實(shí)驗(yàn)一微生物細(xì)胞的計(jì)數(shù)第一頁，共十三頁，編輯于2023年，星期二

目的要求

1.了解血球計(jì)數(shù)板的結(jié)構(gòu)及計(jì)數(shù)原理。

2、掌握使用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)的方法。

第二頁，共十三頁，編輯于2023年，星期二實(shí)驗(yàn)原理

測定微生物數(shù)量方法很多，通常采用的有顯微鏡直接計(jì)數(shù)法、平板計(jì)數(shù)法和光電比濁計(jì)數(shù)法。

顯微鏡直接計(jì)數(shù)法

將小量待測樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上，又稱血球計(jì)數(shù)板，于顯微鏡下直接計(jì)數(shù)的一種簡便、快速、直觀的方法。第三頁，共十三頁，編輯于2023年，星期二血球計(jì)數(shù)扳的構(gòu)造第四頁，共十三頁，編輯于2023年，星期二血球計(jì)數(shù)扳的構(gòu)造

a.平面圖(中間平臺分為兩半，各刻有一個方格網(wǎng))b.側(cè)面圖(中間平臺與蓋玻片之間有高度為0.1毫米的間隙)第五頁，共十三頁，編輯于2023年，星期二

血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)網(wǎng)的分區(qū)和分格

（16×25）第六頁，共十三頁，編輯于2023年，星期二25×16右下、左下左上計(jì)數(shù)時右上中央格第七頁，共十三頁，編輯于2023年，星期二血球計(jì)數(shù)板的計(jì)算方法血球計(jì)數(shù)板上刻有一長寬各為1毫米的方形大格，其體積為0.1mm3。計(jì)數(shù)板有兩種刻度，一種是每大格分為16個中格，而每中格又分25個小格，每大格為16×25小格=400小格，而另一種，則是每大格分為25個中格，而每中格又分為16個小格，則每大格為25×16=400小格（計(jì)數(shù)板上的標(biāo)識為XB·K25）計(jì)數(shù)時，如果使用16格×25格規(guī)格的計(jì)數(shù)室，要按對角線位，取左上、右上、左下、右下4個中格（即100個小格）的酵母菌數(shù)。如果使用25格×16格規(guī)格的計(jì)數(shù)室除了取其4個對角方位外，還需再數(shù)中央的一個中格(即80個小方格)的酵母菌數(shù)。

(6)當(dāng)遇到位于大格線上的酵母菌，一般只計(jì)數(shù)大方格的上方和右方線上的酵母細(xì)胞(或只計(jì)數(shù)下方和左方線上的酵母細(xì)胞)。第八頁，共十三頁，編輯于2023年，星期二計(jì)數(shù)公式(1)16×25的血球計(jì)數(shù)板計(jì)算公式：酵母細(xì)胞數(shù)／ml=（100小格內(nèi)酵母細(xì)胞個數(shù)／100）×400×10000×稀釋倍數(shù)(2)25x16的血球計(jì)數(shù)板計(jì)算公式：酵母細(xì)胞數(shù)／ml=（80小格內(nèi)酵母細(xì)胞個數(shù)／80）×400×10000×稀釋倍數(shù)第九頁，共十三頁，編輯于2023年，星期二實(shí)驗(yàn)器材

顯微鏡、血球計(jì)數(shù)板、酵母菌液、蓋玻片、吸管、吸水紙。第十頁，共十三頁，編輯于2023年，星期二操作步驟1.鏡檢計(jì)數(shù)室對計(jì)數(shù)板進(jìn)行鏡檢。若有污物，則用自來水沖洗，用電吹風(fēng)吹干后才能進(jìn)行計(jì)數(shù)。2.加樣品在血球計(jì)數(shù)板上蓋上蓋玻片,用滴管將搖勻的酵母菌液由蓋玻片邊的小槽滴一小滴,菌液會自動進(jìn)入計(jì)數(shù)室，靜置5分鐘。3.計(jì)數(shù)將血球計(jì)數(shù)板置于載物臺上，先用低倍鏡找到計(jì)數(shù)室的位置，再換高倍鏡計(jì)數(shù)。25個中格的取計(jì)數(shù)板四角和中間位置的五個中方格計(jì)菌數(shù)。重復(fù)計(jì)2-3次，取其平均值，按公式計(jì)算每毫升酵母菌液中菌體的個數(shù)。4.清洗血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后將血球計(jì)數(shù)板用自來水沖洗干凈，勿用硬物刷，吹干后鏡檢。若不干凈，則必須重復(fù)洗滌干凈為止。第十一頁，共十三頁，編輯于2023年，星期二結(jié)果記錄

第一個中格第二個中格第三個中格第四個中格第五個中格第一次測定第二次測定第三次測定平均第十二頁，共十三頁，編輯于2