微生物實驗室的質(zhì)量保證第一頁，共四十三頁，2022年，8月28日微生物實驗室的質(zhì)量控制實驗室的規(guī)范化管理制定嚴(yán)格的管理度制定規(guī)范化操作程序

影響微生物試驗結(jié)果的重要因素包括：培養(yǎng)基的質(zhì)量和規(guī)范化操作菌種的保藏及實驗結(jié)果的正確判斷等。第二頁，共四十三頁，2022年，8月28日

微生物實驗室的質(zhì)量控制環(huán)境保證培養(yǎng)基保證無菌性檢查適用性檢查有效的方法方法驗證SOP操作有效的結(jié)果可靠的結(jié)論結(jié)果判斷第三頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的配制及質(zhì)量控制

第四頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基的配制

培養(yǎng)基可按處方制備也可使用按處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的商品

化成品培養(yǎng)基，脫水培養(yǎng)基除附有處方和使用說明外還應(yīng)注明

有

效期、貯存條件、適用性試驗的質(zhì)控菌株和用途。

配制時應(yīng)按使用說明上的要求操作，受潮結(jié)塊不能使用，確

保培養(yǎng)基的質(zhì)量符合要求。

第五頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基的配制

使用容器

-配制培養(yǎng)基使用的容器應(yīng)是玻璃器皿或搪瓷器皿。

-使用的器皿應(yīng)用蒸餾水或純化水完全沖洗。-配制培養(yǎng)基最常用的溶劑是純化水，特殊情況下需要用去離子水和蒸餾水.

第六頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的配制

對配制培養(yǎng)基的過程作詳細(xì)的記錄

記錄內(nèi)容

配制日期、培養(yǎng)基名稱、成分、配制數(shù)量、

質(zhì)量監(jiān)控結(jié)果等進(jìn)行全面詳細(xì)記錄。第七頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的制備方法

稱量

按照產(chǎn)品說明書的規(guī)定稱量，各稱量物的重量應(yīng)記錄。對培養(yǎng)基的組分應(yīng)準(zhǔn)確稱量，并要求有一定的精確度。第八頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的制備方法

配制將準(zhǔn)確稱量的各組分或脫水培養(yǎng)基加入溶劑中，完全

溶解，如需要可適當(dāng)加熱。

所有的培養(yǎng)基對熱都或多或少的敏感，因此當(dāng)培養(yǎng)基需要

加熱溶解時，應(yīng)注意不要加熱過度，否則會使培養(yǎng)基顏色變

深。配制培養(yǎng)基所用的器具應(yīng)能方便控制加熱和不斷攪拌。

當(dāng)培養(yǎng)基需要添加其它組分時，添加后也應(yīng)將其充分混勻。第九頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基的制備方法

分裝配制的培養(yǎng)基根據(jù)試驗需要分裝試管、傾注平皿、

制備斜面。經(jīng)滅菌的培養(yǎng)基分裝，應(yīng)在無菌環(huán)境下操作，避免污染。第十頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的制備方法

對熱敏感的培養(yǎng)基分裝容器

應(yīng)預(yù)先進(jìn)行滅菌，以保證培養(yǎng)基的無菌性。第十一頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基的制備方法

矯正pH

配制培養(yǎng)基必須矯正pH，干燥培養(yǎng)基也必須對pH進(jìn)行驗證，高壓滅菌前的pH應(yīng)比最終pH值高0.2左右。

矯正pH后的培養(yǎng)基應(yīng)加熱、過濾，使培養(yǎng)基澄清。第十二頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的滅菌

滅菌方法及條件不當(dāng)可直接影響培養(yǎng)基質(zhì)應(yīng)通過無菌

性試驗和促生長試驗進(jìn)行驗證.驗證方法同《中國藥典2010年版》附錄滅菌法。

第十三頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的滅菌

培養(yǎng)基的滅菌應(yīng)按照生產(chǎn)商提供或使用者驗證的

參數(shù)進(jìn)行。商品化的成品培養(yǎng)基必須附有所用滅菌方

法的資料。第十四頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的滅菌

不同種類培養(yǎng)基應(yīng)采用不同的滅菌方法，配制好的培養(yǎng)基滅菌一般多用流通蒸汽滅菌和濾膜過濾除菌。

流通蒸汽滅菌

是最常用的最有效的滅菌法，121℃，15min(121℃，30min)或116℃，40min可殺死所有的細(xì)菌芽孢。第十五頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的滅菌

濾膜過濾除菌

如配制的培養(yǎng)基含有不耐熱成分可采用濾膜過濾除菌和血清凝固器除菌。

-濾膜過濾除菌采用孔徑0.22um的濾膜過濾器.-濾膜材質(zhì)依過濾物品的性質(zhì)及目的而定。

不得對被濾過成分有吸附作用，不得有物質(zhì)釋放

和纖維

的脫落，也不得使用含有石棉的濾器。-濾器和濾膜在使用前應(yīng)進(jìn)行驗證，并進(jìn)行滅菌。血清凝固器80～100℃、30min，連續(xù)三天，間歇滅菌。第十六頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的貯藏

-商品化培養(yǎng)基應(yīng)根據(jù)使用說明書上的要求進(jìn)行儲存。-培養(yǎng)基標(biāo)簽上應(yīng)標(biāo)有批號，生產(chǎn)日期、有效期及培

養(yǎng)基的有關(guān)特性。-所采用的保藏和運輸條件應(yīng)使培養(yǎng)基最低限度失去

水分并提供機械保護。第十七頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的貯藏

脫水培養(yǎng)基或單獨配方組分應(yīng)在適當(dāng)?shù)臈l件下貯存，

如低溫、干燥和避光，所有的容器應(yīng)密閉，尤其是盛

有脫水培養(yǎng)基的容器.第十八頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的貯藏

配制好的培養(yǎng)基應(yīng)驗證的條件下貯藏-保存在2～25℃避光的環(huán)境。

-若保存于非密閉容器中，一般在三周內(nèi)使用，-若保存于密閉容器中，一般在一年內(nèi)使用。

第十九頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的貯藏-瓊脂培養(yǎng)基不得在0℃或0℃以下存放，防止冷凍破

壞凝膠特性。

-瓊脂平板最好現(xiàn)配現(xiàn)用，如置冰箱保存，一般不超

過一周，且應(yīng)密閉包裝，若延長保存，保存期需經(jīng)

驗證確定。

-培養(yǎng)基滅菌后應(yīng)立即取出，不得儲藏在高壓滅菌器

中，避免影響培養(yǎng)基的質(zhì)量。

第二十頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的貯藏-固體培養(yǎng)基滅菌后的再融化應(yīng)在加熱的水浴中或采

用流通蒸汽進(jìn)行，只允許一次，融化的培養(yǎng)基應(yīng)放在45～50℃的水浴中，不得超過8小時。

-使用過的培養(yǎng)基（包括失效的培養(yǎng)基）應(yīng)按照國家

污染廢物處理相關(guān)規(guī)定進(jìn)行。第二十一頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

所有配制好的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行驗證，驗證方法參照《中國藥典2010年版》附錄無菌檢查或微生物限度檢

查項下有關(guān)規(guī)定進(jìn)行。第二十二頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

實驗室配制的培養(yǎng)基監(jiān)控項目

外觀、性狀、pH、促生長試驗、定期的穩(wěn)定性檢查

以及培養(yǎng)基有效期的確定。第二十三頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

驗證時間

-由同一批脫水培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基時，若采用已驗證的配制和滅菌程序，那么可不進(jìn)行批批促生長試驗。-如果培養(yǎng)基制備的方法未經(jīng)驗證，那么，配制的每一批培養(yǎng)基必須進(jìn)行促生長試驗。

試驗方法

-根據(jù)培養(yǎng)基的用途參照《中國藥典2010年版》附錄

無菌檢查或微生物限度檢查項下有關(guān)規(guī)定進(jìn)行。

第二十四頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

培養(yǎng)基的有效期是指已通過促生長試驗的培養(yǎng)基在整個

有效期內(nèi)均需符合這些相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)。

每批培養(yǎng)基儲存的時間將取決于一定存放條件（包括容器

和密封性）的培養(yǎng)基組成成分的穩(wěn)定性。第二十五頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

試驗結(jié)果處理

-當(dāng)批培養(yǎng)基不符合促生長試驗，應(yīng)尋找造成不合格的原因。

-這個調(diào)查包括采取適當(dāng)?shù)男袆右苑乐箚栴}的重復(fù)出現(xiàn)。

-如果未找到原因或還沒有解決有關(guān)培養(yǎng)基的促生長問題，

任何不符合要求的批次均不能使用。第二十六頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

鑒定微生物的診斷試劑

如

革蘭染色、氧化酶試驗試劑等。質(zhì)量控制試驗與培養(yǎng)基質(zhì)量控制試驗相似。

試劑用于未知樣品鑒定-選擇正確的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控菌-按使用說明上的要求進(jìn)行質(zhì)控試驗。第二十七頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基應(yīng)特別小心防護。尤其是用

于關(guān)鍵區(qū)域監(jiān)控的培養(yǎng)基最好是終端滅菌，如果不能

采用終端滅菌的培養(yǎng)基，那么在使用前應(yīng)進(jìn)行100%

的預(yù)培養(yǎng)。防止將外來的污染帶到環(huán)境中及避免出現(xiàn)假陽性結(jié)果。第二十八頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

測定PH值每批培養(yǎng)基滅菌后均應(yīng)測定PH值；在冷卻至室溫

（25℃）進(jìn)行測定。

除非經(jīng)驗證表明培養(yǎng)基的PH允許的變化范圍很寬，

否則，培養(yǎng)基的PH的范圍不得超過規(guī)定的±0.2。第二十九頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

一般性狀

-制成平板或分裝于試管的培養(yǎng)基應(yīng)檢查；容器和蓋

子的破裂，裝量。

-固體培養(yǎng)基因水分流失而造成表面產(chǎn)生裂縫或漣漪。

-其他如溶血，可能冷藏溫度下形成的結(jié)晶，大量的汽泡，微生物污染，氧化還原指示劑的狀況，批數(shù)

量和有效期的檢查和記錄，培養(yǎng)基的無菌檢查等。第三十頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

-液體培養(yǎng)基應(yīng)觀察培養(yǎng)基的顏色，是否有沉淀，

微生物污染，氧化還原指示劑的狀況，批數(shù)量

和有效期的檢查和記錄等。第三十一頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

培養(yǎng)基的促生長和抑制性能試驗

無菌檢查用培養(yǎng)基使用前應(yīng)進(jìn)行適用性試驗

適用性試驗

無菌性試驗

靈敏度檢查第三十二頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

培養(yǎng)基的靈敏度檢查

菌種金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]

銅綠假單胞菌[CMCC(B)10104]

枯草芽胞桿菌[CMCC(B)63501]

生孢梭菌[CMCC(B)64941]

白色念珠菌[CMCC(F)98001]

黑曲霉[CMCC(F)98003]

第三十三頁，共四十三頁，2022年，8月28日靈敏度檢查培養(yǎng)基接種量試驗菌培養(yǎng)溫度培養(yǎng)基培養(yǎng)時間接種管數(shù)裝量

(℃)(天)（支）（支）

金黃色葡萄球菌30～35硫乙醇酸鹽流體3212銅綠假單胞菌3212生孢梭菌3212白色念珠菌23～28改良馬丁529黑曲霉39

①每種菌液接種量含菌小于100cfu②同時做1支空白對照培養(yǎng)基的質(zhì)量控制第三十四頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

結(jié)果判定空白對照管應(yīng)無菌生長。

-若加菌的培養(yǎng)基管均生長良好，判該培養(yǎng)基的靈敏度

檢查符合規(guī)定。

-若加菌的培養(yǎng)基管不生長或生長不好，判培養(yǎng)基的靈

敏度檢查不符合規(guī)定，不能用于無菌試驗，并尋找造

成不合格的原因。培養(yǎng)基的適用性檢查可在供試品的無菌檢查前或與供

試品的無菌檢查同時進(jìn)行。第三十五頁，共四十三頁，2022年，8月28日

微生物限度檢查(計數(shù)培養(yǎng)基)培養(yǎng)基的適用性檢查

微生物限度檢查(計數(shù)培養(yǎng)基)

使用前應(yīng)進(jìn)行適用性試驗，適用性試驗包括促生長、抑制及指示能力檢查。第三十六頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基的適用性檢查菌種大腸埃希菌[CMCC（B）26003]金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003]枯草芽孢桿菌[CMCC(B)63501]白色念珠球菌[CMCC（B）98001]黑曲霉[CMCC（F）98003]第三十七頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的適用性檢查

檢查方法菌種培養(yǎng)基加入菌數(shù)培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時間（cfu）（℃）（h）大腸埃希菌金黃色葡萄球菌營養(yǎng)瓊脂50~10030~3548

枯草芽孢桿菌黑曲霉玫瑰紅鈉瓊脂50~10023~2872

白色念珠球菌白色念珠球菌酵母浸出粉胨50~10023~2872

葡萄糖瓊脂

第三十八頁，共四十三頁，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的適用性檢查

-菌懸液制備后在室溫下放置應(yīng)在2小時內(nèi)使用。-保存在2～8℃可以在24小時內(nèi)使用。-黑曲霉孢子懸液可保存在2～8℃，在驗證過

的貯存期內(nèi)使用。第三十九頁，共四十三頁，2022年，8月28日

結(jié)果判定

被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)不得小于對照培養(yǎng)基菌落平均數(shù)的70%，且菌落形態(tài)、大小應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致。判該培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。第四十頁，共四十三頁，2022年，8月28日⑶控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查控制菌檢查用培養(yǎng)基的促生長、抑制及指示能力檢查控制菌檢查培養(yǎng)基特性試驗菌株大腸埃希菌膽鹽乳糖促生長能力大腸埃希菌抑制能力金黃色葡萄球菌

MUG促生長能力+指示能力大腸埃希菌曙紅亞甲藍(lán)或麥康凱促生長能力+指示能力大腸埃希菌大腸菌群乳糖膽鹽促生長能力大腸埃希菌抑制能力金黃色葡萄球菌乳糖發(fā)酵促生長能力+指示能力大腸埃希菌曙紅亞甲藍(lán)或麥康凱促生長能力+指示能力大腸埃希菌

第四十一頁，共四十三頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基的適用性檢查沙門菌營養(yǎng)肉湯促生長能力乙型付傷寒沙門菌四硫磺酸鈉亮綠促生長能力乙型付傷寒沙門菌抑制能力金黃色葡萄球菌膽鹽硫乳瓊脂或沙門、志賀氏屬瓊脂培養(yǎng)基促生長能力+指示能力乙型付傷寒沙門菌曙紅亞甲藍(lán)瓊脂或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基促生長能力+指示能力乙型付傷寒沙門菌