摘要最有希望代替?zhèn)鹘y(tǒng)抗生素的物質(zhì)。從惜古比天蠶摘要最有希望代替?zhèn)鹘y(tǒng)抗生素的物質(zhì)。從惜古比天蠶(Hyalophoracecropia)蛹的淋巴液抗菌肽ipidalin是一種新型抗菌肽分子，最初是從冬瓜的種子中提取純化的小分子蛋白質(zhì)。分子量為5.7kd，含49個氨基酸殘基1現(xiàn)在在國內(nèi)并沒有研究者進過數(shù)據(jù)庫找到ipidalin對應的氨基酸序列，采用大腸桿菌密碼子優(yōu)化合成ipidalin的基因序列，于蘇州金唯智公司合成的基因連在PUC載體上。將PUC-HipidalinpMALc2X質(zhì)粒DNA，分別用BamHⅠHindⅢ進行雙酶切反應，使之切出相同的粘性末端，使用加拿大Frment公司購置的T4DNA連接酶將切好的有相同粘性末端的載體與目的基因連在一起，先用酶雙切驗證，經(jīng)DNA測序表明構(gòu)建成功，將連接好的質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)入大腸桿菌中，篩選出在大腸桿菌中高表達的陽性克隆株，采用糊精瓊脂糖高性能樹脂方法獲得純化的ipdan目的蛋白。關(guān)鍵詞HispidalinAntimicrobialpeptidesfoundAntimicrobialpeptidesfoundinnatureisakindofsmallmoleculepeptidesubstanceTherearemanyfeaturesofthispeptidesubstance.Forexamplestrongalkalinethermalstabilityandbroad-spectrumantibiotic。Andhasanti-bacterial,anti-fungi,anti-viruses,andanti-cancercellsandotherbiologicalactivity,andtheyarenoteasytoproducedrugresistance.Itisbecauseofthesetypesofcharacteristics,differentfromothercommonantimicrobialpeptideantibioticsubstances,makingitthemostpromisingmaterialtoreplacetraditionalantibioticsThefirstisfoundinthelymphantimicrobialpeptidesfromhumanpitycecropia(Hyalophoracecropia)pupae.Sincethen,humanshavefromplants,amphibians,insects,marinelife,mammals,bacteria,virusesdiscoverednearly2,000kindsofantimicrobialPeptideHispidalinisanewantimicrobialpeptidemolecule,isextractedfromtheseedsofmelonpurified.Molecular5.7kda,containing49aminoacidresidues,andnowresearchersinthecountryanddidnotcarryoutrelatedresearch,andthereforeisveryresearchprospects.Thebasicideaofthisexperimentistheuseofgeneticengineering,thefirstaminoacidsequenceHispidalinfindinthedatabase,usingE.colicodonoptimizedgenesequenceofthesyntheticHispidalinofthecompanyonthePUCvectorsynthesis.ThePUC-HispidalinandpMAL-c2XplasmidDNA,respectivelyBamhⅠHindⅢdoubledigestion,cutoutthesamesite,withaT4ligase,againwithadoubledigestionwereverifiedbysequencingsenttothecompany,theplasmidDNAintoE.coliandinducedexpressioninE.coli,thepositiveclonesinEscherichiacoliexpressionstrain,usinghigh-performanceresinobtaineddextrinagaroseHispidalinpurifiedprotein.Theresultsshowthatwesuccessfullyconstructedarecombinantplasmid.TherecombinantHispidalingethighlyexpressedinE.coli.Inthisstudy,weprovideatheoreticalbasisforexperimentsofmassproductionofHispidalin,andprovidesatheoreticalbasisfortheapplicationofnewantimicrobialdrugsinKeywords：Antimicrobialpeptidesconversion;Hispidalingeneticengineering目錄1前 目錄1前 抗菌肽的定 抗菌肽的作 抗菌肽的發(fā)展歷 抗菌肽的分 抗菌肽的作用機 抗菌肽的理化性質(zhì)和結(jié) 抗菌肽與抗生素的異 抗菌肽的發(fā)展歷程 抗菌肽在不同領(lǐng)域的應 大腸桿菌的表達體 論文研究思 2實驗內(nèi) 實驗材 儀器與設(shè) 菌株與質(zhì) 主要試劑以配 實驗方法與步 3試驗結(jié) 雙酶切產(chǎn)物進行DNA凝膠電 4研究前 參考文致1前1.11前1.1抗菌肽的定義外來刺激而主動產(chǎn)生的一類分子量在4道爾頓左右的多肽類物質(zhì)，它是像長城抗菌肽的作用8個大的家族。最近新的研究成果表明，新型的抗菌肽與抗菌肽之間作用[3]。90000多種真菌（fungi），其中很多是氏陰性菌C-，而且還可以抑制真菌和原蟲的生長。蛙皮素（Defensins）是來源于蛙菌肽，剛開始來自于是動物的吞噬細胞（phagocyticcell），蛙皮素（Defensins）對MagaininsMagainins對原蟲也有很好的殺傷功能。通過各個研究可以證明抗菌肽內(nèi)或者動物體內(nèi)的寄生蟲等也會被抗菌肽類物質(zhì)殺死,例如提取于蛙類的皮膚組織1.3菌肽的發(fā)展歷合成脂肪體，它有31-39個氨基酸殘基。與其它聚陽離子肽相同，天蠶抗菌肽具有非常廣泛的抗菌譜。在低濃度時（0.1-5微米范圍），天蠶抗菌肽表現(xiàn)出對幾種G-與天蠶抗菌肽A混合形成的抗菌肽經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)比親本天蠶抗菌肽A有廣泛的抗菌抗菌肽的分多黏菌素B、桿菌肽短桿菌肽S。一：陽離子的抗菌肽，這樣抗菌肽是最受關(guān)注的，在動物和植物的體內(nèi)都有很廣泛的存在；二：陰離子的抗菌肽，此類抗菌肽主要對+一：陽離子的抗菌肽，這樣抗菌肽是最受關(guān)注的，在動物和植物的體內(nèi)都有很廣泛的存在；二：陰離子的抗菌肽，此類抗菌肽主要對+具有抑制殺傷作用，比如皮抑制作用機制還沒有完全被人類熟知；四：氧結(jié)合蛋白衍生多肽，此類抗菌肽是從1.4.3昆蟲被認為是世界上種類最多的生物之一(大概有一百多萬個品種)，它們有的作用，昆蟲的脂肪體(作用相當于于哺乳動物的肝臟)合成的抗菌肽會隨著機體人類發(fā)現(xiàn)的第一個來源于哺乳動物的抗菌肽是1989年第一次來自于豬小腸的的體內(nèi)至少發(fā)現(xiàn)了30種抗菌肽。Zasloff第一次在非洲爪蟾（Xenopuslaevi）的肌膚組織中發(fā)現(xiàn)了抗菌肽人類第一次發(fā)現(xiàn)從豹鰨中發(fā)現(xiàn)了一種抗菌肽,Pardaxins抗菌肽是從紅海摩西鰨Pardachirusmarmora-tus[12]和西太平洋豹鰨Pardachiruspavoninus[13]中提取到的抗菌肽，30aa30aa殘基，人們將它命名為Pardaxin。至今為止人類已經(jīng)從海洋生物中發(fā)現(xiàn)了50多種AMPS。AMPSAndroctonusaustralis中提取到的androctonin抗菌肽它含有二十五個AA殘基的[14]抗菌肽，它屬于強陽離子的抗菌肽（Strongcationicantimicrobialpeptide）,擁有四個半胱氨酸（L(+)-AMPSHadrurusaztecus毒腺中分離得到的hadrurin[15]Opistophtalmuscarinatus毒腺[16]中提取獲取的opistiporinAMPS都屬于A-螺旋抗菌肽（A-helixantimicrobialpeptide）[17]AMPS并加以分析的工作中,AMPS。比如從日本鱟的血淋巴細胞中提取出來TachyplesinsAMPS。Mytilusedulis[18]和地中海貽貝M.galloprovincialis[19]細胞液中提取到AMPS，分子4個二硫鍵,與防御素家族所具有的結(jié)構(gòu)很相近,但是他的（LCysteine）對Plantdefensins的大小區(qū)間為2-9kD，期間大大小小不計其實。至今為止已經(jīng)性大幅度增加[20]。thioninsAMPS，可以有效抵抗壓制很多植物所含有的病原體的生長。Thionins大多數(shù)含有五到四十八個豐富，包含三到四個S－S鍵之后，陸續(xù)之主的各個部位中發(fā)現(xiàn)許多AMPS[21]。defensins類。(lacticacidbacteria,LAB)產(chǎn)生的bacteriocins抗菌肽[23]1.4.4如天蠶素（cecropins）和滑爪蛙素（magainins）。這類AMPS一般由三十到四十個aaCysteine，也不形S-S鍵。cecropinA最為標準，cecropinA的其C端和N端都α-螺旋；N121AA螺旋由含有性的堿AA組成，碳端酰β-AMPS（defensins）能夠在分子內(nèi)形成二硫鍵，具有環(huán)鏈結(jié)構(gòu)的抗菌肽也在抗菌肽中具有很大分量。比如，tein科學家24胞中分離到的[25]。分析其結(jié)構(gòu)特征，主要為在碳端含有二硫鍵環(huán)，這個二硫鍵7AA7AA短臂，β-轉(zhuǎn)角是二級結(jié)構(gòu)伸展性螺旋結(jié)構(gòu)類的抗菌肽是沒有典型的二級結(jié)構(gòu)的，它們一般呈現(xiàn)線型結(jié)rolin）、甘氨酸（glycin）等，不含半胱氨酸（ytein）。例如從蜜蜂的體內(nèi)提取idins中脯氨酸（Prolin）和精氨酸（ginine）的含量分別高達百分之三十三和百分之十七[27[28。1.5抗菌肽的作用機制不同的理論和假設(shè)想要來對AMPS可以抵抗甚至殺死微生物這一反映的原理進行1.5.1AMPS[29]。目前科學家對于天蠶素類的抗菌肽抑菌機制達成了共鳴天蠶素類抗菌肽作用1.5.2DNA，RNA和蛋白質(zhì)的形成過程中抗菌肽起了一定的作用；抗菌肽能夠形成1.5.31.5.3靶標產(chǎn)生重大影響,AMPS在到達細胞內(nèi)部后，開始于細胞內(nèi)存在的的一些物質(zhì)發(fā)抗菌肽的理化性質(zhì)和物質(zhì),由于富含賴氨酸(lysine)、精氨酸(arginine)和組氨酸(histidine)等堿性氨基酸,的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。多數(shù)抗菌肽具有熱穩(wěn)定性,100攝氏度條件下加熱十幾分鐘仍能保150mmol/L的時候抗菌肽就失去了抑菌活性。除了氯化鈉的濃抗菌肽與抗生素的異1.7.21.7.2速，比IgM快100多倍?？咕牡陌l(fā)展歷BomanHulmark3種抗菌肽,并抗菌肽在不同領(lǐng)域的應用1.9.1magaininMAI278已經(jīng)快完成二期臨床試驗，實驗表明對病毒和腫瘤細胞有較好的殺傷作用。plectasin(菌絲霉素)是從一種子囊菌中分離多年努力，已經(jīng)有很多的成果。如:美國馬蓋寧公司經(jīng)過設(shè)計改造過的抗菌肽日漸豐碩，比如黃自然等人利用柞蠶抗菌肽研制五齡丸可以用于治療肝炎;中科院有重要意義;抗菌肽可在不破壞人體健康細胞的條件下對人髓樣白血病細胞K552EACHR8340BEL27402等起到殺傷作用[31]。:1.10腸桿菌的表達體各種表達系統(tǒng)生產(chǎn)外源重組蛋白"。大腸桿菌體系是基因工程開發(fā)最早的達系統(tǒng)相比,大腸桿菌表達體系還具有很多優(yōu)勢：大腸桿菌生長速度很快，對生長條件要求很低，可以做到大規(guī)模培養(yǎng)，成本很低。外源基因表達水平比較高，一般可達到百分之五到百分之三十。當然還會有很多的缺點：比如:現(xiàn)在的技術(shù)缺少加工修飾系統(tǒng)，特別是缺少糖基化功能;大腸桿菌的內(nèi)毒素類物質(zhì)很難去除，使純化蛋一定難度；不能使表達蛋白完全釋放，對于純化濃度也有很大的影響[37]1.11究思2實驗內(nèi)實驗材料2實驗內(nèi)實驗材料GeneTech（上海）有限公司Tris-2.5mmol/LEasyPfuDNAPolymeraseTransZol試劑T4DNA T4Ligase 司DNATritonX-100司DNATritonX-100Tween-儀器與設(shè)DGX-9073鼓風干燥箱日本SANYO公司美國Thermo公司ZYQ-211智能恒溫培養(yǎng)振蕩器SPX-150生化培養(yǎng)箱Eppendorf5424MyCyclerTMPCR儀DYY-6C型水平電泳儀Eppendorf5424MyCyclerTMPCR儀DYY-6C型水平電泳儀Bio-RadLaboratoriesBio-RadLaboratoriesBio-Rad菌株與質(zhì)大腸桿菌（Escherichiacoli）XL1E.coliBL21(DE3):F-ompThsdS(rB-mB-)gal(λcI857indlsam7nin5T7gene1)dcm(DE3)pMAL-hispidalin:含Hisipdalin目的pMAL-c2X:MBP融合蛋白表達載體，質(zhì)粒圖譜見主要試劑以配制丙烯酞胺(Merek),N,N-一甲叉雙丙烯酞胺(Flkua),β-琉基乙醇(Amreseo),甘油(Invirtogen)澳酚藍(Amreseo主要試劑以配制丙烯酞胺(Merek),N,N-一甲叉雙丙烯酞胺(Flkua),β-琉基乙醇(Amreseo),甘油(Invirtogen)澳酚藍(Amreseo甘氨酸(Amreseo),漠酚藍(Sigma考馬斯亮藍R一250(Serva),十二烷基硫酸鈉(Serva),三(輕甲基)甲基甘氨酸(Merek),peptidemolecularWeightmarker(AmershamBioseienees),TritonX-100過硫酸銨PH試紙將pH7.01.512120min。LBA：1LLB1mL50mg/mL的氨芐青霉素至濃度120μg/mL。4CaCl2溶液(0.1mol/L)11.1CaCl2TAP培養(yǎng)基(1L)10mLTris(100×10mLTAPsalts(100×)，1mL磷酸鹽溶液(1000×)，1mL微量金屬(1000×)，1mL1L，高壓滅菌30min。磷酸鹽溶液(1000×)108gK2HPO454gKH2PO4,1L（1）MQ-25-50g純的KOH（KOH用量越少越39.2625022mL甘油，2.5mL0.522mL甘油，2.5mL0.5MTris-斗過濾后，置于棕色的廣口瓶中，4℃保存?zhèn)溆谩SDS，加入800mL去離子水完全溶解后，定容到1L，室溫儲存?zhèn)溆?。mL離子水，震蕩搖晃，完全混勻后室溫儲存?zhèn)溆?。全溶解，濃鹽酸調(diào)pH=8.8，去離子水定容，4℃保存?zhèn)溆?。R-2507mL甲醇，30mL100mLpH8.8Tris-HCl緩沖液(1.5mol/L)：0.4gSDS，18.2gTris，HCl調(diào)pHpH6.8Tris-HCl緩沖液(0.5mol/L)：0.4gSDS，6.05gTris，HCl調(diào)pH四甲基乙二胺pH8.3轉(zhuǎn)移電泳緩沖液(0.025mol/L)：19.3gGly，3.785gTris1000mL200mLpH7.5Tris-bufferedsaline(TBS緩沖液)：58.48gNaCl，4.84gTris，加水2000mL，臨用前加入0.5mLTween-20。1MIPTG溶液：IPTG為異丙基硫代-β-D-半乳糖苷（分子量238.3），8mL2gIPTG10mL0.22262-4成51.5M1.5M水1.5M262-4成51.5M1.5M水1.5M水1.5M水1.5M成分1成分1234568水1.0M5X樣品緩沖液（20μL＋5μL）在一個Eppendorf管中混合。放入100℃加熱5－10min，取上清點樣。ddH2O將兩塊洗凈的玻璃板之間加入Spacer，按照Bio-RadMiniⅡ/Ⅲ說明書提2.0ml400μL60010%SDS10%AP36μL24μL4裝好電泳系統(tǒng)，加入電極緩沖液，上樣20μL。rpm30min更換一次脫色液（10mL冰乙酸；45Ll乙醇；45mL實驗方法與步驟Hispidalin的氨基酸序列。在蘇州金唯智公司處獲得含有抗菌肽Hispidalin目的基因的質(zhì)粒PUC-Hispidalin， CGTTGAPUC-Hispidalin和pMAL-c2X1-5ml細菌培養(yǎng)物于EP管中，12000r1min，吸除上清液。加入250μL溶液Ⅰ（已加入RNA），用移液器混勻。700μL漂洗液，12000r1min，棄廢液。500μL漂洗液，12000r1min12000r2min，吸附柱敞口置于室溫數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的乙651min12000r1PUC-Hispidalin和pMAL-c2XBamHⅠ、HindpMAL-pMAL-682260681.81.862.5光下操作，盡量切除多余部分),放于干凈的離心管中，稱取重量。向膠塊中加入3倍凝膠體積（如果凝膠重0.1g,其體積可視為100uL，則加300ul的膠溶液）50-5510分鐘，期間不斷的溫和得上下翻離心管，DNA與吸附柱結(jié)合，影響回收率。放入收集管中）12000rmp30-60s,倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放入醇），12000rpm離心1分鐘，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。500uL漂洗液，12000rpm1分鐘，棄廢液，吸附柱12000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液。將吸附柱敞口放置于室溫或者預熱的洗脫液，室溫放置2分鐘，12000rpm1分鐘。注意：1、為了增加回收率，可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中，12000rpm1分鐘。230uL體積過小影響回收率。3、PHPH7.0-8.5(8)將得到DNA產(chǎn)物-20℃保存2.5.5目的基因片斷與pMAL-c2X1510.82.2pMAL-c2X酶切片段T4DNA連接酶1010大腸桿菌（Escherichiacoli）XL1blue3724h左右的新鮮LB30mLLB培養(yǎng)液的試管中，于37℃250rpm振蕩培養(yǎng)過夜；4mLXL1-blue200mLLB137OD6000.4-0.5之間（2-3小時20min0℃；棄上清，倒置離心管1min，以使殘留的培養(yǎng)液流盡；15mL0.1mol/LCaCl2(用冰預冷）110mL0.1mol/LCaCl2（用冰預冷）管（15），混合均勻，貯存于-80100μLXL-1blue感受態(tài)細胞10μL質(zhì)粒與1.5mLEP管中，均勻，置于冰上30min，注意盡量保持該操作在冰上進行；該EP4290s，不要搖動；快速將離心管轉(zhuǎn)移到冰上，靜置2min；1mL37℃的LB3745養(yǎng)基上，37℃倒置培養(yǎng)過夜。放于LBA10×BufferR酶切緩沖液10×BufferR酶切緩沖液210.80.85.4將酶切鑒定結(jié)果比較的理想的質(zhì)粒DNADNABL21表達菌株中，各挑取LBA1/2050ml邊培養(yǎng)邊測菌液值，至其達0.6時，加入IPTG誘導表達，加12000rpm10min15μL樣品加入15μL2×loadingdye5min后使用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS）檢300μL菌液，12000r/min10min，后用離心機12000r/min1min，上樣。③按4%濃縮膠，12%分離膠，1×Tris-Gly電泳緩沖液SDS染色2小時。后用離子水清洗三次，置于脫色液中脫色過夜。2.5.12目的蛋白純化123123使用PH=0.8，Columnbufffer糊精瓊脂糖高性能樹脂（DextrinSepharoseHighPerformanceresin）純化融合白柱子后，用10倍柱床體積的柱床緩沖液平衡柱子，至少平衡3次。用洗脫緩沖液洗脫目的蛋白。其中還有280mM的麥芽糖。先加500μL的洗脫5min,1μL的洗脫緩沖液過柱1.5mlEppendorf管子收集流出液。用微量測定儀測定蛋白濃度。直至蛋3試驗結(jié)雙酶切產(chǎn)物進行3試驗結(jié)雙酶切產(chǎn)物進行DNA凝膠電100bp1kp的Marker3-1pMAL-Hispidalin3-2Qury3-2Qury表示測序得到的序列，Sbjct列，是這兩個序列在比對。在NCI（美國國立生物技術(shù)信息中心）這個數(shù)據(jù)庫中比對的結(jié)果有4個指標：Score219bpExpet表示匹配的可能性，E值為零時，表示完全匹配了，但是測序的結(jié)果上有載體的序列，所以E值不可能為零。ndenes表示兩組序列的一致性，結(jié)果表示100%就是完全匹配上了。說明我合成的含有目的基因的片段已經(jīng)正確連入載體了。Gp4個指標。3.3pMAL-Hispidalin融合蛋白SDS表達3-323-321未誘導組的全蛋白對比，47KDa的位置有條帶，說明融pMAL-Hispidalin已經(jīng)得到了表達。泳3誘導組的上清和泳道4誘導組的沉淀與泳道2誘導組的超后全蛋白對比，說明我們pMAL-純化蛋白SDS-表達液4；8：洗脫液5；M；蛋白質(zhì)Marker；3-4pMAL-Hispidalin泳道1中流穿液里還是有少量目的蛋白，這是正常情況。泳道2、3洗脫掉了未5、4研究前4研究前過去的幾年里，抗生素的過度使用已經(jīng)產(chǎn)生使很多細菌產(chǎn)生了很強的抗藥性形成了超級細菌，依據(jù)可持續(xù)發(fā)展原則，新型的抗菌劑正在被研發(fā)，抗菌肽因為有高效的抗菌性而成了很好的代替品?，F(xiàn)有市場上有各種各樣的抗菌劑,每種的抗菌機理都大不相同,只有隨著在抗菌機理方面作出全面、深層次的研究,總結(jié)各種抗菌肽的不同特點,參考[1]Sunayanaharma,Cationic.參考[1]Sunayanaharma,Cationic.ioactiveeptidefromtheSeedsofBenincasahispida[J].2014,346(12):12-16.BomenH.G,WangD,BomanIA,etal.Anti-bacterialandantimalarialpropertiesofpepti-desthatarececropin-melittinhybrids[J].FEBSLetters,1989,259(1):103-106.LuJChen,ZW,IsolationcharacterizationandanticanceractivityofSK84anovelglycine-richantimicrobialpeptidefromDrosophilavirilis[J].Petides,2010,31(1):44-50.SUTTMANNH,RETZM,PAULSENF,etal,Antimicrobialpeptidesofthececropin-familyshowpotentantitumoractivityagainstbladdercancercells[J].BMCUrology,2008,8(1):XingJun,FengLi,WeiXing.Designandhighlevelexpressionofahybridantimicrobialpe-ptideLF15CA8inEscherichiacoli[J].IndMicrobiolBiotechnol,2014,8(41):527–534.ZASLOFFM.Magainins,aclassofantimicrobialpeptidesfromXenopusskin:isolation,characterizationoftwoactiveforms,andpartialcDNAsequenceofaprecursor[J].ProcNatlAcadSciUSA,1987,84(15):5449-5453.ORENZ,SHAIY.Aclassofhighlypotentantibacterialpeptidesderivedfrompardaxin,apore-formingpeptideisolatedfromMosessolefishPardachirusmarmoratus[J]EurJBiochem,1996,237(1):303-310.LAZAROVICIP,PRIMORN,LOEWLM.PurificationandporeformingactivityoftwohydrophobicpolypeptidesfromthesecretionoftheRedSeaMosessole(Pardachirusmarmoratus)[J].BiolChem,1986,261(35):16704-16713.MARCHINID,MANETTIAG,ROSETTOM,etal.cDNAsequenceandexpressionoftheceratotoxingeneencodinganantibacterialsex-specificpeptide.FromhemedflyCeratitiscapitata(diptera)[J].BiolChem,1995,270(11):6199-TORRESLA,GURROLAGB,ZAMUDIOFZ,etal.Hadrurin,anewantimicrobialpeptidefromthevenomofthescorpionHadrurusaztecus[J].EurJBiochem,2000,267(16):5023-MOERMANL,BOSTEELSS,NOPPEW,etal.Antibacterialandantifungalpropertiesofalpha-helical,cationicpeptidesinthevenomofscorpionsfromsouthernAfrica[J].EurJBiochem,2002,269(19):4799-4810.HARLETM,CHERNYSHS,PHILIPPEH,etal.Innateimmunitysolationofseveral-richantimicrobialpeptidesfromthebloodofamollusc,Mytilusedulis[J].BiolChem,1996,271(36):21808-21813.HUBERTF,NOELT,ROCHP.AmemberofthearthropodHUBERTF,NOELT,ROCHP.AmemberofthearthropoddefensinfamilyfromedibleMediterraneanmussels(Mytilusgalloprovincialis)[J].EurJBiochem,1996,240(1):302-3GARCIAOF,MOLINAA,ALAMILLOJM,etal.Plantdefensepeptides[J].Biopolymers,1998,47(6):479-491.STECB.Plantthioninsthestructuralperspective[J]．CellularandMolecularLifeSciences,2006,63(12):1370－1385．LUDERST,BIRKEMOGA,FIMLANDG,etal.Strongsynergybetweenaeukaryoticantimicrobi-alpeptideandbacteriocinsfromlacticacidbacteria[J].ApplEnvironMicrobiol,2003,69:MITTAG,VANDENBULCKEF,HUBERTF,etal.Involvementofmytilinsinmusselantimicrobialdefense[J].JBiolChem,2000,275(17):1295