1人參皂苷CK的含量測定高效液相色譜法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測定人參皂苷CK含量的高效液相色譜法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于不同純度或來自不同制備工藝的人參皂苷產(chǎn)品及其制品中人參皂苷CK含量的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析試驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T26792高效液體色譜儀中華人民共和國藥典四部GB/T41726-2022人參單體皂苷鑒定及檢測方法GB/T16631-2008高效液相色譜法通則GB/T8170數(shù)值修約規(guī)則與極限數(shù)值的表示和判定T_CNHFA001-2021人參稀有皂苷的含量測定3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。人參皂苷CK：從五加科植物人參PanaxginsengC.A.Mey.的干燥根及根莖經(jīng)加工、轉(zhuǎn)化和純化制成的皂苷單體。4原理人參皂苷及其制品試樣用甲醇超聲振蕩溶解，過濾后注入高效液相色譜儀進(jìn)行分離，采用紫外檢測器檢測，通過比較樣品與標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留時(shí)間來識(shí)別人參皂苷CK，并用外標(biāo)法進(jìn)行定量。5試劑與材料5.1試劑5.1.1水：GB/T6682所規(guī)定的一級(jí)水。5.1.2乙腈（CH3CN）：質(zhì)譜純。5.1.3甲醇（CH3OH）：質(zhì)譜純。5.2標(biāo)準(zhǔn)品人參皂苷CK標(biāo)準(zhǔn)品：質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%，CAS號(hào)：39262-14-1。5.3標(biāo)準(zhǔn)溶液制備5.3.1人參皂苷CK標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.000mg/mL）：準(zhǔn)確稱取25mg（精確至0.01mg）人參皂苷CK標(biāo)準(zhǔn)品至25mL容量瓶中，加入適量甲醇溶解，繼續(xù)加入甲醇至刻度線，超聲振蕩10min，搖勻，用0.22μm有機(jī)濾膜過濾，得到濃度為1.000mg/mL標(biāo)準(zhǔn)品溶液，置于4℃下密封可貯藏一個(gè)月。5.3.2人參皂苷CK標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別吸取0.50，1.00，2.50，5.00mL人參皂苷CK標(biāo)準(zhǔn)溶液到10mL2容量瓶中，用甲醇定容，得到濃度分別為0.0500，0.1000，0.2500，0.5000，1.000mg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。6儀器和設(shè)備6.1高效液相色譜儀：配有紫外檢測器。6.2分析天平：感量0.0001g和0.00001g。6.3精密移液器。6.4真空脫氣裝置或類似設(shè)備。6.5有機(jī)微孔濾膜：0.45μm和0.22μm。6.6超聲處理器。7試驗(yàn)方法7.1樣品制備7.1.1稱樣：人參皂苷CK含量大于或等于10%的固體粉末試樣稱取0.2g～0.5g（精確至0.0001g含量小于10%的液體試樣稱取2g～10g（精確至0.0001g），對(duì)于人參皂苷CK含量含量更低的樣品可適當(dāng)增加稱樣量。7.1.2提?。悍Q好的試樣轉(zhuǎn)至25mL容量瓶中，加入甲醇至刻度線，超聲振蕩30分鐘，搖勻，用0.22μm有機(jī)濾膜過濾，即得測試溶液。7.2測定7.2.1色譜參考條件優(yōu)化儀器工作條件，使測試樣品和標(biāo)準(zhǔn)品中各組分得到滿意的色譜分離，以下色譜條件供參考：a)色譜柱：建議使用雙封端的C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）或等效色譜柱。色譜柱的新舊程度和使用情況、填料填裝狀態(tài)以及溫度會(huì)影響各組分的分離；b)流動(dòng)相：A相為乙腈，B相為水，梯度洗脫條件見表1；c)檢測器：紫外檢測器；d)檢測波長：203nm；e)流速：1mL/min；f)柱溫：30℃;表1液相色譜梯度洗脫條件07.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制將系列人參皂苷CK標(biāo)準(zhǔn)工作液分別注入高效液相色譜儀，依次按上述推薦色譜條件上機(jī)，以保留時(shí)間定性，測得相應(yīng)的峰面積；以標(biāo)準(zhǔn)工作液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以被測組分的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。7.2.3試樣溶液的測定按外標(biāo)法將試樣溶液注入高效液相色譜儀中，以保留時(shí)間定性，測得相應(yīng)的峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到試樣待測液中人參皂苷CK的質(zhì)量濃度。若濃度超出標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍，可通過增加稱樣量或者稀釋的方式使?jié)舛嚷湓跇?biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)。人參皂苷CK標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的高效液相色譜圖參見附錄A。38結(jié)果計(jì)算和表述試樣人參皂苷CK的含量X按式（1）計(jì)算。式中：X—試樣中人參皂苷CK的含量，單位為克每100克（g/100g）；c—標(biāo)準(zhǔn)工作溶液測得被測組分溶液濃度，單位為毫克每毫升（mg/mLV—試樣溶液定容體積，單位為毫升（mL）；m—試樣的質(zhì)量，單位為克（gd——稀釋倍數(shù)，單位為1；計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測試結(jié)果的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字；含量低于1g/100g時(shí)保留兩位有效數(shù)字。9精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)