飼料中鹽酸嗎啉胍的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法2017-10-25發(fā)布2017-11-25實施山東省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I本標(biāo)準按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準由山東省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局提出。本標(biāo)準由山東省畜牧業(yè)標(biāo)準化技術(shù)委員會歸口。本標(biāo)準起草單位：山東省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗研究院、山東省食品藥品檢驗研究院。本標(biāo)準主要起草人：王駿、周莉莉、楊昊、于文江、尹麗麗、劉桂亮。1飼料中鹽酸嗎啉胍的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法本標(biāo)準規(guī)定了配合飼料中鹽酸嗎啉胍的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定方法。本標(biāo)準適用于配合飼料中鹽酸嗎啉胍的測定。本標(biāo)準方法檢出限為0.05mg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法試樣中的鹽酸嗎啉胍用乙酸溶液提取，經(jīng)乙腈稀釋后，以親水性液相色譜柱分離，帶有電噴霧電離源的串聯(lián)四極桿質(zhì)譜測定，外標(biāo)法定量。4試劑和材料除非另有規(guī)定，僅使用分析純試劑，水為GB/T6682規(guī)定的一級水，其他試劑和材料主要包括：a)乙腈：色譜純；d)乙酸溶液：取2.00mL冰乙酸，用水稀釋并定容至100mL;g)鹽酸嗎啉胍標(biāo)準儲備液：準確稱取含鹽酸嗎啉胍50mg(精確至0.1mg)的標(biāo)準品，置于50mL容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，配制成濃度1.0mg/mL的標(biāo)準儲備液。此溶液于4℃避光條件下儲存，有效期為3個月；h)鹽酸嗎啉胍標(biāo)準工作液：準確移取1.00mL標(biāo)準儲備液于100mL容量瓶中，加入95mL乙腈，混勻，放至室溫后用水定容至刻度，搖勻；儀器和設(shè)備主要包括：a)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源(ESI)和串聯(lián)四極桿質(zhì)量分析器；2b)分析天平：感量為0.1mg、0.01g;c)超聲波清洗器；d)離心機：5000r/min;e)渦旋混合器。6測定步驟6.1樣處理稱取2.0±0.05g(精確至0.01g)試樣，置于30mL具塞離心管中，準確加入20mL/L乙酸溶液10mL,在渦旋混合器上混勻1min,超聲提取10min,5000r/min離心10min。取上清液5mL置于30mL離心管中，用5mL、5mL正己烷萃取兩次，棄去正己烷層。準確移取下層清液0.5mL于10mL容量瓶中，加入8mL乙腈混勻，待溶液放至室溫后定容并搖勻，經(jīng)微孔濾膜過濾后待測。6.2基質(zhì)空白溶液的制備稱取2.0g±0.05g(精確至0.01g)陰性試樣，以下按6.1操作，制備基質(zhì)空白溶液。6.3系列基質(zhì)標(biāo)準溶液的制備準確移取適量體積的標(biāo)準工作液，用基質(zhì)空白溶液(6.2)稀釋成鹽酸嗎啉胍濃度分別為0.56.4儀器參考條件6.4.1液相色譜條件液相色譜參考條件如下：a)色譜柱：內(nèi)填親水性色譜填料，100mm×2.1mm(i,d),粒徑1.7μm,或相當(dāng)者；b)流動相：乙腈、10mmol/L乙酸銨溶液。梯度洗脫條件：0min:95%乙腈，4min:線性變化至60%乙腈，保持60%乙腈至6min,6.1min:95%乙腈，保持3min;c)流速：0.3mL/min;d)柱溫：40℃;6.4.2質(zhì)譜參考條件參見附錄A。將基質(zhì)標(biāo)準溶液和試樣溶液在相同的條件下進樣測定，若試樣溶液和基質(zhì)標(biāo)準溶液質(zhì)量色譜圖中鹽酸嗎啉胍的保留時間一致，定性定量離子信噪比均大于3,且定性離子對的相對豐度偏差符合表1的規(guī)定，則可判定樣品中檢出鹽酸嗎啉胍。以基質(zhì)標(biāo)準溶液中鹽酸嗎啉胍定量離子對的峰面積對相應(yīng)的濃度繪制標(biāo)準工作曲線，外標(biāo)法定量。表1定性測定時相對離子豐度的最大允許偏差>10%至20%允許的相對偏差36.6結(jié)果計算6.6.1試樣中鹽酸嗎啉胍的含量按式(1)計算：X——試樣中鹽酸嗎啉胍的含量，單位為毫克每千克(mg/kg);V——測定液體積，單位為毫升(mL);m——試樣的質(zhì)量，單位為克(g);n——稀釋倍數(shù)。6.6.2計算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，保留兩位有效數(shù)字。7精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。4(資料性附錄)質(zhì)譜參考條件質(zhì)譜參考條件：a)電離方式：電噴霧電離，正離子。b)毛細管電壓：3.2kV。c)錐孔電壓：30v。f)脫溶劑氣(N?)流量：600L/h。g)