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DB21Developmentthemethodofreal-timefluorescentRT-PCRfordetectionofPPRV遼寧省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I II 1 1 1 1 1 2 2 4 4 5標準起草單位通訊地址:遼寧省動物及產(chǎn)品檢疫中心(沈陽市沈河區(qū)萬柳塘路105號甲),1小反芻獸疫病毒實時熒光RT-PCR檢測方法本標準規(guī)定了小反芻獸疫病毒實時熒光RT-PCR檢測方法的病學調(diào)查,適用于反芻動物血液血清、淋巴結(jié)及口鼻棉拭子中小反芻GB/T19495.2-2004轉(zhuǎn)基農(nóng)業(yè)部關(guān)于印發(fā)《病死及病害動物無害化處理技術(shù)規(guī)范》的通知(農(nóng)醫(yī)PPRV:小反芻獸疫病毒(PestedesPetitsRuminantsviRNase:核糖核酸酶(ribonuclRT-PCR:反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(reversetranscriptionpolymerasechainreactidNTP:脫氧核糖核苷三磷酸(deoxy-ribonPBS:磷酸鹽緩沖液(phosphatebuffersolutTAE:三羥甲基氨基甲烷-乙酸電泳緩沖液(Trisacetate-EDTAbuf基因組模板的情況下,PCR反應(yīng)得以進行并釋放熒光信號。利用儀器對PCR過程中相應(yīng)通道的信度進行實時監(jiān)測和輸出,實現(xiàn)檢測結(jié)果的定性5.1臺式冷凍離心機(離心范圍0~2注:本標準中使用的試劑,除另有說明外,所有實驗使用的試劑等級均為不含R3實驗室檢測。按照《獸醫(yī)實驗室生物安全技術(shù)管理規(guī)范》進行樣品的生物安全標反應(yīng)體系的成分:去離子水7.5ul,上游引物PPRVF0.5ul,下游引物PPRVR0.5ul,探針7.2.4.2取樣本準備區(qū)準備好的PCR反應(yīng)管,放置411陽性對照:Ct值≤30,有明顯指數(shù)增長,呈典型的S型曲線。陰性對照:C陰性:樣本檢測結(jié)果Ct值>43或無Ct值,表明樣本中未檢測可疑:樣本檢測結(jié)果Ct值在40~43范圍9檢測過程中防止交叉污染的措
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