槐米及其制品中總黃酮含量的測定分光光度法DeterminationofFlavonesinSophorajaponicaanditsproducHYPERLINK安徽省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I本標準按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標準由安徽省濃香型白酒標準化技術(shù)委員會提出并歸口。本標準起草單位：安徽瑞思威爾科技有限公司、安徽古井貢酒股份有限公司。本標準起草人：陸瑋、劉國英、胡幫超、查樞屏、王玉良、湯有宏、李安軍、何宏魁、胡心行、周慶伍、楊恩賀。1槐米及其制品中總黃酮含量的測定分光光度法本標準規(guī)定了槐米及其制品中總黃酮含量的測定分光光度法。本標準適用于槐米、槐米提取液以及槐米發(fā)酵液等樣品中總黃酮含量的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB5009.3食品安全國家標準食品中水分的測定GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。以槐米為主要原料進行提取而得到的產(chǎn)物。以槐米作為主要原料發(fā)酵得到的產(chǎn)物。HYPERLINK請去其他用本標準采用亞硝酸鈉-氯化鋁絡(luò)合分光光度法測定槐米及其制品中的總黃酮含量。在中性或弱堿性且亞硝酸鈉存在時，黃酮類化合物與鋁鹽生成螯合物，加入NaOH后溶液呈紅橙色，在一定濃度范圍內(nèi)，其吸光度與黃酮類化合物的含量成正比，符合朗伯-比爾定律。5試劑與材料5.1試劑5.1.1除另有說明外，本標準所用水應(yīng)符合GB/T6682的要求。5.1.2無水乙醇：分析純。5.1.3亞硝酸鈉：分析純。25.2.1亞硝酸鈉溶液(5%):稱取5g亞硝酸鈉，用水溶解定容至100mL;該溶液現(xiàn)配現(xiàn)用。5.2.2氯化鋁溶液(10%):稱取10g氯化鋁，用水溶解定容至100mL。5.2.3氫氧化鈉溶液(4%):稱取4g氫氧化鈉，用水溶解定容至100mL。5.2.4乙醇溶液(60%):量取600mL無水乙醇，用水溶解定容至1000mL。蘆丁(C?HoO16,CAS號：153-18-4),純度≥99.0%。準確稱取20mg(精確至0.1mg)蘆丁標準品，用60%乙醇溶液溶解定容至100mL,此溶液中超聲30min,用60%乙醇溶液定容至50使青勿傳播或其他用途吸取5mL提取液于100mL燒杯中，加入30mL60%乙醇溶液，超聲10min,以60%乙醇溶吸取2mL濾液，以60%乙醇溶液定容至37.3標準曲線的制作準確吸取蘆丁標準溶液(5.4)0.0,0.5,0.8,1.0,1.3,1.5,1.8,2.0mL分別置于10mL比色管中，加乙醇溶液(5.2.4)至總體積為5mL,加亞硝酸鈉溶液(5.2.1)0.3mL,混勻，靜置8min;再加入氯化鋁溶液(5.2.2)0.3mL,搖勻，靜置10min;加氫氧化鈉溶液(5.2.3)4.0mL,用乙醇溶液(5.2.4)定容至刻度，搖勻，靜置10min。7.4試樣溶液的測定吸取1.0mL待測液于10mL比色管中，加乙醇溶液(5.2.4)至5.0mL,加亞硝酸鈉溶液(5.2.1)0.3mL,混勻，靜置8min;再加入氯化鋁溶液(5.2.2)0.3mL,搖勻，靜置10min;加氫氧化鈉溶液(5.2.3)4.0mL,用乙醇溶液(5.2.4)定容至刻度，搖勻，靜置10min。7.5水分含量的測定按照GB5009.3規(guī)定執(zhí)行。8分析結(jié)果表述8.1槐米中總黃酮的含量(以干基計)按式(1)計算：c——由標準曲線計算得出的待測樣品溶液的總黃酮濃度(mg/L);0.05——槐米樣品的提取液總體積，單位為升(L);H——槐米中水分的質(zhì)量分數(shù)(%);8.2槐米制品中總黃酮的含量按式(2)計算：X=(c-c?)×10×n