第十三章基因工程菌的發(fā)酵近年來，重組DNA技術(shù)(基因工程)已開始由實(shí)驗(yàn)室走向工業(yè)生產(chǎn)，走向?qū)嵱谩Ｋ粌H為我們提供了一種極為有效的菌種改良技術(shù)和手段，也為攻克醫(yī)學(xué)上的疑難雜癥——癌、遺傳病及艾滋病的深入研究和最后的治愈提供了可能；為農(nóng)業(yè)的第三次革命提供了基礎(chǔ)；為深入探索生命的奧秘提供了有力的手段?，F(xiàn)在由工程菌產(chǎn)生的珍稀藥物，如胰島素、干擾素、人生長(zhǎng)激素、乙肝表面抗原等等部已先后面市，基因工程不僅保證了這些藥物的來源，而且可使成本大大下降。但是從許多研究中發(fā)現(xiàn)，工程菌在保存過程中及發(fā)酵生產(chǎn)過程中表現(xiàn)出不穩(wěn)定性，因而工程菌不穩(wěn)定性的解決已日益受到重視并成為基因工程這一高技術(shù)成就轉(zhuǎn)化為生產(chǎn)力的關(guān)鍵之一。第一節(jié)工程菌的來源和應(yīng)用一、何謂基因工程基因工程（geneticengineering）是指在基因水平上，采用與工程設(shè)計(jì)十分類似的方法，根據(jù)人們的意愿，主要是在體外進(jìn)行基因切割、拼接和重新組合，再轉(zhuǎn)入生物體內(nèi)，產(chǎn)生出人們所期望的產(chǎn)物，或創(chuàng)造出具有新的遺傳特征的生物類型，并能使之穩(wěn)定地遺傳給后代。基因工程的核心技術(shù)是DNA的重組技術(shù)。重組即利用供體生物的遺傳物質(zhì)或人工合成的基因，經(jīng)過體外或離體的限制酶切割后與適當(dāng)?shù)妮d體連接起來形成重組DNA分子，然后在將重組DNA分子導(dǎo)入到受體細(xì)胞或受體生物構(gòu)建轉(zhuǎn)基因生物，該種生物就可以按人類事先設(shè)計(jì)好的藍(lán)圖表現(xiàn)出另外一種生物的某種性狀。除DNA重組技術(shù)外，基因工程還應(yīng)包括基因的表達(dá)技術(shù)，基因的突變技術(shù)，基因的導(dǎo)入技術(shù)等?；蚬こ桃话惴譃?個(gè)步驟：一是取得符合人們要求的DNA片段，這種DNA片段被稱為“目的基因”；二是將目的基因與質(zhì)?；虿《綝NA連接成重組DNA；三是把重組DNA引入某種細(xì)胞；四是把目的基因能表達(dá)的受體細(xì)胞挑選出來。DNA分子很小，其直徑只有20埃，約相當(dāng)于五百萬分之一厘米，在它們身上進(jìn)行“手術(shù)”是非常困難的，因此基因工程實(shí)際上是一種“超級(jí)顯微工程”，對(duì)DNA的切割、縫合與轉(zhuǎn)運(yùn)，必須有特殊的工具。要把目的基因從供體DNA長(zhǎng)鏈中準(zhǔn)確地剪切下來，可不是一件容易的事。1968年，沃納·阿爾伯博士、丹尼爾·內(nèi)森斯博士和漢密爾·史密斯博士第一次從大腸桿菌中提取出了限制性內(nèi)切酶，它能夠在DNA上尋找特定的“切點(diǎn)”，認(rèn)準(zhǔn)后將DNA分子的雙鏈交錯(cuò)地切斷。人們把這種限制性內(nèi)切酶稱為“分子剪刀”。這種“分子剪刀”可以完整地切下個(gè)別基因。自70年代以來，人們已經(jīng)分離提取了400多種“分子剪刀”。有了形形色色的“分子剪刀”，人們就可以隨心所欲地進(jìn)行DNA分子長(zhǎng)鏈的切割了。DNA的分子鏈被切開后，還得縫接起來以完成基因的拼接。1976年，科學(xué)們?cè)?個(gè)實(shí)驗(yàn)室里幾乎同時(shí)發(fā)現(xiàn)并提取出一種酶，這種酶可以將兩個(gè)DNA片段連接起來，修復(fù)好DNA鏈的斷裂口。1974年以后，科學(xué)界正式肯定了這一發(fā)現(xiàn)，并把這種酶叫作DNA連接酶。從此，DNA連接酶就成了名符其實(shí)的“縫合”基因的“分子針線”。只要在用同一種“分子剪刀”剪切的兩種DNA碎片中加上“分子針線”，就會(huì)把兩種DNA片段重新連接起來。把“拼接”好的DNA分子運(yùn)送到受體細(xì)胞中去，必須尋找一種分子小、能自由進(jìn)出細(xì)胞，而且在裝載了外來的DNA片段后仍能照樣復(fù)制的運(yùn)載體。理想的運(yùn)載體是質(zhì)粒，因?yàn)橘|(zhì)粒能自由進(jìn)出細(xì)菌細(xì)胞，應(yīng)當(dāng)用“分子剪刀”把它切開，再給它安裝上一段外來的DNA片段后，它依然如故地能自我復(fù)制。有了限制性內(nèi)切酶、連接酶及運(yùn)載體，進(jìn)行基因工程就可以如愿以償了。運(yùn)載體將目的基因運(yùn)到受體細(xì)胞是基因工程的最后一步，目的基因的導(dǎo)入過程是肉眼看不到的。因此，要知道導(dǎo)入是否成功，事先應(yīng)找到特定的標(biāo)志。例如我們用一種經(jīng)過改造的抗四環(huán)素質(zhì)粒PSC100作載體，將一種基因移入自身無抗性的大腸桿菌時(shí)，如果基因移入后大腸桿菌不能被四環(huán)素殺死，就說明轉(zhuǎn)入獲得成功了。二、工程菌的獲得1，確定目的產(chǎn)物。2，找出產(chǎn)該產(chǎn)物的細(xì)胞。3，將細(xì)胞破碎后提純出全部信使RNA。這些信使中包含了該細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的所有蛋白質(zhì)的合成信息。4，利用基因擴(kuò)增技術(shù)（PCR），找出所需的目的基因。5，將目的基因連接到設(shè)計(jì)好的質(zhì)粒載體，形成了重組DNA分子。6，將重組后DNA分子引入到受體細(xì)胞內(nèi)，然后選擇合適的培養(yǎng)條件使細(xì)胞繁殖。根據(jù)選擇性標(biāo)記，從菌落中篩選出目的基因的重組(工程)菌。租三、住工程單菌應(yīng)瓦具備木的條注件糾1，迷發(fā)酵鵲產(chǎn)品效是高刪濃度液、高困轉(zhuǎn)化籃率和薯高產(chǎn)謙率的娛，同貪時(shí)是描分泌好型菌誠株。謠2，坑菌株鑼能利政用常授用的僑碳源梨，并奏可進(jìn)舅行連糟續(xù)發(fā)朋酵。豪3，廳菌株瓜不是蔽致病瓣株，慢也不傍產(chǎn)內(nèi)或毒素范。畏4，傻代謝勉控制獲容易雄進(jìn)行沃。跑5，隱能進(jìn)麻行適辰當(dāng)?shù)恼bDN顏A團(tuán)重組內(nèi)，并夫且穩(wěn)駕定，罪重組拳的坑DN米A抵不易冰脫落揉。貍四、獄工程尊菌的仰應(yīng)用固1驚，基驅(qū)因藥伍物扁例如播，紅緞細(xì)胞塞生成喇素、墻胰島荒素、陰干優(yōu)露素、桶乙肝絲疫苗盆、生鴨長(zhǎng)激勵(lì)素和誤粒細(xì)的胞巨泡噬細(xì)桌胞集普落刺轎激因焰子等神。襯2翼，其總它發(fā)防酵產(chǎn)雁品承例如眠酶制弟劑、篩氨基娘酸（然蘇氨捏酸、雷色氨筍酸）謠、抗依生素球等。唐第二卻節(jié)座縱詢工程博菌的拿培養(yǎng)儲(chǔ)就生詞產(chǎn)流遙程而揪言，陷從發(fā)憐酵到談分離面、純我化目執(zhí)標(biāo)產(chǎn)抹物，分工程我菌和微常規(guī)催微生醒物并則無太楊多的首差異目。但狀工程供菌在紛保存全過程貪中及垃發(fā)酵齡生產(chǎn)神過程疾中表繳現(xiàn)出飼不穩(wěn)創(chuàng)定性副，以翼及安賊全性改等問夜題，仍使得虧工程波菌的濱培養(yǎng)炎有著呢自身偏所特孔有的逢特點(diǎn)仿。閃員一、可安全高問題鴉關(guān)于罪基因嫌工程剃的社隙會(huì)問構(gòu)題，近必須銅提到孟它的跑潛在宜危險(xiǎn)悟性。掌經(jīng)過肢重組促的菌攏和質(zhì)況粒一乞旦用涼于，院工業(yè)亡化生狀產(chǎn)，積就不浙可避柄免地跪進(jìn)入各自然猜界。腸這些塌菌能濤間接盜地危第害人怕體健隸康，腥使治越療藥辭物失釋去效共用，糟污染泥環(huán)境腿等。困因此惰，安桿全問叢題是根極其浩重要榜的。中肥夜19孕74檔年，模提出習(xí)了D價(jià)NA泊重組感實(shí)驗(yàn)征具有曠潛在沙生物虧危險(xiǎn)耀性的壁問題衰。后吳來，傾美、據(jù)日等仗國(guó)都色制定爪了有玉關(guān)D堡NA葛重組盤實(shí)驗(yàn)花的準(zhǔn)淹則，藏即在谷試管鑄內(nèi)用滾酶等挺構(gòu)建嫂異種忙DN恐A的欄重組失分子顏，并栽用它莫轉(zhuǎn)入仍活細(xì)伴胞中組的實(shí)鋼驗(yàn)，查以及鍬使用切重組摸體的闊實(shí)驗(yàn)青應(yīng)遵剩循的偽規(guī)程勞。其鋸目的挽是保融證實(shí)逝驗(yàn)的展安全鍵和推索動(dòng)重剪組D草NA權(quán)的研毯究。麻這些渠準(zhǔn)則算參照友了防游止病砌原微柔生物姓污染肆的措押施，孔以及候根據(jù)水對(duì)實(shí)備驗(yàn)安甚全度圓的評(píng)筒定，罰采用珍物理劑密封秘(P漿1~池P4揉)和抓生物怖學(xué)密蜘封(粉B1夜和B詳2)濾兩種立方法辭。納賄扣物理沫密封原是將轟重組類菌封屋閉于瓦設(shè)備奧內(nèi)，弱以防醋止傳柱染給感實(shí)驗(yàn)潑人員標(biāo)和向殲外界本擴(kuò)散撇。實(shí)見驗(yàn)規(guī)逮模在定20叮L以屋下時(shí)分，物干理密偷封由互密封燭設(shè)施盜、實(shí)標(biāo)驗(yàn)室湯設(shè)計(jì)腳和實(shí)耗驗(yàn)注雪意事遵項(xiàng)組罰成。享密封監(jiān)程度前分為徹P1瓶、P恭2、賊P3臟和P忙4級(jí)陣，數(shù)喘字越快大，望密封盞水平死越高懇。生覺物學(xué)粉密封久要求哲用只賄有在蛙特殊安培養(yǎng)盟條件紫下才盡能生租存的孟宿主際，同至?xí)r用潤(rùn)不能祥轉(zhuǎn)移雀至其那它活鋤細(xì)胞進(jìn)的載真體，壺通過卷這樣降組合浸的宿傳主載疏體系許統(tǒng)，殊可以魯防止屬重組斬菌向錫外擴(kuò)矩散。碰按密拋封程物度分誼B1理和B戲2級(jí)銷，B訊2級(jí)褲的密乏封要上求最你嚴(yán)格逼。初堂今企業(yè)業(yè)中進(jìn)頁行重刷組菌益培養(yǎng)駕時(shí)的鬼設(shè)備穩(wěn)標(biāo)準(zhǔn)憲有L宋S-拾1和篩LS園-2寨。L紋S-畏2相平當(dāng)嚴(yán)鄭格，欣工業(yè)應(yīng)生產(chǎn)碼起碼柳應(yīng)在閉LS桶-1狼的設(shè)承備標(biāo)松準(zhǔn)下備培養(yǎng)廁。L涼S-進(jìn)1標(biāo)垮準(zhǔn)要湖點(diǎn)是雨：(蜻1)箭使用遍防止勻重組炊菌體容外漏婆，能軌在密宇閉狀小態(tài)下貢進(jìn)行戶內(nèi)部欠滅菌澇的培儉養(yǎng)裝廚置；累(2寇)培辮養(yǎng)裝朽置的介排氣潮由除仁菌器籃排出映；(風(fēng)3)白使用員易產(chǎn)未氣溶餡膠的詞設(shè)備寬時(shí)，輸要安啟裝可原收集程氣溶位膠的椒安全朱箱等知。設(shè)泊計(jì)用服于基妹因重護(hù)組菌陷的培寫?zhàn)B裝映置時(shí)姓，不站僅要沿考慮例外部敘雜菌務(wù)的侵常入，準(zhǔn)還要餅防止攪重組寧菌的滑外漏賀。此友外，遷培養(yǎng)首后的筍菌體嚴(yán)分離愈、破仰碎等美處理葉也必此須在導(dǎo)安全電柜內(nèi)估進(jìn)行丘，或道是采掩用密咳閉型篩的設(shè)電備。武二、讓基因挺工程功細(xì)胞客培養(yǎng)退特點(diǎn)怠勿血前已姻述及強(qiáng)，基廚因工肚程細(xì)半胞培擠養(yǎng)過封程與富培養(yǎng)蓄方式拾與天夾然細(xì)壽胞培磁養(yǎng)過察程或字方式擋基本母—慢致。蠢但亦欠有其雹自身裙持點(diǎn)包。實(shí)垃踐表泡明，唯基因擊工程界細(xì)胞迅工業(yè)揭化培拖養(yǎng)中挖，產(chǎn)啞物的鋒產(chǎn)率去往往皺比實(shí)診驗(yàn)室江培養(yǎng)劇規(guī)模結(jié)為低利。其找原因議主要辛與基辯因工緣程細(xì)彩胞特秀點(diǎn)有雜關(guān)，盈首先組基因內(nèi)工程丈細(xì)胞閣的生融長(zhǎng)速息率及思表達(dá)兄率與相其所揉載外上源D夢(mèng)NA方的穩(wěn)懂定性欲及產(chǎn)絲物分尺泌過拳程有收關(guān)，巖其中露重組墾DN默A的下穩(wěn)定捆性尤褲為重殃要，恭重組注DN碑A在罰宿主可內(nèi)表危達(dá)方吵式有著兩種今，其珠一是洪游離榮表達(dá)返方式瓣、其訴二是鹿結(jié)合兼表達(dá)統(tǒng)方式善。因計(jì)此，撿基因蓄工程昏細(xì)胞第培養(yǎng)技過程撥，重奇組D鋪NA傘的丟號(hào)失方趕式亦斗有兩限種，愈其一冒是細(xì)命胞培諷養(yǎng)過隸程，振由于差回復(fù)記突變扁或分核配作勝用致握使D攤NA送丟失晚．稱鑄為脫偶落性引不穩(wěn)都定，頌其二岔是重國(guó)組D火NA輩中編隊(duì)碼的嫁結(jié)構(gòu)資基因梯在宿昂主內(nèi)判發(fā)生逢再重布組過妖程產(chǎn)紛生突紫變，雀不再立表達(dá)南目的懸產(chǎn)物成，此相稱加攔結(jié)構(gòu)敲性不蔽穩(wěn)定決。其聯(lián)次為刑提高潮基因仆工程伙細(xì)胞胡表達(dá)犁效率畜，需呼采取族適當(dāng)掩措施沖，提咳高重烤組D芝NA距在宿燃主細(xì)奏胞內(nèi)胃的拷俘貝數(shù)基及促費(fèi)進(jìn)表鏡達(dá)產(chǎn)重物自梁細(xì)胞潛內(nèi)向負(fù)細(xì)胞援外分搶泌。繁此外山，基手因工蘇程細(xì)迎胞的啄原宿岡主通斬常是繡某些賞培養(yǎng)續(xù)物質(zhì)在(如綿某種搞氨基泛酸或汽維生薦素等節(jié))的脆缺陷界型，昌有些墊基因茄工程慰細(xì)胞吐生產(chǎn)標(biāo)過程咳亦產(chǎn)丟生某攏些抑償制細(xì)踏胞生貢長(zhǎng)的隙代謝沾物。赤由此木，在潛培養(yǎng)拿工程姥中應(yīng)凍考慮圓控制示培養(yǎng)限液營(yíng)提養(yǎng)成挖分及羞其濃吐度，日同時(shí)再采取筐措施輕，消鍛除抑昏制細(xì)俱胞生般長(zhǎng)的約代謝切物，口以保攤證細(xì)闊胞正戴常生唐長(zhǎng)。治由此寧可見駱，在進(jìn)基因葛工程嫁細(xì)胞腰培養(yǎng)襯過程鳥，除榨—瓣般培刃養(yǎng)條冊(cè)件外激，必濤需考圖慮基贊因工士程細(xì)判胞的皆自身最特點(diǎn)獵，確脾定最瘡佳培弦養(yǎng)條艙件。弓三、軍基因夢(mèng)工程岸細(xì)胞宴的培移養(yǎng)摟租食前已刑述及馳，基病因工籃程細(xì)籮胞的絲培養(yǎng)際過程油與一捉般需潤(rùn)氧細(xì)山胞培寇養(yǎng)基愉本一串致，植同時(shí)言培養(yǎng)姑方式單亦無膏差異媽，可佳采用簡(jiǎn)各種村分批貸培養(yǎng)較方式位，亦響可采款用連塞續(xù)培悼養(yǎng)、竿半連申續(xù)培柄養(yǎng)及把透析政培養(yǎng)于等方眼式。沒至于告影響濃基因夾工程鉆細(xì)胞倒培養(yǎng)氣的細(xì)具胞生靜物量跳得率紗與產(chǎn)希物量像的因芒素及括有關(guān)鼓參數(shù)甘。亦館可參驕照普巡通細(xì)礦胞相徹應(yīng)培決養(yǎng)方潤(rùn)式求政得。報(bào)隸這目前究關(guān)于丹動(dòng)植胡物基伐因工栗程細(xì)樓胞培越養(yǎng)工不程的藍(lán)研究倚剛剛析起步凱，有研待進(jìn)便—莊步發(fā)割展。石這里晨?jī)H對(duì)肢基因諷工程扮菌的姓營(yíng)養(yǎng)蓄控制肆、質(zhì)唉粒穩(wěn)熄定性兩、重毫組質(zhì)銷?？綌傌悢?shù)玩的控秧制及饞表達(dá)鬼效率繳作簡(jiǎn)迫單討撞論。肌1，割底物緩濃度歲的控掛制部在基靠因工喬程茵風(fēng)培養(yǎng)石過程努，至桑少要世遵循飛P跑I暖級(jí)物本理防則護(hù)的獸規(guī)定增，因靠此必堅(jiān)需進(jìn)鑄行菌緣體的壟高密柿度培堵養(yǎng)。淋普通富E．長(zhǎng)co燒li皇培養(yǎng)傭時(shí)最騙高干樂重菌拉體收槍率可燥達(dá)1蠅2．徹5％任，釀插酒酵漆母可灰得1鵝4.郊5%指，浙轉(zhuǎn)枯草使桿菌熟僅可葡得2籍%左梳右。凍根據(jù)研這些長(zhǎng)結(jié)果鐘采用如枯草訓(xùn)桿菌盛不太纏合適吉，除算非其螺具有運(yùn)產(chǎn)物矛的高平效分蝕泌系釣統(tǒng)。優(yōu)排坦從生抄物安過全性困考慮飯，培蚊養(yǎng)的冊(cè)基因銀工程蘿菌通漂常是藏維生佳素或爆氨基亡酸的朱營(yíng)養(yǎng)巾缺陷餃型突馳變株鴉。培代養(yǎng)過飼程細(xì)尤胞對(duì)乳維生良素需腳求量嫌甚微肅，在唐培養(yǎng)斯開始頑即加標(biāo)入必排需量朝對(duì)細(xì)省胞生先長(zhǎng)并歌無影千響，比但培油養(yǎng)一巾開始演即加參入足惹夠量撕氨基遵酸則排可能舍因氨雅基酸途濃度銅過大鵝而抑立制細(xì)皮胞生漏長(zhǎng)。朱在此哄情況有下，成可采應(yīng)取培掉養(yǎng)過缺程中水，在尖調(diào)節(jié)背pH鋸值同霉時(shí)補(bǔ)方加氨依基酸黑混合落物和偷葡萄抱糖的雞方法晉，以友便培祝養(yǎng)過鬼程葡亭萄糖組及氨口基酸辱濃度牙的基桑本恒遭定，貝從而枕實(shí)現(xiàn)席高密濕度培隔養(yǎng)，蝶如副E．臉co國(guó)li笨C逗60潮0株鏡培養(yǎng)療時(shí)可研獲得刻6％基干菌燕體。番但菌陸體對(duì)臟葡萄強(qiáng)糖及城氨基悼酸的擱收率于因培練養(yǎng)條道件而感異，席如以凈葡萄階糖及與分別刑用蘇梁氨酸態(tài)、亮賢氨酸獸、組轟氨酸途及色由氨酸非為底爺物時(shí)滲，則蘋平均幅每克誤底物遮所獲轉(zhuǎn)干菌診體量競(jìng)分別繁為0嚴(yán).3排、2午.5椅、1授5、糟40換及4那0g橋?？疵颗f克干類菌體砌成本磁計(jì)，搜應(yīng)用閣蘇氨擾酸成剩本最梯高，蘋故應(yīng)墨避免勻應(yīng)用霜蘇氨課酸缺脆陷型揚(yáng)菌株著為宿輪主，迅最好弓選用秤維生凳素缺華陷型禁菌株母為宿散主。漆2、吳質(zhì)粒拳穩(wěn)定細(xì)性拾重組橡質(zhì)粒承上通聽常載編有A想p游r位基因共，獲防得該膛類重切組質(zhì)尤粒的休基因樣工程憶菌在條含氨炎芐青督霉素竟培養(yǎng)事液中運(yùn)可以買生長(zhǎng)族，而舒非基盆因工能程菌貴不能夠生長(zhǎng)悶。但敞在基同因工怎程菌駝高密蹈度培輪養(yǎng)時(shí)逮，外釘加的域抗生擺素A階P峽易于細(xì)失活柔，影取響培虎養(yǎng)。塞為此壁考慮遺采用滴抗生理素依瓜賴性欲變異尋法替謹(jǐn)代抗細(xì)生素遲添加決法。盾其方洪法是敏通過日誘變梁使宿柔主成彈為某補(bǔ)抗生念素依遮賴性此突變肺株(攀如鏈震霉素貸依賴致性S饅m圍d)站。只待有在酷S拉m氣存在飽下宿狡主才胃能生遍長(zhǎng)，晝但重趙組質(zhì)跨粒上知含有朽S康m悼非依麥賴性劉(S帶mi機(jī)d猛)基石因，書將重困組質(zhì)桑粒導(dǎo)翠入宿依主細(xì)縱胞后寶，所帝獲克旁隆菌殺可在古不含免抗生繞素培內(nèi)養(yǎng)基疑中生崖長(zhǎng)，唱而丟合失質(zhì)伙粒菌蟻株卻貍不能奧生長(zhǎng)竊。此勸法很跨有實(shí)亮用價(jià)梯值，注但缺星點(diǎn)是至宿主斑細(xì)胞干易產(chǎn)亮生回戲復(fù)突恨變，緞造成內(nèi)培養(yǎng)滲工程絡(luò)復(fù)雜娛化，瞎產(chǎn)物啞產(chǎn)率稈下降藏。輸堪吧為考驢察質(zhì)埋粒穩(wěn)涌定性等，在資此引牽入質(zhì)乒粒保殊持率決F柳n沫的概善念，維F雪n辯表示狀分批繳培養(yǎng)咸中細(xì)當(dāng)胞分坊裂n果次后破，培剃養(yǎng)液底中基勁因工拆程細(xì)運(yùn)胞數(shù)廟與總尿細(xì)胞耽數(shù)的堂比值省，即筆假定守在分盒批培鄰養(yǎng)過埋程中嗓，細(xì)僑胞在式對(duì)數(shù)謹(jǐn)生長(zhǎng)謠期每侄次分鬼裂時(shí)狼，其緣質(zhì)粒身丟失屢率為跟P，匯則F牢n日為：條式中枯汁α療-質(zhì)蝴粒丟著失菌科株與掩質(zhì)粒渠保持還率菌啦株郊μ里的比巧值；雕促搬半n-負(fù)細(xì)胞菜分裂限次數(shù)模理論謀上基砍因工聯(lián)程菌喊載荷準(zhǔn)外源臨性基妨因，仆培養(yǎng)蘿過程流細(xì)胞涂大量繞合成宗外源劑性產(chǎn)霞物，踢其負(fù)辱荷大泛于質(zhì)窮粒丟座失菌萌株，零故基行因工盲程菌池株比增生長(zhǎng)屢速率挪μ粗通常令較質(zhì)客拉丟解失菌昌株小框，當(dāng)市然亦疾有變劑化不新大者雄。根黑據(jù)以歲上方雙程計(jì)逗算結(jié)際果，叼F瘦n徹變化妻情況崗如圖悼7-銹20踏所示擱。杯由圖香7-存20蝶可知敞．假談定P薯＝1跡%，糊當(dāng)筑α冬＝0糧時(shí)，閉表明播質(zhì)粒路丟失暗菌株治不能尸生長(zhǎng)握，培發(fā)養(yǎng)處雀于最臭理想昏的穩(wěn)紋定狀佩態(tài)，塵亦為爽質(zhì)粒炊最穩(wěn)躲定狀還態(tài)，晶此時(shí)行F晨n涉接近撓于1陳.0侵；但狡在無急選擇侍壓力偶下，達(dá)α培值越深大，抹F泉n賠越低億，即鏟質(zhì)粒治穩(wěn)定罩性越臭差。鞋搞蓬在基系因工披程細(xì)納胞的埋連續(xù)覺培養(yǎng)客方式散中，要若無蠻選擇距壓力紋，迪這常不遣能得朱到恒委定的褲穩(wěn)定排狀態(tài)呈。而刺在有窗選擇巧壓力逃下，墓則可啟獲得厲穩(wěn)定制狀態(tài)只。但譽(yù)是培枯養(yǎng)基乎也與揭質(zhì)粒姿穩(wěn)定脊性有盞關(guān)，齒采用揪天然宇培養(yǎng)扎基培末產(chǎn)時(shí)腰質(zhì)粒沃穩(wěn)定煎件較慶用合襯成培到養(yǎng)基友為高細(xì)，在季天然腸培養(yǎng)壁基中功即使銳無選豎擇壓種力亦妹可保愛持質(zhì)冬粒的保穩(wěn)定桌性，罷因此經(jīng)，用示天然暢培養(yǎng)與基進(jìn)場(chǎng)行連賓續(xù)培綱養(yǎng)是綱獲得差質(zhì)粒涼穩(wěn)定然性的悼良好風(fēng)方法稀。踏3，擊表達(dá)沙效率制及質(zhì)迷?？讲拓悢?shù)毛控制踏在基絮因工籌程細(xì)到胞培稿養(yǎng)工狠程中老，表香達(dá)效瘋率與賭質(zhì)粒好拷貝免數(shù)有云關(guān)。忌在質(zhì)糠粒穩(wěn)恒定基漠礎(chǔ)上基，應(yīng)僻盡可晚能提茂高細(xì)煎胞內(nèi)學(xué)質(zhì)粒孤拷貝票數(shù)。死在工掩業(yè)生赴產(chǎn)中愿易于拖操作倡的方淺法是伙在培獻(xiàn)養(yǎng)的女不同剪階段炎，采石用不生同培陷養(yǎng)溫川度達(dá)距到提賺高拷呢貝數(shù)廟目的悲，在款前培血養(yǎng)階阿段采違用低貍溫，園以減狼少細(xì)備胞負(fù)逃荷，蹄此時(shí)配拷貝沉數(shù)較屆低，氏而比污生長(zhǎng)西速率她升高拴，在向主培致養(yǎng)中玉途升殖高溫鴉度，良質(zhì)粒梁拷貝潔數(shù)增瘦加，致目的冬基因慌產(chǎn)量鑒提高丈。如移圖7扣-2江1所碗示，捆在2吉5斑℃棉下，虧培養(yǎng)花含有濤穿梭罰質(zhì)粒貝pC則P唉3井的肝E．訓(xùn)co襖li噴C釣60尼0/摘pC橡I8互57路至濁若度為府5。匹再將餓培養(yǎng)倘溫度乓提高樹至3艙7撓℃太，則節(jié)質(zhì)粒柄拷貝來數(shù)增液加，來基因洪產(chǎn)物晚β贊-內(nèi)粒酰胺俗酶活傘性增歸加3管7倍躺左右克，但袋F顫n蘋急劇胸下降喬。此嗎外，私利用勢(shì)λ筐噬菌碰體P大L現(xiàn)啟動(dòng)略子的買溫度狗敏感鞠性，馳采用克二級(jí)洪連續(xù)擦培養(yǎng)俘方式然，第舉1罐亞于低爆溫下余培養(yǎng)雙以降戒低表昌達(dá)效著率，收第2閘罐高歐溫培雨養(yǎng)，釋對(duì)提退高表指達(dá)效尊率亦展是有綁效的憶。侵籌福此外嘩，當(dāng)旨質(zhì)粒棄拷貝竿數(shù)與魚某些氣化合勞物有盆關(guān)時(shí)旦，亦每可采排取添稀加或周去除疊相應(yīng)縫化合捏物的慌雙階播段連爪續(xù)過陡濾培婦養(yǎng)法緞以提公高拷臭貝數(shù)釣和表歐達(dá)效是率。炒如用栗含有芬在色普氨酸耀啟動(dòng)孤子下爐游接界有喝β織-半撕乳糖須苷酶格基因脹的重歸組質(zhì)亂粒笨pM貞CT蜂98票的基嘗因工親程菌旨進(jìn)行秧單級(jí)制連續(xù)促培養(yǎng)紛，并納結(jié)合鎮(zhèn)0.嘴2梨μ撓m孔糧徑陶徒瓷過債濾器核裝置枝(圖顛7-脾22萌)，生開始爬培養(yǎng)駕液含混色氨草酸，玩表達(dá)突效率禁低，勉當(dāng)生短長(zhǎng)濁夫度達(dá)板到1鍋0時(shí)盯，進(jìn)印行交馬叉流爭(zhēng)動(dòng)過絕濾，喉且供懲給不臺(tái)含色選氨酸塘料液蘇，結(jié)慶果如底圖7奧-2芝3所串示。速過濾示達(dá)1商5m虹in培后培慢養(yǎng)液盞中已覺測(cè)不斬出色壯氨酸企，表坦達(dá)效妹率增喂加，傅β約-半腿乳糖慌苷酶笨活力慣劇增感。最名終濁盲度達(dá)唱15張0(的相當(dāng)太于含趟6%慰干細(xì)乎胞)愛，咬β禁半乳懷糖苷紛酶約艙占總花蛋白芳量8閱%。雄穗茶由此泥可知室，在袖基因補(bǔ)工程垂細(xì)胞歇培養(yǎng)畫工程齡中，瞎需根終據(jù)其旨固有叮特點(diǎn)因和具埋體情環(huán)況，稱采取尸相應(yīng)載措施解、提蓄高質(zhì)禮粒穩(wěn)柔定性宣，增渡加質(zhì)蛾?？叫关悢?shù)祥，實(shí)瘋現(xiàn)培貿(mào)養(yǎng)條虜件優(yōu)霸化，幼提高株表達(dá)肺效率渾。脂第三陶節(jié)工翅程菌仰分批即培養(yǎng)午動(dòng)力縫學(xué)蠶對(duì)于縮質(zhì)粒侵脫落辰性不德穩(wěn)定興，細(xì)龜胞在遙分裂摧時(shí)丟冷失質(zhì)建粒的股概率港為順p變，則所以涼對(duì)于底底物敞對(duì)于齊產(chǎn)物蘭第四睬節(jié)潤(rùn)吊培養(yǎng)露裝置眾與產(chǎn)檔物的毛提取抽工程私菌的脹培養(yǎng)城與普輔通微粉生物握的培亦養(yǎng)方桂法類陰似。伸在進(jìn)伏行以卵工業(yè)腦化為向目的欠的維DN澡A見重組踢實(shí)驗(yàn)誓，以吩及為慶生產(chǎn)誦異種減基因掏產(chǎn)物修而培聲養(yǎng)重從組菌漿時(shí)，遇當(dāng)然繳應(yīng)采涌用簡(jiǎn)離便易刺行的強(qiáng)培養(yǎng)罰系統(tǒng)走?，F(xiàn)擠在多賢半使店用大沫腸桿標(biāo)菌為顧宿主酸，而哈在一執(zhí)般的端通氣蔥攪拌荒罐中映大腸激桿菌剛能生武長(zhǎng)良衡好。賓會(huì)一、燙培養(yǎng)槍裝置樣挺休作為薯基因缺重組挽體的櫻培養(yǎng)辮裝置麗，與取一直杯沿用掠的通質(zhì)氣攪棋拌培躲養(yǎng)罐油要有游區(qū)別尋，即犧不僅部要防蜻止外喇部微霧生物即侵入哲罐內(nèi)鮮，還需必須價(jià)采用宏不使繳培養(yǎng)肆物外薦漏的碰培養(yǎng)鳳裝置黨。按盒實(shí)驗(yàn)侮準(zhǔn)則釣，可唯把這堵類密春閉型茶通氣砍攪拌表式培封養(yǎng)罐秒劃分紀(jì)為操宜作液委量2惕0L型以上毒和2姻0L沾以下割兩種州。嫩例刃現(xiàn)今羽使用蜘的微則生物領(lǐng)培養(yǎng)奉裝置撤，按驢其滅逆菌法弦又可可分兩翠類。宣一是殲在高繭壓滅賺菌器良中進(jìn)米行培譜養(yǎng)基臨及培未養(yǎng)罐尼的滅楚菌，陽罐本蕩身通因常是而玻璃理制的輝，容能量在扁10將L以液下的開居多垮；另傍一類平是2華0L蒼以上惰的培勻養(yǎng)罐謝，一劉般為疼不銹酷鋼制憐品，埋多采潔用通偉新鮮塵蒸氣吃進(jìn)行縫滅菌耗。前基者是京可移柏動(dòng)的豐臺(tái)式魔，罐環(huán)本身瞞不能則承受霸高壓偉；后啦者，刊蒸汽糠、空明氣等加供給揭是用鉆固定正管道撓連接斥的，劍一般伏不能柿移動(dòng)栽；這鍵兩類異罐要趨充分閃考慮汪不使球微生聰物由爸罐外鈴進(jìn)入敘罐內(nèi)匯的問匠題，運(yùn)但并陜不一此定要喚解決拖防止奔罐內(nèi)運(yùn)微生際物的深外漏帝問題邊。妄因陪此，牌采用灣高壓儀滅菌爛器滅哀菌的節(jié)小型輝培養(yǎng)炸罐時(shí)課應(yīng)在拼安全劃柜內(nèi)歌運(yùn)轉(zhuǎn)飯。但段培養(yǎng)違罐稍柱大，榮該法格就難漢以使惱用了廈。底二、趴基因到重組是菌外幟漏的月防范抖土斗首先嘆應(yīng)了贈(zèng)解培矛養(yǎng)微揮生物害在普土通通換氣攪混拌罐雹中可勢(shì)能發(fā)吳生外啊漏的邪部位觸和操集作。渡歸納摟起來閑有：排(1誠)排制氣，洗(2要)機(jī)烤械密非封，燃(3矛)接裕種，贈(zèng)(4都)取舒樣，艇(5醬)培前養(yǎng)后萄的滅仔菌(寬通入刪濕熱局蒸氣肅)，御(6餡)雖排液吃(輸寺至下拾一工賭序)品。針好對(duì)這制些均回應(yīng)采零取一斤些措數(shù)施以惡防菌葡體外功漏。散現(xiàn)分偏別說稿明如弦下。幟昂狐1，換排氣分要學(xué)紡排出挖的氣峽中含潔有大滾量氣頂溶膠邊，在返激烈蘇起泡瞇的培順養(yǎng)時(shí)恥，培沉養(yǎng)液股呈泡蛙沫狀島。它腔們從俗排氣飛口向率外排炒出，敗重組趣菌也探容易眨隨之令外漏舒。鼓曾舌以往頑培養(yǎng)隨病原掘菌時(shí)即；為教防止伍菌體榴外流集，采細(xì)取加路藥劑塘槽的巴方法份，但媽效果爆如何毛尚有罪疑問圾。有弄人試倡驗(yàn)證約明，甩排氣等中的嶄微生飽物數(shù)忌量隨脂著培日養(yǎng)液征中菌慕體濃禮度和求通風(fēng)利速度頸等而噴變化漆。用來5L購培養(yǎng)國(guó)罐(護(hù)裝液燒量2龍.5玉L)輸，以宏攪拌賽速度湯40旦0r宇/m厚in塌，通虧氣速付度1四：1慕(V帖VM梢)，鼻即2諸.5仆L/所mi班n(腿換算重成罐深內(nèi)通因氣速霸度為到11序cm米/m泉in癢)來地培養(yǎng)社大腸啄桿菌動(dòng)，發(fā)柏現(xiàn)每勝毫升疼培養(yǎng)尺液中廁含1勺0曉9肚個(gè)菌瀉體，鼓每小采時(shí)有亂15永0~北40托0個(gè)斷菌隨冬氣排罵出；跡而培國(guó)養(yǎng)釀尋酒酵親母時(shí)欣，每疑小時(shí)魔從每灑毫升付含1雁0癢8伴個(gè)菌搖體培是養(yǎng)液賣的排扎氣中項(xiàng)檢出堡30冤~7綢0個(gè)施。由滿此可嗽見，另雖然已培養(yǎng)揚(yáng)液中且菌體嚷濃度鑼相差和很大醒，但束大腸躁桿菌糕和酵趨母菌欠仍以早幾乎慈相同拉程度雞從排循氣中碑漏出纏，并帝不取昌決于孤菌體辨?zhèn)€體歪的大財(cái)小。翼再有拼，提印高通贊氣速樂度時(shí)研，單沙位體泄積的述排氣視中，常大腸還桿菌奧和酵廢母菌嚷菌數(shù)縱都增仙加，著通氣渡速度瘦與漏斃菌數(shù)已之間毀也密境切相拳關(guān)。墓總之擦，排燈氣過撥程中弦含有經(jīng)相當(dāng)童多的攏菌。堡為此應(yīng)，在牧通用悶通氣攔攪拌接型培傅養(yǎng)罐虛上安拳裝排件氣鼓椒泡器否，以霉防止堵激烈瑞起泡乎時(shí)泡騙沫直葵接外蓄溢和銳外部蔥微生本物侵腸入污答染，彼同時(shí)忌還能植肉眼床觀察穗通氣勾狀態(tài)促等(觀圖1蜜1-農(nóng)8)俗。氣員體通白過排任氣管鑒到鼓既泡瓶旅，再銀通過袍膜濾沃器。輔進(jìn)而窮考察撤了該涼排氣伴鼓泡旬瓶中所加入蠅藥劑座(如喜2m勉ol抹/L煉N欄aO挑H)陽的效豆果。請(qǐng)趴戀另外賀，為薄了解箏加熱鈔能否策對(duì)排荒氣滅尖菌，催進(jìn)行撤了與厚上述懲類似系的實(shí)狡驗(yàn)。凍圖1驚1-窩9的震結(jié)果賽表明勞。用虜電熱確器對(duì)風(fēng)排氣總進(jìn)行訂加熱無時(shí)，叢在電倚熱器削出口母處的繪排氣咬溫度克被控欣制在陽20監(jiān)0轎°蜜C左媽右。罰電熱村器之弓后附尤有冷霧凝器遵，旨心在使荷高溫誘的排愁氣冷薦卻，舌以防兄膜濾滴器燒廉毀。訴集孔圖1玻1-逼8和叨圖1拉1-辭9的繩結(jié)果王如表旬11閃-4濤所示銹。表嘉中數(shù)春字為針培養(yǎng)憑開始撤啟1豆2h機(jī)中在笨膜濾殲器上含捕集革到的螞活菌益數(shù)。權(quán)結(jié)果專表明焦，排償氣僅引通過個(gè)藥劑援還不賠能完參全滅罰菌。班使用跨藥劑丟時(shí)若秋能在架排氣來鼓泡洋瓶?jī)?nèi)這進(jìn)行向攪拌撥、消勞泡的租話，馬是會(huì)泳有效立果的培。用拖電熱裙器將饑排氣男加熱語至2才00宰°步C儲(chǔ)時(shí)，垮均末士在膜勇濾器榮上檢希出大磨腸桿午菌和差酵母標(biāo)菌。遷井球圖1搖1-濟(jì)10授是基淋因重炕組菌鞋培養(yǎng)尿裝置即中普勺遍采地用的弟排氣罩除菌扒系統(tǒng)棟。為勵(lì)減少盒培養(yǎng)價(jià)液的腫蒸發(fā)喉量和把降低姐排氣垮的相賓對(duì)濕覆度。抽在罐鍬排氣引口外視安裝肅冷卻運(yùn)冷凝么器，萍其后繪才是黑加熱邁器，戶排氣副氣體愁經(jīng)此嫁加熱扣至6耀0~跡80勿°紡C?；氏鄬?duì)馳濕度兵降低限可預(yù)養(yǎng)防濾訴器上夕凝結(jié)笨水汽嫂。除框菌濾咬器與爆培養(yǎng)破罐空爸氣入翁口處紛的相術(shù)同。乖排氣穴中的照微生喘物（常個(gè)）士菌種轎鼓泡肌瓶皺堿她電熱鏟器查大腸燒桿菌厭釀酒該酵母血98餡0漠71尚61存1懲40遲0妹0顆除菌痛濾器嚇有經(jīng)用多孔蛋填料雷除菌漠的膜想型濾鋤器和波深度沿型濾柴器。架后者病主要虹用于翅氣體境過濾遺，其性原理腦與膜接濾器土不同較，無培篩網(wǎng)揚(yáng)的效羅果，溉而是劇通過撈靜電刺吸附木、慣養(yǎng)性沖戲撞等紗作用筐捕集作氣體蹈中的窯粒子蚊。無筋論使梁用哪臥種類譜型的旬濾器敏，都唯應(yīng)對(duì)豐排氣鍵進(jìn)行臟去濕總處理遠(yuǎn)。使閘用膜冒濾器聯(lián)時(shí)，蹲因?yàn)V痕器表失面凝厭結(jié)水登汽，咐壓力推損失益驟增買，深惜度型株濾器耳除菌勁效率挽也會(huì)親因水議汽凝絲結(jié)而托下降如。膜催濾器淚原來描多用竟于過堆濾液焦體，餐通過盤流水姿性濾坦器的搜開發(fā)仙，也缺能應(yīng)濤用于脈氣體簽過濾茄了。碰憑蕉2，都機(jī)械掏密封撿那隱通氣襪攪拌糖培養(yǎng)令罐中貨貫穿業(yè)罐的似攪拌植軸須凝與傳柿動(dòng)部挨連接煉。作假為這怒部分億的軸天封使簡(jiǎn)用的柄是機(jī)粥械密餃封，莖有單偵機(jī)械銅密封請(qǐng)和雙臟機(jī)械生密封甘之分茄。前偏者由敞單密欺封面燒將罐鬼與外臂界隔便開。祥此密朝封部著分因烈高速擺旋轉(zhuǎn)真產(chǎn)生位摩擦超熱，最故需質(zhì)冷卻漂和潤(rùn)辦滑。浩這樣鵲一來稍，即矩便正姻常運(yùn)文轉(zhuǎn)，業(yè)培養(yǎng)州液也亂會(huì)一直點(diǎn)一緒點(diǎn)地濕滲入懂密封豪面，婆很有從可能梁經(jīng)此告流出影。同殃時(shí)，棋滅菌戒時(shí)的碰熱膨濕脹差的也會(huì)夕使流滿出量原增加瘋。這脂是培父養(yǎng)結(jié)弦束后砌滅菌認(rèn)時(shí)最干易外申漏的越所在覺。還車有，罷機(jī)械潛密封擱受使眼用壽派命所稱限，對(duì)在溢罷漏發(fā)宿生前各就應(yīng)植定期郊更換富。所喉以單券機(jī)械矛密封浴的培演養(yǎng)罐挨不宜屯用于格基因涌重組從菌的囑培養(yǎng)稻。湖甚卸雙機(jī)欣械密朽封是森用高陳于罐走內(nèi)壓尼的壓松力，批將貯遇存于長(zhǎng)另一樹潤(rùn)滑啟液槽眨中的嗽無菌節(jié)水壓叫入機(jī)蒼械密漏封部麥，用寇作軸瘋封潤(rùn)額滑液旨。這魯時(shí)，諸上、柿下兩班部分芝即使雄有一敬部分貝的密牙封液煮滲漏伯，培逐養(yǎng)液昌也幾回乎無辭外漏磚危險(xiǎn)苗。但哨上、舞下兩集方同山時(shí)溢殼漏時(shí)盯，培殲養(yǎng)液甘亦有外可能搏外漏格了。的因此榆，問抗題在慚于攪薯拌軸炭是由遮罐的興上部絹還是擋下部演通入邪。從透培養(yǎng)分裝置掉的使?jié)脙?yōu)崇點(diǎn)及翼攪拌殺軸長(zhǎng)滴度等策角度表看，可用下醒攪拌含為好賽。但悟若考隨慮培填養(yǎng)液達(dá)外漏川的情扒況，膜培養(yǎng)京基因號(hào)重組梨菌時(shí)雞，以顛用上橋部攪美拌的仗雙機(jī)副械密敬封為炊好。甩吼池用磁僅力方極法改鍛變攪悼拌動(dòng)誤力的佩傳動(dòng)禿就不確必?fù)?dān)昌心機(jī)赤械密染封的月外漏交了。鈔10臘L以態(tài)下的低培養(yǎng)薪裝置雪以往啄一直窩是用敏磁力烘進(jìn)行菌動(dòng)力霞傳動(dòng)鈔的，銹但罐聰一大紀(jì)，會(huì)雙出現(xiàn)敏磁力萍不足話、軸務(wù)承磨夫損等隸問題監(jiān)。目側(cè)前大際至9巨0L破培養(yǎng)父罐，化已能呼用強(qiáng)呆磁力南進(jìn)行雅動(dòng)力挽傳動(dòng)激?，F(xiàn)壤時(shí)，起基因貴重組硬菌的剝培養(yǎng)汽罐仍擊采用潤(rùn)雙機(jī)閥械密掃封的編上攪泄拌方絮式為溫多，凈其次熱用雙落機(jī)械俊密封劈的下刊攪拌銷方式刺。堤瓦暫3，胖取樣頸萄侵笨普通鄙培養(yǎng)參罐的線取樣疾管道街在取黃樣時(shí)福會(huì)流咳出樣血品。映取樣題后對(duì)式樣品者管道翁滅菌示時(shí)，質(zhì)未滅晶菌的完培養(yǎng)硬液污辨水被趙排至澆排水奏管內(nèi)昂。對(duì)亭此，瀉必須舟采取認(rèn)措施鼓，如份用取咬樣工將具進(jìn)萍行取留樣(疲圖1櫻1-叉11憲)。臣此法住可在維培養(yǎng)們液不殼接觸菌外界然的條蹄件下狀取樣樂。用者高壓熊滅菌貝器使爸其滅進(jìn)菌或?qū)沁B轉(zhuǎn)接后狠用蒸金汽滅薦菌，產(chǎn)滅菌蕉結(jié)束醋后將課樣品都從罐朋中取行出送辜入樣乎品管曬中。盒取完肺所需拖的樣焰品，陵卸下壤之前爭(zhēng)對(duì)取暫樣管爪道再傅次滅銳菌。副卸下咐經(jīng)滅動(dòng)菌的盒連結(jié)始器，既在安燭全柜訴中卸逼下樣杜品管幟。取松樣中畫使用偵的排帽水管何管道漆與廢錫液滅希菌貯勝罐相槳連，弱取樣脊及滅壩菌時(shí)今產(chǎn)生供的排桃水一互并貯很存于激罐內(nèi)莫，經(jīng)跨滅菌袋后排暫出。姻此外宿還設(shè)壞計(jì)了圓各種標(biāo)安全浴取樣陪用的學(xué)器具搭。例兩如，慢通過細(xì)雙層萍橡皮宜膜，懸用注信射器乓取樣季；把愿可移洽動(dòng)的黨完全崗密封奴型的蘋球形取箱與稠取樣紅管連勢(shì)接，崇在此險(xiǎn)箱中背取樣阿等。境但是塘這些紙操作失都由腎人工禽控制揮，操往作中妙難免顆出錯(cuò)比。為吩了減恨少操恭作人狀員接荒近工召程菌袋的機(jī)跪會(huì)，腥盡量協(xié)不用魄人工爐操作禁而采突用自雁動(dòng)取解樣裝辯置最抄為安老全?；瑘D1啞1-均12鈔為自宴動(dòng)取故樣裝爽置的跑流程沈圖。蜻取樣忽方法印與人貴工取腳樣程悔序大萬致相僚同。蜂同時(shí)辱，取胃樣過剛程因委采用躁程序乞系統(tǒng)給控制損而易紛于變凡動(dòng)。鼠取出站的樣淘品?？嬗谟忱鋷焐瓋?nèi)，煩冷庫萌內(nèi)的利空氣鴉經(jīng)濾查器過碰濾，膊內(nèi)部近也可丘進(jìn)行愚滅菌漠。濟(jì)4，閥培養(yǎng)殖后的龍滅菌撐培養(yǎng)憐后對(duì)屠培養(yǎng)眠液和更管道廚等進(jìn)鄭行滅烈菌時(shí)被，一軍開始兄流出閉的末尚滅菌市排水心有可己能存誘在活費(fèi)的重胡組菌幫。取古樣、濁排液游的管牌道中摘能產(chǎn)趙生這潮類排撐水，號(hào)因此冰，一噸定要掏另行起安裝今排水信管并艘與廢墾液滅拆菌貯喇槽等厘相連軌接，霜以便特徘放傭污水尤。棋5，散接種棗向罐眾內(nèi)直勺接接喘種的變方法央是不誘安全逃的。志簡(jiǎn)單魯?shù)陌厕p全接葡種法戚是將桑種子配瓶與堪培養(yǎng)睬罐以結(jié)管相角連接序后，膀用無米菌空碗氣加罰壓壓鳳入的涂方法窮。另格一種錄方法以是先玩把種麥子液充在安祖全柜鉤內(nèi)移勉至供訂接種晃用的肥小罐菊內(nèi)，刻再將疊其與測(cè)培養(yǎng)揉罐連呀接，乞用蒸雀汽對(duì)模連接舊部分孟滅菌壞后，射把種甲子罐御中的芒種子尊液接理入培擊養(yǎng)罐炒內(nèi)。疼6，晉排液啦培養(yǎng)硬后要怪將培南養(yǎng)液生輸送武至貯奧罐等浴下一兩道工痕序，剃這時(shí)員也有售可能布產(chǎn)生珠氣溶諸膠和始重組總菌的歇擴(kuò)散歌。安芬全的釋方法遞是在火培養(yǎng)匆開始維前就售將排嗚液口刻與下站段工輪序相裕連接票并進(jìn)昨行滅吩菌，作這樣戒培養(yǎng)牛于結(jié)蔑束即溉可直卸接輸孝送培單養(yǎng)液隔。如稀果排需液口懷未與脫下段童工序誕相連絲那就衡應(yīng)與輪連結(jié)障廢液緒滅菌踢罐的月