對(duì)照NaCl冰水植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)六

（1）深刻理解植物組織培養(yǎng)的基本概念和理論依據(jù)。（2）訓(xùn)練利用實(shí)驗(yàn)室的條件來(lái)合理設(shè)計(jì)和完成實(shí)驗(yàn)的基本技能。實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

植物組織培養(yǎng)就是將植物離體的生活部分（如器官、組織、細(xì)胞甚至原生質(zhì)體等）通過(guò)無(wú)菌操作接種在適宜的培養(yǎng)基上，在人工控制的條件（如溫度、光照、濕度等）下進(jìn)行培養(yǎng)的技術(shù)。

理論依據(jù)：植物細(xì)胞的全能性。植物體的每一個(gè)細(xì)胞都攜帶著一套完整的基因組，并具有發(fā)育成完整植株的潛在能力。實(shí)驗(yàn)原理外植體接種完整植株脫分化再分化外植體愈傷組織芽、根實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的依據(jù)依據(jù)一分化

培養(yǎng)基中植物生長(zhǎng)物質(zhì)的種類和濃度在脫分化和再分化中起重要作用，尤其是生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素類的比例。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的依據(jù)依據(jù)二生長(zhǎng)素類/細(xì)胞分裂素類高誘導(dǎo)根的分化中愈傷組織生長(zhǎng)不分化低誘導(dǎo)芽的分化①M(fèi)S培養(yǎng)基的大量元素；②MS培養(yǎng)基的微量元素；③MS培養(yǎng)基的鐵鹽；④有機(jī)附加成分；⑤NAA、6-BA；⑥蔗糖、冷凝脂；⑦0.1mol/LNaOH和0.1mol/LHCl。條件一：實(shí)驗(yàn)藥品實(shí)驗(yàn)條件A無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)(包括植物必需的大量和微量元素，均以鹽的形式加入)

B碳源(一般為蔗糖，濃度30g/L左右)，作用是提供營(yíng)養(yǎng)和維持滲透平衡。C有機(jī)附加物(主要有氨基酸、水解酪蛋白；VB1、VB6、煙酸（VB3）和肌醇，等)D植物生長(zhǎng)物質(zhì)(生長(zhǎng)素類和細(xì)胞分裂素類等)培養(yǎng)基的成分條件二：實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備

①燒杯、移液器、量筒、精密電子天平、三角瓶、pH試紙、封口膜等；②高壓滅菌鍋；③無(wú)菌操作間、超凈工作臺(tái)；④能夠控制光照和溫度條件的培養(yǎng)室。實(shí)驗(yàn)條件要求

以菊花無(wú)菌苗為材料進(jìn)行以下培養(yǎng)基的設(shè)計(jì)。（1）誘導(dǎo)菊花無(wú)菌苗葉片形成愈傷組織（2）誘導(dǎo)菊花無(wú)菌苗莖段形成芽實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)菊花無(wú)菌苗實(shí)驗(yàn)材料

全班分成6個(gè)小組，按照要求經(jīng)查閱資料、代表匯報(bào)和全班討論，最后確定設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基如下（MS為基本培養(yǎng)基）：

1.誘導(dǎo)菊花無(wú)菌苗葉片形成愈傷組織（1）MS+6-BA0.2+NAA0（6-BA占優(yōu)勢(shì)）（2）MS+6-BA0.2+NAA0.15（NAA增加濃度）（3）MS+6-BA0.2+NAA0.2（二者比例適中）

2.誘導(dǎo)菊花無(wú)菌苗莖段形成芽（4）MS+6-BA0+NAA1.0（NAA占優(yōu)勢(shì)）（5）MS+6-BA0.5+NAA1.0（6-BA增加濃度）（6）MS+6-BA1.5+NAA1.0（6-BA占優(yōu)勢(shì)）

根據(jù)設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基，利用提供的實(shí)驗(yàn)條件，我們將按照下列步驟完成實(shí)驗(yàn)。接種脫分化再分化愈傷組織外植體再分化沖洗表面消毒懷菊花無(wú)菌體系無(wú)菌苗葉片誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷帶芽莖段誘導(dǎo)產(chǎn)生芽

一、配制培養(yǎng)基二、無(wú)菌操作三、無(wú)菌培養(yǎng)四、觀察記錄實(shí)驗(yàn)步驟2.配制培養(yǎng)基

各個(gè)小組根據(jù)自己的設(shè)計(jì)方案進(jìn)行。

要求：每一種培養(yǎng)基500mL，分裝12瓶，每瓶40mL，每瓶做好標(biāo)記，如：1，2，……。（1）加溶液。順序?yàn)椋捍罅吭亍⒘吭亍郊映煞帧〈肌F鹽→植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑→蔗糖→冷凝脂（2）攪拌混勻;

（3）定容至500mL；（4）調(diào)pH值至5.6~5.8；（5）分裝、封口。

3.培養(yǎng)基滅菌高壓滅菌(壓力1.1kg/cm2,

121℃,20min

)。濕熱滅菌各物質(zhì)加入量：①大量元素母液（20×）50mL/L；②微量元素母液（100×）10mL/L；③有機(jī)附加成分母液（100×）10mL/L

；④蔗糖(30g/L)、冷凝脂(5.8g/L)⑤肌醇母液（100×）10mL/L

；⑥鐵鹽母液（200×）5mL/L

；⑦6-BA、NAA母液(0.5mg/mL)共500mL,分裝12瓶大量元素25mL微量元素5mL有機(jī)物5mL肌醇5mL鐵鹽2.5mL蔗糖15g冷凝脂2.9g6-BA0mL

NAA1mL調(diào)PH值分裝封口標(biāo)記滅菌編號(hào)培養(yǎng)基組成（mg/L）各物質(zhì)加入量（mL/500mL）6-BANAA1MS+6-BA0.2+NAA00.202MS+6-BA0.2+NAA0.150.20.153MS+6-BA0.2+NAA0.20.20.24MS+6-BA0+NAA1.001.05MS+6-BA0.5+NAA1.00.51.06MS+6-BA1.5+NAA1.01.51.0表1培養(yǎng)基中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑加入量共500mL,分裝12瓶大量元素25mL微量元素5mL有機(jī)物5mL肌醇5mL鐵鹽2.5mL蔗糖15g冷凝脂2.9g6-BA0mL

NAA1mL調(diào)PH值分裝封口標(biāo)記滅菌2.接種（1）切取材料左手持鑷，右手持刀→切取材料→葉片：0.5cm×0.5cm，莖段帶一個(gè)腋芽。

（2）接種取三角瓶→打開封口膜→接種葉塊：正接，每瓶3塊莖段：形態(tài)學(xué)下端插入培養(yǎng)基，每瓶3個(gè)

（3）重新封口（4）做標(biāo)記班級(jí)，日期（1）比較不同的培養(yǎng)基對(duì)愈傷組織形成的影響；（2）比較不同的培養(yǎng)基對(duì)芽形成的影響。結(jié)果分析與討論序號(hào)培養(yǎng)基接種數(shù)/個(gè)污染率/%愈傷組織誘導(dǎo)率/%苗誘導(dǎo)率/%愈傷組織或苗的生長(zhǎng)情況123456表植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)菊花愈傷組織及苗誘導(dǎo)的影響（d）