-1-《水產(chǎn)品中13種鄰苯二甲酸酯單酯的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜檢測方法》編制說明-2-品中13種鄰苯二甲酸酯單酯的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜檢測方法》團體標(biāo)準(zhǔn)制定計開展與專業(yè)技術(shù)人員進行調(diào)研、交流，廣泛征求標(biāo)2024年3月根據(jù)在各單位反饋意見基礎(chǔ)上，形成了標(biāo)準(zhǔn)征求意見稿并由中國國-3--串聯(lián)質(zhì)譜法測定。根據(jù)化合物的保留時間和特征離子峰本文件適用于水產(chǎn)品中鄰苯二甲酸單甲酯（MMP）、鄰苯二甲酸單乙酯90min。此過程結(jié)束后立即加入10mLACN：甲醇（MeOH5:5，v/v然后（2%FA，5:5，v/v）洗脫小柱，并于45°C下，使用氮1.0mLMeOH復(fù)溶，并用0.2萃取柱、固相萃取柱的活化、洗脫試劑以及-4-葡萄糖醛酸綴合物，這給MPAEs的直接提取帶時間和pH等相關(guān)參數(shù)進行優(yōu)化。當(dāng)乙酸銨緩沖液的pH為6.5且酶解時間為90圖2.1乙酸銨緩沖液的pH對去葡萄糖醛酸化效率的影響圖2.2去葡萄糖醛酸化時間對提取效率的影響校準(zhǔn)曲線中化合物的響應(yīng)，評估表觀回收率（Rapp）以選擇最佳提取溶劑。結(jié)-5-較小提取溶劑，如EA和二氯甲烷（DCM）對目標(biāo)物提取效果明顯較差，同時這也說明MPAEs極性相對偏高。為提高MMP和MEP的提取效率，本標(biāo)準(zhǔn)用ACN和MeOH混合萃取以期取得較好的效果。達到95%和90%。因此，ACN:MeOH（5:5，v/v）被選為最優(yōu)提取溶劑。同時圖2.3提取溶液種類的優(yōu)化圖2.4ACN和MeOH混合提取溶液的比例優(yōu)化積和超聲提取時間進行了優(yōu)化。結(jié)果顯示，當(dāng)混合提取溶劑的體積達到10mL時，整體目標(biāo)物的提取效率相對較高，Rapp為72.6%~99.6%；且相對大體積溶-6-可能導(dǎo)致溶劑損失增加。考慮到更多溶劑損失和耗時的影響，分別選擇10mL和20min作為最佳生物樣品的提取溶劑體積和提取時間。圖2.5提取溶液體積對提取效率的影響圖2.6提取時間對提取效率的影響-7-MAXSPE柱是一種混合強陰離子交換柱，有利于弱酸干擾雜質(zhì)的去除。相比之下，HLBSPE柱是一種通用的吸附柱，可廣泛去除雜SPE柱，結(jié)果表明，PolySeryMAXSPE柱和Oas柱。本實驗通過加標(biāo)實驗優(yōu)化了生物樣品復(fù)溶液的pH。結(jié)果表明，復(fù)溶液pH值達到10.5時（圖2.7流出液中未檢測到目標(biāo)物，這意味著此時所有圖2.7復(fù)溶溶液pH對提取效率的影響-8-圖2.8洗脫溶劑對提取效率的影響圖2.9洗脫液的酸度對提取效率的影響并對洗脫劑的體積進行了優(yōu)化。當(dāng)使用10mL2%-9-使用ACN和MeOH作為流動相時，靈敏度幾乎沒有明顯差異。MeOH與ACNMPAEs結(jié)構(gòu)和極性存在差異，利用梯度洗脫來實現(xiàn)最佳分離，并在梯度比例運行后，流動相A和流動相B在90:10此外，實驗過程中對梯度洗脫程序最終調(diào)節(jié)時間（至少1.5min）進行優(yōu)化，可表1液相色譜流動相線性梯度洗脫程序時間（min）流速（mL/min）流動相A(%)流動相B（%）00.35900.30.359010.352020.35903.50.3559540.359060.3590理想。選用WatersACQUITYUPLC?BEHPhenyl色譜柱，調(diào)節(jié)色譜條件后，分圖10目標(biāo)化合物標(biāo)準(zhǔn)工作溶液液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜色譜圖質(zhì)譜參數(shù)，確定最佳監(jiān)測條件。13種鄰苯二甲酸單酯及其內(nèi)標(biāo)物的多反應(yīng)監(jiān)測表3目標(biāo)化合物的多反應(yīng)監(jiān)測條件化合物母離子(m/z)錐孔電壓(V)子離子(m/z)碰撞電壓(V)MMP77,107*MMP-D442MEP38MEP-D440MOP277.12MOP-D4281.146MiBP221.14077*,134.1MiBP-D4225.15280.9*,138.1MnBP221.177*,149.1MnBP-D4225.14671,81*MiNP291.248MiNP-D4295.248MCPP251.124MCPP-D4255.1102.9*,168.9MCHP247.14477,97*MCHP-D4251.15281,97*MBZP255.14277*,183.1MBZP-D4259.146MEHP277.138MEHP-D4281.25234,20MECPP307.140MECPP-D4311.130MEHHP293.1MEHHP-D4297.24MEOHP291.150MEOHP-D4295.148注：帶*的為定量離子取一定量13種鄰苯二甲酸單酯及其內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)使用液于2mL進樣瓶中，制的鄰苯二甲酸單酯保留時間與標(biāo)準(zhǔn)樣品中鄰苯二甲酸單酯的保留時間相對標(biāo)準(zhǔn)Ksam=×100%..........Ksam—樣品中鄰苯二甲酸單酯定性離子的相對豐度，%；A2—樣品中鄰苯二甲酸單酯定性離子對的峰面積（或峰高Kstd=×100%............Kstd—標(biāo)準(zhǔn)溶液中鄰苯二甲酸單酯定性離子的相對豐度，%；Astd2—標(biāo)準(zhǔn)溶液中鄰苯二甲酸單酯定性離子對的峰面積（或峰高表4定性確認(rèn)時相對離子豐度的最大允許偏差KstdKstd＞5020＜Kstd≤5010＜Kstd≤20Kstd≤10Ksam相對于Kstd的最大允許偏差±20%±25%±30%±50%該方法中標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣液中鄰苯二甲酸單酯的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器的檢X=..................(3)X—樣品中鄰苯二甲酸單酯的含量(μg/LCi—樣品制備液中鄰苯二甲酸單酯的含量(μg/L表5方法的精密度和準(zhǔn)確度MPAEs加標(biāo)濃度5μg/kg加標(biāo)濃度20μg/kg加標(biāo)濃度80μg/kg平均回收率（%）RSD（%）平均回收率（%）RSD平均回收率RSDMMP98.97.53.592.95.3MEP95.898.691.85.7MiBP95.25.496.498.17.3MnBP97.13.396.02.691.07.8MCHP99.53.46.599.8MCPP99.85.995.09.797.87.2MBZP90.86.93.595.4MOP99.899.72.62.4MEHP99.398.96.694.85.2MiNP95.48.697.14.489.67.8MEOHP99.44.099.397.9MEHHPMECCP95.497.73.27.896.299.82.32.187.795.28.96.2對水產(chǎn)養(yǎng)殖生物進行加標(biāo)回收實驗，加標(biāo)濃度分別為5μg/kg、20μg/kg和表6方法的檢出限和定量限MAPEs相關(guān)系數(shù)基質(zhì)效應(yīng)檢出限(μg/kg）定量限(μg/kg）MMP0.99790.990.882.93MEP0.99920.812.70MOP0.99970.930.230.78MiBP0.99900.41MnBP0.99940.990.31MiNP0.99980.210.69MCPP0.99950.53MCHP0.99950.180.62MBZP0.99700.930.51MEHP0.99960.990.170.58MECPP0.99870.070.24MEHHP0.99990.48MEOHP0.99990.080.27