ICS65.020.20CCSB05DB21TechnicalstandardofHaploidbree2023-05-30發(fā)布2023-06-30實(shí)施遼寧省市場監(jiān)督管理局發(fā)布DB21/T3741—2023本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由遼寧省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。本文件起草單位：遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院、遼寧省農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心。本文件主要起草人：劉欣芳、王延波、孫成韜、馬駿、姜敏、齊欣、張默、金迪、孟慶國、賈鈺瑩、劉曉麗、葉雨盛、張洋、周亞光。本文件發(fā)布實(shí)施后，任何單位和個(gè)人如有問題和意見建議，均可以通過來電和來函等方式進(jìn)行反饋，我們將及時(shí)答復(fù)并認(rèn)真處理，根據(jù)實(shí)際情況依法進(jìn)行評(píng)估及復(fù)審。歸口管理部門通訊地址：遼寧省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳（沈陽市和平區(qū)太原北街2號(hào)），聯(lián)系電話文件起草單位通訊地址：遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院玉米研究所（沈陽市沈河區(qū)東陵路84號(hào)），聯(lián)系電話DB21/T3741—2023玉米單倍體育種技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了玉米單倍體育種的術(shù)語和定義、單倍體誘導(dǎo)、單倍體加倍、DH系鑒定等技術(shù)內(nèi)容。本文件適用于玉米單倍體育種。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T17315玉米種子生產(chǎn)技術(shù)操作規(guī)程DB21/T2996玉米農(nóng)機(jī)農(nóng)藝融合栽培技術(shù)規(guī)程3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1單倍體誘導(dǎo)haploidinducing以玉米單倍體誘導(dǎo)系為父本，育種基礎(chǔ)材料為母本，雜交產(chǎn)生單倍體籽粒的過程。3.2單倍體籽粒haploidseed胚的倍性為單倍體的玉米籽粒。單倍體育種應(yīng)用中表現(xiàn)為糊粉層紫色、胚白色特征的正常成熟籽粒。3.3由單倍體加倍獲得的雙單倍體為DH系，基因型高度純合，具有性狀一致性。4單倍體誘導(dǎo)2DB21/T3741—20234.1育種基礎(chǔ)材料選擇根據(jù)育種目標(biāo)選擇或構(gòu)建適宜的玉米資源做母本基礎(chǔ)材料。4.2誘導(dǎo)系選擇根據(jù)育種基礎(chǔ)材料選擇誘導(dǎo)率高、花粉量大、標(biāo)記明顯、抗倒伏、結(jié)實(shí)性好的誘導(dǎo)系。本地區(qū)適宜應(yīng)用的誘導(dǎo)系有遼誘1號(hào)、遼誘2號(hào)、遼誘3號(hào)、遼誘4號(hào)、CHIO3（高油誘導(dǎo)系）等。本文件應(yīng)用的單倍體誘導(dǎo)系均含有R-nj基因控制的紫色標(biāo)記性狀。4.3誘導(dǎo)方法4.3.1隔離區(qū)誘導(dǎo)以玉米育種基礎(chǔ)材料為母本、單倍體誘導(dǎo)系為父本，雜交制種誘導(dǎo)產(chǎn)生單倍體。隔離區(qū)制種按照GB/T17315執(zhí)行。4.3.2人工誘導(dǎo)以玉米育種基礎(chǔ)材料為母本、單倍體誘導(dǎo)系為父本，花期人工雜交授粉誘導(dǎo)產(chǎn)生單倍體。4.4單倍體鑒選4.4.1籽粒鑒選成熟期收獲雜交果穗，脫粒后人工鑒選糊粉層紫色、胚白色的籽粒。4.4.2油分鑒選成熟期收獲由高油誘導(dǎo)系雜交的果穗，晾干后脫粒，采用核磁共振分選系統(tǒng)鑒選油分低于4%的籽粒。4.4.3幼胚鑒選取人工雜交15d~18d的果穗，剝?nèi)グ~，轉(zhuǎn)移至超凈工作臺(tái)已滅菌的大燒杯中，放入75%的酒精浸泡10min，無菌水沖洗5遍，用刀片切去幼粒表皮，用刀尖挑選發(fā)育大小為正常胚60%~85%的幼胚。5單倍體加倍5.1籽粒自然加倍DB21/T3741—2023選擇土壤肥沃、灌排方便、光照充足的地塊，播種單倍體籽粒，密度為8000株/667m2~10000株/667m2，出苗后，去除粗壯或葉脈紫色的植株，保留常規(guī)綠色且矮小的單倍體植株，苗期和大喇叭口期噴施葉面肥，人工自交授粉，獲得二倍體果穗。田間管理按照DB21/T2996的規(guī)定執(zhí)行。5.2籽粒藥劑加倍5.2.1浸種法用清水沖洗單倍體籽粒30min，2%次氯酸鈉消毒15min后，將種子浸泡于無菌水中24h；瀝干水分，用6‰秋水仙素加倍溶液（秋水仙素0.6g，二甲基亞砜12.5mL，1000mL無菌水）于25℃浸泡單倍體籽粒20h，清水沖洗后，坐水播種至大田。田間管理按照DB21/T2996標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。注：秋水仙素為劇毒有機(jī)物，易分解，應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，短期保存應(yīng)當(dāng)避光保存于4℃冰箱中，放在安全位置。在配制溶液和使用過程中，須做好防護(hù)。廢液要及時(shí)回收，統(tǒng)一由專業(yè)機(jī)構(gòu)處理。如不慎將秋水仙素溶液沾到皮膚上，應(yīng)迅5.2.2噴淋法將籽粒催芽至胚芽2cm左右，切去芽尖，裝入網(wǎng)袋或網(wǎng)盤中，用6‰秋水仙素加倍溶液循環(huán)噴淋10h，再用清水噴淋清洗4h，移栽至大田，確保芽尖露出土面。田間管理按照DB21/T2996執(zhí)行。5.3幼胚加倍將挑選出的幼胚放在6‰秋水仙素的MS培養(yǎng)基上，胚面朝下，置培養(yǎng)箱中24℃光培養(yǎng)1d~2d至顯色，淘汰紫色幼胚，挑選白色幼胚轉(zhuǎn)移至MS培養(yǎng)基中，每個(gè)幼胚相隔2cm，置培養(yǎng)箱中26℃培養(yǎng)，濕度60%，16h光培養(yǎng)、8h暗培養(yǎng)，5d~7d幼胚發(fā)育成2葉1心幼苗，轉(zhuǎn)苗至塑料培養(yǎng)缽中，緩苗10d~15d，移栽至大田，做好田間管理，自交授粉，收獲二倍體果穗。6DH系鑒定在整個(gè)生育期跟蹤調(diào)查農(nóng)藝性狀，鑒選株型緊湊或半緊