輻照食品檢測技術(shù)主要內(nèi)容一、食品輻照的現(xiàn)狀及輻照食品的檢測原理（一）背景（二）檢測的基本原理二、檢測方法介紹（一）GB/T21926-2008《輻照含脂食品中2-十二烷基環(huán)丁酮測定氣相色譜/質(zhì)譜法》（二）GB/T23748-2009《輻照食品的鑒定DNA彗星試驗(yàn)法篩選法》（三）其他方法三、實(shí)際案例第一部分：食品輻照的現(xiàn)狀及檢測原理

（一）背景

什么是輻照（Irradiation）？

輻照是指將電子加速器（0.2MeV~10MeV）產(chǎn)生的電子線或放射性同位素（137Cs或60Co）產(chǎn)生的γ射線的能量轉(zhuǎn)移給被輻照物質(zhì)，通過控制輻射強(qiáng)度，達(dá)到人們所需要的目標(biāo):◆使被輻照物質(zhì)的物理性能和化學(xué)組成發(fā)生變化（突變育種、材料改性）◆使生物體受到不可恢復(fù)的損失和破壞（滅菌、殺蟲）。輻照效應(yīng)（一）輻照物理學(xué)效應(yīng)

◆射線與物質(zhì)的作用光子、光電子、康普頓散射等◆電子射線的作用庫侖散射、軔致輻射、契連科夫效應(yīng)等

輻照的化學(xué)效應(yīng)水——產(chǎn)生羥自由基,氫自由基——H2O2蛋白質(zhì)——導(dǎo)致二硫鍵、氫鍵、鹽鍵和醚鍵等的斷裂——促使蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生變化——發(fā)生脫氨基作用、脫羧作用和氧化作用

糖類——有明顯的降解作用和輻解產(chǎn)物形成脂類——氧化不飽和脂肪酸，出現(xiàn)脫羧、氫化、脫氨等維生素——脂溶性維生素（最敏感：維生素A和E；穩(wěn)定：維生素D）；水溶性維生素（最敏感：維生素B1和C）輻照效應(yīng)（二）輻照效應(yīng)（三）輻照的生物學(xué)效應(yīng)食品輻照的生物學(xué)效應(yīng)與生物機(jī)體內(nèi)的化學(xué)變化有關(guān)微生物——直接控制或殺滅食品中的腐敗性微生物及致病微生物（細(xì)菌、酵母與霉菌、病毒）蟲類——昆蟲、寄生蟲

果蔬——抑制呼吸高峰、改變果蔬中的化學(xué)成分、影響新鮮蔬菜代謝反應(yīng)根據(jù)2003年9月7～12日在美國芝加哥召開的國際第十四屆國際輻射加工年會(huì)提供的信息

★食品輻照45%

★滅菌：醫(yī)療保健用品21%、藥品4%、包裝材料滅菌11%

★聚合物改性6%

★仿形部件2%

★煙道氣處理7%

★天然植物化學(xué)功能食品5%輻照技術(shù)在各行業(yè)的應(yīng)用為什么要對食品進(jìn)行輻照處理？1.滅菌\除蟲——消滅食品中的微生物，寄生蟲食品中往往存在造成食品腐敗和引起食源性疾病的生物，而輻照產(chǎn)生的r射線具有極強(qiáng)的穿透性和電離能力，可以通過直接或間接的作用(自由基)破壞細(xì)胞的結(jié)構(gòu)分子以及DNA，導(dǎo)致微生物/寄生蟲死亡。實(shí)例：——輻照后的糧食3年內(nèi)不會(huì)生蟲；——肉禽類食品經(jīng)過輻照處理，可全部消滅霉菌、大腸桿菌等腐敗性和致病性微生物；——一般真空包裝下,2～4℃時(shí)鮮肉的保質(zhì)期是5-7天，而利用輻照處理后，在2～4℃下保質(zhì)期為30天。2.抑制發(fā)芽,延緩成熟蔬菜、水果在采摘后有一段休眠期，休眠期過后又會(huì)恢復(fù)生長，發(fā)芽，有些農(nóng)產(chǎn)品一旦發(fā)芽，就不能食用或喪失原有的食用價(jià)值。如土豆（產(chǎn)生劇毒的龍葵素）、大蒜、洋蔥（無原先的食用價(jià)值）等。輻照通過破壞酶賴以生存的附著水環(huán)境，降低或鈍化酶的活性，從而抑制上述農(nóng)產(chǎn)品發(fā)芽，延長保質(zhì)期。實(shí)例：一般土豆常溫保存40天，發(fā)芽率100%；而吸收0.1kGy輻照劑量后，常溫保存300天，無發(fā)芽現(xiàn)象。水果采收后仍是活得有機(jī)體，繼續(xù)進(jìn)行著一系列生理生化過程（后熟），很多營養(yǎng)成分被消耗掉。輻照——酶，受體蛋白——250-350Gy對未成熟的香蕉照射，可使成熟期推遲16天；用250Gy照射芒果，使成熟期推遲16天；用2kGy或更高的劑量照射草莓，使草莓在5攝氏度下，延長貨架時(shí)間5-8天。3.其它作用：

降解食品中殘留的農(nóng)獸藥——氯霉素（河蝦、蜂蜜），菊酯，氨基甲酸酯（蘋果汁）改善食品品質(zhì)——加速陳化（酒）；肉質(zhì)鮮嫩可口（牛肉）；消化吸收（大豆）；縮短復(fù)水時(shí)間（脫水食品）；改進(jìn)烘烤質(zhì)量（面粉）實(shí)例：用0.8kGy和1.3kGy劑量輻照的兩種白蘭地酒，存放3月后品嘗鑒定，其酒質(zhì)相當(dāng)于3年老酒。水果采收后仍是活得有機(jī)體，繼續(xù)進(jìn)行著一系列生理生化過程（后熟），很多營養(yǎng)成分被消耗掉。輻照——酶，受體蛋白——250-350Gy對未成熟的香蕉照射，可使成熟期推遲16天；用250Gy照射芒果，使成熟期推遲16天；用2kGy或更高的劑量照射草莓，使草莓在5攝氏度下，延長貨架時(shí)間5-8天。輻照目的與效果及相對應(yīng)的劑量范圍食品輻照技術(shù)的特點(diǎn)

1.節(jié)能據(jù)國際原子能機(jī)構(gòu)（IAEA）統(tǒng)計(jì)：每噸冷藏食品能耗為3.2*108J；熱殺菌法能耗1.1*109J；輻照法為2.2*107J，比常規(guī)方法節(jié)能十幾倍到幾十倍。2.冷加工常規(guī)的熱殺菌、微波、氣流式過熱蒸汽等常常造成食品內(nèi)部分子熱運(yùn)動(dòng)加劇，喪失食品原有的色香味甚至營養(yǎng)成分。（如香辛料、冷藏/凍肉、新鮮蔬菜等）輻照方法屬于冷加工，可以在常溫或者低溫下進(jìn)行，在食品輻照過程中一般升溫很小。如0.1-1kGy輻照大多數(shù)蔬菜，水果，通常升溫最高不超過1℃。

食品輻照技術(shù)的特點(diǎn)

3.穿透力強(qiáng)，滅殺徹底多數(shù)食品的病原性細(xì)菌，經(jīng)80℃短時(shí)間巴氏消毒后仍能生長；藥劑處理則只對食品表面的殺菌有效，深層病菌無法殺滅。

輻照具有較強(qiáng)的穿透力，如60Co的r射線在水中的半減弱層為11cm水層，因而可以在包裝下以及不解凍情況下輻照食品，并深入到食品內(nèi)部，殺滅隱藏很深的病菌，害蟲，寄生蟲和微生物，達(dá)到長期保存目的。

食品輻照技術(shù)的特點(diǎn)4.無化學(xué)殘留常規(guī)熏蒸（環(huán)氧乙烷、溴甲烷）、添加防腐劑等方法會(huì)有化學(xué)藥劑和添加劑的殘留導(dǎo)致食品品質(zhì)改變。輻照不需化學(xué)添加劑，不存在殘留毒性，也不會(huì)產(chǎn)生感生放射性，不污染環(huán)境。

食品輻照技術(shù)的特點(diǎn)食品輻照的安全性評(píng)價(jià)（一）不會(huì)誘發(fā)放射性：

射線能量〉誘發(fā)閾能——〉誘發(fā)放射性；

60Co---1.25MeV；137Cs---0.66MeV，電子線---10Mev；食品輻照的安全性評(píng)價(jià)（二）毒理學(xué)沒有問題

國際食品輻照衛(wèi)生安全評(píng)價(jià)聯(lián)合專家委員會(huì)、國際食品法典委員會(huì)于1980年、1999年和2003年宣布：用10kGy以下劑量處理的任何食品，不會(huì)產(chǎn)生毒理學(xué)上的問題，且超過10kGy劑量的輻照食品也是衛(wèi)生安全的，無需再進(jìn)行毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)。有爭議部分：輻照后食品可能有基因突變的風(fēng)險(xiǎn)，但科學(xué)家們各執(zhí)一詞，沒有定論。

所以，食品輻照技術(shù)已經(jīng)在很多國家獲得廣泛的應(yīng)用，也成為世貿(mào)組織（WTO）認(rèn)可的食品加工技術(shù)。（中國國門時(shí)報(bào)，2010.10.23）截至目前，世界上已有42個(gè)國家正式批準(zhǔn)了240多種輻照食品的標(biāo)準(zhǔn)，有些國家則嚴(yán)格禁止輻照食品進(jìn)口。世界主要國家關(guān)于輻照食品的法規(guī)歐盟允許輻照食品種類及輻照劑量國別允許輻照食品種類允許輻照劑量歐盟草藥、香料和植物調(diào)味料最高10kGy法國豬肉、大蒜、洋蔥、蝦（含冷凍）、魚（含冷凍）、香料、脫水蔬菜、家禽肉荷蘭大蒜、洋蔥、蝦（含冷凍）、馬鈴薯、家禽肉、蛋白英國豆類、豬肉、大蒜、洋蔥、蝦（含冷凍）、魚（含冷凍）、香料、脫水蔬菜、木瓜、草莓、馬鈴薯、大米、小麥、無菌食品日本允許輻照食品種類及輻照劑量國別允許輻照食品種類允許輻照劑量日本土豆150Gy（且不允許重復(fù)照射）

2000年日本香辛料協(xié)會(huì)申請香辛料允許輻照，但現(xiàn)在還未獲批準(zhǔn)澳大利亞、新西蘭允許輻照食品種類及輻照劑量國別允許輻照食品種類允許輻照劑量澳大利亞、新西蘭栗子、水果類、南美番荔枝、荔枝、龍眼、芒果、山竹果、番木瓜、紅毛丹

150Gy-1kGy藥草、香辣調(diào)味料

2kGy-30kGy藥草萃取物（新鮮、干燥或發(fā)酵的葉、花或植物的其他部分制造的飲料，茶除外）3kGy-10kGy美國允許輻照食品種類及輻照劑量國別允許輻照食品種類允許輻照劑量美國新鮮、未加熱處理過的豬肉0.3kGy～1kGy干燥或脫水酶制劑10kGy干燥或脫水香料30kGy新鮮、冷凍或生的禽肉3kGy冷凍包裝肉類(僅美國國家航空航天局)44kGy冷凍生肉4.5kGy冷凍生肉制品7kGy新鮮蛋類3kGy種子8kGy新鮮或冷凍的軟體甲殼類動(dòng)物5.5kGy新鮮水果蔬菜1kGy加拿大允許輻照食品種類及輻照劑量國別允許輻照食品種類允許輻照劑量加拿大土豆、洋蔥——小麥、面粉和全麥粉——香料和脫水調(diào)味品——芒果0.25～1.5kGy新鮮禽肉1.5～3.0kGy冷凍禽肉2.0～5.0kGy鮮、干或預(yù)處理的蝦1.5～3.0kGy冷凍的蝦1.5～5.0kGy鮮牛肉1.5～4.5kGy冷凍牛肉2.0～7.0kGy我國的輻照情況我國于1958年開始建造研究用輻照裝置（五五期間開始動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、六五期間進(jìn)一步研究），90年代以后輻照技術(shù)逐步向食品工業(yè)轉(zhuǎn)移。到2005年，我國設(shè)計(jì)裝源能力30萬居里（11.1PBq）以上的商用γ輻照裝置已達(dá)84座，功率5kw以上的電子加速器為83臺(tái)；2007年輻照加速器達(dá)100臺(tái)，在建33臺(tái)，平均每年以15%的速度遞增。2005年，輻照食品產(chǎn)值達(dá)35億元，產(chǎn)量達(dá)14.5萬噸，占世界輻照食品產(chǎn)量(40萬噸)的36%，居世界首位，其中輻照香辛料、脫水蔬菜、大蒜及大蒜制品是主要產(chǎn)品，其直接產(chǎn)值超過20億元，社會(huì)效益巨大，近幾年又有了進(jìn)一步的發(fā)展。所以，從輻照食品的種類和數(shù)量而言，我國是世界上輻照食品應(yīng)用最多的國家之一。我國輻照食品安全規(guī)定

允許輻照食品種類允許輻照劑量標(biāo)準(zhǔn)適用商品熟畜禽肉類

低于8kGyGB14891.1-1997豬肉、牛肉、雞鴨肉花粉類低于8kGyGB14891.2-1994玉米、蕎麥、高梁、芝麻、油菜、向日葵、紫云英的蜜源的純花粉及混合花粉干果果脯類0.4～1.0kGyGB14891.3-1997花生仁、桂圓、空心蓮、核桃、生杏仁、紅棗、桃脯、杏脯、山楂脯及其他蜜餞類香辛料類低于10kGyGB14891.4-1997所有品種新鮮水果、蔬菜

低于1.5kGyGB14891.5-1997土豆、洋蔥、西紅柿、蘋果等17種豬肉低于0.65kGyGB14891.6-1994鮮豬肉冷凍包裝畜禽肉類

低于2.5kGyGB14891.7-1997預(yù)包裝的豬肉、牛肉、雞鴨肉豆類、谷類及其制品

豆類低于0.2kGy谷類0.4～0.6kGyGB14891.8-1997豆類、谷類及其制品薯干酒低于4kGyGB14891.9-1994薯干酒此外，與國際上的規(guī)定一樣，我國自1996年出臺(tái)《輻照食品衛(wèi)生管理辦法》，到后來的《食品輻照通用技術(shù)要求》以及2007年實(shí)施的《食品召回管理規(guī)定》和2008年新修訂的《食品標(biāo)識(shí)管理規(guī)定》法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)中都有明確指出，凡是經(jīng)過電離輻射或者電離能量處理過的農(nóng)產(chǎn)品及食品都要進(jìn)行標(biāo)簽標(biāo)注,凡未貼標(biāo)識(shí)的輻照食品一律不準(zhǔn)進(jìn)入國內(nèi)市場。食品輻照設(shè)施防護(hù)非常重要——尤其是升降源保障輻照食品安全性的前提條件1、輻照劑量和輻照時(shí)間監(jiān)控的需要目前各國普遍認(rèn)可的劑量是10kGy以下，而高于這個(gè)劑量是否會(huì)產(chǎn)生一些不安全因素還存在爭議。

2、非法輻照的監(jiān)管需要

監(jiān)控輻照滅菌的單位，對其滅菌的品種和操作進(jìn)行監(jiān)控

——違法輻照、重復(fù)輻照

3、標(biāo)識(shí)管理的需要

盡管國家早就對此進(jìn)行了相關(guān)規(guī)定，但在目前銷售的食品上很少會(huì)發(fā)現(xiàn)有標(biāo)注輻照食品字樣的。給消費(fèi)者知情和選擇的機(jī)會(huì)是很有必要的，所以這方面的相關(guān)監(jiān)督應(yīng)該要加強(qiáng)。為什么要對輻照食品進(jìn)行檢測（一）為什么要對輻照食品進(jìn)行檢測（二）4.進(jìn)出口貿(mào)易的需要——由于各國的歷史、生活習(xí)慣及法規(guī)差異，目前世界各國允許輻照的食品種類仍差別較大，需要判別出口產(chǎn)品是否滿足進(jìn)口國要求我國輻照產(chǎn)品在國外被通報(bào)的部分情況2005-2006年，我國出口食品先后10次被歐盟食品預(yù)警系統(tǒng)通報(bào)非法輻照2007年1月26日，中國出口到法國的小龍蝦被檢出非法輻照2007年3月21日，中國出口到英國的人參膠囊、辣味咖喱碗面、中草藥茶等被檢出非法輻照2007年3月28日，中國出口到意大利的脫水蔬菜被檢出非法輻照；2007年7月4日，中國出口到英國的1批人參粉末膠囊被檢出含有未經(jīng)批準(zhǔn)的輻照成分；2008年2月22日，中國出口到英國的一批花旗參膠囊被檢出經(jīng)輻照；2008年6月5日，日本檢出中國的一批干香菇實(shí)行了放射線照射處理；2008年6月13日，英國食品標(biāo)準(zhǔn)局要求產(chǎn)自中國經(jīng)輻照后的酵母粉及其產(chǎn)品撤出2008年10月20日，日本檢出1批干辣椒經(jīng)過輻照處理；2008年12月-2009年9月，日本先后四次查出我國輸日干香菇經(jīng)輻照處理；2009年9月7日，日本檢出我國一批出口日本的冷凍水煮蝦蛄接受過輻照處理；2010年2月4日，芬蘭檢出中國的裹亞麻籽口味的大豆經(jīng)輻照處理；2010年2月15日，意大利檢出中國的茶補(bǔ)充劑經(jīng)輻照處理2010年2月17日，芬蘭檢出中國的減肥茶采用了未經(jīng)批準(zhǔn)的輻照處理2010年5月28日，羅馬尼亞檢出中國出口至歐盟的植物萃取物經(jīng)過非法輻照越來越頻繁（二）輻照食品檢測的基本原理概況：食品輻照劑量一般規(guī)定在0.01-10kGy之間，其引起食品的外觀、形狀、溫度及組成上的變化是十分微小的，因此，檢測食品是否已被輻照和估測輻照食品的吸收劑量是十分困難的。為此，1989年國際原子能機(jī)構(gòu)組織了為期5年（1989-1994）的輻照食品分析檢測方法協(xié)調(diào)研究，這次協(xié)調(diào)研究將輻照食品檢測方法推向了實(shí)際應(yīng)用，推動(dòng)了檢測方法向國際標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)展。目前頒布輻照食品檢測法定標(biāo)準(zhǔn)方法的國家和組織主要有歐盟、國際食品法典委員會(huì)（CAC）、中國和日本。其中以歐盟的標(biāo)準(zhǔn)最為系統(tǒng)。歐盟先后頒布了涉及8個(gè)方法（含篩選法）的10個(gè)檢測方法標(biāo)準(zhǔn)。中國共有6個(gè)。基本思路：

逆向證明：基于輻照在食品中產(chǎn)生的物理、化學(xué)、生物學(xué)和生理學(xué)等影響，從輻照后的產(chǎn)物和食品出現(xiàn)的一些微小變化為依據(jù)進(jìn)行檢測。

根據(jù)目標(biāo)物的特異性程度，檢測方法分為初篩和確證兩種類型。1.初篩方法的原理依據(jù)：輻照會(huì)引起生物體內(nèi)的DNA損傷、酶活性鈍化等生物效應(yīng)。著眼點(diǎn)：主要就是利用輻照前后食品表面的微生物異常狀態(tài)以及食品分子中DNA性狀的變化來實(shí)現(xiàn)檢測。特點(diǎn)：操作簡單，快速，高通量局限性：由于其他消毒、滅菌的處理方法（如熏蒸、加熱、凍存）也會(huì)造成食品中微生物或DNA的異常，所以初篩方法只能從間接的角度表明被檢食品可能經(jīng)過輻照，具體的鑒定需要通過確證方法。

2.確證方法的原理依據(jù)：輻照會(huì)造成食品中出現(xiàn)含量有明顯變化的產(chǎn)物以及某些特殊的物化特性；著眼點(diǎn)：輻照專一性輻解產(chǎn)物（環(huán)丁酮類、碳?xì)浠衔铮┖痛鎯?chǔ)的能量（動(dòng)量）等。目前國際上認(rèn)可的法定確證方法很多，主要有氣相色譜、氣質(zhì)聯(lián)用、熱釋光、光致發(fā)光及電子自旋共振等方法。第二部分：檢測方法的介紹

初篩方法§直接熒光過濾器/需氧菌平板計(jì)數(shù)法§內(nèi)毒素/革蘭氏陰性菌計(jì)數(shù)法（LAL/GNB）§DNA彗星技術(shù)檢測法確證方法§針對碳?xì)浠衔锏臍庀嗌V檢測法§針對2-十二烷基環(huán)丁酮的氣相色譜-質(zhì)譜檢測法§熱釋光檢測法（TL）§光致發(fā)光檢測法（PSL）§電子自旋共振技術(shù)（ESR）檢測法其它方法

——黏度（淀粉類）、鄰酪氨酸法（蛋白質(zhì)）、電阻抗法（土豆）、過氧化氫法（酒）、D-2,3-丁二醇法（酒）、發(fā)芽率測定法（土豆、大蒜）等我國現(xiàn)有的輻照食品檢測方法標(biāo)準(zhǔn)NY/T1207-2006輻照香辛料及脫水蔬菜熱釋光鑒定方法NY/T1390-2007輻照新鮮水果、蔬菜熱釋光鑒定方法NY/T1573-2007輻照含骨類動(dòng)物源性食品的鑒定-ESR法GB/T21926-2008輻照含脂食品中2-十二烷基環(huán)丁酮測定氣相色譜-質(zhì)譜法GB/T23748-2009輻照食品的鑒定DNA彗星試驗(yàn)法篩選法SN/T2522.1-2010進(jìn)出口輻照食品檢測方法微生物學(xué)篩選法

（一）GB/T21926-2008

《輻照含脂食品中2-十二烷基環(huán)丁酮測定

氣相色譜/質(zhì)譜法》

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局、中國國家標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)提出。本標(biāo)準(zhǔn)由中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：國家農(nóng)副加工食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心、安徽國家農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化與監(jiān)測中心。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：程靜、盧業(yè)舉、趙成仕、舒勇、夏春、王彩霞、邵棟梁、戚愛香。范圍規(guī)定了輻照含脂食品中2-十二烷基環(huán)丁酮的氣相色譜/質(zhì)譜測定方法。適用于輻照含脂食品。檢出限為10μg/kg（以脂肪計(jì)）。

研究表明：雞肉、豬肉、鮮蛋、三文魚和奶酪等均適用原理2-十二烷基環(huán)丁酮是含脂食品中棕櫚酸甘油酯經(jīng)輻照后，酰氧鍵（酯鍵）發(fā)生斷裂，生成2-十二烷基環(huán)丁酮。目前，還沒有證據(jù)表明2-烷基環(huán)丁酮在未經(jīng)輻照的食物中也能被檢測到——標(biāo)志性化合物。棕櫚酸甘油酯2-十二烷基環(huán)丁酮注：若是硬脂酸甘油脂則會(huì)產(chǎn)生2-十四烷基環(huán)丁酮斷鍵成環(huán)方法的概述用正己烷索氏抽提法提取脂肪（含2-十二烷基環(huán)丁酮），經(jīng)過弗洛里柱凈化，以氣相色譜-質(zhì)譜檢測。試劑

正己烷，乙醚，2-十二烷基環(huán)丁酮標(biāo)準(zhǔn)品，無水硫酸鈉，弗羅里硅土（60-100目，650℃烘烤，10%水去活，陳化過夜）儀器和設(shè)備

氣相色譜，索氏提取器，冷凍離心機(jī)，玻璃層析柱，均質(zhì)器弗洛里硅土——去活化，陳化——重要檢測條件：色譜柱：DB-5MS（30mX0.25mmX0.25μm）升溫程序：80℃（1min）—15℃/min—〉150℃—8℃/min—〉200℃—20℃/min—〉260℃（2min）選擇離子（m/z）監(jiān)測：98、55、112不分流進(jìn)樣，1μL取樣：優(yōu)先取脂肪含量高的部分（如雞皮），對于脂肪含量低的食品要增加被測樣品數(shù)量。兩步索氏提取，需11-17h索氏抽提法用無水乙醚或石油醚以索氏提取器提取，蒸去溶劑后得脂肪。試樣處理：谷物等經(jīng)粉碎過40目篩，肉用絞肉機(jī)絞2次，適當(dāng)拌以海砂，移入濾紙筒液體或半固體則與海砂混合后在沸水浴上蒸干，在100度左右干燥，研細(xì)，裝筒。過程：抽提6-12小時(shí)，蒸干溶劑，干燥恒重，計(jì)算含量GB/T5009.6-2003中的脂肪含量的測定簡化技巧按照標(biāo)準(zhǔn)操作——涉及2次索氏提取可以加以簡化，使實(shí)驗(yàn)步驟更加連貫方法一：取索氏提取干燥后的脂肪200mg，溶于5mL正己烷?！?.4方法二：用正己烷索氏提取——取一部分提取液測脂肪含量——根據(jù)計(jì)算結(jié)果量取200mg脂肪所對應(yīng)提取液體積——〉7.4C=ACs/As

（二）GB/T23748-2009

《輻照食品的鑒定DNA彗星試驗(yàn)法

篩選法》發(fā)布部門：中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)發(fā)布日期：2009-05-13實(shí)施日期：2009-08-01首發(fā)日期：2009-05-13起草單位：國家環(huán)保產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心、河北師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院、中國標(biāo)準(zhǔn)化研究院、湖北出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心起草人：張巖、李玉國、李揮、呂品、崔海容、周正、王麗霞、劉敬澤、郭麗敏、謝樂、劉東、閆蘊(yùn)力、李叢芬、周巍標(biāo)準(zhǔn)參照BSEN13784-2002《食品DNA彗星試驗(yàn)法鑒定輻照食品篩選法》(英文版)制定規(guī)定了含DNA輻照食品的DNA彗星試驗(yàn)篩選方法。

適用于生鮮肉類、原糧、干果、蔬菜以及香辛料是否輻照的篩選前言原理

將含有DNA的食品進(jìn)行輻照處理時(shí)，DNA的一條單鏈或者雙鏈會(huì)出現(xiàn)斷裂而產(chǎn)生不同的DNA片段。將樣品用瓊脂糖固定在顯微鏡載玻片上后，用去垢劑裂解細(xì)胞以破壞細(xì)胞膜，然后在設(shè)定的電壓下進(jìn)行電泳。各DNA片段從細(xì)胞內(nèi)向陽極方向延伸或遷移，就如同向著陽極方向形成一條尾巴，使被破壞的細(xì)胞電泳圖看起來像一顆彗星。受到輻照的細(xì)胞其DNA（含更多片段）從細(xì)胞核到陽極的彗星比未受到輻照的細(xì)胞更長一些。未受到輻照的細(xì)胞其彗星近似于圓形或只有很短的尾巴

典型的DNA彗星照片，未經(jīng)輻照的冷凍牛肉的銀染結(jié)果典型的DNA彗星照片，7kGy銀染輻照后的冷凍牛肉結(jié)果試劑以及儀器設(shè)備常規(guī)的瓊脂糖凝膠電泳所需的試劑：電泳緩沖液，裂解緩沖液，EDTA、Tris、吖啶橙、溴化乙錠和碘化吡啶等溶液。水平電泳儀，顯微鏡（按不同顯色方法，配置不同）試樣制備（細(xì)胞懸液）動(dòng)物組織1骨髓將骨劈裂，取骨髓置在冰冷PBS溶液中，以攪拌使細(xì)胞懸浮，過篩布（100μm），待用。2肌肉組織刮取肌肉組織或者用解剖刀將其切成極薄的薄片（不能帶有脂肪），放入冰冷PBS溶液中，以攪拌獲得懸浮液，過篩布（500μm+200μm），待用。

植物組織1種子、堅(jiān)果和香料用研缽研碎去殼樣品，置于冰冷PBS溶液中，以500轉(zhuǎn)/分鐘攪拌。懸浮液順次通過孔徑大小為200μm和100μm的篩布進(jìn)行過濾。待用。2馬鈴薯、洋蔥等用解剖刀將樣品切成極薄的薄片，同上處理分析測定鑄膠

先用一薄層瓊脂糖對載玻片進(jìn)行預(yù)涂層，再將細(xì)胞懸浮液與瓊脂糖鑄膠溶液混合并轉(zhuǎn)移至已預(yù)涂層的載玻片上。

裂解細(xì)胞：

使細(xì)胞膜成為可滲透膜，便于DNA在電泳時(shí)向外遷移電泳染色檢測對于吖啶橙染色的片子，熒光顯微鏡應(yīng)配備460nm到485nm（藍(lán)色激發(fā)光）的濾波片。被染色的DNA（雙鏈）發(fā)綠光，但背景和碎片呈黃色。對于碘化丙啶或溴化乙錠染色的片子，熒光顯微鏡應(yīng)裝有515nm到560nm（綠色激發(fā)光）的濾波片及590nm的光柵。鏡下DNA發(fā)紅光。對于銀染的片子，任何標(biāo)準(zhǔn)透射顯微鏡都可以觀察到。首選也可以再涂一層瓊脂糖，防止懸液中其它電離成分影響電泳結(jié)果判斷輻照后的樣品一般沒有完整的細(xì)胞，僅有彗星存在；而未輻照的樣品則幾乎始終存在一定量的無拖尾或拖尾很少的未損傷細(xì)胞。盡管大量的不同形狀或長度的細(xì)胞也可能在未輻照的樣品中檢測到，但始終有實(shí)際未損傷細(xì)胞存在這一特有的現(xiàn)象。一般通過顯微鏡下目視，即可將樣品分為經(jīng)輻照或未經(jīng)輻照。若用圖像分析系統(tǒng)則還可對彗星形式作客觀的評(píng)價(jià)。計(jì)算彗星的長度、面積、拖尾、彗星頭部、尾部等更多的信息因?yàn)橥ㄟ^其他途徑也可能得到DNA片段（肉類在酶作用下的DNA自然降解，加熱或微波處理后的食品，天然的殘核等），所以DNA彗星檢測技術(shù)只是一種篩選法，其結(jié)果需用另一種專門針對輻照樣品的檢測方法進(jìn)行確證，注意事項(xiàng)（三）其他方法直接熒光過濾器/需氧菌平板計(jì)數(shù)法（DEFT/APC）內(nèi)毒素/革蘭氏陰性菌計(jì)數(shù)法（LAL/GNB）針對碳?xì)浠衔锏臍庀嗌V檢測法熱釋光檢測法（TL）光致發(fā)光檢測法（PSL）電子自旋共振技術(shù)（ESR）檢測法1）直接熒光過濾器/需氧菌平板計(jì)數(shù)法（DEFT/APC）原理：利用輻照前后食品中微生物狀態(tài)的異常變化來進(jìn)行檢測的。其中DEFT通過濾膜減壓過濾，在濾膜上獲得微生物，以吖啶橙熒光染色表征，DEFT值表示樣品中的微生物總數(shù)（包括輻照中死亡的微生物）。APC方法得出的則是樣品中的活微生物數(shù)。在本方法中將由DEFT得到的數(shù)據(jù)與APC方法的數(shù)據(jù)進(jìn)行對比，當(dāng)兩者存在很大差異（4個(gè)數(shù)量級(jí)）時(shí)，則表明樣品可能受過輻照。

取5g樣品加入45ml蛋白胨水中混勻過濾樣品懸浮液DEFTAPC取2ml樣品過濾液經(jīng)薄膜過濾器過濾用2mlAO對薄膜過濾器染色2min用2.5ml緩沖液（pH3.0）清洗濾器用2.5ml2-丙醇再次清洗取下并干燥聚碳酸酯纖維濾膜制備DEFT玻片用落射熒光顯微鏡檢測DEFT玻片DEFT計(jì)數(shù)結(jié)果表述：Dc=A-BAPC計(jì)數(shù)準(zhǔn)備系列稀釋液用平板計(jì)數(shù)瓊脂進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)30℃孵育72h菌落計(jì)數(shù)（cfu）膜：0.6um和10um優(yōu)點(diǎn)：1.鑒于普通食品中微生物存在的普遍性，這一方法適用性較廣，可以用于多香果、胡椒粉、小豆蔻等藥草和調(diào)味品，也可用于肉、奶、海產(chǎn)品和家禽等食品；2.在一個(gè)試驗(yàn)周期內(nèi)，可以同時(shí)操作大量樣品，通量大，適于大規(guī)模篩查。局限性：1）當(dāng)樣品中的微生物含量很少時(shí)（APC＜103cfu/g）,這種方法會(huì)受到限制；2）某些本身含有抑菌成分的香料（如丁香，肉桂，大蒜和芥末）會(huì)造成假陽性結(jié)果；3）其他可使微生物死亡的食品加工處理方式（熏蒸，加熱處理）也會(huì)導(dǎo)致相似的DEFT值與APF值之差，因此，篩的陽性結(jié)果必須進(jìn)行確證。2）內(nèi)毒素/革蘭氏陰性菌計(jì)數(shù)法（LAL/GNB）原理：LAL/GNB法的原理與DEFT/APC法較為類似，同樣依據(jù)食品中存在的大量失活微生物組織可以假定為輻照產(chǎn)物的原理，利用樣品中活的革蘭氏陰性菌數(shù)量和樣品中革蘭氏陰性菌表面的細(xì)菌毒素來估算活的革蘭氏陰性菌總量與死的革蘭氏陰性菌總量，如果兩個(gè)結(jié)果的差異很大,說明樣品可能經(jīng)過輻照處理。步驟1：檢測試驗(yàn)樣品中活的革蘭氏陰性菌（GNB）的計(jì)數(shù)。在21℃±1℃的條件下，革蘭氏陰性菌在含有乳酸鏈球菌素、青霉素和結(jié)晶紫的選擇性培養(yǎng)基中好氧生長，24h±1h后形成的菌落數(shù)。

步驟2：采用鱟變形細(xì)胞溶解物法(LAL)檢測鑒定試驗(yàn)樣品中細(xì)菌內(nèi)毒素的濃度。鱟變形細(xì)胞溶解產(chǎn)物（LAL）實(shí)驗(yàn)是一種半定量的分析方法，在適宜條件下細(xì)菌內(nèi)毒素激活鱟試劑中的凝固酶，使鱟試劑產(chǎn)生凝集反應(yīng)形成凝膠。優(yōu)點(diǎn)：快速、高通量篩查適用于新鮮的整禽或胸脯、腿、翅膀等部分以及去皮或未去皮的冷藏或冷凍胴體的鑒別，適用于微生物實(shí)驗(yàn)室對食品的快速、高通量篩查。

局限性：樣品中存在的大量死亡微生物組織可能是由多種原因造成的，需要確證；并且輻照后未冷藏的食品中的細(xì)菌會(huì)再次繁殖，從而影響檢測。

3）針對碳?xì)浠衔锏臍庀嗌V檢測法原理：在食品所含的脂肪中，脂肪酸甘油酯是主要成分，在輻照過程中，含脂樣品中已知結(jié)構(gòu)的脂肪酸（見表1，表2）經(jīng)輻照會(huì)發(fā)生化學(xué)鍵斷裂，生成少1個(gè)碳（Cn-1，烷烴）和少2個(gè)碳（Cn-2，烯烴）的輻照產(chǎn)物（見表1，表2），經(jīng)加熱溶出、溶劑萃取或索氏提取等方法獲得脂肪，再經(jīng)弗羅里柱萃取凈化、濃縮，以配備氫火焰檢測器或質(zhì)譜的氣相色譜儀即可檢測。表1表2優(yōu)點(diǎn)：適用于含油脂豐富的食品，如雞肉、豬肉、木瓜、芒果等；本方法的檢測限低，對于生肉類、乳酪等食品可達(dá)0.5kGy（商業(yè)輻照劑量可能稍高），對于新鮮鱷梨、木瓜和芒果檢測限為0.3kGy。常規(guī)儀器檢測，無須特殊儀器；檢測限不受樣品存儲(chǔ)時(shí)間的影響。局限性：1）方法只能針對含脂食品，可以檢測的食品種類比較有限，2）必須預(yù)知食品中所含主要脂肪酸種類和結(jié)構(gòu)，才能確定最終檢測的目標(biāo)化合物；3）飽和碳?xì)浠衔锟赡転樘烊淮嬖冢瑫?huì)干擾檢測，必須與其他預(yù)測的不飽和碳?xì)浠衔锿瑫r(shí)進(jìn)行判斷，尤其當(dāng)使用溶劑進(jìn)行提取時(shí)，試劑空白是必須要考察的。4）熱釋光檢測法（TL）原理：熱釋光檢測法是目前國際上使用最多的法定方法，這一方法的原理基于含有或沾染硅酸鹽粒子(如塵埃)的食品在輻照時(shí)，硅酸鹽粒子可吸收并穩(wěn)定能量。當(dāng)食品中分離出的硅酸鹽粒子在控制加熱的條件下會(huì)釋放出吸收的能量，產(chǎn)生熒光。再將同樣的樣品經(jīng)固定劑量（通常為1kGy）輻照處理，進(jìn)而測定其熒光，通過兩者比較便可判斷樣品是否經(jīng)過輻照。該方法在理論上適用于所有暴露于土壤、風(fēng)沙中的食品，目前多用于草藥、香料及甲殼類動(dòng)物、新鮮蔬菜、脫水蔬菜和馬鈴薯的檢測。能量吸收輻射能量熱能能量釋放光能發(fā)光曲線1發(fā)光曲線2優(yōu)點(diǎn)：方法只依賴于食品中的硅酸鹽礦物