結(jié)核檢測(cè)新技術(shù)廣州市場(chǎng)部徐未概述結(jié)核?。河山Y(jié)核分枝桿菌引起的一種慢性感染疾病，以肺結(jié)核最為常見(jiàn)，主要病變?yōu)榻Y(jié)核結(jié)節(jié)、侵潤(rùn)、干酪樣變和空洞形成。傳染源：患者和動(dòng)物（牛）傳播途徑：空氣途徑為主。易感人群：普遍易感。嬰幼兒、青春后期及老年人發(fā)病率較高。肺結(jié)核最常見(jiàn)的癥狀是持續(xù)大于2周的排痰性咳嗽中國(guó)結(jié)核病患病約為600萬(wàn)2023/5/243結(jié)核病感染率44.5%123耐多藥結(jié)核病率6.8%4活動(dòng)性肺結(jié)核患病率459/10萬(wàn)菌陰肺結(jié)核病患病率340/10萬(wàn)（74.1%）現(xiàn)癥（15歲及以上）：MDRTB33.9萬(wàn)，XDRTB10.5萬(wàn)耐多藥結(jié)核病流行病學(xué)2007-2008年全國(guó)結(jié)核病耐藥基線(xiàn)調(diào)查涂陽(yáng)肺結(jié)核初治涂陽(yáng)復(fù)治涂陽(yáng)總耐藥率37.8%35.2%56.2%耐多藥率8.3%5.7%25.6%廣泛耐藥率0.7%0.5%2.1%2010年肺結(jié)核耐藥率涂陽(yáng)肺結(jié)核初治涂陽(yáng)復(fù)治涂陽(yáng)總耐藥率42.1%42.7%38.5%耐多藥率6.8%5.4%15.4%廣泛耐藥率2.1%1.2%7.7%1.單耐藥結(jié)核?。菏侵附Y(jié)核病患者感染的結(jié)核分枝桿菌體外DST證實(shí)對(duì)1種一線(xiàn)抗結(jié)核藥物耐藥的結(jié)核病。2.多耐藥結(jié)核病：是指結(jié)核病患者感染的結(jié)核分枝桿菌體外DST證實(shí)對(duì)1種以上一線(xiàn)抗結(jié)核藥物耐藥（但不包括同時(shí)對(duì)異煙肼和利福平耐藥）的結(jié)核病。3.利福平耐藥結(jié)核病:是指結(jié)核病患者感染的結(jié)核分枝桿菌體外DST證實(shí)對(duì)利福平耐藥的結(jié)核病，包括任何耐利福平的結(jié)核病WHO.Definitionsandreportingframeworkfortuberculosis–2013revision.WHO/HTM/TB/2013.2耐藥結(jié)核病的定義4.耐多藥結(jié)核?。菏侵附Y(jié)核病患者感染的結(jié)核分枝桿菌體外DST證實(shí)至少同時(shí)對(duì)異煙肼和利福平耐藥的結(jié)核病。5.廣泛耐藥結(jié)核病：是指結(jié)核病患者感染的結(jié)核分枝桿菌體外DST證實(shí)除至少同時(shí)對(duì)異煙肼和利福平耐藥外，還對(duì)任何氟喹諾酮類(lèi)抗菌藥物產(chǎn)生耐藥，以及3種二線(xiàn)注射類(lèi)藥物（卷曲霉素、卡那霉素和阿米卡星）中的至少1種耐藥的結(jié)核病。WHO.Definitionsandreportingframeworkfortuberculosis–2013revision.WHO/HTM/TB/2013.2耐藥結(jié)核病的定義結(jié)核病的診斷方法

診斷方法特點(diǎn)影像學(xué)特異性差，對(duì)醫(yī)師主觀依賴(lài)性強(qiáng)痰結(jié)核菌培養(yǎng)金標(biāo)準(zhǔn)，耗時(shí)2-8周，需要帶菌標(biāo)本（如痰等標(biāo)本）抗酸染色法敏感性較低，需要帶菌標(biāo)本（如痰等），不區(qū)分結(jié)核分子桿菌與其他分枝桿菌血清結(jié)核抗體檢測(cè)靈敏性特意性低，不適用于活動(dòng)性結(jié)核判斷分子診斷方法重復(fù)性較差，易污染結(jié)核菌素實(shí)驗(yàn)受卡介苗接種干擾，假陽(yáng)性高，特異性差藥物敏感試驗(yàn)需要時(shí)間痰結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)陽(yáng)性平均時(shí)間：固體培養(yǎng)基14~21天液體培養(yǎng)基

7~14天

菌種鑒定平均時(shí)間：20~30天藥物敏感試驗(yàn)平均時(shí)間：固體培養(yǎng)基

30天液體培養(yǎng)

7~14天γ干擾素釋放試驗(yàn)（interferongammareleaseassays,IGRAs）國(guó)際最新的用于結(jié)核桿菌感染的體外免疫診斷方法原理：機(jī)體感染結(jié)核桿菌后，血液中特異性的T淋巴細(xì)胞在再次受到結(jié)核桿菌特異性抗原刺激時(shí)，分泌特異性的細(xì)胞因子IFN-γ，通過(guò)檢測(cè)IFN-γ來(lái)判斷有無(wú)結(jié)核的感染。結(jié)核桿菌特異性抗原：早期分泌靶抗原6（ESAT-6）培養(yǎng)濾液蛋白10（CEP-10）TB-7.7（p4）兩種商品化的試劑盒：濃度法的QFT-GIT（QuantiFERON-TB＠GoldIn-Tube）（德國(guó)Qiagen）斑點(diǎn)法的T-SPOT.TB

（英國(guó)OxfordImmunotec）7γ干擾素釋放試驗(yàn)原理8IGRAs的原理是：受到MTB刺激致敏的T淋巴細(xì)胞再次遇到同類(lèi)抗原時(shí)可產(chǎn)生γ-干擾素來(lái)自結(jié)核分枝桿菌基因組RD1和RD11區(qū)域所有的卡介苗均缺失RD1和RD11區(qū)基因大多數(shù)環(huán)境分枝桿菌也缺失RD1和RD11區(qū)基因（除M.kansasii、M.szulgai和M.marrinums之外）γ干擾素釋放試驗(yàn)的高特異性ESAT-6、CEP-10和TB-7.711QFT-GIT試驗(yàn)結(jié)果判讀空白對(duì)照（IU/ml）結(jié)核抗原減去空白對(duì)照（IU/ml）陽(yáng)性對(duì)照減去空白對(duì)照（IU/ml）結(jié)果解釋≤8.0≥0.35且≥25%空白對(duì)照值任意值陽(yáng)性很可能感染了結(jié)核分枝桿菌≤8.0＜0.35或＜25%空白對(duì)照值≥0.5陰性不太可能感染結(jié)核分枝桿菌≤8.0＜0.35或＜25%空白對(duì)照值＜0.5不確定不確定是否感染結(jié)核分枝桿菌＞8.0任意值任意值不確定不確定是否感染結(jié)核分枝桿菌GuillénMA.ArchBronconeumol2011,47:521-530.報(bào)告單送檢注意事項(xiàng)1、耗材的使用：肝素鋰抗凝管2、送檢時(shí)間：16h內(nèi)3、標(biāo)本保存溫度：17-27度4、結(jié)核IGRA技術(shù)不能鑒別出活動(dòng)性結(jié)核和潛伏性結(jié)核γ干擾素釋放試驗(yàn)臨床應(yīng)用“菌陰”結(jié)核的輔助診斷、不明原因發(fā)熱查因的檢查涂片和培養(yǎng)陰性的疑似結(jié)核病患者兒童結(jié)核病的輔助診斷肺外結(jié)核的鑒別診斷腸結(jié)核（與克羅恩病鑒別）結(jié)核性腦膜炎（兒童）結(jié)核性胸膜/腹膜炎（胸腹水待查的患者）骨與關(guān)節(jié)結(jié)核淋巴結(jié)結(jié)核腎結(jié)核2012年全世界通過(guò)快速診斷檢測(cè)方法發(fā)現(xiàn)的病人數(shù)增加了40%以上，達(dá)到9.4萬(wàn)人，耐多藥結(jié)核病例中仍有四分之三的人沒(méi)有得到診斷。WHO.Globaltuberculosisreport2012WHO全球推薦2010年12月WHO官方推薦用于結(jié)核病的檢測(cè)WHO《結(jié)核病定義和報(bào)告框架2013年修訂版》細(xì)菌學(xué)確診結(jié)核病例:生物標(biāo)本經(jīng)涂片鏡檢、培養(yǎng)或世衛(wèi)組織批準(zhǔn)的快速診斷試劑(如XpertMTB/RIF)檢驗(yàn)為陽(yáng)性者。所有此類(lèi)病例均應(yīng)報(bào)告,不論其是否已開(kāi)始結(jié)核病治療。WHO資料更新XpertMTB/RIFimplementationmanualXpertMTB/RIFassayforthediagnosisofpulmonaryandextrapulmonaryTBinadultsandchildren2014年2月26日拿到CFDA注冊(cè)證，我國(guó)CDC于2014年5月份購(gòu)買(mǎi)了774臺(tái)。XpertMTB/RIF檢測(cè)檢測(cè)原理半巢式實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，檢測(cè)結(jié)核桿菌DNA，可同時(shí)診斷結(jié)核病和利福平耐藥，操作簡(jiǎn)便，全自動(dòng)處理操作簡(jiǎn)單、安全性好操作人員僅需一天培訓(xùn)，即可掌握全自動(dòng)檢測(cè)，手動(dòng)操作僅3步，安全性好WHO認(rèn)可的檢測(cè)項(xiàng)目WHO認(rèn)可，可用于結(jié)核病的確診XpertMTB/RIF：臨床研究Chin

Med

J

2014;127

(21):

3744-375038XpertMTB/RIF：研究結(jié)果MTB檢測(cè)敏感性和特異性Chin

Med

J

2014;127

(21):

3744-375039標(biāo)本類(lèi)型對(duì)照（研究數(shù)量，樣本數(shù)量）敏感性中位數(shù)（%）（95%Crl）

特異性中位數(shù)（%）（95%Crl）

淋巴結(jié)組織和穿刺物XpertMTB/RIF與培養(yǎng)比較（14項(xiàng)研究，849份樣本）84.9(72–92)92.5(80–97)XpertMTB/RIF與CRS比較（5項(xiàng)研究，1項(xiàng)未發(fā)表）83.7(74–90)99.2(88–100)腦脊液XpertMTB/RIF與培養(yǎng)比較（16項(xiàng)研究，709份樣本）79.5(62–90)98.6(96–100)XpertMTB/RIF與CRS比較（6項(xiàng)研究，512份樣本）55.5(51–81)98.8(95–100)

胸腔積液XpertMTB/RIF與培養(yǎng)比較（17項(xiàng)研究，1385份樣本）43.7(25–65)98.1(95–99)XpertMTB/RIF與CRS比較（7項(xiàng)研究，698份樣本）17(8–34)99.9(94–100)胃灌洗液和吸出物XpertMTB/RIF與培養(yǎng)比較（12項(xiàng)研究，1258份樣本）83.8(66–93)98.1(92–100)其它組織樣本XpertMTB/RIF與培養(yǎng)比較（12項(xiàng)研究，699份樣本）81.2(68–90)98.1(87–100)XpertMTB/RIF診斷成人和兒童肺外結(jié)核及利福平耐藥（肺外標(biāo)本）敏感性和特異性的薈萃分析綜合參考標(biāo)準(zhǔn)（CRS）：包括除了XpertMTB/RIF外的核酸擴(kuò)增試驗(yàn)（NAAT）、組織學(xué)、涂片、細(xì)菌培養(yǎng)、生化檢測(cè)、臨床癥狀或抗結(jié)核治療療效的組合不受其他微生物的干擾79株來(lái)自不同地區(qū)的結(jié)核菌株82株非結(jié)核分枝桿菌、真菌、病毒W(wǎng)HO推薦：XpertMTB/RIF應(yīng)當(dāng)作為成人或兒童疑似耐多藥結(jié)核病或合并HIV感染的首選診斷XpertMTB/RIF可以作為所有成人或兒童疑似結(jié)核病的首選診斷XpertMTB/RIF可以作為成人疑似結(jié)核?。ǚ悄投嗨幗Y(jié)核病或合并HIV結(jié)核?。┑难a(bǔ)充診斷，應(yīng)當(dāng)作為涂片陰性的標(biāo)本的進(jìn)一步檢測(cè)手段16結(jié)核病診斷未來(lái)的首選檢測(cè)QFT與Xpert對(duì)比

QFT/t-spotXpert原理人體被結(jié)核分枝桿菌感染后產(chǎn)生的記憶性T細(xì)胞在體外被特異性抗原刺激時(shí)激活并釋放Y-IFN運(yùn)用實(shí)時(shí)PCR和反轉(zhuǎn)錄酶PCR技術(shù)，一體化和自動(dòng)化進(jìn)行樣品制備、核酸擴(kuò)增和靶向序列檢測(cè)。引物擴(kuò)增含有rpoB基因，而利福平耐藥中rpoB基因突變率為95%是否為進(jìn)口試劑是是標(biāo)本類(lèi)型血，3ml/血，8