ICS11.220NYB41中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T574一2002地方流行性牛白血病瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗方法Agargelimmunodiffusiontestforenzooticbovineleukosis2002-08-27發(fā)布2002-12-01實施中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布

NY/T574-2002地方流行性牛白血病（enzooticbovineleukosis,簡稱EBL)是由牛白血病病毒引起牛的淋巴樣細(xì)胞惡性增生，進(jìn)行性惡病質(zhì)變化和全身淋巴結(jié)腫大為特征的一種慢性、進(jìn)行性、接觸傳染性腫瘤病。被世界動物衛(wèi)生組織WorldOrganizationforAnimalHealth（英），OfficeInternationaldesEpizooties（法），○IE列為B類疾病，我國農(nóng)業(yè)部把該病列為二類動物疫病。本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散(AGID),是根據(jù)OIE《診斷試驗和疫苗標(biāo)準(zhǔn)手冊》2000年版)和我因?qū)嶋H情況制定的，是國際貿(mào)易指定的診斷方法。本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)局提出。本標(biāo)準(zhǔn)由全國動物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所。本標(biāo)準(zhǔn)起草人：劉煥章、辛九慶。

NY/T574-2002地方流行性牛白血病瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗方法1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了地方流行性牛白血病瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗診斷技術(shù)要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于地方流行性牛白血病的診斷、檢疫和流行病學(xué)調(diào)查。2瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗2.1材料準(zhǔn)備2.1.1打孔器(內(nèi)徑5mm)，瓊脂糖(試劑級）2.1.2抗原;標(biāo)準(zhǔn)陽性血清、陰性血清。2.2操作方法2.2.1瓊脂精凝膠板制備在磷酸緩沖液(0.05mol/LpH7.2)100ml.中加人瓊脂糖(試劑級)1.0g.加氯化鈉分析試劑8.5g.10%硫柳汞(試劑級)1ml.。將上述各種成分混合，加熱充分溶解.超熱加到平血中注意不要產(chǎn)生氣泡。每個平血內(nèi)加瓊脂糖溶液15ml.～17ml.(直徑9cm）,膠板厚度為2mm。待凝固后把平血倒貿(mào)，放在4（冰箱中保存10d。2.2.2打孔2.2.2.1孔型圖案的準(zhǔn)備：在坐標(biāo)紙上面好7孔型(見圖1）,孔徑5mm,孔距3mm。圖1瓊脂精凝膠板打孔示意圖2.2.2.2把圖案放在瓊脂板平皿下，用打孔器按圖型準(zhǔn)確位置打孔孔內(nèi)瓊脂用針頭小心挑出，勿破壞周圍瓊脂，將平血底部在酒精燈上路烤封底。2.2.3滴加抗原和血清七孔型中央孔加抗原（Ag),1、3、5孔加標(biāo)準(zhǔn)陽性血消,2、4、6孔分別加三份被檢血清。各孔一次加滿,以不溢出為準(zhǔn),平血加蓋后放在濕盒中，于室溫(20℃以上)作用,24h和48h各檢查一次，檢查時用斜射強(qiáng)光，背景要暗。2.3結(jié)果判定2.3.1陽性:標(biāo)準(zhǔn)陽性血清與抗原孔之間有兩條沉淀線?？靠乖椎氖莋pa對乙醚敏感的囊膜蛋白）抗體沉淀線，靠血清孔為Pa抗乙醚的核蛋白)抗體沉淀線?？乖缀捅粰z血清孔之間出現(xiàn)一條清晰的沉淀線·并與標(biāo)