免疫室作業(yè)指導書

文件編號：SEZYY-JYK-3-MY-05

第A版

編制：錢宇清

審核：錢宇清

批準：曹勤

生效日期：2011年8月8日

江蘇省第二中醫(yī)院檢驗科

目錄

序號主題內容代號頁號

1血清乙型肝炎病毒表面抗原檢測SEZYY-JYK-3-MY-015

2血清乙型肝炎病毒表面抗體檢測SEZYY-JYK-3-MY-028

3血清乙型肝炎病毒e抗原檢測SEZYY-JYK-3-MY-0311

4血清乙型肝炎病毒e抗體檢測SEZYY-JYK-3-MY-0414

5血清乙型肝炎病毒核心抗體檢測SEZYY-JYK-3-MY-0517

6SEZYY-JYK-3-MY-0720

血清丙型肝炎病毒抗體檢測

7SEZYY-JYK-3-MY-0924

人類免疫缺陷病毒抗體檢測

8SEZYY-JYK-3-MY-1027

梅毒甲苯胺紅不加熱血清試驗

9SEZYY-JYK-3-MY-1129

梅毒螺旋體特異性抗體檢測

10SEZYY-JYK-3-MY-1731

類風濕因子(RF)測定

11SEZYY-JYK-3-MY-1833

抗鏈球菌溶血素0(ASO)測定

12SEZYY-JYK-3-MY-1235

支原體肺炎血清學試驗

13SEZYY-JYK-3-MY-1337

甲胎蛋白(AFP)定量測定

14SEZYY-JYK-3-MY-1440

癌胚抗原(CEA)定量測定

15SEZYY-JYK-3-MY-1543

糖鏈抗原125(CA125)定量測定

16SEZYY-JYK-3-MY-1646

糖類抗原153(CA153)定量測定

17SEZYY-JYK-3-MY-1748

糖鏈抗原199(CA199)定量測定

18SEZYY-JYK-3-MY-1851

糖類抗原724(CA724)定量測定

19SEZYY-JYK-3-MY-1954

非小細胞肺癌相關抗原(CYFRA21-1)定量測定

20SEZYY-JYK-3-MY-2057

神經元特異性烯醇化酶(NSE)定量測定

21SEZYY-JYK-3-MY-2160

F-PSA定量測定

22SEZYY-JYK-3-MY-2262

T-PSA定量測定

23SEZYY-JYK-3-MY-2362

人絨毛膜促性腺激素定量測定

24SEZYY-JYK-3-MY-2468

孕酮定量測定

25SEZYY-JYK-3-MY-2571

游離三碘甲腺原氨酸(T3)定量測定

26SEZYY-JYK-3-MY-2674

游離甲狀腺素(FT4)定量測定

27SEZYY-JYK-3-MY-2777

三碘甲狀腺原氨酸(T3)定量測定

28SEZYY-JYK-3-MY-2880

甲狀腺素(T4)定量測定

29SEZYY-JYK-3-MY-2983

促甲狀腺激素定量測定

30SEZYY-JYK-3-MY-3086

胰島素(INSULIN)定量測定

31SEZYY-JYK-3-MY-3188

微量加樣器的質控

32SEZYY-JYK-3-MY-3291

Cobas411電化學發(fā)光儀操作維護規(guī)程

33SEZYY-JYK-3-MY-3398

免疫學室內質量控制操作程序

34SEZYY-JYK-3-MY-34103

免疫學檢驗室間質量評價(EQA)

修訂頁

序號文件編號頁碼需更改的內容更改內容批準人批準日期

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血清乙型肝炎病毒表面抗原檢測（ELISA）

1.原理

在微孔條上預包被被純化乙肝表面抗體，配以酶標記抗體（HBsAb-HRP）及TMB等其

它試劑，采用夾心法原理檢測人血清（或血漿）中乙肝表面抗（HBsAg）。

2.標本采集

2.1采集前病人準備：受檢者應空腹

2.2標本種類：血清或血漿

2.3標本要求：采集病人靜脈血3ml（可用EDTA抗凝），室溫放置不超過4小時，分離

血清備用。

3.標本儲存：2-8℃保存不應超過1周，-20℃不應超過3個月，-70℃長期保存，應避免

反復凍融。

4.標本運輸：密封，室溫運輸。

5.標本拒收標準：污染、標本量不足、嚴重溶血或脂血標本不宜作此項檢測。

6.試劑

6.1試劑名稱：乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒

6.2試劑生產廠家：上海榮盛生物藥業(yè)有限公司。

6.3包裝規(guī)格：96Test/盒

6.4試劑盒組成：

HBsAg微孔板，HBsAg酶標記抗體，HBsAg陽性對照血清，HBsAg陰性對照血清，濃縮

洗滌液，底物A,底物B,終止液，封口膜，自封袋。

6.5試劑儲存條件及有效期：2-8℃避光保存，有效期12個月。

7.儀器設備

7.1儀器名稱：自動酶標儀

8.操作步驟

8.1平衡：將試劑盒各組分取出，平衡至室溫（18-25℃）,微孔板開封后，余者及時以

自封袋封存。

8.2配液：濃縮洗滌液配制前充分搖勻（如有晶體應充分溶解），濃縮洗滌液和蒸儲水或

去離子水按1：19稀釋后使用。

8.3編號：將微孔條固定于支架，按序編號。

8.4加樣：分別用加樣器在對照孔中加入陰、陽性對照血清各501于相應孔中。

8.5加酶：分別在每孔中加入酶標記抗體501,輕拍混勻。

8.6溫育：置37℃溫育60分鐘，室溫平衡5分鐘。

8.7洗滌：用洗滌液充分洗滌5次，洗滌完扣干（每次應保持30-60秒的浸泡時間）。

8.8顯色：每孔加入底物A、B各501,輕拍混勻，置37℃暗處15分鐘。

8.9終止：每孔加終止液501,混勻。

8.10測定：用酶標儀單波長450nm或雙波長450/630nm測定各孔OD值（用單波長測定

時需設空白對照一孔，30分鐘內完成測定，并記錄結果）。

9.結果判斷與分析

9.1臨界值（C.O.）的計算：臨界值=陰性對照孔OD值NX2.1,陰性對照OD均值大于

0」時應重新試驗，小于0.05時以0.05計算。

9.2結果判定：樣品OD值S/C.O>=1者為HBsAg陽性

樣品OD值S/C.O<1者為HBsAg陰性

10.質量控制

每次試驗用含2ng/mlHBsAg的質控血清同步檢測，以S/CO值繪制質控圖，S/CO值

應在控制范圍內；如失控，則要檢查試劑效期、儲藏溫度、試驗溫度是否正常、操作步

驟是否正確，直至重新試驗使其在控。

11.參考范圍：陰性

12.臨床意義：在血清中HBsAg的存在表明有急性乙肝或慢性乙肝或為無癥狀攜帶者。

13.操作性能：靈敏度為ng/ml,特異性高。

14.方法局限性

14.1.對于病毒復制較強的病人，病毒量較大，出現HOOK現象，造成假陰性，須將病人

血清進行稀釋后再重新試驗。

14.2.如出現跳孔現象可能造成假陽性。

14.3.樣品顯色深淺與樣品中抗原的含量沒有一定正相關。

15.注意事項

15.1.每板建議設陰陽性對照血清各兩孔，設空白對照時，不加樣品及酶標記抗體，其余

各步相同。

15.2.洗滌時各孔均須加滿，防止孔口內有游離酶未能洗凈。

15.3.加試劑前應將試劑瓶翻轉數次，使液體混勻。如果滴加，滴加前應棄去1—2滴。滴

加時瓶身應保持垂直，以使滴量準確。注意勿將試劑滴在孔壁上。

15.4.所有樣品都應按傳染源處理。

15.5.封口膜使用說明

15.5.1.微孔板拆封后，在取出當天所需的微孔條后，其余微孔條可以封口膜封存以避免受

潮。在封存時，注意勿把封口膜粘貼到微孔條底部，以免影響其透光性。

15.5.2.微孔板溫育時，以封口膜覆蓋孔口，可避免其他因素對實驗帶來的非預期的影響。

15.6.不同品名、不同批號的試劑不可混用，以免產生錯誤結果。

16.當檢測系統(tǒng)（儀器）不能工作時，所采取的補救措施：應保證所有操作步驟正確無誤；

可以比對陰陽對照，肉眼判讀；無法準確判讀者，應留樣待系統(tǒng)正常后復查。

17.參考文獻：中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司編。全國臨床檢驗操作規(guī)程（第二版）410-412

頁。

18.其它：必須按規(guī)定使用經中國藥品生物制品檢定所檢定并貼有“檢定合格”防偽標簽

的試劑。

血清乙型肝炎病毒表面抗體檢測（ELISA）

1.原理

在微孔條上預包被被純化乙肝表面抗原，配以酶標記抗原（HBsAg-HRP）及TMB等其

它試劑，采用夾心法原理檢測人血清（或血漿）中乙肝表面抗體（HBsAb）。

2.標本采集

2.1采集前病人準備：受檢者應空腹

2.2標本種類：血清或血漿

2.3標本要求：采集病人靜脈血3ml（可用EDTA抗凝），室溫放置不超過4小時，分離血清

備用。

3.標本儲存：2-8℃保存不應超過1周,-20℃不應超過3個月，-70℃長期保存，應避免反

復凍融。

4.標本運輸：密封，室溫運輸。

5.標本拒收標準：污染、標本量不足、嚴重溶血或脂血標本不宜作此項檢測。

6.試劑

6.1試劑名稱：乙型肝炎病毒表面抗體診斷試劑盒

6.2試劑生產廠家：上海榮盛生物藥業(yè)有限公司。

6.3包裝規(guī)格：96Test/盒

6.4試劑盒組成：

HBsAb微孔板，HBsAb酶標記抗原，HBsAb陽性對照血清，HBsAb陰性對照血清，濃縮洗

滌液，底物A,底物B,終止液，封口膜，自封袋。

6.5試劑儲存條件及有效期：2-8℃避光保存，有效期12個月。

7.儀器設備

7.1儀器名稱：自動酶標儀

8.操作步驟

8.1平衡：將試劑盒各組分取出，平衡至室溫（18-25℃）,微孔板開封后，余者及時以自封

袋封存。

8.2配液：濃縮洗滌液配制前充分搖勻（如有晶體應充分溶解），濃縮洗滌液和蒸儲水或去

離子水按1：19稀釋后使用。

8.3編號：將微孔條固定于支架，按序編號。

8.4加樣：分別用加樣器在對照孔中加入陰、陽性對照血清各501于相應孔中。

8.5加酶：分別在每孔中加入酶標記抗體501,輕拍混勻。

8.6溫育：置37℃溫育60分鐘，室溫平衡5分鐘。

8.7洗滌：用洗滌液充分洗滌5次，洗滌完扣干（每次應保持30-60秒的浸泡時間）。

8.8顯色：每孔加入底物A、B各501,輕拍混勻，置37℃暗處15分鐘。

8.9終止：每孔加終止液501,混勻。

8.10測定：用酶標儀單波長450nm或雙波長450/630nm測定各孔OD值（用單波長測定時

需設空白對照一孔，30分鐘內完成測定，并記錄結果）。

9.結果判斷與分析

9.1臨界值（C.O.）的計算：臨界值=陰性對照孔OD值NX2.1,陰性對照OD均值大于0.1

時應重新試驗，小于。.05時以0.05計算。

9.2結果判定：樣品OD值S/C.O>=1者為HBsAb陽性

樣品OD值S/C.O<1者為HbsAb陰性

10.質量控制

每次試驗用含30mIu/mlHBsAb的質控血清同步檢測，S/CO值應在控制范圍內；如失控，

則要檢查試劑效期、儲藏溫度、試驗溫度是否正常、操作步驟是否正確，直至重新試驗使其

在控。

11.參考范圍

陰性或陽性

12.臨床意義

HBsAb陽性表明存在HBV的保護性抗體。

13.操作性能：靈敏度高，特異性好。

14.方法局限性：樣品顯色深淺與樣品中抗體的含量沒有一定正相關。

15.注意事項

15.1每板建議設陰陽性對照血清各兩孔，設空白對照時，不加樣品及酶標記抗體，其余各

步相同。

15.2洗滌時各孔均須加滿，防止孔口內有游離酶未能洗凈。

15.3加試劑前應將試劑瓶翻轉數次，使液體混勻。如果滴加，滴加前應棄去1—2滴。滴加

時瓶身應保持垂直，以使滴量準確。注意勿將試劑滴在孔壁上。

15.4所有樣品都應按傳染源處理。

15.5封口膜使用說明

15.5.1微孔板拆封后，在取出當天所需的微孔條后，其余微孔條可以封口膜封存以避免受潮。

在封存時，注意勿把封口膜粘貼到微孔條底部，以免影響其透光性。

15.5.2微孔板溫育時，以封口膜覆蓋孔口，可避免其他因素對實驗帶來的非預期的影響。

15.6不同品名、不同批號的試劑不可混用，以免產生錯誤結果。

16.當檢測系統(tǒng)（儀器）不能工作時，所采取的補救措施：應保證所有操作步驟正確無誤；

可以比對陰陽對照，肉眼判讀；無法準確判讀者，應留樣待系統(tǒng)正常后復查。

17.參考文獻：中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司編。全國臨床檢驗操作規(guī)程（第二版）412頁。

18.其它：必須按規(guī)定使用經中國藥品生物制品檢定所檢定并貼有“檢定合格”防偽標簽的

試劑。

血清乙型肝炎病毒e抗原檢測（ELISA）

1.原理

在微孔條上預包被被純化乙肝e抗體（HBeAb）,配以酶標記抗原（HBeAb-HRP）及

TMB等其它試劑，采用夾心法原理檢測人血清（或血漿）中乙肝e抗原（HBeAg）。

2.標本采集

2.1采集前病人準備：受檢者應空腹

2.2標本種類：血清或血漿

2.3標本要求：采集病人靜脈血3ml（可用EDTA抗凝），室溫放置不超過4小時，分離

血清備用。

3.標本儲存：2-8℃保存不應超過1周，-20℃不應超過3個月，-70℃長期保存，應避免

反復凍融。

4.標本運輸：密封，室溫運輸。

5.標本拒收標準：污染、標本量不足、嚴重溶血或脂血標本不宜作此項檢測。

6.試劑

6.1試劑名稱：乙型肝炎病毒e抗原診斷試劑盒

6.2試劑生產廠家：上海榮盛生物藥業(yè)有限公司。

6.3包裝規(guī)格：96Test/盒

6.4試劑盒組成：

HBeAg微孔板，HBeAg酶標記抗原，HBeAg陽性對照血清，HBeAg陰性對照血清，

濃縮洗滌液，底物A,底物B,終止液，封口膜，自封袋。

6.5試劑儲存條件及有效期：2-8℃避光保存，有效期12個月。

7.儀器設備

7.1儀器名稱：自動酶標儀

8.操作步驟

8.1平衡：將試劑盒各組分取出，平衡至室溫（18-25℃）,微孔板開封后，余者及時以自

封袋封存。

8.2配液：濃縮洗滌液配制前充分搖勻（如有晶體應充分溶解），濃縮洗滌液和蒸儲水或

去離子水按1：19稀釋后使用。

8.3編號：將微孔條固定于支架，按序編號。

8.4加樣：分別用加樣器在對照孔中加入陰、陽性對照血清各501于相應孔中。

8.5加酶：分別在每孔中加入酶標記抗體501,輕拍混勻。

8.6溫育：置37℃溫育60分鐘，室溫平衡5分鐘。

8.7洗滌：用洗滌液充分洗滌5次，洗滌完扣干（每次應保持30-60秒的浸泡時間）。

8.8顯色：每孔加入底物A、B各501,輕拍混勻，置37℃暗處15分鐘。

8.9終止：每孔加終止液501,混勻。

8.10測定：用酶標儀單波長450nm或雙波長450/630nm測定各孔OD值（用單波長測定

時需設空白對照一孔，30分鐘內完成測定，并記

錄結果）。

9.結果判斷與分析

9.1臨界值（C.O.）的計算：臨界值=陰性對照孔OD值NX2.1,陰性對照OD均值大于

0.1時應重新試驗，小于0.05時以0.05計算。

9.2結果判定：樣品OD值S/C.O>=1者為HBeAg陽性

樣品OD值S/C.O<1者為HBeAg陰性

10.質量控制：

每次試驗用含量為2NCU/ml的HBeAg質控血清同步檢測，S/CO值應在控制范圍內；

如失控，則要檢查試劑效期、儲藏溫度、試驗溫度是否正常、操作步驟是否正確，直至

重新試驗使其在控。

11.參考范圍：陰性或陽性

12.臨床意義：HBeAg陽性可作為體內HBV處在復制狀態(tài)及血清具有傳染性的一個標志；

持續(xù)陽性則揭示轉為慢性。

13.操作性能：靈敏度高，特異性好。

14.方法局限性：樣品顯色深淺與樣品中抗原的含量沒有一定正相關。

15.注意事項

15.1每板建議設陰陽性對照血清各兩孔，設空白對照時，不加樣品及酶標記抗體，其余

各步相同。

15.2洗滌時各孔均須加滿，防止孔口內有游離酶未能洗凈。

15.3加試劑前應將試劑瓶翻轉數次，使液體混勻。如果滴加，滴加前應棄去1—2滴。滴

加時瓶身應保持垂直，以使滴量準確。注意勿將試劑滴在孔壁上。

15.4所有樣品都應按傳染源處理。

15.5封口膜使用說明

15.5.1微孔板拆封后，在取出當天所需的微孔條后，其余微孔條可以封口膜封存

以避免受潮。在封存時，注意勿把封口膜粘貼到微孔條底部，以免影響其透光性。

15.5.2微孔板溫育時，以封口膜覆蓋孔口，可避免其他因素對實驗帶來的非預期的影響。

15.6不同品名、不同批號的試劑不可混用，以免產生錯誤結果。

16.當檢測系統(tǒng)（儀器）不能工作時，所采取的補救措施：應保證所有操作步驟正確無誤；

可以比對陰陽對照，肉眼判讀；無法準確判讀者，應留樣待系統(tǒng)正常后復查。

17.參考文獻：中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司編。全國臨床檢驗操作規(guī)程（第二版）412-413

頁。

18.其它：必須按規(guī)定使用經中國藥品生物制品檢定所檢定并貼有“檢定合格”防偽標簽

的試劑。

血清乙型肝炎病毒e抗體檢測（ELISA）

1.原理

在微孔條上預包被被純化乙肝e抗體（HBeAb）,配以酶標記抗原（HBeAb-HRP）、中和

抗原（HBeAg）及TMB等其它試劑，采用競爭法原理檢測人血清（或血漿）中乙肝e抗體

（HBeAb）o

2.標本采集

2.1采集前病人準備：受檢者應空腹。

2.2標本種類：血清或血漿。

2.3標本要求：采集病人靜脈血3ml（可用EDTA抗凝），室溫放置不超過4小時，分離血清

備用。

3.標本儲存：2-8℃保存不應超過24小時，-20℃不應超過3個月，

-70℃長期保存，應避免反復凍融。

4.標本運輸：密封，室溫運輸。

5.標本拒收標準：污染、標本量不足、嚴重溶血或脂血標本不宜作此項檢測。

6.試劑

6.1試劑名稱：乙型肝炎病毒e抗體診斷試劑盒

6.2試劑生產廠家：上海榮盛生物藥業(yè)有限公司。

6.3包裝規(guī)格：96Test/盒

6.4試劑盒組成：

HBeAb微孔板，HBeAb酶標記抗原，中和抗原，HBeAb陽性對照血清，HBeAb陰性對

照血清，濃縮洗滌液，底物A,底物B,終止液，封口膜，自封袋。

6.5試劑儲存條件及有效期：2-8℃避光保存，有效期12個月。

7.儀器設備

7.1儀器名稱：自動酶標儀

8.操作步驟

8.1平衡：將試劑盒各組分取出，平衡至室溫（18-25℃）,微孔板開封后，余者及時以自封

袋封存。

8.2配液：濃縮洗滌液配制前充分搖勻（如有晶體應充分溶解），濃縮洗滌液和蒸儲水或去

離子水按1：19稀釋后使用。

8.3編號：將微孔條固定于支架，按序編號。

8.4加樣：分別用加樣器在對照孔中加入陰、陽性對照血清各501于相應孔中。

8.5加酶：分別在每孔中加入酶標記抗體501,輕拍混勻。

8.6中和：分別在每孔中加入中和抗原（HBeAg）501,輕拍混勻。

8.7溫育：置37℃溫育60分鐘，室溫平衡5分鐘。

8.8洗滌：用洗滌液充分洗滌5次，洗滌完扣干（每次應保持30-60秒的浸泡時間）。

8.9顯色：每孔加入底物A、B各50I,輕拍混勻，置37℃暗處15分鐘。

8.10終止：每孔加終止液501,混勻。

8.11測定：用酶標儀單波長450nm或雙波長450/630nm測定各孔OD值（用單波長測定時

需設空白對照一孔，30分鐘內完成測定，并記錄結果）。

9.結果判斷與分析

9.1臨界值（C.O.）的計算：

待測樣品為原倍血清時，臨界值=陰性對照孔OD值NX0.2,待測樣品為非原倍血清時，

臨界值=陰性對照孔OD值NX0.5,（非原倍血清是指稀釋血清、質控血清等）。

9.2結果判定：樣品OD值S/C.OV=1者為HBeAb陽性

樣品OD值S/C.O>1者為HBeAb陰性

10.質量控制：

每次試驗用含量為2NCU/ml的HBeAb質控血清同步檢測，S/CO值應在控制范圍內；

如失控，則要檢查試劑效期、儲藏溫度、試驗溫度是否正常、操作步驟是否正確，直至重新

試驗使其在控。

11.參考范圍：陰性

12.臨床意義：HBeAb陽性可作為體內HBV處在復制狀態(tài)及血清具有傳染性的一個標志。

陽性表示機體已產生免疫力，病毒活力降低，傳染性減弱，預后好。

13.操作性能：靈敏度高，特異性好。

14.方法局限性：樣品顯色深淺與樣品中抗體的含量沒有一定相關。

15.注意事項

15.1每板建議設陰陽性對照血清各兩孔，設空白對照時，不加樣品及酶標記抗體，其余各

步相同。

15.2洗滌時各孔均須加滿，防止孔口內有游離酶未能洗凈。

15.3加試劑前應將試劑瓶翻轉數次，使液體混勻。如果滴加，滴加前應棄去1-2滴。滴加時

瓶身應保持垂直，以使滴量準確。注意勿將試劑滴在孔壁上。

15.4所有樣品都應按傳染源處理。

15.5封口膜使用說明

15.5.1微孔板拆封后，在取出當天所需的微孔條后，其余微孔條可以封口膜封存以避免受潮。

在封存時，注意勿把封口膜粘貼到微孔條底部，以免影響其透光性。

15.5.2微孔板溫育時，以封口膜覆蓋孔口，可避免其他因素對實驗帶來的非預期的影響。

15.6不同品名、不同批號的試劑不可混用，以免產生錯誤結果。

16.當檢測系統(tǒng)（儀器）不能工作時，所采取的補救措施：應保證所有操作步驟正確無誤；

可以比對陰陽對照，肉眼判讀；無法準確判讀者，應留樣待系統(tǒng)正常后復查。

17.參考文獻：中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司編。全國臨床檢驗操作規(guī)程（第二版）412-413

頁。

18.其它：必須按規(guī)定使用經中國藥品生物制品檢定所檢定并貼有“檢定合格”防偽標簽的

試劑。

血清乙型肝炎病毒核心抗體檢測（ELISA）

1.原理

在微孔條上預包被被純化乙肝核心抗原（HBcAg）,配以酶標記抗體（HbcAb-HRP）

及TMB等其它試劑，采用競爭抑制法原理檢測人血清（或血漿）中乙肝核心抗體（HBcAb）。

2.標本采集

2.1采集前病人準備：受檢者應空腹。

2.2標本種類：血清或血漿。

2.3標本要求：采集病人靜脈血3ml（可用EDTA抗凝），室溫放置不超過4小時，分離

血清備用。

3.標本儲存：2-8℃保存不應超過1周，-20℃不應超過3個月，-70℃長期保存，應避免

反復凍融。

4.標本運輸：密封，室溫運輸。

5.標本拒收標準：污染、標本量不足、嚴重溶血或脂血標本不宜作此項檢測。

6.試劑

6.1試劑名稱：乙型肝炎病毒核心抗體診斷試劑盒

6.2試劑生產廠家：上海榮盛生物藥業(yè)有限公司。

6.3包裝規(guī)格：96Test/盒

6.4試劑盒組成：

HBcAb微孔板，HBcAb酶標記抗原，HBcAb陽性對照血清，HBcAb陰性對照血清，

濃縮洗滌液，底物A,底物B,終止液，封口膜，自封袋。

6.5試劑儲存條件及有效期：2-8℃避光保存，有效期12個月。

7.儀器設備

7.1儀器名稱：自動酶標儀

8.操作步驟

8.1平衡：將試劑盒各組分取出，平衡至室溫（18-25℃）,微孔板開封后，余者及時以自

封袋封存。

8.2配液：濃縮洗滌液配制前充分搖勻（如有晶體應充分溶解），濃縮洗滌液和蒸儲水或

去離子水按1：19稀釋后使用。

8.3編號：將微孔條固定于支架，按序編號。

8.4加樣：每測定孔加入501樣品。對照孔中加入陰、陽性對照血清各501。作為臨

床診斷依據，必須將原倍血清樣品按1：30稀釋后再檢驗，稀釋液應采用生理鹽水或

lOmMPBS;作為流行病學調查依據，使用原倍血清檢驗。

8.5加酶：每孔加入酶標記抗體501,輕拍混勻。

8.6溫育：置37℃溫育60分鐘，室溫平衡5分鐘。

8.7洗滌：用洗滌液充分洗滌5次，洗滌完扣干（每次應保持30-60秒的浸泡時間）。

8.8顯色：每孔加入底物A、B各50I,輕拍混勻，置37℃暗處15分鐘。

8.9終止：每孔加終止液501,混勻。

8.10測定：用酶標儀單波長450nm或雙波長450/630nm測定各孔OD值（用單波長測定

時需設空白對照一孔，30分鐘內完成測定，并記錄結果）。

9.結果判斷與分析

9.1臨界值（C.O.）的計算：

臨界值=陰性對照孔OD值N義0.2

9.2結果判定：樣品OD值S/C.O<=1者為HBcAb陽性

樣品OD值S/C.O>1者為HBcAb陰性

10.質量控制：

每次試驗用含量為2NCU/ml的HBcAb質控血清同步檢測，S/CO值應在控制范圍內；

如失控，則要檢查試劑效期、儲藏溫度、試驗溫度是否正常、操作步驟是否正確，直至

重新試驗使其在控。

11.參考范圍：陰性

12.臨床意義：高效價陽性表示現實感染，低效價陽性表示既往感染。

13.操作性能：靈敏度高，特異性好。

14.方法局限性：樣品顯色深淺與樣品中抗體的含量沒有一定相關。

15.注意事項

15.1每板建議設陰陽性對照血清各兩孔，設空白對照時，不加樣品及酶標記抗體，其余

各步相同。

15.2洗滌時各孔均須加滿，防止孔口內有游離酶未能洗凈。

15.3加試劑前應將試劑瓶翻轉數次，使液體混勻。如果滴加，滴加前應棄去「2滴。滴

加時瓶身應保持垂直，以使滴量準確。注意勿將試劑滴在孔壁上。

15.4所有樣品都應按傳染源處理。

15.5封口膜使用說明

15.5.1微孔板拆封后，在取出當天所需的微孔條后，其余微孔條可以封口膜封存以避免

受潮。在封存時，注意勿把封口膜粘貼到微孔條底部，以免影響其透光性。

15.5.2微孔板溫育時，以封口膜覆蓋孔口，可避免其他因素對實驗帶來的非預期的影響。

15.6不同品名、不同批號的試劑不可混用，以免產生錯誤結果。

16.當檢測系統(tǒng)（儀器）不能工作時，所采取的補救措施：應保證所有操作步驟正確無誤；

可以比對陰陽對照，肉眼判讀；無法準確判讀者，應留樣待系統(tǒng)正常后復查。

17.參考文獻：中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司編。全國臨床檢驗操作規(guī)程（第二版）413

頁。

18.其它：必須按規(guī)定使用經中國藥品生物制品檢定所檢定并貼有“檢定合格”防偽標簽

的試劑。

血清丙型肝炎病毒抗體檢測(ELISA)

1.原理

在微孔條上預包被丙型肝炎病毒(HCV)重組嵌合抗原，采用ELISA法檢測丙型肝炎

病毒抗體。樣品加入已有樣品稀釋液的包被抗原反應孔，在隨后的溫育過程中，若樣品

中含特異抗體，則該抗體與包被抗原形成抗原抗體復合物被吸附到固相，再加入酶標記

的第二，最終形成抗原-抗體-酶標二抗復合物，洗滌除去未結合的游離酶，加入顯色劑后

顯色。

2.標本采集

2.1采集前病人準備：受檢者應空腹

2.2標本種類：血清或血漿

2.3標本要求：采集病人靜脈血2ml,室溫放置不超過4小時，分離血清備用。

3.標本儲存：2-8°C保存不應超過1周，-20°C不應超過3個月，-70°C長期保存，應

避免反復凍融。

4.標本運輸：密封，室溫運輸。

5.標本拒收標準：污染、標本量不足、嚴重溶血或脂血標本不宜作此項檢測。

6.試劑

6.1試劑名稱：丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒

6.2試劑生產廠家：上海榮盛生物藥業(yè)有限公司。

6.3包裝規(guī)格：96Test/盒

6.4試劑盒組成：包被反應板，樣品稀釋液，酶標記抗體，陽性對照血清，陰性對照血清，

濃縮洗滌液，底物A,底物B,終止液，封口膜，密封袋。

6.5試劑儲存條件及有效期：2-8°C避光保存，有效期12個月。

7.儀器設備

7.1儀器名稱：自動酶標儀

8.操作步驟

8.1平衡：將試劑盒各組分取出，平衡至室溫（18-25°C）,微孔板開封后，余者及時以

自封袋封存。

8.2配液：濃縮洗滌液配制前充分搖勻（如有晶體應充分溶解），濃縮洗滌液和蒸儲水或

去離子水按1：19稀釋后使用。

8.3編號：將微孔條固定于支架，按序編號。

8.4加樣品稀釋液：用加樣器在微孔反應條板孔中加入樣品稀釋液，每孔1001,空下四

孔準備加對照。

8.5加標本和留空白：將每份待檢標本各101分別加入已有樣品稀釋液的各孔中，留下

一孔不加標本作空白對照，標好位置。

8.6加對照：在預先空下的四孔中用加樣器分別加入陰性對照一孔，陽性對照三孔，每孔

1001,標好位置。對照應在所有標本加完以后再加，以保