1偽狂犬病毒、豬細小病毒和豬圓環(huán)病毒2型三重熒光PCR檢測方法NY/T5414縮略語PRV：偽狂犬病毒（PorcinePsPPV：豬細小病毒（PorcineParvovirus）PCV-2：豬圓環(huán)病毒2型（PorcineCiFAM：6-羧基熒光素(6-Carboxyfluorescein)Hex：六氯-6-甲基熒光素（6-Hexa26.1.1病毒總核酸提取試劑TIANampVir6.1.2IQPowermix含豬圓環(huán)病毒2型（PCV-2）ORF2基因的體外重組質粒，序列片段序列將混合液充分混合后，最后加入模板，簡短離心，按照下列反應程序（見表1），進行一步法熒光19.3結果描述及判定9.3.1質控標準39.3.2結果判斷和鑒別如果Ct值仍然<40，則判定為核酸檢測陽性，如果Ct值≥40或者無Ct值，判FAM陽性熒光信號表示PCV-2核酸檢測陽性，Cy5陽性熒光信號表示PRV核酸檢測陽性，Hex陽性樣品處理和核酸提取以及廢棄物處理按照GB19489規(guī)定，在相應等級的生物安全實驗室或者生物45‘-ggccacgcccaacgacacgggcctctacacgctgcacgacgcctcggggccgcgggccgtgtaccggccgcccgcgccggcggacccggtgggccccgcgcgccccggggacacgttcgacctgatgccgcgcgtggtctcggacatgggccgcgcgcgcccccgcggtgcctgctgtactacgtgtacgagcggcgtgcagcttcacctcgccggcgcgcgcgcggctggtggcgcgccg-3'5‘-aaagaccagaacatacacaaccaataagagacagaaaactgaatggccactaatatgtgcttggttggtaaagaaaggttaagaaaaatgggaggagccaaaaatgcaaaccccaataaatacaccaacagactctcagatttccacatcagtgaaaacttcgccagcggacaacaactacgcagcaactccaatacaggaggacctggatttagcttcaacctgcacttaactccaacaccgccagattcagcaatacggacaccaagtccaacttggtcggaaatagaaaccgacataagagcctgctttggtgaaaactgtgcacccacaacaaaccttgaataa-3'5‘-tctgaattgtacatacatggttacacggatattgtattcctggtcgatttccagcagtttgtagtctcagccacagctgatttcttttgttgtttcgggagtggtaggagaagggctgggttatggtatggcgggaggagtagtttacataggggtcataggtgagggctgtggcctttgttacaaagttatcatctagaataacagcactggagcccactcccctgtcaccctgggtgatcggggagcagggccagaattcaaccttaacctttcttattctgtagtatgggcacagagcgggggtttgagccccctcctgggggaagaaagtcattaatattgaatctcatcatgtgactgtggttcgcttgatagtatatccgaaggtgcgggagaggcgggtgttgaagatgccatttttccttctccagcggtaacggtggcgggggtggacgagccaggggcggcggcggaggatctggccaagatggctgcgggggcggtgtcttcttctccggtaacgcctccttggatacgtcat-3'5Cy5-CGAGCCCTGCATCTACCANS1HEX-ACCAACCTGCACTTAACTCCAACAACGGATATTGTAKTCCTGGACTTCCAACCAAATAACAAAAGAAAFAM-CAGTGCCGAGGCCTACGTFAM-CAGTGCCGAGGCCTACRTG6），C.1.6簡短離心，收集附著在管壁及管蓋），），C.1.12將吸附柱放回收集管中，13,400×C.1.13將吸附柱放入一個新的RNase-Free離心管（1.5mmin，使吸附膜完全變干。向吸附膜的中間部位懸空滴加20-150μLRNase-Free