實(shí)訓(xùn)三固定化酵母細(xì)胞制備果葡糖漿一、基礎(chǔ)知識(shí)1、酶制劑的概念和種類（一）酶制劑含有酶的制品①定義：多酶片、加酶洗衣粉中的蛋白酶和脂肪酶②種類：A、液體酶制劑治療某些胃病的胃蛋白酶液B、固體酶制劑2、酶的生產(chǎn)①提取法定義：采用一定的技術(shù)直接從動(dòng)植物或微生物的組織、細(xì)胞中將酶提取出來優(yōu)點(diǎn)：簡單易行，在動(dòng)植物或微生物資源豐富的地區(qū)具有應(yīng)用價(jià)值實(shí)例：在屠宰廠，可以從家畜胰臟中提取出胰酶；在水果加工廠，可以從菠蘿皮中提取出菠蘿蛋白酶缺點(diǎn)：要有充足的原材料，廣泛應(yīng)用受到限制②發(fā)酵法定義：通過微生物發(fā)酵獲得所需要的酶如果是胞外酶，可以從發(fā)酵液中直接提取；如果是細(xì)胞內(nèi)酶，則可將細(xì)胞弄碎再經(jīng)過提取純化而得到易培養(yǎng)、繁殖速度快、便于大規(guī)模生產(chǎn)優(yōu)點(diǎn)：提取方式：③化學(xué)合成法缺點(diǎn)：成本高、已知分子結(jié)構(gòu)的酶提取出來的酶還要經(jīng)過分離、純化，再加入適量的穩(wěn)定劑和填充劑，制成相應(yīng)的酶制劑后才能用于催化化學(xué)反應(yīng)3、酶的提取和分離純化酶的應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：催化效率高、低耗能、低污染缺點(diǎn)：1、對(duì)環(huán)境條件敏感、易失活；2、難回收、不能再次利用、成本高：

3、反應(yīng)后，酶混在產(chǎn)物中，影響產(chǎn)品質(zhì)量如何解決？酶和細(xì)胞固定化方法1、物理吸附法2、包埋法3、化學(xué)結(jié)合法酶和細(xì)胞固定方法的選擇①酶適合采用化學(xué)結(jié)合和物理吸附法固定②細(xì)胞適合采用包埋法固定1、方法2、原因①細(xì)胞個(gè)大，酶分子很小②個(gè)體大的細(xì)胞難以被吸附或結(jié)合而個(gè)小的酶容易從包埋的材料中漏出類型優(yōu)點(diǎn)不足直接使用酶催化效率高，低耗能、低污染等對(duì)環(huán)境條件非常敏感，容易失活；溶液中的酶很難回收，不能被再次利用，提高了生產(chǎn)成本；反應(yīng)后酶會(huì)混在產(chǎn)物中，可能影響產(chǎn)品質(zhì)量固定化酶酶既能與反應(yīng)物接觸，又能與產(chǎn)物分離，同時(shí)，固定在載體上的酶還可以被反復(fù)利用一種酶只能催化一種化學(xué)反應(yīng)，而在生產(chǎn)實(shí)踐中，很多產(chǎn)物的形成都通過一系列的酶促反應(yīng)才能得到的固定化細(xì)胞成本低、操作容易、對(duì)酶活性的影響更小、可以催化一系列的反應(yīng)、容易回收固定后的酶或細(xì)胞與反應(yīng)物不容易接近，可能導(dǎo)致反應(yīng)效果下降由于大分子物質(zhì)難以自由通過細(xì)胞膜，因此固定化細(xì)胞的應(yīng)用也受到限制直接使用酶、固定化酶和固定化細(xì)胞催化的優(yōu)缺點(diǎn)實(shí)訓(xùn)三固定化酵母細(xì)胞制備果葡糖漿

一、實(shí)訓(xùn)目的

1.掌握酵母細(xì)胞固定化的方法。

2.掌握蔗糖酶催化制備果葡糖漿的原理及還原糖的定性檢測法。

3.掌握固定化細(xì)胞與固定化酶的催化特點(diǎn)。二、果葡糖漿制備原理酵母細(xì)胞中富含蔗糖酶，蔗糖酶能將蔗糖轉(zhuǎn)化成果糖和葡萄糖，葡萄糖和果糖同為六碳單糖，分子式為C6H12O6，但化學(xué)結(jié)構(gòu)不同，前者為醛糖，后者為酮糖。斐林試劑是新配制的Cu(OH)2溶液，它在加熱條件下與醛基反應(yīng)，被還原成磚紅色的Cu2O沉淀，可用于鑒定可溶性還原糖的存在。三、儀器和試劑

儀器：三角瓶（1）、注射器（1）、試管（2）、水浴鍋。試劑：

1、海藻酸鈉50克；

2、活性酵母100克；

3、10％蔗糖液：稱取100克蔗糖用水定容至1000毫升；

4.斐林甲、乙液：各50ml。

5、4％氯化鈣溶液（180克氯化鈣溶于4320克水中）四、實(shí)訓(xùn)步驟

l、稱取海藻酸鈉0.5克加入50毫升水中（250mL燒杯中），微火加熱溶解后冷卻到30℃左右（不燙手即可），將預(yù)先準(zhǔn)備好的0.5克活性酵母的懸液（加2~3mL水混勻于小燒杯中）加入混勻。然后用注射器吸取，讓其慢慢滴入4％氯化鈣溶液中（150毫升），制成直徑2－3毫米的球形固定化酵母。剛形成的凝膠珠應(yīng)在CaCl2溶液中浸泡一段時(shí)間，以便形成穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。將此固定化酵母裝入三角瓶中，加入10％的蔗糖液30毫升。經(jīng)固定化酵母水解30~40分鐘，其成分為葡萄糖和果糖的混合液。四、實(shí)訓(xùn)步驟

2、蔗糖酶的檢測吸取斐林甲、乙液各1毫升于干燥試管中，加入水解液1毫升，沸水中保溫，觀察顏色反應(yīng)。有氧化亞銅沉淀的則說明蔗糖已被水解，酵母中有蔗糖酶的存在?？瞻滓?0％蔗糖液做對(duì)照，其它同上。斐林試劑：斐林試劑甲：NaOH溶液，其濃度為0.1g/ml。斐林試劑乙：CuSO4溶液，其濃度為0.05g/ml。斐林試劑是新配制的Cu(OH)2溶液，它在加熱條件下與醛基反應(yīng)，被還原成磚紅色的Cu2O沉淀，可用于鑒定可溶性還原糖的存在。用斐林試劑鑒定可溶性還原糖時(shí)，溶