藥品微生物檢驗(yàn)技術(shù)全套可編輯PPT課件

本課件是可編輯的正常PPT課件

模塊一藥品微生物檢驗(yàn)前準(zhǔn)備

項(xiàng)目一無(wú)菌室的使用

項(xiàng)目二微生物檢驗(yàn)實(shí)訓(xùn)基礎(chǔ)

項(xiàng)目三微生物檢驗(yàn)安全

模塊二藥品安全性檢查

項(xiàng)目一無(wú)菌檢查

項(xiàng)目二微生物總數(shù)檢查

項(xiàng)目三控制菌檢查項(xiàng)目四熱原檢查

項(xiàng)目五細(xì)菌內(nèi)毒素檢查

項(xiàng)目六異常毒性檢查

項(xiàng)目七過(guò)敏反應(yīng)的測(cè)定

項(xiàng)目八溶血與凝聚檢查

模塊三藥品有效性檢查

項(xiàng)目一抑菌效力檢查項(xiàng)目二抗生素效價(jià)測(cè)定目錄本課件是可編輯的正常PPT課件《藥品微生物檢驗(yàn)技術(shù)》模塊一藥品微生物檢驗(yàn)前準(zhǔn)備本課件是可編輯的正常PPT課件

項(xiàng)目一無(wú)菌室的使用

項(xiàng)目二微生物檢驗(yàn)實(shí)訓(xùn)基礎(chǔ)

項(xiàng)目三微生物檢驗(yàn)安全

目錄本課件是可編輯的正常PPT課件項(xiàng)目一無(wú)菌室的使用任務(wù)無(wú)菌室的清潔與消毒本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)引入請(qǐng)思考

微生物污染一直是制藥行業(yè)用藥安全方面最突出的問(wèn)題，造成染菌的原因很多，如制劑原材料污染及生產(chǎn)環(huán)境不潔等。藥品染菌危害極大，在進(jìn)行相關(guān)操作時(shí)，如有無(wú)菌要求，應(yīng)務(wù)必保證?，F(xiàn)接到進(jìn)行藥品無(wú)菌檢測(cè)的任務(wù)，需要保證試驗(yàn)環(huán)境無(wú)菌。請(qǐng)對(duì)無(wú)菌室進(jìn)行清潔與消毒，并檢測(cè)潔凈度是否達(dá)到要求。如何實(shí)現(xiàn)無(wú)菌的條件呢？

本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)分析

無(wú)菌是指沒(méi)有活的微生物存在，防止微生物進(jìn)入機(jī)體或物體的方法稱(chēng)為無(wú)菌技術(shù)或無(wú)菌操作。小規(guī)模的無(wú)菌操作可以使用無(wú)菌接種箱或超凈工作臺(tái)完成；工作量大時(shí)則在無(wú)菌室內(nèi)配合使用超凈工作臺(tái)來(lái)完成，要求也更嚴(yán)格。

無(wú)菌室科學(xué)的布局是實(shí)現(xiàn)無(wú)菌操作的基礎(chǔ)保障。無(wú)菌室專(zhuān)辟于微生物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，可以用板材和玻璃建造。本課件是可編輯的正常PPT課件相關(guān)知識(shí)一、無(wú)菌室布局

無(wú)菌室通過(guò)空氣的凈化和空間的消毒為微生物檢驗(yàn)提供一個(gè)相對(duì)無(wú)菌的工作環(huán)境。無(wú)菌室通常包括緩沖間和工作間兩大部分。本課件是可編輯的正常PPT課件相關(guān)知識(shí)二、無(wú)菌室的使用-無(wú)菌室的清潔(1)清潔形式包括日清潔、周清潔、月清潔。若無(wú)菌室長(zhǎng)期處于停用狀態(tài)，可以每周清潔一次。下一次使用前，需進(jìn)行徹底的清潔。(2)清潔范圍包括無(wú)菌室緩沖間、工作間。(3)清潔工具:清潔布、水桶等。(4)消毒劑:0.2%的苯扎溴銨(商品名:新潔爾滅)溶液、75%乙醇(每月輪換使用)等。(5)清潔效果評(píng)價(jià):目測(cè)檢查，各種物體表面應(yīng)光潔，物品擺放整齊有序，地面無(wú)可見(jiàn)異物、污垢、積水，區(qū)域內(nèi)無(wú)廢棄物。(6)清潔程序:按照先里后外、先上后下、先物后地、先凈后臟的不可逆順序依次進(jìn)行清潔。本課件是可編輯的正常PPT課件相關(guān)知識(shí)二、無(wú)菌室的使用-無(wú)菌室的消毒滅菌方法(1)甲醛溶液和高錳酸鉀溶液混合熏蒸。(2)紫外線(xiàn)殺菌。(3)

0.1%氯化汞溶液消毒。(4)苯酚溶液噴霧。(5)石灰水擦拭。本課件是可編輯的正常PPT課件相關(guān)知識(shí)二、無(wú)菌室的使用-無(wú)菌室內(nèi)的設(shè)備使用超凈工作臺(tái)。（2）紫外線(xiàn)殺菌。本課件是可編輯的正常PPT課件相關(guān)知識(shí)三、無(wú)菌室潔凈度的檢測(cè)無(wú)菌室在消毒處理后、無(wú)菌操作前及操作過(guò)程中均需檢查空氣中菌落數(shù)，以此來(lái)判斷無(wú)菌室是否達(dá)到規(guī)定的潔凈度。浮游菌監(jiān)測(cè)依靠浮游菌采樣器收集懸游在空氣中的生物性粒子于適宜的培養(yǎng)基表面，經(jīng)培養(yǎng)后形成可見(jiàn)的菌落并計(jì)數(shù)，以判定該無(wú)菌室的微生物濃度。沉降菌監(jiān)測(cè)通過(guò)自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基表面，培養(yǎng)形成可見(jiàn)菌落并計(jì)數(shù)，以判定該無(wú)菌室的微生物濃度。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施一、制訂分工計(jì)劃序號(hào)工作內(nèi)容完成時(shí)間成員負(fù)責(zé)人1試驗(yàn)前物品準(zhǔn)備

2消毒試劑的配制

3無(wú)菌室的清潔消毒

根據(jù)任務(wù)要求，制定合理工作進(jìn)度計(jì)劃，并根據(jù)小組成員的特點(diǎn)進(jìn)行分工。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施二、試驗(yàn)前準(zhǔn)備設(shè)備、器材、試劑、用品規(guī)格數(shù)量用途無(wú)菌室

操作場(chǎng)所超凈工作臺(tái)

操作區(qū)域75％乙醇

擦拭消毒次氯酸鈉消毒液

擦拭消毒清潔布

水桶

補(bǔ)充1：

補(bǔ)充2：

本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施三、清潔與消毒項(xiàng)目?jī)?nèi)容備注清潔部位超凈工作臺(tái)、地面、墻面、天花板、門(mén)窗及玻璃、把手等清潔頻率操作前、操作后、每?jī)芍艿淖詈笠粋€(gè)工作日清潔工具水桶、拖布、毛刷、海綿、清潔布、橡膠手套等清潔劑0.2％苯扎溴銨溶液、75％乙醇每月輪換使用清潔方法超凈工作臺(tái)用濕紗布擦拭后，用消毒劑擦拭消毒桌面用濕紗布擦拭后，用消毒劑擦拭消毒地面用清潔劑溶液擦拭后，用消毒劑擦拭消毒空氣打開(kāi)超凈工作臺(tái)，使其運(yùn)轉(zhuǎn)，開(kāi)啟超凈工作臺(tái)紫外線(xiàn)燈及無(wú)菌室紫外線(xiàn)燈照射消毒30min，關(guān)閉紫外線(xiàn)燈后，方可進(jìn)行操作清潔工具用洗滌劑清洗干凈，并用消毒劑消毒后，置于指定位置晾干備用本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施四、無(wú)菌室消毒清潔記錄清潔記錄清潔對(duì)象方法操作人日期工作間超凈工作臺(tái)、操作臺(tái)地面、墻面紫外線(xiàn)燈、日光燈緩沖間操作臺(tái)地面、墻面紫外線(xiàn)燈、日光燈過(guò)道地面、墻面紫外線(xiàn)燈、日光燈更衣室地面、墻面紫外線(xiàn)燈、日光燈備注:方法用對(duì)應(yīng)符號(hào)表示?！?用無(wú)菌抹布蘸取75%乙醇擦拭，○-用無(wú)菌抹布蘸取0.2%苯扎溴銨溶液擦拭，√-用甲醛及高錳酸鉀熏蒸消毒。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)測(cè)評(píng)考核內(nèi)容考核標(biāo)準(zhǔn)配分得分任務(wù)分工和準(zhǔn)備現(xiàn)團(tuán)隊(duì)合作精神5

實(shí)施前檢查各類(lèi)物品5

清潔過(guò)程按照正確順序清潔10

正確使用清潔工具10

消毒過(guò)程按要求正確配制消毒劑10

按規(guī)程完成超凈工作臺(tái)清潔消毒10

按規(guī)程完成空氣、地面等消毒10

經(jīng)檢測(cè)符合無(wú)菌室使用要求10完成各項(xiàng)工作記錄10任務(wù)完成情況按時(shí)完成任務(wù)10

安全生產(chǎn)完成過(guò)程符合安全規(guī)范10

合計(jì)100本課件是可編輯的正常PPT課件思考與練習(xí)簡(jiǎn)答題1.在進(jìn)入無(wú)菌室進(jìn)行相關(guān)操作之前應(yīng)該做什么？2.無(wú)菌室應(yīng)具備的條件有哪些？本課件是可編輯的正常PPT課件項(xiàng)目二微生物檢驗(yàn)實(shí)訓(xùn)基礎(chǔ)任務(wù)常用接種方法的練習(xí)

本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)引入請(qǐng)思考微生物在自然界中呈混雜狀態(tài)存在，要獲得所需菌種，必須把它們分離出來(lái)。在保存菌種時(shí)，菌種不慎受到污染也應(yīng)分離純化。某實(shí)驗(yàn)室大腸埃希菌在保藏過(guò)程中，因保藏方法不當(dāng)而被污染，現(xiàn)在需要進(jìn)行分離純化。請(qǐng)同學(xué)們?cè)跓o(wú)菌環(huán)境下，嘗試采用多種方法實(shí)施菌種接種，實(shí)現(xiàn)大腸埃希菌分離純化。經(jīng)培養(yǎng)后觀(guān)察菌落特征，并記錄結(jié)果。

本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)分析

完成大腸埃希菌的分離及純化，首先需要掌握微生物分離純化的基本原理，即將待分離的樣品進(jìn)行一定程度的稀釋?zhuān)刮⑸铮ɑ蜴咦樱┍M量以分散狀態(tài)存在，然后長(zhǎng)成一個(gè)個(gè)純種單菌落。上述工作需要依靠接種操作，因此掌握常見(jiàn)的微生物接種方法對(duì)獲得大腸埃希菌單菌落是非常必要的。本課件是可編輯的正常PPT課件相關(guān)知識(shí)-無(wú)菌操作要求無(wú)菌操作的要求：操作前將操作空間中的細(xì)菌和病毒等微生物殺滅；操作過(guò)程中保證操作空間與外界隔離，避免微生物侵入。本課件是可編輯的正常PPT課件相關(guān)知識(shí)-微生物常用的接種工具與接種方法1.接種工具本課件是可編輯的正常PPT課件相關(guān)知識(shí)-微生物常用的接種工具與接種方法2.接種方法（1）斜面接種。（2）液體接種。（3）劃線(xiàn)接種。（4）穿刺接種。（5）涂布接種。本課件是可編輯的正常PPT課件相關(guān)知識(shí)-培養(yǎng)基培養(yǎng)基是人工配制的適合微生物生長(zhǎng)繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)，應(yīng)含有微生物生長(zhǎng)發(fā)育所需的水分、碳源、氮源及各種離子、微量元素。此外，培養(yǎng)基還應(yīng)具有適宜的酸堿度（pH值）、滲透壓和一定的緩沖能力。1.培養(yǎng)基的制備過(guò)程:

稱(chēng)取組分-溶解-調(diào)pH值-過(guò)濾-分裝-包扎-標(biāo)記-消毒或滅菌—擺斜面或倒平板。2.培養(yǎng)基的制備原則（1）選擇適宜的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（2）營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度及配比合適（3）條件適宜（4）滅菌處理本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施一、制訂工作計(jì)劃序號(hào)工作內(nèi)容完成時(shí)間成員負(fù)責(zé)人1培養(yǎng)基制備

2培養(yǎng)基滅菌

3菌種準(zhǔn)備

4物品準(zhǔn)備5培養(yǎng)及觀(guān)察6結(jié)果判斷根據(jù)任務(wù)要求，制定合理工作進(jìn)度計(jì)劃，并根據(jù)小組成員的特點(diǎn)進(jìn)行分工。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施二、試驗(yàn)前準(zhǔn)備本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施三、接種1.斜面接種本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施三、接種2.劃線(xiàn)接種本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施三、接種3.涂布接種本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)測(cè)評(píng)按列任務(wù)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行測(cè)評(píng)，并做好記錄。本課件是可編輯的正常PPT課件思考與練習(xí)一、選擇題1.下列有關(guān)劃線(xiàn)接種的說(shuō)法中，正確的是（）。Ａ取多量標(biāo)本接種Ｂ于平板1/2處密集涂布Ｃ局部密集涂布后，來(lái)回作曲線(xiàn)連續(xù)劃線(xiàn)Ｄ線(xiàn)與線(xiàn)間應(yīng)有交叉2.如圖所示是微生物劃線(xiàn)接種，劃線(xiàn)的順序?yàn)椋?、２、３、４、５。下列說(shuō)法正確的是（）。Ａ操作前要將接種環(huán)放在火焰邊灼燒滅菌Ｂ劃線(xiàn)操作須在火焰上進(jìn)行Ｃ在５區(qū)域中才可以得到所需菌落Ｄ在１、２、３、４、５區(qū)域中劃線(xiàn)前后都要對(duì)接種環(huán)滅菌３.分離培養(yǎng)細(xì)菌一般需要（）。Ａ４～８ｈＢ８～１２ｈＣ１６～２０ｈＤ２～３天二、簡(jiǎn)答題1.劃線(xiàn)接種的主要目的是什么？2.無(wú)菌物品的管理原則有哪些？本課件是可編輯的正常PPT課件項(xiàng)目三微生物檢驗(yàn)安全任務(wù)微生物檢驗(yàn)的安全防護(hù)

本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)引入最美的“大白”和“小藍(lán)”

在抗擊新型冠狀病毒感染疫情這場(chǎng)戰(zhàn)役中，防疫人員的身影處處可見(jiàn)，人們親切地稱(chēng)他們?yōu)椤按蟀住薄靶∷{(lán)”。他們不分日夜地做好流調(diào)溯源、人員轉(zhuǎn)運(yùn)、樣本采集、核酸檢測(cè)、環(huán)境消殺、醫(yī)療救治……如果說(shuō)他們是無(wú)畏的戰(zhàn)士，那么防護(hù)服便是戰(zhàn)士的“生命鎧甲”！防護(hù)服采用不光滑的透氣性材料（聚丙烯之類(lèi)的化學(xué)合成材料）制作，可以阻止可能攜帶病原體的分泌物、噴濺物、顆粒物等接觸人體，有效保護(hù)防疫人員的健康，使防疫人員穿著時(shí)減少自身感染與病毒擴(kuò)散的風(fēng)險(xiǎn)。在藥品微生物檢驗(yàn)中，也應(yīng)按要求做好安全防護(hù)。在操作過(guò)程中，應(yīng)正確穿戴防護(hù)服、手套和口罩，安全使用實(shí)驗(yàn)室中的水、電、氣；采用正確方法捉拿實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，防止動(dòng)物意外損傷，禁止對(duì)動(dòng)物采取粗暴動(dòng)作。若操作對(duì)象是致病微生物，為防止其感染操作人員或污染實(shí)驗(yàn)室及周?chē)沫h(huán)境，培養(yǎng)物及菌種的無(wú)害化處理尤為重要。當(dāng)前無(wú)菌室的工作臺(tái)、培養(yǎng)箱中有微生物培養(yǎng)物和菌種，現(xiàn)需要對(duì)它們以及試驗(yàn)中使用過(guò)的工具、容器等進(jìn)行無(wú)害化處理，請(qǐng)大家學(xué)習(xí)相關(guān)知識(shí)，在老師的指導(dǎo)下，一起完成本項(xiàng)目任務(wù)。本課件是可編輯的正常PPT課件相關(guān)知識(shí)-實(shí)驗(yàn)室水、電、氣的安全處理方法用電安全用水安全用氣安全本課件是可編輯的正常PPT課件相關(guān)知識(shí)-個(gè)體防護(hù)裝備實(shí)驗(yàn)室個(gè)體防護(hù)裝備個(gè)體防護(hù)裝備的種類(lèi)個(gè)體防護(hù)裝備的使用本課件是可編輯的正常PPT課件相關(guān)知識(shí)-病原微生物實(shí)驗(yàn)室分級(jí)與個(gè)體防護(hù)一級(jí)防護(hù)穿工作服、工作鞋→手清洗或手消毒→戴一次性隔離帽→戴防護(hù)口罩→穿一次性隔離衣→戴一次性乳膠手套。二級(jí)防護(hù)穿分體式衣和拖鞋→手清洗或手消毒→戴一次性隔離帽→戴防護(hù)口罩→穿防護(hù)服→戴一次性乳膠手套→換隔離鞋→穿一次性鞋套，此時(shí)可在半污染區(qū)工作；進(jìn)入污染區(qū)，需要再穿一次性隔離衣→戴一次性乳膠手套→穿鞋套；對(duì)病原菌實(shí)施近距離操作時(shí),需戴防護(hù)眼鏡。三級(jí)防護(hù)在二級(jí)防護(hù)著裝基礎(chǔ)上加戴全面型呼吸防護(hù)器。四級(jí)防護(hù)防護(hù)服應(yīng)為正壓防護(hù)服。根據(jù)實(shí)驗(yàn)室對(duì)病原微生物的生物安全防護(hù)水平，并依照實(shí)驗(yàn)室生物安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定，將病原微生物實(shí)驗(yàn)室分為一級(jí)（BSL-1）、二級(jí)（BSL-2）、三級(jí)（BSL-3）、四級(jí)（BSL-4）。本課件是可編輯的正常PPT課件相關(guān)知識(shí)-培養(yǎng)物的無(wú)害處理廢液的處理廢氣的處理固體廢棄物的處理

微生物檢驗(yàn)的操作對(duì)象若是致病微生物，為了保障實(shí)驗(yàn)室的生物安全，必須及時(shí)對(duì)操作過(guò)程中產(chǎn)生的廢液、廢氣和固體廢棄物進(jìn)行處理，防止其感染檢驗(yàn)人員或污染實(shí)驗(yàn)室及周?chē)沫h(huán)境。本課件是可編輯的正常PPT課件相關(guān)知識(shí)-常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的捉拿方法小鼠的捉拿方法大鼠的捉拿方法豚鼠的捉拿方法兔的捉拿方法狗的捉拿方法正確地捉拿實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，是為了不損害動(dòng)物健康，不影響觀(guān)察指標(biāo)，并防止被動(dòng)物咬傷，保證后續(xù)操作順利進(jìn)行。捉拿動(dòng)物的方法根據(jù)動(dòng)物種類(lèi)而定。捉拿動(dòng)物前，必須對(duì)各種動(dòng)物的一般習(xí)性有所了解，捉拿時(shí)既要小心仔細(xì)，不能粗暴，又要大膽敏捷，達(dá)到正確捉拿動(dòng)物的目的。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施一、制訂工作計(jì)劃工作內(nèi)容完成時(shí)間成員負(fù)責(zé)人無(wú)菌室滅菌

培養(yǎng)皿滅菌

器具、器械滅菌

方法適用性試驗(yàn)根據(jù)任務(wù)要求，制定合理工作進(jìn)度計(jì)劃，并根據(jù)小組成員的特點(diǎn)進(jìn)行分工。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施一、試驗(yàn)前準(zhǔn)備設(shè)備、器材、試劑規(guī)格數(shù)量用途無(wú)菌室

操作場(chǎng)所

高壓蒸汽滅菌器

滅菌設(shè)備防護(hù)服

隔離微生物手套隔離微生物口罩隔離微生物補(bǔ)充1補(bǔ)充2補(bǔ)充3本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施三、處理方法選擇

1.無(wú)菌室滅菌

培養(yǎng)、觀(guān)察微生物或更換培養(yǎng)液時(shí)，必須從各方面防止任何污染物進(jìn)入培養(yǎng)液或容器，所以無(wú)菌室的滅菌是至關(guān)重要的。無(wú)菌室的污染來(lái)源主要是空氣中的細(xì)菌和真菌孢子，因此長(zhǎng)期停用后的無(wú)菌室應(yīng)使用高錳酸鉀+甲醛進(jìn)行熏蒸滅菌。經(jīng)常使用的無(wú)菌室，每次使用都應(yīng)進(jìn)行地面衛(wèi)生清潔，并用紫外線(xiàn)燈照射30min進(jìn)行空氣滅菌。超凈工作臺(tái)每次操作前用紫外線(xiàn)燈照射30min，然后用75%乙醇擦拭。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施三、處理方法選擇2.培養(yǎng)皿滅菌使用高壓蒸汽滅菌器滅菌時(shí)，將有培養(yǎng)物和菌種的培養(yǎng)皿集中于玻璃容器內(nèi)，放入底部有一定量（淹沒(méi)加熱管）涼水的高壓蒸汽滅菌器內(nèi)，經(jīng)一定程度的加壓排凈滅菌器內(nèi)冷空氣，使蒸汽到達(dá)各個(gè)部位，保證徹底滅菌。然后繼續(xù)加壓加熱，當(dāng)壓力表讀數(shù)達(dá)到103~104kPa、溫度為121℃時(shí)，保持15~40min即可。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施三、處理方法選擇4.玻璃器皿、塑料器皿和器械

本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)測(cè)評(píng)考核內(nèi)容考核標(biāo)準(zhǔn)配分得分人員防護(hù)能正確穿脫個(gè)體防護(hù)裝備10能正確處理使用過(guò)的防護(hù)裝備10方法選擇能正確選擇適合的滅菌方法10

無(wú)害化處理能正確操作高壓蒸汽滅菌器15

能正確完成高壓蒸汽滅菌15

了解相關(guān)物品的無(wú)害化處理方法10

記錄填寫(xiě)能正確客觀(guān)填寫(xiě)過(guò)程及結(jié)果記錄10

清場(chǎng)能熟練規(guī)范操作10操作過(guò)程中具有安全意識(shí)10合計(jì)100任務(wù)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)本課件是可編輯的正常PPT課件思考與練習(xí)一、選擇題1.下列關(guān)于高壓蒸汽滅菌法的說(shuō)法中，不正確的是（）。Ａ適用于對(duì)耐高溫和耐濕物品的滅菌Ｂ可殺滅細(xì)菌、芽孢Ｃ通常滅菌壓力為205kPaＤ通常滅菌溫度為121℃2.（）適用于不耐高熱的物品滅菌。Ａ火焰滅菌法Ｂ干熱滅菌法Ｃ高壓蒸汽滅菌法Ｄ化學(xué)藥劑法二、簡(jiǎn)答題1.簡(jiǎn)述高壓蒸汽滅菌法的原理和步驟。2.微生物檢驗(yàn)的安全防護(hù)包括哪些方面？本課件是可編輯的正常PPT課件《藥品微生物檢驗(yàn)技術(shù)》謝謝本課件是可編輯的正常PPT課件《藥品微生物檢驗(yàn)技術(shù)》模塊二藥品安全性檢查項(xiàng)目一無(wú)菌檢查本課件是可編輯的正常PPT課件

任務(wù)一氯化鈉注射液無(wú)菌檢查-直接接種法

任務(wù)二喜炎平注射液無(wú)菌檢查-薄膜過(guò)濾法

目錄本課件是可編輯的正常PPT課件項(xiàng)目二無(wú)菌檢查任務(wù)一氯化鈉注射液無(wú)菌檢查-直接接種法

本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)引入請(qǐng)思考氯化鈉注射液的主要作用是補(bǔ)充電解質(zhì)，調(diào)節(jié)體內(nèi)的水、電解質(zhì)平衡。很多藥物需要溶解在氯化鈉注射液中，才能進(jìn)行肌內(nèi)注射或者靜脈注射，并直接進(jìn)入血液循環(huán)。對(duì)氯化鈉注射液有什么要求呢？

現(xiàn)有一批氯化鈉注射液，需按照抽樣標(biāo)準(zhǔn)抽取一定數(shù)量并對(duì)這一批抽檢品是否無(wú)菌進(jìn)行判斷。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)分析本任務(wù)以氯化鈉注射液作為研究對(duì)象，介紹氯化鈉注射液無(wú)菌檢查方法及操作，工作內(nèi)容及要求見(jiàn)下表。本課件是可編輯的正常PPT課件

無(wú)菌檢查法的檢查對(duì)象是《中國(guó)藥典》２０２０年版要求無(wú)菌的藥品、生物制品、醫(yī)療器械、原料、輔料及其他品種。相關(guān)知識(shí)-無(wú)菌檢查法檢查對(duì)象

單向流空氣區(qū)域、工作臺(tái)面及受控環(huán)境應(yīng)定期按醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度確認(rèn)。檢查環(huán)境

無(wú)菌檢查可以確保藥品的質(zhì)量，間接反映藥品生產(chǎn)企業(yè)的生產(chǎn)條件、工藝方法和管理水平，反映藥物不同產(chǎn)地、不同批次之間的質(zhì)量差異。檢查意義本課件是可編輯的正常PPT課件本次任務(wù)所用的方法是直接接種法，即通過(guò)無(wú)菌操作技術(shù)將供試品直接接種至相應(yīng)培養(yǎng)基上，給予供試品中細(xì)菌、真菌充分的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)與適宜的生長(zhǎng)環(huán)境，使微生物從單個(gè)狀態(tài)培養(yǎng)成肉眼可見(jiàn)的菌群。相關(guān)知識(shí)-直接接種法

直接接種法本課件是可編輯的正常PPT課件硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基主要用于厭氧菌的培養(yǎng)，也可用于需氧菌的培養(yǎng)；相關(guān)知識(shí)-檢查用培養(yǎng)基

胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基用于真菌和需氧菌的培養(yǎng)。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施一、制訂工作計(jì)劃序號(hào)工作內(nèi)容完成時(shí)間成員負(fù)責(zé)人1培養(yǎng)基制備

2培養(yǎng)基無(wú)菌檢查

3培養(yǎng)基靈敏度檢查

4方法適用性試驗(yàn)5供試品接種6對(duì)照試驗(yàn)7培養(yǎng)及觀(guān)察8結(jié)果判斷根據(jù)任務(wù)要求，制定合理工作進(jìn)度計(jì)劃，并根據(jù)小組成員的特點(diǎn)進(jìn)行分工。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施二、試驗(yàn)前準(zhǔn)備設(shè)備、器材、試劑規(guī)格數(shù)量用途無(wú)菌室

操作場(chǎng)所超凈工作臺(tái)

操作區(qū)域酒精燈

局部無(wú)菌環(huán)境75%乙醇

擦拭消毒氯化鈉注射液

供試品培養(yǎng)基

提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)移液器

定量移取供試品試管、試管架

容器、支架培養(yǎng)箱

微生物培養(yǎng)菌種

靈敏度檢查、陽(yáng)性對(duì)照本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施三、試驗(yàn)操作培養(yǎng)基的制備依據(jù)培養(yǎng)基培養(yǎng)及制備要求，按照計(jì)算用量-稱(chēng)量-溶解-調(diào)pH值-分裝-滅菌完成。注意特殊物質(zhì)的溶解方式及順序，注意分裝是培養(yǎng)基裝量的高度。

計(jì)算用量

稱(chēng)量

溶解

調(diào)pH值

分裝

滅菌本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施三、試驗(yàn)操作培養(yǎng)基的無(wú)菌檢查制備好的培養(yǎng)基每批隨機(jī)取不少于５支（瓶），放至相應(yīng)培養(yǎng)箱中培養(yǎng)１４天，觀(guān)察培養(yǎng)基狀態(tài)。如果培養(yǎng)基混濁，則表明培養(yǎng)基有菌，不能用；如果培養(yǎng)基澄清，則表明培養(yǎng)基無(wú)菌，符合培養(yǎng)基無(wú)菌檢查標(biāo)準(zhǔn)。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施三、試驗(yàn)操作培養(yǎng)基的靈敏度檢查菌懸液制備培養(yǎng)基靈敏度檢查所用的菌株傳代次數(shù)不得超過(guò)５代（從菌種保存中心獲得的干燥菌種為第０代），并采用適宜的菌種保藏技術(shù)進(jìn)行保存和確認(rèn)，以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施三、試驗(yàn)操作培養(yǎng)基的靈敏度檢查菌種培養(yǎng)基培養(yǎng)時(shí)間制備方式金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌接種其新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上３０～３５℃培養(yǎng)１８～２４小時(shí)上述培養(yǎng)物用ｐＨ7.0無(wú)菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液或0.9％無(wú)菌氯化鈉溶液制成適宜濃度菌懸液生孢梭菌接種其新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中白色念珠菌接種其新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上２０～２５℃培養(yǎng)２～３天黑曲霉接種至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基或馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上２０～２５℃培養(yǎng)５～７天或直到獲得豐富的孢子加入適量含0.05％（ｍＬ／ｍＬ）聚山梨酯80的ｐＨ7.0無(wú)菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液將孢子洗脫。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施三、試驗(yàn)操作培養(yǎng)基靈敏度檢查操作培養(yǎng)基名稱(chēng)接種菌種試管數(shù)空白對(duì)照培養(yǎng)時(shí)間結(jié)果判斷硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（３０～３５℃培養(yǎng)）不大于１００ｃｆｕ的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌每種菌種各２支１支不接種菌種的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基接種細(xì)菌的培養(yǎng)基管培養(yǎng)時(shí)間不超過(guò)３天，接種真菌的培養(yǎng)基管培養(yǎng)時(shí)間不得超過(guò)５天空白對(duì)照管應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。若加菌的培養(yǎng)基管均生長(zhǎng)良好，判該培養(yǎng)基的靈敏度檢查符合規(guī)定。如果加菌培養(yǎng)基管有無(wú)菌生長(zhǎng)的現(xiàn)象，則培養(yǎng)基的靈敏度檢查不符合規(guī)定，不能使用胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（２０～２５℃培養(yǎng)）不大于１００ｃｆｕ的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉每種菌種各２支１支不接種菌種的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施三、試驗(yàn)操作方法適用性試驗(yàn)方法適用性試驗(yàn)的意義進(jìn)行產(chǎn)品無(wú)菌檢查時(shí)，應(yīng)進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)，以確認(rèn)所采用的方法適合于該產(chǎn)品的無(wú)菌檢查。若檢驗(yàn)程序或產(chǎn)品發(fā)生變化可能影響檢驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)重新進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)。方法適用性試驗(yàn)對(duì)每一試驗(yàn)菌應(yīng)逐一進(jìn)行方法確認(rèn)。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施三、試驗(yàn)操作方法適用性試驗(yàn)-操作培養(yǎng)基名稱(chēng)接種菌種接種方法培養(yǎng)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基不大于１００ｃｆｕ的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、生孢梭菌每種菌種各２管，其中１管接入每支培養(yǎng)基規(guī)定的供試品接種量，另１管作為對(duì)照置于３０～３５℃培養(yǎng)箱，其中生孢梭菌需置于厭氧培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)時(shí)間不得超過(guò)５天胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基不大于１００ｃｆｕ的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉置于２０～２５℃培養(yǎng)箱，培養(yǎng)時(shí)間不得超過(guò)５天結(jié)果判斷１與對(duì)照管比較，如含供試品各容器中的試驗(yàn)菌均生長(zhǎng)良好，則說(shuō)明供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下無(wú)抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不計(jì)，可照此檢查方法和檢查條件進(jìn)行供試品的無(wú)菌檢查２如含供試品的任一容器中試驗(yàn)菌生長(zhǎng)微弱、緩慢或不生長(zhǎng)，則說(shuō)明供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下有抑菌作用，應(yīng)采用增加培養(yǎng)基用量、使用中和劑或滅活劑等方法，消除供試品的抑菌作用，并重新進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施三、試驗(yàn)操作供試品的取樣檢驗(yàn)數(shù)量

檢驗(yàn)數(shù)量指一次試驗(yàn)所用供試品最小包裝容器的數(shù)量。除另有規(guī)定外，出廠(chǎng)產(chǎn)品及上市產(chǎn)品按《中國(guó)藥典》２０２０年版最少檢驗(yàn)數(shù)量規(guī)定進(jìn)行抽樣。檢驗(yàn)量

檢驗(yàn)量即一次試驗(yàn)所用的供試品數(shù)量（ｇ、ｍＬ或ｃｍ２）。若每支（瓶）供試品的裝量按規(guī)定足夠接種兩種培養(yǎng)基，則應(yīng)分別接種至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施三、試驗(yàn)操作供試品的取樣樣品的抽樣要求：

１）須采用無(wú)菌操作技術(shù)在具有無(wú)菌條件的特定區(qū)域中進(jìn)行取樣，防止樣品受到微生物污染而出現(xiàn)假陽(yáng)性的結(jié)果。２）應(yīng)監(jiān)測(cè)抽樣環(huán)境并記錄，同時(shí)記錄采樣時(shí)間。３）抽樣的任何消毒過(guò)程（如抽樣點(diǎn)的消毒）不能影響樣品中微生物的檢出。４）所抽樣品應(yīng)有清晰標(biāo)識(shí)，注明樣品名稱(chēng)、批號(hào)、抽樣日期、采樣容器、抽樣人等信息。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施三、試驗(yàn)操作供試品的處理與接種除生物制品外，一般樣品無(wú)菌檢查時(shí)兩種培養(yǎng)基接種的瓶或支數(shù)相等；生物制品無(wú)菌檢查時(shí)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基接種的瓶或支數(shù)為２∶１。除另有規(guī)定外，每個(gè)容器中培養(yǎng)基接種的供試品體積不得大于培養(yǎng)基體積的10％，同時(shí)，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基每管裝量不少于15ｍＬ，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基每管裝量不少于10ｍＬ。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施三、試驗(yàn)操作供試品的處理與接種氯化鈉注射液接種操作培養(yǎng)基供試品陽(yáng)性對(duì)照陰性對(duì)照培養(yǎng)條件硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基氯化鈉注射液分別接種與供試品等量的金黃色葡萄球菌（不大于100cfu）至培養(yǎng)基中未接種的培養(yǎng)基３０～３５℃培養(yǎng)１４天胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基２０～２５℃培養(yǎng)１４天本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施四、結(jié)果判斷結(jié)果觀(guān)察培養(yǎng)期間應(yīng)定期觀(guān)察，并記錄是否有菌生長(zhǎng)。若在加入供試品后或在培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)基出現(xiàn)混濁，培養(yǎng)14天后，不能從外觀(guān)上判斷有無(wú)微生物生長(zhǎng)，可取該培養(yǎng)液不少于１ｍＬ轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中，將原始培養(yǎng)物和新接種的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)不少于４天，觀(guān)察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現(xiàn)混蝕；或取培養(yǎng)液（物）涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌，必要時(shí)做菌種鑒定。陽(yáng)性對(duì)照管所接種菌應(yīng)生長(zhǎng)良好，陰性對(duì)照管不得有菌生長(zhǎng)。否則試驗(yàn)無(wú)效。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施四、結(jié)果判斷結(jié)果觀(guān)察只有符合下列至少一個(gè)條件時(shí)，方可認(rèn)為試驗(yàn)無(wú)效：（１）無(wú)菌檢查試驗(yàn)所用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無(wú)菌檢查法的要求。（２）回顧無(wú)菌試驗(yàn)過(guò)程，發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染的因素。（３）在陰性對(duì)照中觀(guān)察到微生物生長(zhǎng)。（４）供試品管中生長(zhǎng)的微生物經(jīng)鑒定后，確證是無(wú)菌試驗(yàn)中所使用的物品和（或）無(wú)菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的。本課件是可編輯的正常PPT課件項(xiàng)目二無(wú)菌檢查任務(wù)二喜炎平注射液無(wú)菌檢查-薄膜過(guò)濾法

本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)引入請(qǐng)思考喜炎平注射液是直接輸入靜脈的液體滅菌制劑，通常包裝于玻璃瓶、塑料瓶或軟袋中，使用時(shí)通過(guò)輸液器持續(xù)滴注輸入靜脈。喜炎平注射液成分中有穿心蓮內(nèi)酯磺化物，穿心蓮內(nèi)酯能清熱解毒、消炎止痛，具有一定抑菌作用?，F(xiàn)有一批喜炎平注射液，需按照抽樣標(biāo)準(zhǔn)抽取一定數(shù)量并對(duì)這一批抽檢品是否無(wú)菌進(jìn)行判斷。。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)分析（１）喜炎平注射液中可能存在的微生物包括細(xì)菌、真菌。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基主要用于厭氧菌的培養(yǎng)，也可用于需氧菌的培養(yǎng)；胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基用于真菌和需氧菌的培養(yǎng)。（２）按照培養(yǎng)基配方完成培養(yǎng)基制備，對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行無(wú)菌檢查、靈敏度檢查，確認(rèn)培養(yǎng)基適用于該試驗(yàn)后，該培養(yǎng)基才能被采用。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)分析直接接種法與薄膜過(guò)濾法優(yōu)、缺點(diǎn)比較方法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)直接接種法供試品用量較少，比較節(jié)約不能有效除去供試品中的抑菌成分，易出現(xiàn)假陰性結(jié)果薄膜過(guò)濾法操作環(huán)境相對(duì)封閉，可以有效減少外部環(huán)境的影響；能有效除去抑菌成分的影響，適用于含抑菌成分的供試品檢查消耗的供試品量較多本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)分析（４）薄膜過(guò)濾法采用無(wú)菌操作技術(shù)將供試品通過(guò)集菌儀過(guò)濾后再加入相應(yīng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)、觀(guān)察，需要進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)，以確認(rèn)該方法適用于喜炎平注射液的無(wú)菌檢查。（５）按照《中國(guó)藥典》２０２０年版規(guī)定，確定喜炎平注射液的檢驗(yàn)數(shù)量、檢驗(yàn)量，保證供試品抽樣的客觀(guān)性，在無(wú)菌室中完成供試品檢查。放置相應(yīng)培養(yǎng)箱培養(yǎng)，通過(guò)觀(guān)察培養(yǎng)基是混濁還是澄清來(lái)判斷供試品是否合格。本課件是可編輯的正常PPT課件

薄膜過(guò)濾法:一般采用封閉式薄膜過(guò)濾器,根據(jù)供試品及其溶劑的特性選擇濾膜材質(zhì)。無(wú)菌檢查用的濾膜孔徑應(yīng)不大于0.45μｍ，濾膜直徑約為50ｍｍ。使用時(shí)，應(yīng)保證濾膜在過(guò)濾前后的完整性。采用無(wú)菌操作技術(shù)使供試液通過(guò)集菌儀，供試品中可能存在的微生物被截留收集在濾膜上，通過(guò)沖洗液沖洗濾膜除去供試品中的抑菌成分。把所需培養(yǎng)基通過(guò)進(jìn)樣管道直接注入集菌培養(yǎng)器中，放置規(guī)定的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)、觀(guān)察，以檢驗(yàn)供試品是否無(wú)菌。相關(guān)知識(shí)-薄膜過(guò)濾法

薄膜過(guò)濾法全封閉預(yù)滅菌不易受污染本課件是可編輯的正常PPT課件相關(guān)知識(shí)-集菌儀的使用集菌儀的操作過(guò)程：（１）取出一次性培養(yǎng)器，確認(rèn)包裝完好后在無(wú)菌室內(nèi)打開(kāi)無(wú)菌包裝。（２）將一次性培養(yǎng)器逐個(gè)插放在不銹鋼排液槽上。（３）將一次性培養(yǎng)器的彈性軟管裝入集菌儀的蠕動(dòng)泵頭，要求定位準(zhǔn)確，軟管走勢(shì)順暢。（４）將進(jìn)樣針插入樣品中，啟動(dòng)集菌儀，過(guò)濾集菌。若樣品中含有抑菌物質(zhì)，應(yīng)用適量緩沖液沖洗濾膜，方法與集菌過(guò)程相同。本課件是可編輯的正常PPT課件相關(guān)知識(shí)-集菌儀的使用（５）完成集菌后，開(kāi)啟已滅菌的培養(yǎng)基，插入針頭。（６）摘下一次性培養(yǎng)器頂部空氣濾器開(kāi)口的膠塞，套在一次性培養(yǎng)器的底口上，泵入相應(yīng)的培養(yǎng)基。（７）用夾子夾閉與一次性培養(yǎng)器連接部的軟管，留出５～６ｃｍ，剪除其余部分，并將開(kāi)口端插在空氣濾器的開(kāi)口上。（８）將培養(yǎng)器置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)并觀(guān)察。本課件是可編輯的正常PPT課件相關(guān)知識(shí)-集菌儀的使用集菌儀使用注意事項(xiàng)（１）在集菌儀泵頭扣緊之前，嚴(yán)禁啟動(dòng)開(kāi)關(guān)，否則可能導(dǎo)致手部受傷。（２）若無(wú)菌室采用化學(xué)消毒劑消毒，應(yīng)將儀器移至封閉罩內(nèi)或搬出無(wú)菌室，以免損壞電子部件和儀器表面。（３）在進(jìn)樣針插入瓶裝流體樣品前應(yīng)先開(kāi)機(jī)，然后倒置容器瓶，以保持進(jìn)樣針上的過(guò)濾膜干燥，氣流暢通，正常進(jìn)液。（４）若進(jìn)液管內(nèi)出現(xiàn)過(guò)多氣泡，應(yīng)將泵速降低，并檢查進(jìn)氣濾膜是否被浸泡，若不能進(jìn)液，則檢查進(jìn)樣針是否暢通。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施一、制訂工作計(jì)劃序號(hào)工作內(nèi)容完成時(shí)間成員負(fù)責(zé)人1培養(yǎng)基制備

2培養(yǎng)基無(wú)菌檢查

3培養(yǎng)基靈敏度檢查

4方法適用性試驗(yàn)5供試品集菌6對(duì)照試驗(yàn)7培養(yǎng)及觀(guān)察8結(jié)果判斷根據(jù)任務(wù)要求，制定合理工作進(jìn)度計(jì)劃，并根據(jù)小組成員的特點(diǎn)進(jìn)行分工。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施二、試驗(yàn)前準(zhǔn)備設(shè)備、器材、試劑規(guī)格數(shù)量用途無(wú)菌室

操作場(chǎng)所超凈工作臺(tái)

操作區(qū)域酒精燈

局部無(wú)菌環(huán)境75%乙醇

擦拭消毒喜炎平注射液

供試品培養(yǎng)基

提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)緩沖液

沖洗濾膜集菌儀

截留樣品中的微生物培養(yǎng)箱

微生物培養(yǎng)菌種

靈敏度檢查、陽(yáng)性對(duì)照本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施三、試驗(yàn)操作培養(yǎng)基的制備依據(jù)培養(yǎng)基培養(yǎng)及制備要求，按照計(jì)算用量-稱(chēng)量-溶解-調(diào)pH值-分裝-滅菌完成。注意特殊物質(zhì)的溶解方式及順序，注意分裝是培養(yǎng)基裝量的高度。

計(jì)算用量

稱(chēng)量

溶解

調(diào)pH值

分裝

滅菌本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施三、試驗(yàn)操作方法適用性試驗(yàn)-操作培養(yǎng)基名稱(chēng)接種菌種接種方法培養(yǎng)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基不大于１００ｃｆｕ的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、生孢梭菌按供試品的無(wú)菌檢查要求，取每種培養(yǎng)基規(guī)定接種的供試品總量，采用薄膜過(guò)濾法過(guò)濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中加入不大于１００ｃｆｕ的試驗(yàn)菌，過(guò)濾置于３０～３５℃培養(yǎng)箱，其中生孢梭菌需置于厭氧培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)時(shí)間不得超過(guò)５天胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基不大于１００ｃｆｕ的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉置于２０～２５℃培養(yǎng)箱，培養(yǎng)時(shí)間不得超過(guò)５天結(jié)果判斷１與對(duì)照管比較，如含供試品各容器中的試驗(yàn)菌均生長(zhǎng)良好，則說(shuō)明供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下無(wú)抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不計(jì)，照此檢查方法和檢查條件進(jìn)行供試品的無(wú)菌檢查２如含供試品的任一容器中試驗(yàn)菌生長(zhǎng)微弱、緩慢或不生長(zhǎng)，則說(shuō)明供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下有抑菌作用，應(yīng)采用增加沖洗量、增加培養(yǎng)基用量、使用中和劑或滅活劑、更換濾膜品種等方法，消除供試品的抑菌作用，并重新進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施三、試驗(yàn)操作供試品的處理及接種喜炎平注射液為水溶性液體供試品，取規(guī)定量，直接過(guò)濾；或混合至含不少于１００ｍＬ適宜稀釋液的無(wú)菌容器中，混勻，立即過(guò)濾。用沖洗液沖洗濾膜，沖洗次數(shù)一般不少于３次，以便除去抑菌成分。喜炎平注射液對(duì)革蘭陽(yáng)性菌與革蘭陰性菌均有抑制作用，故選擇金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌為陽(yáng)性對(duì)照菌。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施三、試驗(yàn)操作供試品的處理及接種喜炎平注射液接種操作方法培養(yǎng)基供試品接種原則陽(yáng)性對(duì)照陰性對(duì)照培養(yǎng)條件硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基氯化鈉注射液沖洗后，１份濾器中加入１００ｍＬ硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，１份濾器中加入１００ｍＬ胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基分別接種與供試品等量的金黃色葡萄球菌（不大于１００ｃｆｕ）至培養(yǎng)基中未接種的培養(yǎng)基３０～３５℃培養(yǎng)１４天胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基２０～２５℃培養(yǎng)１４天本課件是可編輯的正常PPT課件《藥品微生物檢驗(yàn)技術(shù)》謝謝本課件是可編輯的正常PPT課件《藥品微生物檢驗(yàn)技術(shù)》模塊二藥品安全性檢查項(xiàng)目二微生物總數(shù)檢查本課件是可編輯的正常PPT課件

任務(wù)一葡萄糖酸鈣口服液的微生物總數(shù)檢查-平皿法

任務(wù)二葡萄糖酸鈣口服液的微生物總數(shù)檢查-薄膜過(guò)濾法

任務(wù)三葡萄糖酸鈣口服液的微生物總數(shù)檢查-最可能數(shù)法

目錄本課件是可編輯的正常PPT課件項(xiàng)目二微生物總數(shù)檢查任務(wù)一葡萄糖酸鈣口服液的微生物總數(shù)檢查-平皿法

本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)引入請(qǐng)思考

葡萄糖酸鈣口服溶液用于預(yù)防和治療鈣缺乏癥，如骨質(zhì)疏松、手足抽搐癥、骨發(fā)育不全、佝僂病，以及兒童、妊娠和哺乳期婦女、絕經(jīng)期婦女、老年人鈣的補(bǔ)充。某企業(yè)生產(chǎn)了一批葡萄糖酸鈣口服溶液，根據(jù)《中國(guó)藥典》2020年版要求需要進(jìn)行微生物限度檢查。

請(qǐng)按照供試品取樣要求抽取一定數(shù)量的葡萄糖酸鈣口服溶液，并按照規(guī)定確定檢驗(yàn)數(shù)量、檢驗(yàn)量。查詢(xún)《中國(guó)藥典》2020年版四部通則1105（非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法），選擇平皿法，進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)，判斷被檢藥品是否符合微生物限度規(guī)定。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)分析（１）《中國(guó)藥典》2020年版規(guī)定的微生物計(jì)數(shù)方法包括平皿法、薄膜過(guò)濾法和最可能數(shù)法（簡(jiǎn)稱(chēng)MPN法）。本任務(wù)以葡萄糖酸鈣口服溶液為材料，選擇平皿法進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)。（２）對(duì)微生物計(jì)數(shù)需要制備適合微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，并將微生物培養(yǎng)成肉眼可見(jiàn)的菌落。因此，應(yīng)按照培養(yǎng)基配方完成培養(yǎng)基制備及其適用性檢查。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)分析（３）平皿法是《中國(guó)藥典》2020年版規(guī)定的微生物計(jì)數(shù)方法之一。對(duì)于所選擇的計(jì)數(shù)方法還需要進(jìn)行計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)。（４）按照《中國(guó)藥典》2020年版規(guī)定，確定葡萄糖酸鈣口服溶液的檢驗(yàn)數(shù)量、檢驗(yàn)量，保證供試品抽樣的客觀(guān)性，采用無(wú)菌操作完成供試品檢查。按照規(guī)定進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)并完成檢驗(yàn)報(bào)告。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)分析本任務(wù)的工作內(nèi)容及要求見(jiàn)下表。工作內(nèi)容工作要求關(guān)鍵點(diǎn)供試液的制備采取適宜方法制備供試液稀釋比例菌液制備選取規(guī)定菌株培養(yǎng)，制備菌液菌株選擇、培養(yǎng)及菌液制備培養(yǎng)基制備正確選擇培養(yǎng)基，完成制備計(jì)算、稱(chēng)量、調(diào)節(jié)pH值、分裝、滅菌培養(yǎng)基適用性檢查接種培養(yǎng)、計(jì)數(shù)判定培養(yǎng)、結(jié)果判定培養(yǎng)基無(wú)菌檢查抽檢培養(yǎng)基放置于相應(yīng)培養(yǎng)箱中定期觀(guān)察計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)試驗(yàn)組、供試品對(duì)照組、菌液對(duì)照組設(shè)置方法適用性判斷供試品接種供試品抽樣、接種無(wú)菌操作陰性對(duì)照陰性對(duì)照操作對(duì)照設(shè)計(jì)培養(yǎng)及觀(guān)察培養(yǎng)、觀(guān)察、記錄細(xì)菌、真菌培養(yǎng)條件結(jié)果判斷菌落計(jì)數(shù)、報(bào)告有效結(jié)果、檢品合格結(jié)果本課件是可編輯的正常PPT課件相關(guān)知識(shí)-微生物計(jì)數(shù)法1.微生物計(jì)數(shù)法的概念及要求

微生物計(jì)數(shù)法系用于能在有氧條件下生長(zhǎng)的嗜溫細(xì)菌和真菌的計(jì)數(shù)。微生物計(jì)數(shù)法用于檢查非無(wú)菌制劑及其原、輔料等是否符合規(guī)定的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)按《中國(guó)藥典》2020年版規(guī)定進(jìn)行檢驗(yàn)，包括樣品的取樣量和結(jié)果的判斷等。除另有規(guī)定外，微生物計(jì)數(shù)法不適用于活菌制劑的檢查。

微生物計(jì)數(shù)試驗(yàn)環(huán)境應(yīng)符合微生物限度檢查的要求。檢驗(yàn)全過(guò)程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。潔凈空氣區(qū)域、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期進(jìn)行監(jiān)測(cè)。本課件是可編輯的正常PPT課件相關(guān)知識(shí)-微生物計(jì)數(shù)法２.計(jì)數(shù)方法

供試品檢查時(shí)，應(yīng)根據(jù)供試品理化特性和微生物限度標(biāo)準(zhǔn)等因素選擇計(jì)數(shù)方法，檢測(cè)的樣品量應(yīng)能保證所獲得的試驗(yàn)結(jié)果能夠判斷供試品是否符合規(guī)定。3.計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查和供試品計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)

供試品微生物計(jì)數(shù)中所使用的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行適用性檢查；計(jì)數(shù)方法應(yīng)進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)，以確認(rèn)所采用的方法適合于該產(chǎn)品的微生物計(jì)數(shù)。當(dāng)檢驗(yàn)程序或產(chǎn)品發(fā)生變化可能影響檢驗(yàn)結(jié)果時(shí)，計(jì)數(shù)方法應(yīng)重新進(jìn)行適用性試驗(yàn)。本課件是可編輯的正常PPT課件相關(guān)知識(shí)-非無(wú)菌藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)

非無(wú)菌藥品的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)是基于藥品的給藥途徑和對(duì)患者健康潛在的危害以及藥品的特殊性而制訂的，不同藥品的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)不同。藥品生產(chǎn)、貯存、銷(xiāo)售過(guò)程中的檢驗(yàn)，藥用原料、輔料、中藥提取物及中藥飲片的檢驗(yàn)，新藥標(biāo)準(zhǔn)制訂，進(jìn)口藥品標(biāo)準(zhǔn)復(fù)核，考察藥品質(zhì)量及仲裁等，除另有規(guī)定外，其微生物限度均以此標(biāo)準(zhǔn)為依據(jù)。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施一、制訂工作計(jì)劃序號(hào)工作內(nèi)容完成時(shí)間成員負(fù)責(zé)人1查詢(xún)標(biāo)準(zhǔn)

2培養(yǎng)基制備

3培養(yǎng)基無(wú)菌檢查4培養(yǎng)基適用性檢查5供試液制備6菌液制備7方法適用性試驗(yàn)8供試液接種9培養(yǎng)及觀(guān)察10結(jié)果判斷

根據(jù)任務(wù)要求，制定合理工作進(jìn)度計(jì)劃，并根據(jù)小組成員的特點(diǎn)進(jìn)行分工。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施二、試驗(yàn)前準(zhǔn)備設(shè)備、器材、試劑規(guī)格數(shù)量用途無(wú)菌室操作場(chǎng)所超凈工作臺(tái)操作區(qū)域酒精燈局部無(wú)菌環(huán)境75％乙醇擦拭消毒pH7.0無(wú)菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液制備供試液胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基為微生物提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)移液器定量移取供試液試管、試管架容器、支架培養(yǎng)皿微生物培養(yǎng)培養(yǎng)箱微生物培養(yǎng)試驗(yàn)菌株培養(yǎng)基適用性檢查、方法適用性試驗(yàn)本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施三、培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基名稱(chēng)配方制備1000ml實(shí)際制備___ml

制備方式用量計(jì)算各用量胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基胰酪胨15.0g

瓊脂15.0g

大豆木瓜蛋白酶水解物5.0g

氯化鈉5.0g

水1000ml

沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基動(dòng)物組織胃蛋白酶水解物胰酪胨等量合物10.0g

瓊脂15.0g

葡萄糖40.0g

水1000ml

本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施四、培養(yǎng)基適用性檢查菌液制備和培養(yǎng)基適用性檢查培養(yǎng)條件序號(hào)步驟操作內(nèi)容1配制稀釋液pH7.0無(wú)菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液的配制2配制培養(yǎng)基按規(guī)定程序配制所需要的培養(yǎng)基：___________、___________滅菌后備用。3制備菌液（１）取__________、__________、__________、白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物，用pH7.0無(wú)菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液制成適宜濃度的菌懸液。（２）取_________的新鮮培養(yǎng)物加入適量含0.05％（體積分?jǐn)?shù)）聚山梨酯80的pH7.0無(wú)菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液，將孢子洗脫。然后，采用適宜的方法吸出孢子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，用含0.05％（體積分?jǐn)?shù)）聚山梨酯80的pH7.0無(wú)菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液制成適宜濃度的黑曲霉孢子懸液。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施四、培養(yǎng)基適用性檢查菌液制備和培養(yǎng)基適用性檢查培養(yǎng)條件4接種培養(yǎng)（１）取11個(gè)無(wú)菌平皿，分別接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各______皿，每皿接種量不大于______，最后一皿作為陰性對(duì)照。傾倒胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（被檢培養(yǎng)基）混勻凝固后按規(guī)定條件培養(yǎng)，觀(guān)察計(jì)數(shù)（需氧菌總數(shù)）。對(duì)照培養(yǎng)基同法操作。（２）取5個(gè)無(wú)菌平皿，分別接種______、______各2皿，每皿接種量不大于______，最后一皿作為陰性對(duì)照。傾倒沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（被檢培養(yǎng)基）混勻凝固后按規(guī)定條件培養(yǎng)，觀(guān)察計(jì)數(shù)（霉菌和酵母菌總數(shù)）。對(duì)照培養(yǎng)基同法操作5陰性對(duì)照取_______接種培養(yǎng)基后培養(yǎng)，作為陰性對(duì)照，陰性對(duì)照應(yīng)_______。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施四、培養(yǎng)基適用性檢查菌液制備和培養(yǎng)基適用性檢查培養(yǎng)條件6定期觀(guān)察記錄（１）胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板，培養(yǎng)溫度______，培養(yǎng)時(shí)間不超過(guò)______天；（２）沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板，培養(yǎng)溫度______，培養(yǎng)時(shí)間不超過(guò)______天；觀(guān)察菌落生長(zhǎng)情況，點(diǎn)計(jì)平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)，菌落蔓延生長(zhǎng)成片的平板，不宜計(jì)數(shù)。點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)后，計(jì)算各稀釋級(jí)供試液的平均菌落數(shù)；7結(jié)果判斷_______的菌落平均數(shù)與_______的菌落平均數(shù)的比值應(yīng)為_(kāi)______，且菌落形態(tài)大小應(yīng)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落一致；陰性對(duì)照_______，則被檢培養(yǎng)基適用性檢查符合規(guī)定。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施五、計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)１.供試液的制備２.接種和稀釋?zhuān)?抗菌活性的去除或滅活４.供試品中微生物的回收——平皿法５.結(jié)果判斷——平皿法本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施六、供試品檢查供試品檢查操作記錄序號(hào)步驟操作內(nèi)容1配制稀釋液pH7.0無(wú)菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液的配制2制備培養(yǎng)基__________培養(yǎng)基用于測(cè)定需氧菌總數(shù)，__________用于測(cè)定霉菌和酵母菌總數(shù)3制備供試液取供試品10mL，加入_______的_______緩沖液配制成1:10的供試液。取1:10供試液_______加入含9mL_______緩沖液的試管中制成1:102的供試液，再取1:102的供試液1mL加入另一支含9mL_______緩沖液的試管中，制成1:103稀釋級(jí)的供試液4吸樣注皿分別取3個(gè)稀釋級(jí)別的供試液檢驗(yàn)，每級(jí)稀釋液取1mL，置于直徑為90mm的無(wú)菌平皿中，注入15～20mL溫度不超過(guò)45℃熔化的胰酪大豆胨瓊脂或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，每稀釋級(jí)每種培養(yǎng)基至少制備_____個(gè)平皿5陰性對(duì)照吸取稀釋液（pH7.0無(wú)菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液）1mL，置于直徑為90mm的無(wú)菌平皿中，注入15～20mL溫度不超過(guò)45℃熔化的胰酪大豆胨瓊脂或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施六、供試品檢查供試品檢查操作記錄序號(hào)步驟操作內(nèi)容6定期觀(guān)察記錄

胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板，培養(yǎng)溫度____，培養(yǎng)時(shí)間不超過(guò)____天

沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板，培養(yǎng)溫度____，培養(yǎng)時(shí)間不超過(guò)____天觀(guān)察菌落生長(zhǎng)情況，點(diǎn)計(jì)平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)，菌落蔓延生長(zhǎng)成片的平板，不宜計(jì)數(shù)。點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)后，計(jì)算各稀釋級(jí)供試液的平均菌落數(shù)7結(jié)果判斷陰性對(duì)照應(yīng)____，否則試驗(yàn)無(wú)效。若供試品的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)的檢查結(jié)果均符合規(guī)定，判供試品符合規(guī)定；若其中任何一項(xiàng)不符合規(guī)定，判供試品不符合規(guī)定本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施七、微生物總數(shù)檢查原始記錄表單（平皿法）本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)測(cè)評(píng)序號(hào)考核內(nèi)容考核標(biāo)準(zhǔn)配分得分1培養(yǎng)基制備能正確計(jì)算培養(yǎng)基各組分用量5

能正確配制培養(yǎng)基10

能完成培養(yǎng)基滅菌操作5

2培養(yǎng)基的無(wú)菌檢查能將不同培養(yǎng)基放至相應(yīng)培養(yǎng)箱中5

能正確判斷培養(yǎng)基是否無(wú)菌5

3培養(yǎng)基適用性檢查能制備各菌種的菌液5

能將菌液接種至相應(yīng)的培養(yǎng)基中10

能正確完成培養(yǎng)基適用性檢查5

4計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)?zāi)苷_設(shè)置驗(yàn)證試驗(yàn)5

能正確進(jìn)行結(jié)果判斷5

本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)測(cè)評(píng)序號(hào)考核內(nèi)容考核標(biāo)準(zhǔn)配分得分5供試品接種、培養(yǎng)、結(jié)果判斷能用無(wú)菌操作技術(shù)完成供試品接種10

能正確觀(guān)察供試品培養(yǎng)變化5

能正確判斷供試品是否合格10

6培養(yǎng)物處理、無(wú)菌室清潔能正確完成培養(yǎng)物處理10

能正確完成無(wú)菌室清潔5

合計(jì)100本課件是可編輯的正常PPT課件項(xiàng)目二微生物總數(shù)檢查任務(wù)二葡萄糖酸鈣口服液的微生物總數(shù)檢查-薄膜過(guò)濾法

本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)引入請(qǐng)思考

任務(wù)一介紹了微生物計(jì)數(shù)方法中的平皿法，如何使用薄膜過(guò)濾法進(jìn)行葡萄糖酸鈣口服溶液的微生物總數(shù)檢查呢？

請(qǐng)按照供試品取樣要求抽取一定數(shù)量的葡萄糖酸鈣口服溶液，并按照規(guī)定確定檢驗(yàn)量，查詢(xún)《中國(guó)藥典》2020年版四部通則1105（非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法），選擇薄膜過(guò)濾法，進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)，判斷被檢藥品是否符合微生物限度規(guī)定。

本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)分析（１）本任務(wù)以葡萄糖酸鈣口服溶液為材料，選擇薄膜過(guò)濾法進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)。（２）薄膜過(guò)濾法是《中國(guó)藥典》2020年版規(guī)定的微生物計(jì)數(shù)方法之一。薄膜過(guò)濾法可以富集樣品中的微生物，分離去除樣品中對(duì)微生物生長(zhǎng)產(chǎn)生干擾的因素，有效地提高檢驗(yàn)結(jié)果的靈敏度和可靠性，是近年來(lái)微生物檢查領(lǐng)域應(yīng)用廣泛的一種計(jì)數(shù)手段。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)分析（３）按照《中國(guó)藥典》2020年版的規(guī)定，確定葡萄糖酸鈣口服溶液的檢驗(yàn)數(shù)量、檢驗(yàn)量，保證供試品抽樣的客觀(guān)性，采用無(wú)菌操作完成供試品檢查。按照規(guī)定進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)并完成檢驗(yàn)報(bào)告。

本任務(wù)的工作內(nèi)容及要求同任務(wù)一。本課件是可編輯的正常PPT課件相關(guān)知識(shí)-薄膜過(guò)濾法

薄膜過(guò)濾法所采用的濾膜孔徑應(yīng)不大于0.45?，直徑一般為50mm，若采用其他直徑的濾膜，沖洗量應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整。供試品及其溶劑應(yīng)不影響濾膜材質(zhì)對(duì)微生物的截留。濾器及濾膜使用前應(yīng)采用適宜的方法滅菌。使用時(shí)，應(yīng)保證濾膜在過(guò)濾前后的完整性。

水溶性供試液過(guò)濾前，先過(guò)濾少量的沖洗液以潤(rùn)濕濾膜；對(duì)于油類(lèi)供試品，其濾膜和濾器在使用前應(yīng)充分干燥。為發(fā)揮濾膜的最大過(guò)濾效率，應(yīng)注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個(gè)濾膜表面。供試液經(jīng)薄膜過(guò)濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量一般為100mL，總沖洗量一般不超過(guò)500mL，最多不得超過(guò)1000mL，以避免濾膜上的微生物受到損傷。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施一、制訂工作計(jì)劃序號(hào)工作內(nèi)容完成時(shí)間成員負(fù)責(zé)人1查詢(xún)標(biāo)準(zhǔn)

2培養(yǎng)基制備

3培養(yǎng)基無(wú)菌檢查4培養(yǎng)基適用性檢查5供試液制備6菌液制備7計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)8供試液接種9培養(yǎng)及觀(guān)察10結(jié)果判斷

根據(jù)任務(wù)要求，制定合理工作進(jìn)度計(jì)劃，并根據(jù)小組成員的特點(diǎn)進(jìn)行分工。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施二、試驗(yàn)前準(zhǔn)備設(shè)備、器材、試劑規(guī)格數(shù)量用途無(wú)菌室操作場(chǎng)所超凈工作臺(tái)操作區(qū)域酒精燈局部無(wú)菌環(huán)境75％乙醇擦拭消毒ｐＨ7.0無(wú)菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液制備供試液胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基為微生物提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)移液器定量移取供試液試管、試管架容器、支架培養(yǎng)皿微生物培養(yǎng)培養(yǎng)箱微生物培養(yǎng)試驗(yàn)菌株培養(yǎng)基適用性檢查、方法適用性試驗(yàn)濾膜及薄膜過(guò)濾器富集微生物本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施三、培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基名稱(chēng)配方制備1000ml實(shí)際制備___ml

制備方式用量計(jì)算各用量胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基胰酪胨15.0g

瓊脂15.0g

大豆木瓜蛋白酶水解物5.0g

氯化鈉5.0g

水1000ml

沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基動(dòng)物組織胃蛋白酶水解物胰酪胨等量合物10.0g

瓊脂15.0g

葡萄糖40.0g

水1000ml

本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施四、培養(yǎng)基適用性檢查培養(yǎng)基適用性檢查操作記錄序號(hào)步驟操作內(nèi)容1配制稀釋液pH7.0無(wú)菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液的配制2配制培養(yǎng)基按規(guī)定程序配制所需要的培養(yǎng)基：___________、___________滅菌后備用。3制備菌液（１）取__________、__________、__________、白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物，用pH7.0無(wú)菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液制成適宜濃度的菌懸液（２）取_________的新鮮培養(yǎng)物加入適量含0.05％（體積分?jǐn)?shù)）聚山梨酯80的pH7.0無(wú)菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液，將孢子洗脫。采用適宜的方法吸出孢子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，用含0.05％（體積分?jǐn)?shù)）聚山梨酯80的pH7.0無(wú)菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液制成適宜濃度的黑曲霉孢子懸液。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施四、培養(yǎng)基適用性檢查培養(yǎng)基適用性檢查操作記錄4接種培養(yǎng)（１）取11個(gè)無(wú)菌平皿，分別接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各______皿，每皿接種量不大于______，最后一皿作為陰性對(duì)照。傾倒胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（被檢培養(yǎng)基）混勻凝固后按規(guī)定條件培養(yǎng)，觀(guān)察計(jì)數(shù)（需氧菌總數(shù)）。對(duì)照培養(yǎng)基同法操作。（２）取5個(gè)無(wú)菌平皿，分別接種______、______各2皿，每皿接種量不大于______，最后一皿作為陰性對(duì)照。傾倒沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（被檢培養(yǎng)基）混勻凝固后按規(guī)定條件培養(yǎng)，觀(guān)察計(jì)數(shù)（霉菌和酵母菌總數(shù)）。對(duì)照培養(yǎng)基同法操作。5陰性對(duì)照取_______接種培養(yǎng)基后培養(yǎng)，作為陰性對(duì)照，陰性對(duì)照應(yīng)_______。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施四、培養(yǎng)基適用性檢查培養(yǎng)基適用性檢查操作記錄6定期觀(guān)察記錄（１）胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板，培養(yǎng)溫度______，培養(yǎng)時(shí)間不超過(guò)______天；（２）沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板，培養(yǎng)溫度______，培養(yǎng)時(shí)間不超過(guò)______天；觀(guān)察菌落生長(zhǎng)情況，點(diǎn)計(jì)平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)，菌落蔓延生長(zhǎng)成片的平板，不宜計(jì)數(shù)。點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)后，計(jì)算各稀釋級(jí)供試液的平均菌落數(shù)。7結(jié)果判斷_______的菌落平均數(shù)與_______的菌落平均數(shù)的比值應(yīng)為_(kāi)______，且菌落形態(tài)大小應(yīng)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落一致；陰性對(duì)照_______，則被檢培養(yǎng)基適用性檢查符合規(guī)定。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施五、計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)１.供試液的制備２.接種和稀釋?zhuān)?抗菌活性的去除或滅活４.供試品中微生物的回收——薄膜過(guò)濾法５.結(jié)果判斷——薄膜過(guò)濾法本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施六、供試品檢查供試品檢查操作記錄序號(hào)步驟操作內(nèi)容1配制稀釋液pH7.0無(wú)菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液的配制2制備培養(yǎng)基__________培養(yǎng)基用于測(cè)定需氧菌總數(shù)，__________培養(yǎng)基用于測(cè)定霉菌和酵母菌總數(shù)3制備供試液按平皿法制備1:10的供試液_______mL4裝膜將裝有濾膜的薄膜過(guò)濾器安裝在帶有真空裝置的支架上5潤(rùn)膜薄膜過(guò)濾器中倒入pH7.0無(wú)菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液50mL，打開(kāi)真空閥潤(rùn)洗濾膜，潤(rùn)洗一次6樣品過(guò)膜將適量pH7.0無(wú)菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液倒入薄膜過(guò)濾器，移取10mL供試液至緩沖液中，打開(kāi)真空閥過(guò)濾樣品本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施六、供試品檢查供試品檢查操作記錄序號(hào)步驟操作內(nèi)容7沖洗將約100mLpH7.0無(wú)菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液倒入薄膜過(guò)濾器中，打開(kāi)真空閥沖洗濾膜，沖洗不少于3次8貼膜用鑷子輕輕取出過(guò)濾膜，菌面朝上貼于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基中心9陰性對(duì)照取相應(yīng)稀釋液過(guò)濾、沖洗，作為陰性對(duì)照10培養(yǎng)將貼有濾膜的平板倒置放入培養(yǎng)箱中11結(jié)果判斷若濾膜上有菌落生長(zhǎng)，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，以相當(dāng)于1g、1mL或10cm2供試品的菌落數(shù)報(bào)告菌數(shù)本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施七、微生物總數(shù)檢查原始記錄表單（薄膜過(guò)濾法）本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)測(cè)評(píng)序號(hào)考核內(nèi)容考核標(biāo)準(zhǔn)配分得分1培養(yǎng)基制備能正確計(jì)算培養(yǎng)基各組分用量5

能正確配制培養(yǎng)基10

能完成培養(yǎng)基滅菌操作5

2培養(yǎng)基的無(wú)菌檢查能將不同培養(yǎng)基放至相應(yīng)培養(yǎng)箱中5

能正確判斷培養(yǎng)基是否無(wú)菌5

3培養(yǎng)基適用性檢查能制備各菌種的菌液5

能將菌液接種至相應(yīng)的培養(yǎng)基中10

能正確完成培養(yǎng)基適用性檢查5

4計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)?zāi)苷_設(shè)置驗(yàn)證試驗(yàn)5

能正確進(jìn)行結(jié)果判斷5

本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)測(cè)評(píng)序號(hào)考核內(nèi)容考核標(biāo)準(zhǔn)配分得分5供試品接種、培養(yǎng)、結(jié)果判斷能用無(wú)菌操作技術(shù)完成供試品接種10

能正確觀(guān)察供試品培養(yǎng)變化5

能正確判斷供試品是否合格10

6培養(yǎng)物處理、無(wú)菌室清潔能正確完成培養(yǎng)物處理10

能正確完成無(wú)菌室清潔5

合計(jì)100本課件是可編輯的正常PPT課件項(xiàng)目二微生物總數(shù)檢查任務(wù)三葡萄糖酸鈣口服液的微生物總數(shù)檢查-最可能數(shù)法

本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)引入請(qǐng)思考

任務(wù)一與任務(wù)二分別介紹了微生物計(jì)數(shù)方法中的平皿法和薄膜過(guò)濾法，如何使用最可能數(shù)法進(jìn)行葡萄糖酸鈣口服溶液的微生物總數(shù)檢查呢？

請(qǐng)按照供試品取樣要求抽取一定數(shù)量的葡萄糖酸鈣口服溶液，并按照規(guī)定確定檢驗(yàn)量，查詢(xún)《中國(guó)藥典》2020年版四部通則1105（非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法），選擇最可能數(shù)法，進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)，判斷被檢藥品是否符合微生物限度規(guī)定。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)分析（１）本任務(wù)以葡萄糖酸鈣口服溶液為材料，選擇最可能數(shù)法進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)。（２）按照《中國(guó)藥典》2020年版規(guī)定，確定葡萄糖酸鈣口服溶液的檢驗(yàn)數(shù)量、檢驗(yàn)量，保證供試品抽樣的客觀(guān)性，采用無(wú)菌操作完成供試品檢查。按照規(guī)定進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)并完成檢驗(yàn)報(bào)告。

本任務(wù)的工作內(nèi)容及要求同任務(wù)一。本課件是可編輯的正常PPT課件相關(guān)知識(shí)-最可能數(shù)法

最可能數(shù)法（MPN法）用于微生物計(jì)數(shù)時(shí)精密度和準(zhǔn)確度不及薄膜過(guò)濾法和平皿法，但對(duì)于某些微生物污染量很小的供試品，最可能數(shù)法可能是更適合的方法，僅在供試品需氧菌總數(shù)沒(méi)有適宜計(jì)數(shù)方法的情況下使用。最可能數(shù)法不適用于霉菌計(jì)數(shù)。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施一、制訂工作計(jì)劃序號(hào)工作內(nèi)容完成時(shí)間成員負(fù)責(zé)人1查詢(xún)標(biāo)準(zhǔn)

2培養(yǎng)基制備

3培養(yǎng)基無(wú)菌檢查4培養(yǎng)基適用性檢查5供試液制備6菌液制備7計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)8供試液接種9培養(yǎng)及觀(guān)察10結(jié)果判斷

根據(jù)任務(wù)要求，制定合理工作進(jìn)度計(jì)劃，并根據(jù)小組成員的特點(diǎn)進(jìn)行分工。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施二、試驗(yàn)前準(zhǔn)備設(shè)備、器材、試劑規(guī)格數(shù)量用途無(wú)菌室操作場(chǎng)所超凈工作臺(tái)操作區(qū)域酒精燈局部無(wú)菌環(huán)境75％乙醇擦拭消毒ｐＨ7.0無(wú)菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液制備供試液胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基為微生物提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)移液器定量移取供試液試管、試管架容器、支架培養(yǎng)箱微生物培養(yǎng)試驗(yàn)菌株培養(yǎng)基適用性檢查、方法適用性試驗(yàn)補(bǔ)充1補(bǔ)充2本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施三、培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基名稱(chēng)配方制備1000ml實(shí)際制備___ml

制備方式用量計(jì)算各用量胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基胰酪胨17.0g

葡萄糖/無(wú)水葡萄糖2.5g/2.3g

大豆木瓜蛋白酶水解物3.0g

氯化鈉5.0g

磷酸氫二鉀2.5g

水1000ml本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施四、培養(yǎng)基適用性檢查培養(yǎng)基適用性檢查操作記錄序號(hào)步驟操作內(nèi)容1配制稀釋液pH7.0無(wú)菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液的配制。2配制培養(yǎng)基按規(guī)定程序配制所需要的培養(yǎng)基：___________。滅菌后備用。3制備菌液取__________、__________、__________用pH7.0無(wú)菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液制成適宜濃度的菌懸液。4接種培養(yǎng)取_____支無(wú)菌試管，分別接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌各_____管，每管接種不大于_____的菌液，最后一管作為陰性對(duì)照。按規(guī)定條件培養(yǎng)，觀(guān)察計(jì)數(shù)（需氧菌總數(shù)）。對(duì)照培養(yǎng)管同法操作。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施四、培養(yǎng)基適用性檢查培養(yǎng)基適用性檢查操作記錄5陰性對(duì)照取_______接種培養(yǎng)基后培養(yǎng)，作為陰性對(duì)照，陰性對(duì)照應(yīng)_______。6定期觀(guān)察記錄（１）胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基管，培養(yǎng)溫度___，培養(yǎng)時(shí)間不超過(guò)____天（２）觀(guān)察菌落生長(zhǎng)情況7結(jié)果判斷陰性對(duì)照_____；被檢液體培養(yǎng)基管與對(duì)照培養(yǎng)基管比較，試驗(yàn)菌應(yīng)_____。本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施五、計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)１.供試液的制備２.接種和稀釋?zhuān)?抗菌活性的去除或滅活４.供試品中微生物的回收——最可能數(shù)法５.結(jié)果判斷——最可能數(shù)法本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施六、供試品檢查供試品檢查操作記錄序號(hào)步驟操作內(nèi)容1配制稀釋液pH7.0無(wú)菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液的配制2制備培養(yǎng)基按計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的計(jì)數(shù)方法進(jìn)行供試品中_____的測(cè)定__________培養(yǎng)基用于測(cè)定需氧菌總數(shù)3制備供試液制備1:10的供試液_______mL4稀釋用進(jìn)行______10倍系列稀釋?zhuān)辽?個(gè)連續(xù)稀釋級(jí)5接種每一稀釋級(jí)取3份

____

mL分別接種至3管裝有_____

mL胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基的試管中本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施六、供試品檢查供試品檢查操作記錄序號(hào)步驟操作內(nèi)容6陰性對(duì)照取

______接種培養(yǎng)基后培養(yǎng)，作為陰性對(duì)照7培養(yǎng)接種管置______℃培養(yǎng)______天，逐日觀(guān)察各管微生物的生長(zhǎng)情況8結(jié)果判斷根據(jù)微生物生長(zhǎng)的管數(shù)從表2-2-23中查供試品1g、1mL或10cm2中需氧菌總數(shù)的最可能數(shù)本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)實(shí)施七、微生物總數(shù)檢查原始記錄表單（薄膜過(guò)濾法）本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)測(cè)評(píng)序號(hào)考核內(nèi)容考核標(biāo)準(zhǔn)配分得分1培養(yǎng)基制備能正確計(jì)算培養(yǎng)基各組分用量5

能正確配制培養(yǎng)基10

能完成培養(yǎng)基滅菌操作5

2培養(yǎng)基的無(wú)菌檢查能將不同培養(yǎng)基放至相應(yīng)培養(yǎng)箱中5

能正確判斷培養(yǎng)基是否無(wú)菌5

3培養(yǎng)基適用性檢查能制備各菌種的菌液5

能將菌液接種至相應(yīng)的培養(yǎng)基中10

能正確完成培養(yǎng)基適用性檢查5

4計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)?zāi)苷_設(shè)置驗(yàn)證試驗(yàn)5

能正確進(jìn)行結(jié)果判斷5

本課件是可編輯的正常PPT課件任務(wù)測(cè)評(píng)序號(hào)考核內(nèi)容考核標(biāo)準(zhǔn)配分得分5供試品接