（優(yōu)選）化妝品微生物檢驗及安全技術規(guī)范比較本文檔共41頁；當前第1頁；編輯于星期二\10點42分化妝品因含有水分，油脂，蛋白質，多元醇等，為微生物的生長創(chuàng)造了良好的條件，造成產品變質。為了抑制微生物的繁殖和消費者使用過程中的產品污染，往往在化妝品中加入防腐劑(尼珀爾金甲脂、乙酯、丙脂及苯氧乙醇等)，但不能過量。因此，化妝品一方面為微生物的生長繁殖提供了良好的環(huán)境；另一方面由于防腐劑的應用又可抑制微生物的生長。為了避免測試結果可能出現(xiàn)假陰性（實際應該生長或是污染了，由于防腐劑的存在而導致結果不生長或是結果偏小），需要添加中和劑。本文檔共41頁；當前第2頁；編輯于星期二\10點42分化妝品中常用的中和劑樣品中：國際方法：尼泊金酯類防腐劑的中和劑：吐溫80（30g/L）和卵磷脂(3g/L)+普通肉湯。化妝品安全技術規(guī)范：培養(yǎng)基成分中直接有卵磷脂（1g）吐溫80（7g）。（稀釋法也能同步起到中和的效果）生產用水中的余氯：每125ml水樣中加入0.1mg硫代硫酸鈉。（注意添加方式和使用范圍）本文檔共41頁；當前第3頁；編輯于星期二\10點42分化妝品衛(wèi)生標準本文檔共41頁；當前第4頁；編輯于星期二\10點42分微生物檢驗方法（2015版化妝品安全技術規(guī)范）GB/T7918.1-1987化妝品微生物標準檢驗方法總則菌落總數(shù)（2015版化妝品安全技術規(guī)范）GB/T7918.2-1987化妝品微生物標準檢驗方法耐熱大腸菌群（2015版化妝品安全技術規(guī)范）糞大腸菌群：GB/T7918.3-1987化妝品微生物標準檢驗方法銅綠假單胞菌（2015版化妝品安全技術規(guī)范）GB/T7918.4-1987化妝品微生物標準檢驗方法綠膿桿菌金黃色葡萄球菌（2015版化妝品安全技術規(guī)范）GB/T7918.5-1987化妝品微生物標準檢驗方法金黃色葡萄球菌霉菌和酵母菌：（2015版化妝品安全技術規(guī)范）

本文檔共41頁；當前第5頁；編輯于星期二\10點42分方法比較側重點2007版化妝品衛(wèi)生規(guī)范2015版化妝品安全技術規(guī)范儀器和設備規(guī)格沒有規(guī)定有：天平/培養(yǎng)箱樣品采集全部操作應在無菌室內進行，或在相應條件下，按無菌操作規(guī)定進行。全部操作應在符合生物安全要求的實驗室中進行如檢出糞大腸菌群或其它致病菌，自報告發(fā)出之日起該菌種及被檢樣品應保存一個月。直接刪除如為5mL則加到45mL滅菌生理鹽水，混勻后，制成1：10檢液。直接刪除2007版化妝品衛(wèi)生規(guī)范與2015版化妝品安全技術規(guī)范對比：總則本文檔共41頁；當前第6頁；編輯于星期二\10點42分本文檔共41頁；當前第7頁；編輯于星期二\10點42分總則重點1.具有代表性。2.不少于2個包裝單位的取樣中共取10g或10mL。3.供檢樣品，應嚴格保持原有的包裝狀態(tài)。容器不應有破裂，在檢驗前不得打開，防止樣品被污染。4.應置于室溫陰涼干燥處，不要冷藏或冷凍。4.宜先取出部分樣品做微生物檢驗。5.嚴格上微生物無復測一說。（可能的因素多），因此對微生物檢驗人員要求嚴格。6.生物安全開始重視。本文檔共41頁；當前第8頁；編輯于星期二\10點42分詳細操作步驟側重點2007版化妝品衛(wèi)生規(guī)范2015版化妝品安全技術規(guī)范菌落總數(shù)定義嗜中溫的需氧性菌落總數(shù)需氧性和兼性厭氧菌落總數(shù)TTC121℃/20min高壓滅菌溶解后過濾除菌，或115℃高壓滅菌20minWHO更改糞大腸菌群（Fecalcoliforms）耐熱大腸菌群Thermotolerantcoliformbacteria大腸培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間置44℃±0.5℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h～48h置44.5℃±0.5℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，如既不產酸也不產氣，繼續(xù)培養(yǎng)至48h霉菌和酵母菌置28℃±2℃培養(yǎng)72h置28℃±2℃培養(yǎng)5d（讀數(shù)時間靈活）本文檔共41頁；當前第9頁；編輯于星期二\10點42分詳細操作步驟重點1.所配制培養(yǎng)基可冷藏和冷卻備用為分步驟檢測提供基礎。2.菌落總數(shù)和霉菌酵母菌總數(shù)a.單位CFU/g或CFU/ml。b.二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，應以四舍五入法計算。c.“不可計”注明稀釋度。ColonyFormingUnitsd.特有的形態(tài)和培養(yǎng)特性（霉菌和酵母菌）。本文檔共41頁；當前第10頁；編輯于星期二\10點42分樣品的制備液體樣品膏、霜、乳劑半固體狀樣品固體樣品樣品的制備注意事項無菌容器、材料及操作樣品的均一性玻璃珠磁力攪拌均質器本文檔共41頁；當前第11頁；編輯于星期二\10點42分樣品的檢驗及保管

及時檢驗樣品應放在室溫陰涼干燥處樣品先進行微生物檢驗(原料)，再做其他指標須防止微生物的再污染和擴散測試方法：本文檔共41頁；當前第12頁；編輯于星期二\10點42分菌落總數(shù)檢驗菌落總數(shù)（Aerobicbacterialcount）：化妝品檢樣經過處理，在一定條件下培養(yǎng)后（如培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時間、pH值、需氧性質等），1g（1mL）檢樣中所含菌落的總數(shù)。所得結果只包括一群本方法規(guī)定的條件下生長的嗜中溫的需氧性和兼性厭氧菌落總數(shù)。測定菌落總數(shù)便于判明樣品被細菌污染的程度，是對樣品進行衛(wèi)生學總評價的綜合依據(jù)。本文檔共41頁；當前第13頁；編輯于星期二\10點42分測試流程48小時出結果（30-300）：數(shù)據(jù)處理混合平板的制備細菌的培養(yǎng)檢查結果、觀察與計數(shù)供試液的制備書寫檢驗記錄單本文檔共41頁；當前第14頁；編輯于星期二\10點42分TTC亦不可多加會抑制菌落生長為便于區(qū)別化妝品中的顆粒與菌落，可在每100mL卵磷脂吐溫80營養(yǎng)瓊脂中加入1mL0.5％的TTC溶液，如有細菌存在，培養(yǎng)后菌落呈紅色，而化妝品的顆粒顏色無變化。本文檔共41頁；當前第15頁；編輯于星期二\10點42分接種陽性菌計算回收率推薦了解：人員培訓能力掌握的檢驗重要指標。有條件可做視具體樣品測試結果。在膏霜類化妝品中,微生物都是吸附或附著于顆粒狀的原料中,檢測時不易洗脫下來,因此,需要驗證檢測方法的有效性。本文檔共41頁；當前第16頁；編輯于星期二\10點42分耐熱大腸菌群未檢出2天，檢出3-4天耐熱大腸菌群Thermotolerantcoliformbacteria系一群需氧及兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌，在44.5℃培養(yǎng)24h—48h能發(fā)酵乳糖產酸并產氣。該菌主要來自人和溫血動物糞便，可作為糞便污染指標來評價化妝品的衛(wèi)生質量,推斷化妝品中有否污染腸道致病菌的可能。本文檔共41頁；當前第17頁；編輯于星期二\10點42分產酸：黃色產氣：氣泡產酸產氣書寫檢驗記錄單不產酸不產氣增菌培養(yǎng)供試液的制備配培養(yǎng)基和稀釋液檢查結果判斷44.5±0.5℃24-48h分離培養(yǎng)蛋白胨水培養(yǎng)最終結果判斷44.5±0.5℃24±2h靛基質特征菌落36±1℃18~24h雙倍膽鹽乳糖EMB瓊脂液面玫瑰紅色紫黑色★糞大腸菌群檢查流程圖鏡檢本文檔共41頁；當前第18頁；編輯于星期二\10點42分結果報告根據(jù)發(fā)酵乳糖產酸產氣，平板上有典型菌落，并經證實為革蘭氏陰性短桿菌，靛基質試驗陽性，則可報告被檢樣品中檢出耐熱大腸菌群。本文檔共41頁；當前第19頁；編輯于星期二\10點42分銅綠假單胞菌未檢出2天，檢出4天銅綠假單胞菌（Pseudomonasaeruginosa）屬于假單胞菌屬，為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶陽性，能產生綠膿菌素。此外還能液化明膠，還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，在42℃±1℃條件下能生長。該菌對人有致病力，可使傷處化膿，引起敗血癥等。在自然界中分布甚廣，空氣、水、土壤本文檔共41頁；當前第20頁；編輯于星期二\10點42分最終結果判斷增菌培養(yǎng)供試液的制備書寫檢驗記錄單分離純化無菌落或無特征菌落配培養(yǎng)基和稀釋液革蘭染色、鏡檢→氧化酶試驗綠膿菌素試驗生化試驗硝酸鹽還原試驗

42℃生長試驗明膠液化試驗★銅綠假單胞菌檢查流程圖SCDLP培養(yǎng)基十六烷三甲基溴化銨瓊脂36±1℃18~24h36±1℃18~24h特征菌落灰白色、扁平、周圍有水溶性藍綠色素鏡檢本文檔共41頁；當前第21頁；編輯于星期二\10點42分十六烷三甲基溴化銨平板SCDLP培養(yǎng)基黃綠色菌膜灰白色濕潤氧化酶試驗粉紅/紫紅色本文檔共41頁；當前第22頁；編輯于星期二\10點42分綠膿菌素試驗鹽酸層呈粉紫色氯仿層呈藍綠色硝酸鹽還原產氣試驗N2明膠液化試驗明膠培養(yǎng)基（高層）明膠液化本文檔共41頁；當前第23頁；編輯于星期二\10點42分結果報告被檢樣品經增菌分離培養(yǎng)后，經證實為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶及綠膿菌素試驗皆為陽性者，即可報告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌；如綠膿菌素試驗陰性而液化明膠、硝酸鹽還原產氣和42℃生長試驗三者皆為陽性時，仍可報告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌。本文檔共41頁；當前第24頁；編輯于星期二\10點42分金黃色葡萄球菌未檢出2天，檢出3天金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）為革蘭氏陽性球菌，呈葡萄狀排列，無芽胞，無莢膜，能分解甘露醇，血漿凝固酶陽性。該菌是葡萄球菌中對人類致病力最強的一種，能引起人體局部化膿性病灶，嚴重時可導致敗血癥。本文檔共41頁；當前第25頁；編輯于星期二\10點42分革蘭染色、鏡檢→生化試驗:血漿凝固酶試驗甘露醇發(fā)酵試驗最終結果判斷增菌培養(yǎng)供試品的處理書寫檢驗記錄單分離純化無菌落或無特征菌落配培養(yǎng)基和稀釋液36±1℃36±1℃SCDLP培養(yǎng)基或7.5%NaCl肉湯24±2hBairdParker’s或血瓊脂24~48h特征菌落★金黃色葡萄球菌檢查流程圖鏡檢耐鹽分本文檔共41頁；當前第26頁；編輯于星期二\10點42分BairdParker’s平板灰/黑色血漿凝固酶試驗血漿凝塊液態(tài)血漿甘露醇高鹽瓊脂本文檔共41頁；當前第27頁；編輯于星期二\10點42分結果報告凡在上述選擇平板上有可疑菌落生長，經染色鏡檢，證明為革蘭氏陽性葡萄球菌，并能發(fā)酵甘露醇產酸，血漿凝固酶試驗陽性者，可報告被檢樣品檢出金黃色葡萄球菌。本文檔共41頁；當前第28頁；編輯于星期二\10點42分霉菌和酵母菌霉菌和酵母菌數(shù)測定（Determinationofmoldsandyeastcount）化妝品檢樣在一定條件下培養(yǎng)后，1g或1mL化妝品中所污染的活的霉菌和酵母菌數(shù)量，藉以判明化妝品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般衛(wèi)生狀況。本方法根據(jù)霉菌和酵母菌特有的形態(tài)和培養(yǎng)特性，在虎紅培養(yǎng)基上，置28℃±2℃培養(yǎng)5d，計算所生長的霉菌和酵母菌數(shù)。（5-50）本文檔共41頁；當前第29頁；編輯于星期二\10點42分革蘭氏染色本文檔共41頁；當前第30頁；編輯于星期二\10點42分檢驗結果正確的保證設備方面：恒溫培養(yǎng)設備高壓滅菌器（驗證）超凈工作臺（生物安全柜）均質器(旋渦混合器)天平（0.1g）顯微鏡（可要可不要無硬性要求）本文檔共41頁；當前第31頁；編輯于星期二\10點42分壓力滅菌器的檢定（強檢）出廠合格證：只是表示該儀器設備符合出廠標準。安全需要強檢（安全閥和壓力表）。至于溫度性能緊急時可以用廠家校準證書替代。問題1：量值得傳遞過程？結論？量值溯源過程？本文檔共41頁；當前第32頁；編輯于星期二\10點42分常規(guī)潔凈工作臺？本文檔共41頁；當前第33頁；編輯于星期二\10點42分試劑要求：無菌容器（？）及溶液；試劑充足；空間充分（10平方米2人操作）；

培養(yǎng)基的制備（有效期的確認）與質量控制（促生長與回收率的驗證）推薦項；本文檔共41頁；當前第34頁；編輯于星期二\10點42分目前大部分微生物實驗室本文檔共41頁；當前第35頁；編輯于星期二\10點42分人員操作方面：無菌操作，避免污染；一定專業(yè)技術或工作經驗（招聘與外部審核時）相互協(xié)作；測試結果的證明。本文檔共41頁；當前第36頁；編輯于星期二\10點42分日常維護：設備的計量與保證；超凈臺及時清潔與殺菌（操作前后半小時）；檢驗后材料的及時處理；環(huán)境衛(wèi)生（沉降菌的檢測每周）。本文檔共41頁；當前第37頁；編輯于星期二\10點42分油性樣品如何處理稀釋液生理鹽水-極性