2.4微生物檢測的根本技術染色察看劃線接種，分別純化生化反響Foodmate2004/3/13染色察看革蘭氏染色1884年丹麥醫(yī)師Gram所發(fā)明革

蘭

氏

染

色

法1.涂片固定2.單染—結晶紫染液第一次染色1min3.媒染—碘-碘化鉀溶液浸濕30S4.脫色—95%乙醇溶液進展顏色洗脫5.復染—紅色的藩紅染液第二次染色

呈現第二次染色的效果紅色；稱革蘭氏陰性菌〔紅陰G-〕細菌呈現第一次染色的效果紫色，革蘭氏陽性菌〔紫陽G＋〕；劃線接種，分別純化Inoculatinganagarplatetoobtainsinglecolonies灼燒生化反響來測定微生物的代謝產物，生化反響常用來鑒別一些在形狀和其它方面不易區(qū)別的微生物。微生物生化反響：糖酵解實驗淀粉水解實驗V-P實驗甲基紅〔MethylRed〕實驗靛基質〔Imdole〕實驗枸椽酸鹽實驗：尿素酶〔Urease〕實驗三糖鐵〔TSI〕瓊脂實驗糖酵解實驗不同微生物分解利用糖類的才干有很大差別，或能利用或不能利用，能利用者，或產氣或不產氣。可用指示劑及發(fā)酵管檢驗。淀粉水解實驗某些細菌可以產生分解淀粉的酶，把淀粉水解為麥芽糖或葡萄糖。淀粉水解后，遇碘不再變藍色。V-P實驗某些細菌在葡萄糖蛋白胨水培育基中能分解葡萄糖產生丙酮酸，丙酮酸縮合，脫羧成乙酰甲基甲醇，后者在強堿環(huán)境下，被空氣中氧氧化為二乙酰，二乙酰與蛋白胨中的胍基生成紅色化合物，稱V－P〔+〕反響。甲基紅〔MethylRed〕實驗腸桿菌科各菌屬都能發(fā)酵葡萄糖，在分解葡萄糖過程中產生丙酮酸，進一步分解中，由于糖代謝的途徑不同，可產生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性產物，可使培育基PH值下降至pH4.5以下，使甲基紅指示劑變紅。靛基質〔Imdole〕實驗某些細菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用顯色反響表現出來。吲哚與對二甲基氨基苯醛結合，構成玫瑰吲哚，為紅色化合物。枸椽酸鹽實驗某些細菌能利用枸椽酸鹽作為碳源，及磷酸銨作為氮源，將枸椽酸鹽分解為二氧化碳，培育基反響后成堿性，由于指示劑的作用，培育基變?yōu)樘m色。尿素酶〔Urease〕實驗有些細菌能產生尿素酶，將尿素分解、產生2個分子的氨，使培育基變?yōu)閴A性，酚紅呈粉紅色。1、未接種2、尿素酶陽性3、尿素酶陰性三糖鐵〔TSI〕瓊脂實驗本實驗可同時察看乳糖和蔗糖發(fā)酵產酸或產酸產氣〔變黃〕；產生硫化氫〔變黑〕。葡萄糖被分解產酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸，因接觸空氣而氧化，加之細菌利用培育基中含氮物質，生成堿性產物，故使斜面后來又變紅，底部由于是在厭氧形狀下，酸類不被氧化，所以仍堅持黃色。a.uninoculated

b.littlechange/alkaline/-/-

c.alkaline/acid/-/+

d.acid/acid/+/+

e.acid/acid/+/-

slantcolo