ICS65.080GXAFDeterminationofGammaaminobutyricacidinwatersolublefertilizers—High-performanceliquidchromatographymethodIT/GXAF0018—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由廣西壯族自治區(qū)分析測(cè)試研究中心提出。本文件由廣西肥料協(xié)會(huì)歸口并宣貫。本文件起草單位：廣西壯族自治區(qū)分析測(cè)試研究中心、南寧漢和生物科技股份有限公司、新勝利工業(yè)集團(tuán)有限公司、廣西壯族自治區(qū)地質(zhì)礦產(chǎn)測(cè)試研究中心、廣西壯族自治區(qū)環(huán)境保護(hù)科學(xué)研究院、廣西南環(huán)檢測(cè)科技有限公司、平南縣公共檢驗(yàn)檢測(cè)中心、廣西壯族自治區(qū)欽州生態(tài)環(huán)境監(jiān)測(cè)中心、廣西交科集團(tuán)有限公司、廣西高林肥業(yè)有限責(zé)任公司、廣西東亞撒陽(yáng)肥料有限公司。本文件主要起草人：陳桂鸞、劉程、鄧藝萍、班雁華、黃一帆、韋英亮、潘揚(yáng)昌、張思敏、吳瓊婧、韋猛、梁杰、梁鑫佳、劉輝庭、鄒源、謝敏蓉、黃孜祺、班書浩、韋樹燕、陸云、劉洋、李創(chuàng)、覃柳妹、覃保林、余義發(fā)、潘能良、潘巨武、梁承、白雪、胡瓊、梁豐收、李福信、韓幸、覃飛妮、農(nóng)東紅、謝基靜、王潔、覃榕耐、高信雄、鐘華慶、李輝寧、閉仁耀、陳艷。1T/GXAF0018—2024水溶肥料中γ-氨基丁酸的測(cè)定高效液相色譜法本文件描述了水溶肥料中γ-氨基丁酸測(cè)定的高效液相色譜法。本文件適用于水溶肥料中γ-氨基丁酸含量的測(cè)定。本方法檢出限為0.02μg/mL，定量限為0.08μg/mL。2規(guī)范性引用下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法QB/T5633.7—2022氨基酸、氨基酸鹽及其類似物第7部分：γ-氨基丁酸3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1γ-氨基丁酸γ-aminobutyricacid具有生物活性功能的四碳非蛋白質(zhì)氨基酸，可以促進(jìn)植物營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)、提高植物抗逆性、促進(jìn)植物對(duì)中微量元素的吸收。結(jié)構(gòu)見附錄A。4原理按照QB/T5633.7—2022規(guī)定執(zhí)行。5試劑與材料除非另有說明,本方法所用試劑分析純以上試劑,水應(yīng)符合GB/T6682一級(jí)水的規(guī)定。5.1γ-氨基丁酸標(biāo)準(zhǔn)品：含量≥99.0％。5.2碳酸氫鈉。5.32,4-二硝基氟苯。5.4乙腈：色譜純。5.5三水合乙酸鈉。6儀器和設(shè)備6.1配有紫外檢測(cè)器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)的高效液相色譜儀。6.2電子天平：感量為0.0001g。6.3恒溫水浴鍋。7參考色譜條件7.1色譜柱：C18柱，5μm,4.6mm×250mm(或可以選用性能相當(dāng)?shù)纳V柱)。2T/GXAF0018—20247.2流動(dòng)相：乙酸鈉溶液-乙腈（80∶20）。7.3檢測(cè)波長(zhǎng)：360nm。7.4流速：1.0mL/min。7.5柱溫：30℃。7.6進(jìn)樣量：10μL。8參考色譜條件8.1衍生緩沖溶液的制備稱量4.2g碳酸氫鈉，將其溶解于水中，并將溶液定容至100mL容量瓶中，混合均勻。溶液需現(xiàn)配即用。8.2衍生試劑溶液的制備2,4-二硝基氟苯乙腈溶液（1移取2,4-二硝基氟苯1.00mL，用乙腈溶解并定容至100mL容量瓶中，混勻。8.3標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備稱取γ-氨基丁酸標(biāo)準(zhǔn)品0.025g（精確至0.0001g），用水溶解定容至100mL容量瓶中，混勻。移取1.00mL置于10mL容量瓶中，加入0.50mL衍生緩沖溶液（8.1），隨后再加入1.00mL衍生試劑溶液（8.2混勻。60℃±2℃水浴恒溫1h，冷卻至室溫后加水定容至10mL，混勻。用0.22μm濾膜過濾，濾液作為標(biāo)準(zhǔn)溶液。8.4試樣的制備8.4.1固體樣品經(jīng)多次縮分后取100g，研磨后過0.50mm試驗(yàn)篩（潮濕時(shí)先過1.00mm試驗(yàn)篩），混合均勻后置于干燥容器中。8.4.2液體樣品經(jīng)充分搖勻后取200mL，置于干燥容器中。8.5試樣溶液的制備稱取適量試樣約含γ-氨基丁酸0.025g，用水溶解定容至100mL容量瓶中，混勻。稱取1.00mL置于10mL容量瓶中，加入0.50mL衍生緩沖溶液（8.1隨后再加入1.00mL衍生試劑溶液（8.2混勻。60℃±2℃水浴恒溫1h，冷卻至室溫后加水定容至10mL，混勻。用0.22μm濾膜過濾，濾液作為試樣溶液。8.6流動(dòng)相的制備8.6.1乙酸鈉溶液的制備稱取6.8g三水合乙酸鈉，將其溶解于適量水中，隨后稀釋至1000mL，混勻，過濾。8.6.2乙酸鈉溶液-乙腈（80∶20）量取乙酸鈉溶液（8.6.1）800mL和過濾超聲后的乙腈200mL，混勻。9測(cè)定將標(biāo)準(zhǔn)溶液（8.3）及試樣溶液（8.5）分別注入高效液相色譜儀中，并記錄下各自的色譜圖。根據(jù)色譜峰的峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算出相應(yīng)的γ-氨基丁酸的濃度。3T/GXAF0018—202410結(jié)果計(jì)算γ-氨基丁酸的校正因子f，按照公式（1）進(jìn)行計(jì)算：式中：m標(biāo)——標(biāo)準(zhǔn)品稱樣質(zhì)量，單位為克（gP——標(biāo)準(zhǔn)品的純度，%;D標(biāo)——標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋倍數(shù)；A標(biāo)——標(biāo)準(zhǔn)品溶液的峰面積。γ-氨基丁酸含量W以百分比質(zhì)量分?jǐn)?shù)的形式表示，按照公式（2）進(jìn)行計(jì)算：式中：f——校正因子；m樣——試樣的稱樣質(zhì)量，單位為克（gA樣——試樣溶液的峰面積；D樣——試樣的稀釋倍數(shù)。計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。11精密度11.1重復(fù)性在重復(fù)測(cè)試條件下，兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值與算術(shù)平均值之比（以百分比表示）應(yīng)符合表1的規(guī)定。表1實(shí)驗(yàn)室內(nèi)重復(fù)性要求≤0.1%10%>0.1%5%11.2再現(xiàn)性在再現(xiàn)性測(cè)試條件下，兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值與算術(shù)平均值之比（以百分比表示）應(yīng)符合表表2實(shí)驗(yàn)室間再現(xiàn)性要求≤0.1%12%>0.1%