測(cè)器EvaporativeLightScattering

6、收集

1、HPLC的應(yīng)

選擇分離方式的一

血液中藥物濃度

速

食品安全中有機(jī) 殘留量分12

艾氏3

p,p`- 速：1.5：：

4

p,p`-環(huán)境樣品中多環(huán)芳

2、幾類特殊的液相色

型效液相色譜型

型色

DynamicAxialCompression超量載

濃縮法超量載樣：容量因子k降低，峰形變成三角

接在柱上使用，需要結(jié)合分邊緣切割與中心

效液相色

小顆粒要求系統(tǒng)能承受高于目前極限壓力UltraPerformanceLiquidUltraHighPerformanceRapidSeparation

UltiMate

ACQUITYUPLC

UPLCv.s.

H=A+B/u+UPLC

H=A+B/u+根據(jù)范 色譜理論，柱效反比于系統(tǒng)固定相粒度大UPLC運(yùn)用了更短的柱子，進(jìn)一步增加了峰高根據(jù)范 色譜理論，最優(yōu)流速反比于粒度大UPLC的應(yīng)