ICS07.080CCSA40GB/T40173—2021水溶性殼聚糖中還原性端基糖的測定國家市場監(jiān)督管理總局國家標準化管理委員會IGB/T40173—2021本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由全國生化檢測標準化技術委員會(SAC/TC387)提出并歸口。1GB/T40173—2021水溶性殼聚糖中還原性端基糖的測定分光光度法本文件規(guī)定了水溶性殼聚糖中還原性端基糖的分光光度測定方法。本文件適用于水溶性殼聚糖(含量≥90%,脫乙酰度≥90%)中還原性端基糖的檢測。本方法檢出限為0.006mmol/g,定量限為0.023mmol/g。下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。3.1葡聚糖。3.2脫乙酰度degreeofdeacetylation殼聚糖分子中脫除乙?；奶菤埢鶖嫡細ぞ厶欠肿又锌偟奶菤埢鶖档陌俜謹怠?.3可溶于酸性、中性和堿性溶液的低聚合度殼聚糖。殼聚糖分子末端的還原性端基糖在堿性條件下與3-甲基-2-苯并噻唑酮腙(MBTH)反應生成吖嗪，酸性條件下過量的MBTH被Fe3+氧化成陽離子，再與吖嗪反應生成青藍色化合物，還原端基糖的濃度在一定范圍內與其在590nm處的吸光度呈正比例線性關系。通過測定在590nm處的吸光度值，外標法定量。除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純。水為符合GB/T6682規(guī)定的三級水。2GB/T40173—2021純度≥98%。5.2DL-二硫蘇糖醇[DTT,HSCH?CH(OH)CH(OH)CH?SH]:CAS號：3483-12-3,純度≥98%。5.3鹽酸氨基葡萄糖標準品(C?H?NO?·HCl):CAS號：66-84-2,純度≥99%,或經國家認證并授予標準物質證書的標準物質。5.4濃鹽酸。效期10天。期10天。5.9硫酸鐵銨試劑：稱取5g硫酸鐵銨[NH?Fe(SO?)?·12H?O]和5g氨基磺酸，加入41.8mL濃鹽5.10鹽酸氨基葡萄糖標準溶液(0.1mg/mL):稱取0.1g鹽酸氨基葡萄糖(精確至0.0001g),加水溶解，用水稀釋并定容至100mL,混勻，(濃度為1mg/mL);準確吸取上述溶液10mL,用水稀釋定容至6儀器設備7.1試樣制備準確稱取試樣約0.1g(精確至0.0001g),加水約507.2標準工作溶液的配制標準工作溶液。8測定步驟分別移取鹽酸氨基葡萄糖標準工作溶液500μL,各加入500pL0.5mol/L氫氧化鈉溶液和500μL顯色1h。以水調節(jié)零點，于波長590nm處測定吸光度值。以鹽酸氨基葡萄糖的質量濃度為橫坐標，標準工作溶液吸光度值與質量濃度為零的空白管的吸光度的差值為縱坐標繪制標準曲線。8.2試樣溶液的測定移取試樣溶液500μL,加入500μL0.5mol/L氫氧化鈉溶液和500μLMBTH試劑于試管中，混勻，于80℃水浴13min,趁熱迅速加入1000μL硫酸鐵銨試劑，混勻，放置顯色1h。以水調節(jié)零點，于波長590nm處測定吸光度值。將待測樣吸光度值與質量濃度為零的空白管的吸光度值差值代入標準曲線，計算試樣中還原端基糖的含量。9結果計算與表示9.1結果計算試樣中還原端基糖含量按式(1)計算?！?1)式中：X——試樣中還原端基糖的含量，單位為毫摩爾每克(mmol/g);Ae——待測樣的吸光度值；Ap——空白管的吸光度值；k——標準曲線的斜率，單位為毫升每毫克(mL/mg);m-—水溶性殼聚糖的質量濃度，單位為毫克每毫升(mg/mL);M——鹽酸氨基葡萄糖的分子質量，215.63