中華人民共和國國家環(huán)境保護標準土壤和沉積物草甘膦的測定高效液相色譜法2019-10-24發(fā)布2020-04-24實施 1適用范圍 12規(guī)范性引用文件 13方法原理 14試劑和材料 15儀器和設備 26樣品 27分析步驟 38結(jié)果計算與表示 49精密度和準確度 510質(zhì)量保證和質(zhì)量控制 611廢物處理 6附錄A(資料性附錄)方法的精密度和準確度 7為貫徹《中華人民共和國環(huán)境保護法》和《中華人民共和國土壤污染防治法》,保護生態(tài)環(huán)境，保障人體健康，規(guī)范土壤和沉積物中草甘膦的測定方法，制定本標準。本標準規(guī)定了測定土壤和沉積物中草甘膦的高效液相色譜法。本標準為首次發(fā)布。本標準由生態(tài)環(huán)境部生態(tài)環(huán)境監(jiān)測司、法規(guī)與標準司組織制訂。本標準起草單位：生態(tài)環(huán)境部南京環(huán)境科學研究所。本標準驗證單位：江蘇省環(huán)境監(jiān)測中心、江蘇省南京環(huán)境監(jiān)測中心、江蘇省常州環(huán)境監(jiān)測中心、江蘇省鎮(zhèn)江環(huán)境監(jiān)測中心、呼倫貝爾市環(huán)境監(jiān)測中心站、廣西壯族自治區(qū)南寧生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心。本標準生態(tài)環(huán)境部2019年10月24日批準。本標準自2020年4月24日起實施。本標準由生態(tài)環(huán)境部解釋。1土壤和沉積物草甘膦的測定高效液相色譜法警告：實驗中所使用的溶劑及標準溶液均為有毒有害物質(zhì)，溶液配制和試樣的制備應在通風櫥內(nèi)進行，操作時應按要求佩戴防護器具，避免接觸皮膚和衣物。1適用范圍本標準規(guī)定了測定土壤和沉積物中草甘膦的高效液相色譜法。本標準適用于土壤和沉積物中草甘膦的測定。當取樣量為10g(干重)時，本方法檢出限為0.02mg/kg,測定下限為0.08mg/kg。2規(guī)范性引用文件本標準引用了下列文件或其中的條款。凡是未注明日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。GB17378.3海洋監(jiān)測規(guī)范第3部分：樣品采集、貯存和運輸GB17378.5海洋監(jiān)測規(guī)范第5部分：沉積物分析HJ494水質(zhì)采樣技術(shù)指導HJ495水質(zhì)采樣方案設計技術(shù)規(guī)定HJ613土壤干物質(zhì)和水分的測定重量法HJ/T91地表水和污水監(jiān)測技術(shù)規(guī)范HJ/T166土壤環(huán)境監(jiān)測技術(shù)規(guī)范3方法原理土壤和沉積物中的草甘膦(Glyphosate)用磷酸鈉和檸檬酸鈉混合水溶液提取，提取液在弱堿性條件下經(jīng)正己烷萃取凈化，水相用9-芴甲基氯甲酸酯(FMOC-CI)衍生化后，用具熒光檢測器的高效液相色譜儀分離檢測草甘膦的衍生物(Glyphosate-FMOC),以保留時間定性，外標法定量。4試劑和材料除非另有說明，分析時均使用符合國家標準的分析純試劑，實驗用水為新鮮制備的蒸餾水或不含目標化合物的純水。4.1乙腈(CH?CN):液相色譜純。4.2正己烷(C?H??)。4.4鹽酸溶液：1+1。鹽酸(4.3)和水按1:1的體積比混合。4.6磷酸溶液：φ(H?PO?)=0.2%。2準確量取2.35ml磷酸(4.5)于1L容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，臨用現(xiàn)配。4.8二水合檸檬酸鈉(Na?C?H?O?·2H?O)。4.9磷酸鈉和檸檬酸鈉混合提取液：c(Na?PO?·I2H?O)=0.03mol/L準確稱取11.40g(精確到0.01g)十二水合磷酸鈉(4.7)和2.94g(精確到0.01g)二水合檸檬酸三鈉(4.8),用水溶解并定容至1L容量瓶中。4.10十水合四硼酸鈉(Na?B?O?-IOH?O)。準確稱取1.91g(精確到0.01g)十水合四硼酸鈉(4.10),用水溶解并定容至100ml容量瓶中。4.129-芴甲基氯甲酸酯(C?sH?CIO?,FMOC-CI):純度不低于99%,4℃以下冷藏、避光保存。4.139-芴甲基氯甲酸酯溶液：p(CisH?ClO?)=1.0mg/ml。準確稱取50.0mg(精確到0.1mg)9-芴甲基氯甲酸酯(4.12),用乙腈(4.1)溶解并定容至50ml容量瓶，搖勻，轉(zhuǎn)移至密實瓶中于4℃以下冷藏、避光保存。可直接使用市售有證標準溶液，也可用標準物質(zhì)配制。準確稱取10.0mg(精確到0.1mg)草甘膦標準物質(zhì)，用水溶解并定容至100ml容量瓶，搖勻，轉(zhuǎn)移至密實瓶中于4℃以下冷藏保存，保存時間為2個月。移取1.0ml草甘膦標準貯備液(4.14)于10ml容量瓶中，用水稀釋并定容至刻度，搖勻，轉(zhuǎn)移至密實瓶中于4℃下冷藏保存，保存期為2個月。4.16石英砂：粒徑0.3～0.7mm(50～25目)。4.17針式過濾器：0.22μm,濾膜材質(zhì)為聚四氟乙烯或其他等效材質(zhì)。4.18濾紙：中速濾紙，棉質(zhì)纖維材質(zhì)。5儀器和設備5.1液相色譜儀：具有梯度洗脫功能，柱溫箱溫度可控，配備熒光檢測器。5.2色譜柱：填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠，粒徑5μm,柱長250mm,內(nèi)徑4.6mm的色譜柱或其他等效色譜柱。5.3離心管：聚丙烯(PP)材質(zhì)，50ml。5.4超聲波清洗器：超聲功率500～700W。5.5高速離心機：轉(zhuǎn)速范圍8000～12000r/min。5.6分析天平：感量為0.1mg.5.8一般實驗室常用儀器和設備。6樣品6.1樣品采集和保存按照HJ/T166的相關要求采集和保存土壤樣品，按照GB17378.3、GB17378.5、HJ494、HJ495及HJ/T91的要求采集和保存沉積物樣品。樣品于4℃以下密封、避光、冷藏運輸和保存。土壤樣品應在7d內(nèi)完成前處理，沉積物樣品應在33d內(nèi)完成前處理。6.2樣品的制備土壤樣品：稱取兩份新鮮樣品，一份樣品用于測定干物質(zhì)含量，另一份樣品(干物質(zhì)含量應大于10g)用于目標物草甘膦的測定。沉積物樣品：用高速離心機(5.5)離心10min去除間隙水后，再稱取兩份新鮮樣品，一份樣品用于測定含水率，另一份樣品(干物質(zhì)含量應大于10g)用于目標物草甘膦的測定。6.3水分的測定土壤樣品干物質(zhì)含量按照HJ613進行測定，沉積物樣品含水率按照GB17378.5進行測定。6.4試樣的制備將樣品(6.2)全部轉(zhuǎn)移至50ml離心管中，加入50.0ml磷酸鈉和檸檬酸鈉混合提取液(4.9),超聲提取30min,用高速離心機(5.5)離心5min,取上清液用濾紙(4.18)過濾，待凈化。提取液(6.4.1)先用鹽酸溶液(4.4)調(diào)節(jié)pH至9,靜置10min后用濾紙(4.18)過濾，加入50ml正己烷(4.2),充分振蕩后靜置，棄去有機相，水相用50ml正己烷(4.2)再萃取一次。6.4.3衍生化取1.00ml凈化后的水溶液(6.4.2)于1.5ml聚乙烯塑料管中，加入0.12ml四硼酸鈉溶液(4.11)和0.2ml9-芴甲基氯甲酸酯溶液(4.13),在常溫下用混勻儀(5.7)衍生4h,用針式過濾器(4.17)過濾后待測。6.5空白試樣的制備用石英砂(4.16)代替樣品，按照與試樣的制備(6.4)相同的步驟進行空白試樣的制備。7分析步驟7.1測量參考條件流動相A:乙腈；流動相B:磷酸溶液(4.6),梯度洗脫程序見表1。柱溫：35℃。激發(fā)波長：254nm;發(fā)射波長：301nm。表1梯度洗脫程序時間/min04吸取不同體積的標準使用液(4.15),用水稀釋，制備至少5個濃度點的標準系列，草甘膦的質(zhì)量按照儀器測量參考條件(7.1),濃度由低到高依次進樣，以草甘膦濃度為橫坐標，以峰面積(峰高)為縱坐標，建立工作曲線。草甘膦衍生物的參考色譜圖見圖品7.3試樣測定按照與建立工作曲線相同條件(7.2)進行試樣(6.4)的測定。按照與試樣測定(7.3)相同條件進行空白試樣(6.5)的測定。根據(jù)樣品中目標化合物的保留時間(RT)定性。樣品中目標化合物的保留時間與期望保留時間(即標準溶液中的平均相對保留時間)的相對偏差應控制在土5%以內(nèi)。必要時可采用樣品中添加目標化合新鮮土壤樣品的含水量，按照式(1)進行計算：my——樣品質(zhì)量(濕重),g;5m?——樣品質(zhì)量(濕重),g;6方法精密度匯總數(shù)據(jù)參見附錄A。9.2準確度6家實驗室對草甘膦加標質(zhì)量分數(shù)為0.100mg/kg、0.500mg/kg和1.00mg/kg的統(tǒng)一樣品進行分析測定。加標回收率范圍分別為71.0%～109%、73.6%～106%和68.3%～109%。加標回收率最終值為79.6%±12%～102%±13%、77.3%±5.6%～100%±8.6%和75.5%±9.4%～100%±12%。方法準確度匯總數(shù)據(jù)參見附錄A。10質(zhì)量保證和質(zhì)量控制10.1空白試驗每批樣品至少做一個空白試驗，空白值不得高于方法的檢出限。10.2校準初次使用儀器或在儀器維修、更換色譜柱或校準不合格時，應建立工作曲線，相關系數(shù)應≥0.995。每20個樣品或每批次樣品(≤20個樣品/批)應測定一個工作曲線中間濃度點標準溶液，其測定結(jié)果與該點濃度的相對誤差應在±20%以內(nèi)。10.3平行樣每批樣品至少測定10%的平行雙樣，樣品數(shù)量少于10個時，應至少測定一個平行