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文檔簡介

茚三酮法測氨基酸

茚三***顯色法測定氨基酸的含量:凡含有自由氨基的化合物,如蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸的溶液與水合茚三***共熱時,能產(chǎn)生紫色化合物,可用比色法進行測定。

氨基酸與茚三***的反應(yīng)分兩個步驟。

第一步是氨基酸被氧化形成2、3和醛、茚三***被還原成還原型茚三***;其次步是所形成的還原型茚三***與另一個茚三***分子和3縮合生成有色物質(zhì)。

:721型分光光度計臺天平減壓蒸餾器干燥容量瓶移液槍燒杯試管架試管水浴鍋。

:1標準氨基酸溶液:溶液2,2醋酸緩沖液:量取862醋酸鈉溶液,加入142乙酸混合而成。

用檢查校正。

3茚三***顯色液:稱取170茚三***和30還原茚三***,用20乙二醇甲醚溶解460%乙醇。

5樣品液:~50μ氨基酸。

茚三***若變?yōu)槲⒓t色,則需按下法重結(jié)晶:稱取5茚三***溶于15~25熱蒸餾水中,活性炭,輕輕攪拌。

加熱30后趁熱過濾,濾液放入冰箱過夜。

次日析出黃白色結(jié)晶,抽濾,用1冷水洗滌結(jié)晶,置干燥器干燥后,裝入棕色玻璃瓶保存。

還原型茚三***按下法制備:茚三***,沸蒸餾水溶解,得黃色溶液。

維生素用25溫蒸餾水溶解,一邊攪拌一邊將維生素溶液滴加到茚三***溶液中,不斷消失沉淀。

滴定后連續(xù)攪拌15,然后在冰箱內(nèi)冷卻到4℃,過濾、沉淀用冷水洗滌3次,置五氧化二磷真空干燥器中干燥保存,備用。

乙二醇甲醚若放置太久,需用下法除去過氧化物:在500乙二醇甲醚中加入5硫酸亞鐵,振蕩1~2,過濾除去硫酸亞鐵,再經(jīng)蒸餾,收集沸點為121~125℃的餾分,為無色透亮?????的乙二醇甲醚。

四、操作步驟的標準氨基酸溶液0,,,,,于試管中,用水補足至1。

各加入1,2醋酸緩沖液;再加入1茚三***顯色液,充分混勻后,蓋住試管口,在100℃水浴中加熱15,用自來水冷卻。

放置5后,加入360%乙醇稀釋,充分搖勻,用分光光度計測定570。

脯氨酸和羥脯氨酸與茚三***反應(yīng)呈黃色,應(yīng)測定440。

以570為縱坐標,氨基酸含量為橫坐標,繪制標準曲線。

123456標準氨基酸溶液蒸餾水02醋111111酸緩沖液茚三***顯111111色液570混勻,蓋住試管口后在100水浴加熱15,然后用自來水冷卻。

放置5后,加入360%的乙醇稀釋,充分搖勻。

取樣品液1,,2醋酸緩沖液1和茚三***顯色液1,混勻后于100℃沸水浴中加熱15,自來水冷卻。

放置5后,加360%乙醇稀釋,搖勻

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