1．(2015年重慶卷，6)下列有關(guān)人胰島素基因表達(dá)載體的敘述，正確的是()A．表達(dá)載體中的胰島素基因可通過(guò)人肝細(xì)胞mRNA反轉(zhuǎn)錄獲得B．表達(dá)載體的復(fù)制和胰島素基因的表達(dá)均啟動(dòng)于復(fù)制原(起)點(diǎn)C．借助抗生素抗性基因可將含胰島素基因的受體細(xì)胞篩選出來(lái)D．啟動(dòng)子和終止密碼子均在胰島素基因的轉(zhuǎn)錄中起作用解析：人肝細(xì)胞不能合成胰島素，則人肝細(xì)胞中不含有胰島素的mRNA，不能通過(guò)人肝細(xì)胞中的mRNA反轉(zhuǎn)錄獲得人胰島素基因，A錯(cuò)誤；表達(dá)載體的復(fù)制啟動(dòng)于復(fù)制原點(diǎn)，胰島素基因的表達(dá)啟動(dòng)于啟動(dòng)子，B錯(cuò)誤；抗生素抗性基因是標(biāo)記基因，可用于篩選含胰島素基因的受體細(xì)胞，C正確；啟動(dòng)子在轉(zhuǎn)錄過(guò)程中起作用，終止密碼子在翻譯過(guò)程中起作用，D錯(cuò)誤。答案：C2．(2018屆人大附中模擬)用基因工程技術(shù)生產(chǎn)羧酸酯酶(CarE)制劑的流程如圖所示，下列敘述正確的是()A．過(guò)程①需使用Taq聚合酶B．過(guò)程②需使用解旋酶和PCR獲取目的基因C．過(guò)程③可將重組表達(dá)質(zhì)粒導(dǎo)入所有的大腸桿菌D．過(guò)程④可利用DNA分子雜交鑒定目的基因是否已導(dǎo)入受體細(xì)胞解析：過(guò)程①表示通過(guò)反轉(zhuǎn)錄法合成目的基因，該過(guò)程需要逆轉(zhuǎn)錄酶，A錯(cuò)誤；過(guò)程②表示利用PCR技術(shù)對(duì)目的基因進(jìn)行擴(kuò)增，該過(guò)程中解旋是通過(guò)高溫解鏈實(shí)現(xiàn)的，不需要解旋酶，B錯(cuò)誤；過(guò)程③可將重組表達(dá)質(zhì)粒導(dǎo)入用CaCl2溶液處理的大腸桿菌(即感受態(tài)細(xì)胞)，C錯(cuò)誤；過(guò)程④可利用DNA分子雜交鑒定目的基因是否已導(dǎo)入受體細(xì)胞，D正確。答案：D3．圖1、圖2分別為“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)中部分操作步驟示意圖，下列敘述不正確的是()A．圖1、圖2中加入蒸餾水稀釋的目的相同B．圖1中完成過(guò)濾之后保留濾液C．圖2中完成過(guò)濾之后棄去濾液D．在圖1雞血細(xì)胞液中加入少許嫩肉粉有助于去除雜質(zhì)解析：A錯(cuò)誤，圖1加入蒸餾水稀釋的目的分別是破碎細(xì)胞獲取含DNA的濾液；圖2加入蒸餾水稀釋的目的是稀釋NaCl溶液，析出DNA；B正確，圖1過(guò)濾之后保留濾液，因?yàn)V液中含DNA；C正確，圖2過(guò)濾之后棄去濾液，因DNA已析出；D正確，嫩肉粉中的蛋白酶可對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行水解。答案：A4．(2017屆鎮(zhèn)江模擬)抗菌肽對(duì)治療癌癥有一定的作用，下圖表示抗菌肽合成過(guò)程。相關(guān)說(shuō)法正確的是()A．用PCR克隆目的基因不需要DNA解旋酶B．基因表達(dá)載體包含起始密碼和終止密碼C．用顯微注射法導(dǎo)入基因表達(dá)載體D．篩選菌種時(shí)用基因探針檢測(cè)相關(guān)蛋白質(zhì)解析：PCR技術(shù)中采用的是高溫變性，因此用PCR克隆目的基因不需要DNA解旋酶，A正確；基因表達(dá)載體包含啟動(dòng)子和終止子，而起始密碼和終止密碼在mRNA上，B錯(cuò)誤；將基因表達(dá)載體導(dǎo)入酵母菌細(xì)胞時(shí)應(yīng)用感受態(tài)細(xì)胞法，C錯(cuò)誤；篩選菌種時(shí)用基因探針檢測(cè)相關(guān)基因或mRNA，不能用基因探針檢測(cè)蛋白質(zhì)，要用抗體檢測(cè)，D錯(cuò)誤。答案：A5．(2018屆云南省玉溪模擬)請(qǐng)回答下列有關(guān)基因工程的問(wèn)題：(1)如果用某種生物發(fā)育的某個(gè)時(shí)期的mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的多種互補(bǔ)DNA片段，與載體連接后儲(chǔ)存在一個(gè)受體菌群中，這個(gè)受體菌群體就叫做這種生物的________。(2)一個(gè)基因表達(dá)載體的組成，除了目的基因外，還必須有________，________以及________。(3)目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程，稱(chēng)為_(kāi)_______。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞、動(dòng)物細(xì)胞、大腸桿菌最常用的方法分別是________、________、感受態(tài)細(xì)胞法。(4)目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，是否可以穩(wěn)定維持和表達(dá)其遺傳特性，只有通過(guò)檢測(cè)與鑒定才能知道。首先要檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物______________________上是否插入了目的基因；其次要檢測(cè)目的基因是否__________________________；最后檢測(cè)目的基因是否____________________________________________。解析：(1)由于生物個(gè)體發(fā)育過(guò)程中，基因是選擇性表達(dá)的，因此細(xì)胞中的mRNA是部分基因轉(zhuǎn)錄形成的，則通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄方法合成的目的基因只包含該生物的部分基因，這個(gè)受體菌群體就叫做這種生物的cDNA(部分基因)文庫(kù)。(2)一個(gè)基因表達(dá)載體的組成，除了目的基因外，還必須有啟動(dòng)子、終止子以及標(biāo)記基因。(3)目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程，稱(chēng)為轉(zhuǎn)化；將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞最常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最常用的方法是顯微注射技術(shù)法。(4)目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，需要檢查基因工程是否成功：首先要采用DNA分子雜交技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA上是否插入了目的基因；其次要采用分子雜交技術(shù)檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA；最后檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，可采用抗原—抗體雜交法。答案：(1)cDNA(部分基因)文庫(kù)(2)啟動(dòng)子終止子標(biāo)記基因(3)轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法顯微注射技術(shù)法(4)染色體的DNA轉(zhuǎn)錄出了mRNA翻譯成蛋白質(zhì)6．(2017屆陜師大模擬)下圖是科學(xué)家利用大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素的部分過(guò)程。請(qǐng)結(jié)合相關(guān)知識(shí)回答問(wèn)題：(1)除圖示方法獲得目的基因(人胰島素基因)外，還可通過(guò)________的方法獲得目的基因。(2)圖示所獲得的人胰島素基因在大腸桿菌中不能表達(dá)，需要質(zhì)粒為其提供________等調(diào)控因子；質(zhì)粒含有一個(gè)或多個(gè)________切割位點(diǎn)，供目的基因插入其中；質(zhì)粒上還含有________，供重組DNA的鑒定和選擇。(3)圖中切割人胰島素基因和質(zhì)粒的酶(酶A)相同，其目的是____________，將重組DNA分子導(dǎo)入大腸桿菌前，常需用________處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞。(4)由于大腸桿菌中沒(méi)有________________等結(jié)構(gòu)，其內(nèi)合成的人胰島素沒(méi)有活性，需要經(jīng)過(guò)再加工。解析：(1)獲取目的基因的方法除題圖所示方法外，還有人工合成。(2)圖示所獲得的人胰島素基因由于不含啟動(dòng)子和終止子，因此需要運(yùn)載體——質(zhì)粒提供。質(zhì)粒上還應(yīng)含有一個(gè)或多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)，供目的基因插入其中；質(zhì)粒上還含有標(biāo)記基因，供重組DNA的鑒定和選擇。(3)用同一種限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，以便獲得相同的末端。將重組DNA分子導(dǎo)入大腸桿菌前，需用Ca2＋處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞。(4)由于大腸桿菌中沒(méi)有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體等結(jié)構(gòu)，其內(nèi)合成的人胰島素沒(méi)有活性，需要經(jīng)過(guò)再加工。答案：(1)人工合成(2)啟動(dòng)子、終止子限制酶標(biāo)記基因(3)獲得相同的末端Ca2＋(4)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體7．(2017屆臨川模擬)資料甲：科學(xué)家將牛生長(zhǎng)激素基因?qū)胄∈笫芫阎?，得到了體型巨大的“超級(jí)小鼠”；科學(xué)家采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法培育出轉(zhuǎn)基因煙草。資料乙：T4溶菌酶在溫度較高時(shí)易失去活性?？茖W(xué)家對(duì)編碼T4溶菌酶的基因進(jìn)行了改造，使其表達(dá)的T4溶菌酶第3位的異亮氨酸變?yōu)榘腚装彼?，在該半胱氨酸與第97位的半胱氨酸之間形成了一個(gè)二硫鍵，提高了T4溶菌酶的耐熱性。回答下列問(wèn)題：(1)資料甲屬于基因工程的范疇。將基因表達(dá)載體導(dǎo)入小鼠的受精卵中常用________法。構(gòu)建基因表達(dá)載體常用的工具酶是________和________。在培育有些轉(zhuǎn)基因植物時(shí)，常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，農(nóng)桿菌的作用是___________________。(2)資料乙中的技術(shù)屬于________工程的范疇，該工程是指以分子生物學(xué)相關(guān)理論為基礎(chǔ)，通過(guò)基因修飾或基因合成，對(duì)________進(jìn)行改造，或制造一種________的技術(shù)。在該實(shí)例中，引起T4溶菌酶空間結(jié)構(gòu)改變的原因是組成該酶肽鏈的________序列發(fā)生了改變。解析：(1)將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞常用顯微注射法；構(gòu)建基因表達(dá)載體需要限制性核酸內(nèi)切酶對(duì)目的基因所在的DNA和載體進(jìn)行切割，還需要DNA連接酶將目的基因與載體結(jié)合；農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上，故可用農(nóng)桿菌感染植物，將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞。(2)資料乙中的技術(shù)屬于蛋白質(zhì)工程的范疇，通過(guò)改造基因，對(duì)T4溶菌酶這種蛋白質(zhì)進(jìn)行了改造，使組成該酶的氨基酸序列發(fā)生了改變，從而提高了T4溶菌酶的耐熱性。答案：(1)顯微注射限制性核酸內(nèi)切酶DNA連接酶農(nóng)桿菌可感染植物，將目的基因轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞中(2)蛋白質(zhì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)新蛋白質(zhì)氨基酸8．(2015年海南卷)在體內(nèi)，人胰島素基因表達(dá)可合成出一條稱(chēng)為前胰島素原的肽鏈，此肽鏈在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中經(jīng)酶甲切割掉氨基端一段短肽后成為胰島素原，進(jìn)入高爾基體的胰島素原經(jīng)酶乙切割去除中間片段C后，產(chǎn)生A、B兩條肽鏈，再經(jīng)酶丙作用生成由51個(gè)氨基酸殘基組成的胰島素。目前，利用基因工程技術(shù)可大量生產(chǎn)胰島素?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)人體內(nèi)合成前胰島素原的細(xì)胞是________________，合成胰高血糖素的細(xì)胞是________________。(2)可根據(jù)胰島素原的氨基酸序列，設(shè)計(jì)并合成編碼胰島素原的________________序列，用該序列與質(zhì)粒表達(dá)載體構(gòu)建胰島素原基因重組表達(dá)載體。再經(jīng)過(guò)細(xì)菌轉(zhuǎn)化、篩選及鑒定，即可建立能穩(wěn)定合成________________的基因工程菌。(3)用胰島素原抗體檢測(cè)該工程菌的培養(yǎng)物時(shí)，培養(yǎng)液無(wú)抗原抗體反應(yīng)，菌體有抗原抗體反應(yīng)，則用該工程菌進(jìn)行工業(yè)發(fā)酵時(shí)，應(yīng)從________________中分離、純化胰島素原。胰島素原經(jīng)酶處理便可轉(zhuǎn)變?yōu)橐葝u素。解析：(1)由題意可知，前胰島素原在細(xì)胞內(nèi)經(jīng)加工后成為胰島素，人體合成胰島素的細(xì)胞是胰島B細(xì)胞，所以合成前胰島素原的細(xì)胞也是胰島B細(xì)胞；合成胰高血糖素的細(xì)胞是胰島A細(xì)胞。(2)根據(jù)胰島素原的氨基酸序列，可設(shè)計(jì)并合成編碼胰島素原的DNA序列(即目的基因)；用該序列與質(zhì)粒表達(dá)載體構(gòu)建胰島素原基因重組表達(dá)載體，再經(jīng)過(guò)細(xì)菌轉(zhuǎn)化、篩選及鑒定，即可建立能穩(wěn)定合成人胰島素原的基因工程菌。(3)根據(jù)題意，培養(yǎng)液無(wú)抗原抗體反應(yīng)，菌體有抗原抗體反應(yīng)，說(shuō)明胰島素原不存在于培養(yǎng)液而存在于菌體中，所以用該工程菌進(jìn)行工業(yè)發(fā)酵時(shí)，應(yīng)從菌體中分離、純化胰島素原，經(jīng)酶處理便可轉(zhuǎn)變?yōu)橐葝u素。答案：(1)胰島B細(xì)胞胰島A細(xì)胞(2)DNA胰島素原(3)菌體9．(2017屆哈爾濱檢測(cè))青蒿素是治療瘧疾的重要藥物。研究人員已經(jīng)弄清了青蒿細(xì)胞中青蒿素的合成途徑(如圖中實(shí)線方框內(nèi)所示)，并且發(fā)現(xiàn)酵母細(xì)胞也能夠產(chǎn)生合成青蒿素的中間產(chǎn)物FPP(如圖中虛線方框內(nèi)所示)。結(jié)合所學(xué)知識(shí)回答下列問(wèn)題：(1)瘧疾俗稱(chēng)“打擺子”，是由瘧原蟲(chóng)引起的間歇性寒熱癥狀的疾病。當(dāng)瘧原蟲(chóng)寄生在人體中時(shí)，會(huì)引起人的免疫反應(yīng)，使________細(xì)胞產(chǎn)生淋巴因子。同時(shí)B細(xì)胞在受到刺激后，在淋巴因子的作用下增殖分化成______細(xì)胞，產(chǎn)生抗體。(2)根據(jù)圖示代謝過(guò)程，科學(xué)家在培育能產(chǎn)生青蒿素的酵母細(xì)胞過(guò)程中，要向____________中導(dǎo)入的基因是____________________，具體操作中可利用____________________技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的DNA上是否插入目的基因。(3)構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，用不同類(lèi)型的________切割DNA后，可能產(chǎn)生________末端，也可能產(chǎn)生______末端。(4)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，酵母細(xì)胞導(dǎo)入相關(guān)基因后，相關(guān)基因能正常表達(dá)，但酵母菌合成的青蒿素仍很少，根據(jù)圖解分析原因可能是_______________________。解析：(1)當(dāng)瘧原蟲(chóng)寄生在人體中時(shí)，會(huì)引起人的免疫反應(yīng)，使T細(xì)胞產(chǎn)生淋巴因子，同時(shí)B細(xì)胞在受到刺激后，在淋巴因子的作用下增殖分化成記憶細(xì)胞和漿細(xì)胞，漿細(xì)胞能產(chǎn)生抗體。(2)由于酵母細(xì)胞中也能合成FPP，F(xiàn)PP形成青蒿素過(guò)程還需要ADS酶和CYP7ⅠAV1酶參與，所以酵母細(xì)胞需要導(dǎo)入ADS酶基因、CYP7ⅠAV1酶基因。(3)構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，用不同類(lèi)型的限制酶切割DNA后，可能產(chǎn)生黏性末端，也可能產(chǎn)生平末端。(4)由圖可知，酵母細(xì)胞中部分FPP用于合成固醇，使合成的青蒿素量較少。答案：(1)T漿(2)酵母細(xì)胞ADS酶基因、CYP7ⅠAV1酶基因DNA分子雜交(3)限制酶黏性平(4)酵母細(xì)胞中部分FPP用于合成固醇10．(2017年全國(guó)卷Ⅲ)編碼蛋白甲的DNA序列(序列甲)由A、B、C、D、E五個(gè)片段組成，編碼蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段組成，如圖1所示。回答下列問(wèn)題：(1)現(xiàn)要通過(guò)基因工程的方法獲得蛋白乙，若在啟動(dòng)子的下游直接接上編碼蛋白乙的DNA序列(TTCGCTTCT……CAGGAAGGA)，則所構(gòu)建的表達(dá)載體轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞后不能翻譯出蛋白乙，原因是__________________________________________________________。(2)某同學(xué)在用PCR技術(shù)獲取DNA片段B或D的過(guò)程中，在PCR反應(yīng)體系中加入了DNA聚合酶、引物等，還加入了序列甲作為_(kāi)___________________，加入了______________________作為合成DNA的原料。(3)現(xiàn)通過(guò)基因工程方法獲得了甲、乙、丙三種蛋白，要鑒定這三種蛋白是否具有刺激T淋巴細(xì)胞增殖的作用，某同學(xué)做了如下實(shí)驗(yàn)：將一定量的含T淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)液平均分成四組，其中