ICS65.020DB22B05吉林省地方標(biāo)準(zhǔn)DB22/T2805.1—2017大豆主要病蟲害抗性鑒定技術(shù)規(guī)范第1部分：抗疫霉根腐病Technicalspecificationforidentificationofsoybeanresistancetomaindiseasesandpests-吉林省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布DB22/T2805.1—2017前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由吉林省農(nóng)業(yè)委員會(huì)提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張金花、張偉、賈嬌、劉曉梅、劉煜財(cái)、李啟云、任金平、高月波、王義生、姜兆遠(yuǎn)、張強(qiáng)、李小宇、高鵬。IDB22/T2805.1—2017大豆主要病蟲害抗性鑒定技術(shù)規(guī)范第1部分：抗疫霉根腐病1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了室內(nèi)人工接種法鑒定大豆對(duì)疫霉根腐病抗性的試驗(yàn)條件、菌種來源及保存、鑒定方法、病情調(diào)查、抗性評(píng)價(jià)和鑒定記錄。本標(biāo)準(zhǔn)適用于大豆對(duì)疫霉根腐病抗性的室內(nèi)人工接種鑒定及評(píng)價(jià)。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。NY/T2114大豆疫霉病菌檢疫檢測(cè)與鑒定方法3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。由大豆疫霉菌（PhytophthorasojaeKaufman&Gerdemann）侵染大豆引起根或莖基部腐爛、葉片變?cè)囼?yàn)要求在可控條件溫室或大棚中進(jìn)行。溫度20℃～30℃，相對(duì)濕度75%～90%，光照強(qiáng)度2000lx～2500lx。1DB22/T2805.1—2017選用當(dāng)?shù)夭杉⒎蛛x鑒定后的病原菌（應(yīng)按NY/T2114執(zhí)行）或者實(shí)驗(yàn)室內(nèi)保存的有代表性的菌株。5.2菌種保存將生長于胡蘿卜斜面培養(yǎng)基菌種置于10℃～17℃冰箱中短期（1個(gè)～2個(gè)月）保存或液氮長期保存。5.3接種體的繁殖選取無雜菌，菌絲白色，生長均勻的轉(zhuǎn)菌試管，菌體在胡蘿卜瓊脂（Carrotagar，CA）培養(yǎng)基上擴(kuò)繁。選取分離純化的大豆疫霉菌菌株，接種于CA平板后在25℃黑暗條件下于溫箱內(nèi)培養(yǎng)8d備用。6鑒定方法6.1試驗(yàn)材料種植將試驗(yàn)材料播種在裝有無菌土的營養(yǎng)缽（直徑10cm～15cm，高度10cm）中，等距、等深播種，每缽保苗3株，每個(gè)重復(fù)5缽，3次重復(fù)。設(shè)置抗感對(duì)照品種。出苗前溫室溫度不超過25℃～30℃，出苗后溫度控制在不超過20℃～25℃。6.2接種體準(zhǔn)備將保存的菌種在CA平板培養(yǎng)基上活化，轉(zhuǎn)接到CA平板上繁殖，置于25℃恒溫培養(yǎng)箱黑暗條件下培養(yǎng)。采用下胚軸傷口接種法。用滅菌后的刀片在大豆子葉節(jié)下方1cm處縱向輕劃長度約為1cm的傷口，深度不超過莖稈直徑的三分之一。取5mm菌膜夾在傷口處，接種后立即罩上塑料袋保濕48h，在試驗(yàn)條件下培養(yǎng)。7病情調(diào)查7.2調(diào)查方法按分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)逐株調(diào)查，記載病級(jí)（見附錄C），達(dá)到9級(jí)即為死亡，計(jì)算植株死亡率。Pn100......................................(1)N2DB22/T2805.1—2017式中：P——植株死亡率；n——死亡病株數(shù)；N——接種株數(shù)。8抗性評(píng)價(jià)8.1有效性判別當(dāng)設(shè)置的感病對(duì)照品種達(dá)到P≥70，視該批次鑒定有效。8.2抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)鑒定材料的植株死亡率確定其對(duì)大豆疫霉根腐病的抗性水平，劃分標(biāo)準(zhǔn)如下：表1大豆對(duì)疫霉根腐病抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)植株死亡率0≤P≤30抗性評(píng)價(jià)抗病（R）30＜P＜7070≤P≤100中間類型（M）感病（S）8.3重復(fù)鑒定9鑒定記錄技術(shù)負(fù)責(zé)人：3DB22/T2805.1—2017AA附錄A（資料性附錄）大豆疫霉根腐病菌和癥狀A(yù).1學(xué)名和形態(tài)描述A.1.1學(xué)名大豆疫霉菌（PhytophthorasojaeKaufman&Gerdemann)，屬卵菌門疫霉屬真菌。A.1.2形態(tài)描述有性時(shí)期產(chǎn)生卵孢子球形，壁厚，單生在藏卵器里。雄器側(cè)生。卵孢子發(fā)芽長出芽管，形成菌絲或游動(dòng)孢子囊。游動(dòng)孢子囊無乳狀突起，萌發(fā)后形成游動(dòng)孢子或直接萌發(fā)生出芽管。A.2癥狀侵染大豆后可引起根系腐爛、葉片變黃萎蔫、猝倒死亡，在大豆的任何生育階段都可侵染。在高濕條件下引起爛種、爛芽。苗期發(fā)病則在近地表莖部出現(xiàn)水漬狀病斑。成株期受侵染后葉片自下而上逐漸變黃并很快萎蔫，植株死亡后葉片仍不脫落，近地面莖部黑褐色（巧克力色）病斑，并可向上擴(kuò)展至10～11節(jié)位，莖的皮層及髓變褐，中空易折斷，根腐爛，根系極少；未死亡病株莢數(shù)明顯減少，空莢、癟莢較多，籽粒皺縮。綠色豆莢基部被害，最初病斑水漬狀，后逐漸變褐并從莢柄向上蔓延至莢尖，最后整個(gè)豆莢變枯呈黃褐色，種子失水干癟，種皮、胚和子葉均可帶菌。4DB22/T2805.1—2017BB附錄B（規(guī)范性附錄）胡蘿卜瓊脂培養(yǎng)基（CA培養(yǎng)基）胡蘿卜200g加蒸餾水500ml,用榨汁機(jī)攪碎，用4層紗布過濾，濾液用蒸餾水補(bǔ)充至1000ml，加瓊脂20g，溶化后分裝滅菌，121℃滅菌20min。5DB22/T2805.1—2017CC附錄C（規(guī)范性附錄）分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)0級(jí)：接種部位無變化稍變褐；1級(jí)：接種部位產(chǎn)生病斑，病斑面積占莖部面積的四分之一以下；3級(jí)：接種