3-1高效液相色譜法的特點(diǎn)1.高效液相色譜法概述1960年代，由于氣相色譜對(duì)高沸點(diǎn)有機(jī)物分析的局限性，為了分離蛋白質(zhì)、核酸等不易汽化的大分子物質(zhì)，氣相色譜的理論和方法被重新引入經(jīng)典液相色譜。1960年代末科克蘭、哈伯、荷瓦斯、莆黑斯、里普斯克等人開(kāi)發(fā)了世界上第一臺(tái)高效液相色譜儀，開(kāi)啟了高效液相色譜的時(shí)代。

1971年科克蘭等人出版了《液相色譜的現(xiàn)代實(shí)踐》一書(shū)，標(biāo)志著高效液相色譜法（HPLC）正式建立?，F(xiàn)在是1頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二它是在經(jīng)典液相色譜基礎(chǔ)上，引入了氣相色譜的理論，在技術(shù)上采用了高壓泵、高效固定相和高靈敏度檢測(cè)器，因而具備速度快、效率高、靈敏度高、操作自動(dòng)化的特點(diǎn)．為了更好地了解高效液相色譜法優(yōu)越性，現(xiàn)從兩方面進(jìn)行比較：一、概述現(xiàn)在是2頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二

1．高效液相色譜法與經(jīng)典液相色譜法

高效液相色譜法的最大優(yōu)點(diǎn)在于高速、高效、高靈敏度、高自動(dòng)化．液體的流動(dòng)相高速通過(guò)時(shí)，受到的阻力較大，為了能迅速通過(guò)色譜柱，必須對(duì)流動(dòng)相施加高壓15~35Mpa，因此高壓、高速是高效液相色譜的特點(diǎn)之一?，F(xiàn)在是3頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二高效液相色譜法與經(jīng)典液相色譜法的比較

經(jīng)典液相色譜法高效液相色譜法粒徑(μm)75-6003-50（常用5-10）柱前壓力(atm)0.01-1.020-300分析時(shí)間(h)1-200.05-1.0色譜柱長(zhǎng)度(cm)50-2002-30柱效(塊/m)2-50104-105樣品用量(g)1-1010-6-10-2現(xiàn)在是4頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二2．高效液相色譜法與氣相色譜法（l）氣相色譜法分析對(duì)象只限于分析氣體和沸點(diǎn)較低的化合物，它們僅占有機(jī)物總數(shù)的20％．對(duì)于占有機(jī)物總數(shù)近80％的那些高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、摩爾質(zhì)量大的物質(zhì)，目前主要采用高效液相色譜法進(jìn)行分離和分析．

現(xiàn)在是5頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二

(2)高效GC1000塔板/m(填充柱）HPLC3W塔板/m現(xiàn)在是6頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二(3)氣相色譜一般都在較高溫度下進(jìn)行的，而高效液相色譜法則經(jīng)?？稍谑覝貤l件下工作．總之，高效液相色譜法是吸取了氣相色譜與經(jīng)典液相色譜優(yōu)點(diǎn)，并用現(xiàn)代化手段加以改進(jìn)，因此得到迅猛的發(fā)展．現(xiàn)在是7頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二高效液相色譜與氣相色譜的比較

GCHPLC應(yīng)用范圍熱穩(wěn)定、低沸點(diǎn)的物質(zhì)熱不穩(wěn)定、高沸點(diǎn)、離子型的物質(zhì)熱力學(xué)理論較成熟正在發(fā)展中分析成本低高分離能力與柱的類(lèi)型有關(guān)較高現(xiàn)在是8頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二液相色譜儀器

highperformanceliquidchromatograph現(xiàn)在是9頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二3.高效液相色譜法的應(yīng)用

1.藥物分析

約80%的藥物都能用高效液相色譜進(jìn)行分離和純化。特別是手性藥物的分離分析。2.食品分析①食品本身組成,特別是營(yíng)養(yǎng)成分，如糖、有機(jī)酸、維生素、蛋白質(zhì)、氨基酸、脂肪的分析；②食品添加劑，如防腐劑、抗氧化劑、合成色素、甜味劑和保鮮化學(xué)物質(zhì)的分析；③食品污染物，如農(nóng)藥殘余和黃曲霉素等的分析。

3.制備分離應(yīng)用

要制備或提取一些高純化合物，如新合成化合物的結(jié)構(gòu)鑒定，藥物的生物和毒理試驗(yàn)?，F(xiàn)在是10頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二4.高效液相色譜法的特點(diǎn)高壓（150×105~350×105Pa）高速（in1hr）高效（3w/m)高靈敏度(UV-ng;FL-10pg;μTAS)現(xiàn)在是11頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二人參、西洋參與三七的鑒別R1Rg1ReRb1RdABCRg1Rg1ReReRfRb1RcRb2RdRc三種藥材的HPLC指紋圖譜現(xiàn)在是12頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二3-2影響色譜峰擴(kuò)展及色譜分離的因素H=A+B/μ+Cμ高效液相色譜中的速率方程現(xiàn)在是13頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二高效液相色譜中的速率方程渦流擴(kuò)散項(xiàng)縱向擴(kuò)散流動(dòng)相傳質(zhì)滯留區(qū)傳質(zhì)固定相內(nèi)傳質(zhì)現(xiàn)在是14頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二2.對(duì)速率方程的討論選用細(xì)顆粒填料可獲高柱效（5μm）流動(dòng)相流速低，有利于達(dá)到高柱效選用黏度小的流動(dòng)相有利于提高柱效溫度的影響(適當(dāng)提高柱溫以降低流動(dòng)相黏度）液膜厚度的影響現(xiàn)在是15頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二3.柱外效應(yīng)由于色譜柱之外的因素引起的色譜峰的展寬，例如進(jìn)樣系統(tǒng)、連接管路及檢測(cè)器的死體積等?，F(xiàn)在是16頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二3-3高效液相色譜的類(lèi)型及其分離原理

液—液分配色譜及化學(xué)鍵合相色譜液—固吸附色譜離子交換色譜離子色譜空間排阻色譜

現(xiàn)在是17頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二流動(dòng)相和固定相都是液體分離原理：利用組分在兩相中溶解度的差異固定相：載體+固定液早期物理或機(jī)械法涂漬固定液，由于易流失已較少采用；現(xiàn)在應(yīng)用最廣的是化學(xué)鍵合固定相：將各種不同基團(tuán)通過(guò)化學(xué)反應(yīng)鍵合到擔(dān)體（硅膠）表面的游離羥基上。

liquid-liquidpartitionchromatography1、液-液分配色譜現(xiàn)在是18頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二液—液分配色譜固定液類(lèi)型：β,β’—氧二丙腈、聚乙二醇、角鯊?fù)榈?。液—液色譜流動(dòng)相應(yīng)盡可能不與固定液互溶，兩者的極性差別應(yīng)很大。固定液為極性、流動(dòng)相為非極性的液—液色譜稱(chēng)為正相色譜，反之，則稱(chēng)為反相色譜。現(xiàn)在是19頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二

正相色譜——固定液極性>流動(dòng)相極性（NLLC）

極性小的組分先出柱，極性大的組分后出柱適于分離極性組分

反相色譜——固定液極性<流動(dòng)相極性（RLLC）

極性大的組分先出柱，極性小的組分后出柱適于分離非極性組分液液分配色譜法現(xiàn)在是20頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二液—液分配色譜應(yīng)用：液—液色譜能分離多種類(lèi)型化合物，如烷烴、烯烴、芳烴、染料、甾族化合物等。

現(xiàn)在是21頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二利用化學(xué)反應(yīng)將固定液的官能團(tuán)鍵合在載體表面1．分離原理：分配+吸附（以L(fǎng)LC為基礎(chǔ)）2．特點(diǎn)：不易流失熱穩(wěn)定性好化學(xué)性能好載樣量大適于梯度洗脫化學(xué)鍵合固定相（chemicallybondedphasechromatography）現(xiàn)在是22頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二分離原理：利用溶質(zhì)分子占據(jù)固定相表面吸附活性中心能力的差異

分離前提：K不等或k不等流動(dòng)相為液體，固定相為固體吸附劑2、液-固吸附色譜

liquid-solidadsorptionchromatography現(xiàn)在是23頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二液—固吸附色譜固體吸附劑主要類(lèi)型：極性的硅膠（應(yīng)用最廣）氧化鋁分子篩非極性的活性炭現(xiàn)在是24頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二液—固吸附色譜應(yīng)用：分離極性不同的試樣分離含極性基團(tuán)相同但數(shù)目不同的試樣分離異構(gòu)體現(xiàn)在是25頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二3、離子交換色譜

ion-exchangechromatography

固定相：陰離子或陽(yáng)離子交換樹(shù)脂；

流動(dòng)相：陰離子交換樹(shù)脂作固定相，采用酸性水溶液；陽(yáng)離子離子交換樹(shù)脂作固定相，采用堿性水溶液；

基本原理：組分在固定相上發(fā)生的反復(fù)離子交換反應(yīng)；組分與離子交換劑之間親和力的大小與離子半徑、電荷、存在形式等有關(guān)。親和力大，保留時(shí)間長(zhǎng)；陽(yáng)離子交換：R—SO3H+M+=R—SO3M+H+

陰離子交換：R—NR4OH+X-=R—NR4X+OH-

應(yīng)用：離子及可離解的化合物，包括氨基酸、核酸等?，F(xiàn)在是26頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二離子色譜法是由離子交換色譜法派生出來(lái)的一種分離方法。由于離子交換色譜法在無(wú)機(jī)離子的分析和應(yīng)用受到限制。例如，對(duì)于那些不能采用紫外檢測(cè)器的被測(cè)離子，如采用電導(dǎo)檢測(cè)器，由于被測(cè)離子的電導(dǎo)信號(hào)被強(qiáng)電解質(zhì)流動(dòng)相的高背景電導(dǎo)信號(hào)掩沒(méi)而無(wú)法檢測(cè)。為了解決這一問(wèn)題，1975年Small等人提出一種能同時(shí)測(cè)定多種無(wú)機(jī)和有機(jī)離子的新技術(shù)。4、離子色譜

ionchromatography現(xiàn)在是27頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二離子色譜應(yīng)用：待測(cè)陰離子隨流動(dòng)相通過(guò)離子交換樹(shù)脂時(shí)發(fā)生離子交換反應(yīng)。至今離子色譜是分離分析常見(jiàn)無(wú)機(jī)混合陰離子的最佳分析方法。現(xiàn)在是28頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二現(xiàn)在是29頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二5、空間排阻色譜（凝膠色譜）

size-exclusionchromatography固定相：凝膠gel具有一定大小孔隙分布。

原理：按分子大小分離。小分子可以擴(kuò)散到凝膠空隙，由其中通過(guò)，出峰最慢；中等分子只能通過(guò)部分凝膠空隙，中速通過(guò)；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶劑分子非常小，故在最后出峰。整個(gè)試樣都在tM(死時(shí)間）之前出峰?，F(xiàn)在是30頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二空間排阻色譜法特點(diǎn)：峰擴(kuò)展比較小流動(dòng)相和固定相的選擇比較簡(jiǎn)單不能分離異構(gòu)體（>10%）可對(duì)相對(duì)分子質(zhì)量在100-8*105范圍內(nèi)的化合物按質(zhì)量分離現(xiàn)在是31頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二液相色譜分離類(lèi)型的選擇（1）根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量選擇相對(duì)分子質(zhì)量十分低的樣品，其揮發(fā)性好，適用于氣相色譜．標(biāo)準(zhǔn)液相色譜類(lèi)型（液--固、液--液、及離子交換色譜）最適合的相對(duì)分子質(zhì)量范圍是200～2000．對(duì)于相對(duì)分子質(zhì)量大于2000的樣品，則用尺寸排阻法為最佳．現(xiàn)在是32頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二（2）根據(jù)溶解度選擇如：樣品可溶于水并屬于能離解物質(zhì)，以采用離子交換色譜為佳；如：樣品可溶于烴類(lèi)（如苯或異辛烷），則可采用液--固吸附色譜

現(xiàn)在是33頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二（3）根據(jù)分子結(jié)構(gòu)選擇例如，酸、堿化合物宜用離子交換色譜；脂肪族或芳香族宜用液--液分配色譜或液--固吸附色譜；異構(gòu)體用液--固吸附色譜；同系物用液--液分配色譜．等等?，F(xiàn)在是34頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二分離類(lèi)型選擇總結(jié)，P93現(xiàn)在是35頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二3-4液相色譜法固定相

高效液相色譜柱是HPLC的心臟。左右心房分別是：固定相和其填裝技術(shù)（－）固定相高效液相色譜固定相以承受高壓能力來(lái)分類(lèi)，可分為剛性固體和硬膠兩大類(lèi)．

剛性固體以二氧化硅為基質(zhì)，可承受7.O×108～1.O×109Pa的高壓，可制成直徑、形狀、孔隙度不同的顆粒．現(xiàn)在是36頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二

（2）全多孔型

由氧化硅、氧化鋁、硅藻土等制成的多孔球體；早期采用100μm的大顆粒，表面涂漬固定液，性能不佳已不多見(jiàn)；現(xiàn)采用5~10μm的小顆粒，比表面積和柱容量都很大。

（1）表面多孔型

基體是30~40μm實(shí)心玻璃微球，表面附著一層厚度為1~2μm的多孔活性材料，如硅膠、氧化鋁等。表面積小，柱容量低。固定相按照空隙深度分類(lèi)：現(xiàn)在是37頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二1、液液色譜法、鍵合相色譜法及離子對(duì)色譜法固定相1）全多孔型單體（porousmicrobeadssupport）2）表層多孔型擔(dān)體（pellicularmicrobeadssupport）現(xiàn)在是38頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二化學(xué)鍵合固定相（1960后）在硅膠表面利用硅烷化反應(yīng)制得Si-O-Si-C型的反應(yīng)該化學(xué)鍵穩(wěn)定，是廣泛使用的固定相（C-18）。現(xiàn)在是39頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二類(lèi)型分離方式應(yīng)用特點(diǎn)C-18反相、離子對(duì)普適性好，保留值大。溶于水的高極性化合物、中等極性化合物C-8反相、離子對(duì)與C-18類(lèi)似，保留值略小C-3,C-4反相保留值小，適合肽類(lèi)和蛋白質(zhì)苯基反相保留適中，選擇性不同。非極性、中等極性化合物-CN反相、正相選擇性與硅膠類(lèi)似，保留小，用途廣-NH2反相、正相分離糖類(lèi)、核苷酸、固醇等二醇基正相分離有機(jī)酸、排阻分蛋白質(zhì)等醚基反相、正相分離酚類(lèi)、芳硝基化合物，保留比C-18強(qiáng)聚苯乙烯基反相pH使用范圍廣，對(duì)部分分離峰形好，壽命長(zhǎng)常用固定相表3-2現(xiàn)在是40頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二化學(xué)鍵合固定相特點(diǎn)表面沒(méi)有液坑，傳質(zhì)快無(wú)固定液流失可以改變選擇性（通過(guò)鍵合不同官能團(tuán)）有利于梯度洗提，及配用靈敏的檢測(cè)器現(xiàn)在是41頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二2．液固吸附色譜法固定相（2）高分子多孔小球：YSG

原理：吸附+分配蒹小孔凝膠作用特點(diǎn)：柱選擇性好，峰形好，柱效低適用：分離弱極性化合物（1）硅膠

表孔硅膠（薄殼硅膠）全多孔硅膠無(wú)定形YWG5~6μm5×104球形YQG3~4μm8×108

堆積硅珠YQG3~4μm8×108理想

原理：吸附特點(diǎn)：峰易拖尾適用：分離極性化合物現(xiàn)在是42頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二在氣相色譜中，載氣是惰性的，常用的只有三四種，他們的性質(zhì)差異也不大，所以要提高柱子的選擇性，只要選擇合適的固定相即可。但在液相色譜中，當(dāng)固定相選定后，流動(dòng)相的種類(lèi)、配比能顯著的影響分離效果，因此，流動(dòng)相的選擇也非常重要。液相色譜的流動(dòng)相又稱(chēng)為：淋洗液，洗脫劑。3-5液相色譜法流動(dòng)相

現(xiàn)在是43頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二

流動(dòng)相的選擇原則流動(dòng)相純度要高（色譜純）且價(jià)格便宜應(yīng)避免使用會(huì)引起柱效損失或保留特性變化的溶劑對(duì)試樣要有適宜的溶解度溶劑的粘度要小些為好應(yīng)與檢測(cè)器相匹配現(xiàn)在是44頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二常用溶劑的極性順序：

水(最大)>甲酰胺>乙腈>甲醇>乙醇>丙醇>丙酮>二氧六環(huán)>四氫呋喃>甲乙酮>正丁醇>乙酸乙酯>乙醚>異丙醚>二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳>環(huán)己烷>己烷>煤油(最小)

在選擇溶劑時(shí)，溶劑的極性是選擇的重要依據(jù)。例如，采用正相液-液分配分離時(shí)：首先選擇中等極性溶劑，若組分的保留時(shí)間太短，降低溶劑極性，反之增加。也可在低極性溶劑中，逐漸增加其中的極性溶劑，使保留時(shí)間縮短。在選擇溶劑時(shí)，溶劑的極性是選擇的重要依據(jù)現(xiàn)在是45頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二高效液相色譜儀3-6高效液相色譜儀現(xiàn)在是46頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二高效液相色譜儀：貯液器、高壓泵、梯度洗提裝置、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、恒溫器和色譜工作站等。主要工作部件現(xiàn)在是47頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二1.高壓泵色譜柱很細(xì)1-6mm，填充劑粒度小5-10μm，阻力很大

要求：流量穩(wěn)定，壓力平穩(wěn)無(wú)脈動(dòng)（1）往復(fù)式柱塞泵（2）氣動(dòng)放大泵恒流泵和恒壓泵兩類(lèi)現(xiàn)在是48頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二2.梯度洗提梯度洗提即程序控制流動(dòng)相的組成，使在整個(gè)分離過(guò)程中，溶劑強(qiáng)度按照特定的變化規(guī)律增加。

優(yōu)點(diǎn)：分離復(fù)雜混合物，使所有組分都處在最佳的k值范圍內(nèi)。

缺點(diǎn)：檢測(cè)器的使用受到限制，分析結(jié)果的重復(fù)性取決于流速的穩(wěn)定性。柱子需進(jìn)行再生處理。現(xiàn)在是49頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二應(yīng)用舉例現(xiàn)在是50頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二3.進(jìn)樣裝置注射器進(jìn)樣裝置高壓定量進(jìn)樣閥現(xiàn)在是51頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二旋轉(zhuǎn)式六通閥

六通進(jìn)樣閥結(jié)構(gòu)示意圖現(xiàn)在是52頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二

高效液相色譜柱比氣相色譜柱短得多（約5～30cm），所以柱外展寬（又稱(chēng)柱外效應(yīng)）較突出。進(jìn)樣系統(tǒng)是引起往前展寬的主要因素，因此高效液相色譜法中對(duì)進(jìn)樣技術(shù)要求較嚴(yán)。

進(jìn)樣閥現(xiàn)在是53頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二色譜柱是液相色譜儀的心臟部件，它包括柱管與固定相兩部分．柱管材料有玻璃、不銹鋼、鋁、銅及內(nèi)襯光滑的聚合材料的其他金屬．玻璃管耐壓有限，故金屬管用得較多，目前標(biāo)準(zhǔn)色譜柱長(zhǎng)15～30cm，內(nèi)徑為4.6mm或3.9mm，直型不銹鋼柱4.分離系統(tǒng)——色譜柱現(xiàn)在是54頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二

柱子裝填得好壞對(duì)柱效影響很大。對(duì)于細(xì)粒度的填料（＜20μm）一般采用勻漿填充法裝柱，先將填料調(diào)成勻漿，然后在高壓泵作用下，快速將其壓入裝有洗脫液的色譜柱內(nèi)，經(jīng)沖洗后，即可備用?，F(xiàn)在是55頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二液相色譜柱發(fā)展趨勢(shì)減小填料顆粒度（3~5μm），提高柱效；可以使用更短的柱（數(shù)cm），加快分析速度;減小柱徑（內(nèi)徑<1mm),降低溶劑用量又提高檢測(cè)濃度現(xiàn)在是56頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二5．檢測(cè)器

紫外檢測(cè)器熒光檢測(cè)器示差折光檢測(cè)器電導(dǎo)檢測(cè)器現(xiàn)在是57頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二5．檢測(cè)系統(tǒng)

在液相色譜中，有兩種基本類(lèi)型的檢測(cè)器．一類(lèi)是溶質(zhì)性檢測(cè)器，它僅對(duì)被分離組分的物理或化學(xué)特性有響應(yīng)，屬于這類(lèi)檢測(cè)器的有紫外、熒光、電化學(xué)檢測(cè)器等．另一類(lèi)是總體檢測(cè)器，它對(duì)試樣和洗脫液總的物理或化學(xué)性質(zhì)有響應(yīng)，屬于這類(lèi)檢測(cè)器的有示差折光，電導(dǎo)檢測(cè)器等．現(xiàn)在是58頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二理想的檢測(cè)器特性靈敏度高重現(xiàn)性好響應(yīng)快線(xiàn)性范圍寬適用范圍廣對(duì)流動(dòng)相流量和溫度波動(dòng)不敏感死體積小現(xiàn)在是59頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二(1)

紫外－可見(jiàn)檢測(cè)器

應(yīng)用最廣，適用于對(duì)紫外可見(jiàn)光有吸收的樣品的檢測(cè)。對(duì)大部分有機(jī)化合物有響應(yīng)。其結(jié)構(gòu)同紫外－可見(jiàn)分光光度計(jì)。

現(xiàn)將常用的檢測(cè)器介紹如下:現(xiàn)在是60頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二紫外檢測(cè)器

應(yīng)用最廣，對(duì)大部分有機(jī)化合物有響應(yīng)。現(xiàn)在是61頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二響應(yīng)特性選擇性檢測(cè)器，如芳烴類(lèi)化合物的檢測(cè)靈敏度高，可檢測(cè)10-9g/mL的物質(zhì)線(xiàn)性范圍寬，104-105對(duì)溫度及流動(dòng)相的改變不敏感適合梯度洗提HPLC常規(guī)檢測(cè)器現(xiàn)在是62頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二示差折光檢測(cè)器示差折光檢測(cè)器是依據(jù)不同性質(zhì)的溶液對(duì)光具有不同的折射率，通過(guò)連續(xù)測(cè)量溶液折射率的變化，便可測(cè)知各組分的含量。

現(xiàn)在是63頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二示差折光檢測(cè)器

（differentialrefractiveindexdetector）

除紫外檢測(cè)器之外應(yīng)用最多的檢測(cè)器；可連續(xù)檢測(cè)參比池和樣品池中流動(dòng)相之間的折光指數(shù)差值。差值與濃度呈正比；

通用型檢測(cè)器（每種物質(zhì)具有不同的折光指數(shù)）；靈敏度低、對(duì)溫度敏感、不能用于梯度洗脫；偏轉(zhuǎn)式、反射式和干涉型三種現(xiàn)在是64頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二響應(yīng)特性通用型的濃度檢測(cè)器低靈敏度（10-7g/mL)基線(xiàn)易受溫度的影響（溫度精密度±10-3℃）不適合梯度洗提現(xiàn)在是65頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二熒光檢測(cè)器（fluorescencedetector）根據(jù)某些物質(zhì)受激后能產(chǎn)生一定強(qiáng)度熒光的性質(zhì)，可制成靈敏度極高的熒光檢測(cè)器。

現(xiàn)在是66頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二響應(yīng)特性選擇性檢測(cè)器。對(duì)多環(huán)芳烴，維生素B、黃曲霉素、卟啉類(lèi)化合物、農(nóng)藥、藥物、氨基酸、甾類(lèi)化合物等有響應(yīng)。高靈敏度，比紫外高約1000倍適合梯度洗提現(xiàn)在是67頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二熒光檢測(cè)器結(jié)構(gòu)現(xiàn)在是68頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二應(yīng)用舉例現(xiàn)在是69頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二電導(dǎo)檢測(cè)器結(jié)構(gòu)離子色譜法中使用最廣的檢測(cè)器原理：根據(jù)物質(zhì)在某些介質(zhì)中解離后所產(chǎn)生的電導(dǎo)變化來(lái)進(jìn)行測(cè)定現(xiàn)在是70頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二響應(yīng)特性選擇性檢測(cè)器，對(duì)離子型化合物有響應(yīng)靈敏度高受溫度的影響不能梯度洗提現(xiàn)在是71頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二3-7HPLC分離類(lèi)型的選擇選擇合適的液相色譜分離類(lèi)型

了解分析對(duì)象要分析的組分的大致濃度干擾物質(zhì)試樣的性質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu)分子量極性、酸堿性溶解度參數(shù)現(xiàn)在是72頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二色譜分離方式的選擇

根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量選擇根據(jù)溶解性選擇根據(jù)分子結(jié)構(gòu)選擇

現(xiàn)在是73頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量選擇相對(duì)分子質(zhì)量低的試樣(≤400)因其揮發(fā)性強(qiáng)，宜采用氣相色譜分離；相對(duì)分子質(zhì)量大于2000的化合物可采用液相色譜分離；相對(duì)分子質(zhì)量介于400—2000范圍內(nèi)的分子，應(yīng)視試樣性質(zhì)選用液—固吸附色譜、液—液分配色譜或離子交換色譜分離?，F(xiàn)在是74頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二根據(jù)分子結(jié)構(gòu)選擇

液—固吸附色譜適用于異構(gòu)體分離；液—液分配色譜可用于同系物分離；含有離子基團(tuán)和能電離基團(tuán)的組分，可采用離子交換色譜分離；生物大分子或高分子聚合物可用空間排阻（凝膠）色譜分離?，F(xiàn)在是75頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二根據(jù)溶解性選擇水溶性離子化合物與共價(jià)化合物可分別采用離子交換色譜或液—液分配色譜分離。對(duì)于非水溶性化合物，若易溶于烴類(lèi)溶劑，可采用液—固吸附色譜分離；若溶于二氯甲烷或氯仿，可采用液—固吸附色譜或正相液—液分配色譜分離；若溶于甲醇，則用反相液—液分配色譜分離。現(xiàn)在是76頁(yè)\一共有82頁(yè)\編輯于星期二溶于水——排阻色譜，水為流動(dòng)相相對(duì)分子質(zhì)量＞2000不溶于水——排阻色譜，非水流動(dòng)相同系物——鍵合相色譜不溶于水異構(gòu)體——液固色譜樣品分子大小差異——排阻色譜