湖北省宜昌第二中學(xué)2024-2025學(xué)年生物高二下期末復(fù)習(xí)檢測模擬試題考生須知：1．全卷分選擇題和非選擇題兩部分，全部在答題紙上作答。選擇題必須用2B鉛筆填涂；非選擇題的答案必須用黑色字跡的鋼筆或答字筆寫在“答題紙”相應(yīng)位置上。2．請用黑色字跡的鋼筆或答字筆在“答題紙”上先填寫姓名和準(zhǔn)考證號。3．保持卡面清潔，不要折疊，不要弄破、弄皺，在草稿紙、試題卷上答題無效。一、選擇題(本大題共7小題,每小題6分,共42分。)1．下圖表示胡蘿卜植物組織培養(yǎng)的過程，下列關(guān)于①②③過程敘述正確的是A．均應(yīng)避光培養(yǎng) B．所用培養(yǎng)基相同C．都應(yīng)避免雜菌污染 D．都進(jìn)行細(xì)胞分化2．在模擬孟德爾雜交實驗中，從下圖松緊袋中隨機(jī)抓取一個小球并作相關(guān)記錄，每次將抓取的小球分別放回原松緊袋中，重復(fù)100次。下列敘述錯誤的是A．從①②中各隨機(jī)抓取一個小球并組合，可模擬基因的自由組合定律B．從③④中各隨機(jī)抓取一個小球并組合，模擬F1（Dd）自交產(chǎn)生F2C．從①②③④中各隨機(jī)抓取一個小球并組合，模擬（BbDd）自交產(chǎn)生F2D．從①③或②④中各隨機(jī)抓取一個小球并組合，統(tǒng)計結(jié)果中BD組合的概率約為1/43．有絲分裂是真核生物細(xì)胞增殖的主要方式，有關(guān)動植物細(xì)胞有絲分裂的敘述，不正確的是（）A．植物細(xì)胞有絲分裂末期在赤道板的位置出現(xiàn)細(xì)胞板，動物細(xì)胞則無此現(xiàn)象B．洋蔥根尖分生區(qū)細(xì)胞有絲分裂有關(guān)的膜性細(xì)胞器有核糖體、中心體、線粒體、高爾基體C．動物細(xì)胞分裂時中心體在間期進(jìn)行復(fù)制，并于分裂期進(jìn)行均勻分配D．高等動植物細(xì)胞有絲分裂時紡錘體的形成方式是不同的4．與普通洗衣粉相比，加酶洗衣粉能更有效地清除污漬。下列有關(guān)敘述正確的是A．加酶洗衣粉是添加了固定化酶的洗衣粉B．加酶洗衣粉中的某種酶可以清除各種污漬C．加酶洗衣粉在各種條件下的洗滌效果都比普通洗衣粉好D．水質(zhì)、水量、水溫、水的酸堿度都會影響加酶洗衣粉的洗滌效果5．已知a、b、c、d是某細(xì)菌DNA片段上的4個基因，下圖中W表示野生型，①、②、③分別表示三種缺失不同基因的突變體，虛線表示所缺失的基因。若分別檢測野生型和各種突變體中某種酶的活性，發(fā)現(xiàn)僅在野生型和突變體①中該酶有活性，則編碼該酶的基因是（）A．基因a B．基因bC．基因c D．基因d6．下列各選項與所給模型不相符的是A．若X表示種群數(shù)量，則①代表出生率或遷入率B．若X表示生態(tài)系統(tǒng)抵抗力穩(wěn)定性，則①可能代表物種豐富度C．若X表示捕食鏈中第二營養(yǎng)級的總能量，則②代表第一營養(yǎng)級的總能量D．若X表示無機(jī)環(huán)境中的碳元素，則②表示光合作用7．下列關(guān)于細(xì)胞生命歷程的敘述，正確的是（）A．細(xì)胞衰老過程中各種酶活性降低 B．分化程度越高的細(xì)胞遺傳物質(zhì)改變越大C．燙傷引起的細(xì)胞死亡屬于細(xì)胞凋亡 D．植物通氣組織的形成通過細(xì)胞凋亡實現(xiàn)8．（10分）某種細(xì)菌能分泌胞外酶將有機(jī)磷殺蟲劑樂果降解，某研究小組進(jìn)行了該細(xì)菌對某水稻田泥土中殘留樂果的分解能力的研究，結(jié)果如圖。下列相關(guān)分析中正確的是A．本實驗中的自變量有泥土含水量、溫度、處理時間B．本實驗采用的對照方法有空白對照和相互對照C．本實驗需要測定泥土中樂果初始含量和3天后的含量D．該細(xì)菌分解泥土中樂果效果最好的條件是20℃、泥土含水量20%－40%二、非選擇題9．（10分）如圖所示，圖甲表示某大棚蔬菜葉肉細(xì)胞的部分結(jié)構(gòu)和相關(guān)代謝情況，其中a~f代表O4或CO4。圖乙表示該植物在不同光照強(qiáng)度下的數(shù)據(jù)，圖丙代表某植物在一天內(nèi)吸收CO4變化情況。請據(jù)圖回答下列問題：（1）在圖甲中，b可代表___________，物質(zhì)b進(jìn)入箭頭所指的結(jié)構(gòu)后與[H]結(jié)合，生成大量的水和能量。（4）圖乙中光照強(qiáng)度為a時，可以發(fā)生圖甲中的哪些過程（用圖甲中字母表示）?_______；圖乙中光照強(qiáng)度為b時，該葉肉細(xì)胞光合作用速率________（填<、=、>）呼吸作用速率；光照強(qiáng)度為c時，單位時間內(nèi)該葉肉細(xì)胞從周圍吸收________單位CO4；光照強(qiáng)度為d時，單位時間內(nèi)該葉肉細(xì)胞呼吸作用速率是凈光合作用速率的________倍。（4）圖丙中，若C、F時間所合成的葡萄糖速率相同，均為43mg/dm4h，則A、C、F三點的呼吸強(qiáng)度的比較結(jié)果是A_____C______F（填<、=、>），若E點時間的呼吸速率與F點相同，則E時間合成葡萄糖的速率為______mg/dm4h（小數(shù)點后保留一位小數(shù)），一天中到________（用圖中字母表示）時間該植物積累的有機(jī)物總量最多。（4）以測定CO4吸收速率與釋放速率為指標(biāo)，探究溫度對某綠色植物光合作用與細(xì)胞呼吸的影響，結(jié)果如表所示：溫度/℃51343454345光照條件下CO4釋放速率（mg·h–1）11．84．44．74．54黑暗條件下CO4釋放速率（mg·h–1）3．53．7514．444．5①光照條件下，溫度由45℃升高為43℃后光合作用制造的有機(jī)物總量_________（填“增加”“不變”或“減少”）。②假設(shè)細(xì)胞呼吸晝夜不變，植物在43℃時，給植物光照14h，則一晝夜凈吸收CO4的量為________mg。10．（14分）基因工程中可以通過PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因。回答下列問題。（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀╛_______和________。（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是________。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是________。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的________。（3）目前在PCR反應(yīng)中使用Taq酶而不使用大腸桿菌DNA聚合酶的主要原因是________。11．（14分）內(nèi)皮抑素是從血管內(nèi)皮細(xì)胞瘤中分離出的一種內(nèi)源性血管生成抑制因子，能特異性地抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移。某小組為獲得內(nèi)皮抑素，構(gòu)建分泌型內(nèi)皮抑素基因表達(dá)載體，并在C6細(xì)胞（大鼠源性膠質(zhì)瘤細(xì)胞）中表達(dá)。具體操作如下：（1）構(gòu)建分泌型內(nèi)皮抑素基因表達(dá)載體①采用相關(guān)技術(shù)提取1日齡SD大鼠大腦半球組織中的總RNA，檢測RNA質(zhì)量和濃度。②內(nèi)皮抑素cDNA的獲得：以上述提取的RNA為模板，通過________過程獲得cDNA，并利用PCR技術(shù)體外擴(kuò)增cDNA。PCR技術(shù)中除需目的基因作為模板外，還需要的條件有________和控制溫度等。③為避免目的基因和載體自身環(huán)化，酶切目的基因和載體時，可用________酶切割，以保證目的基因兩側(cè)和載體上具有________。（2）目的基因在C6細(xì)胞中表達(dá)（將目的基因?qū)隒6細(xì)胞中，并表達(dá)）①培養(yǎng)C6細(xì)胞時，為防止雜菌污染，可在培養(yǎng)基中加入一定量的________。②若要檢測目的基因是否成功整合到受體細(xì)胞的DNA上，可采用________技術(shù)。③導(dǎo)入C6細(xì)胞中的目的基因成功表達(dá)后，會使C6細(xì)胞在大鼠體內(nèi)的________可能會受到抑制。12．艾滋病是一種死亡率極高的傳染性疾病，截止目前全世界約有3690萬人感染HIV，對HIV疫苗或艾滋病相關(guān)藥物的研制勢在必行。目前科學(xué)家對HIV蛋白質(zhì)的分析表明：該蛋白質(zhì)分子中含有半胱氨酸(R基為：一CH2一SH)。據(jù)此回答下列問題：(1)HIV屬于_______(填“原核”、“真核”、“DNA病毒”或“RNA病毒”)生物，HIV侵人人體的T細(xì)胞后，在_______的催化作用下合成DNA，并與宿主基因整合進(jìn)行大量復(fù)制增殖，破壞人體免疫系統(tǒng)，引發(fā)艾滋病。(2)某科學(xué)家為攻克艾滋病，需要用同位素標(biāo)記法，獲得只標(biāo)記核酸的HIV和只標(biāo)記蛋白質(zhì)的HIV來進(jìn)行研究，但是因工作繁忙，科學(xué)家想求助與你，他們給你提供了不含同位素的HIV、T2噬菌體、大腸桿菌、B細(xì)胞、T細(xì)胞;含有同位素14℃的培養(yǎng)基、含有同位素15N的培養(yǎng)基、含有同位素32P的培養(yǎng)基、含有同位素35S的培養(yǎng)基和相關(guān)的試驗設(shè)備，請你選擇你要用到的材料，自行設(shè)計試驗思路，培養(yǎng)出科學(xué)家所需要的兩種HIV：_______________________________________

參考答案一、選擇題(本大題共7小題,每小題6分,共42分。)1、C【解析】

分析題圖：①～③過程分別表示脫分化、再分化、生長與發(fā)育?！驹斀狻緼、①過程為脫分化，需要在避光條件下培養(yǎng)，②過程為再分化，③過程為生長與發(fā)育，②③都需要給予光照條件，A錯誤；B、過程①（脫分化）②（再分化）分別使用誘導(dǎo)脫分化培養(yǎng)基和誘導(dǎo)再分化培養(yǎng)基，②需要更換培養(yǎng)基，愈傷組織才能進(jìn)一步分化，因此所用培養(yǎng)基存在差異，B錯誤；C、①②③過程都應(yīng)避免雜菌污染，以防止雜菌與培養(yǎng)物爭奪營養(yǎng)并危害培養(yǎng)物生長，C正確；D、①過程沒有進(jìn)行細(xì)胞分化，②③過程都進(jìn)行細(xì)胞分化，D錯誤。故選C。解答此題的關(guān)鍵是識記并理解植物組織培養(yǎng)的具體過程、注意事項。在此基礎(chǔ)上，準(zhǔn)確判斷圖中各數(shù)字所示過程的名稱，進(jìn)而分析判斷各選項的正誤。2、A【解析】

本題考查模擬基因分離定律和自由組合定律的實驗，要求考生掌握基因分離和自由組合的實質(zhì)，明確實驗中所用的容器、小球和小球的隨機(jī)結(jié)合所代表的含義;其次要求考生掌握性狀分離比的模擬實驗的原理,注意實驗過程中相關(guān)操作的細(xì)節(jié)。①②兩袋中的小球是一對等位基因，③④兩袋中的小球是另一對等位基因?！驹斀狻竣佗谥行∏蚰M的是等位基因，各隨機(jī)抓取一個小球并組合,可模擬基因分離定律和受精作用,A錯誤。③④中小球模擬等位基因，各隨機(jī)抓取一個小球并組合,模擬F1(Dd)自交產(chǎn)生F2，體現(xiàn)分離定律,B正確。①②③④中小球模擬兩對同源染色體上的兩對等位基因，各隨機(jī)抓取一個小球并組合，模擬(BbDd)自交產(chǎn)生F2，體現(xiàn)自由組合定律，C正確。從①③或②④中各隨機(jī)抓取一個小球并組合,模擬基因自由組合，BD組合模擬一種基因型的配子，其概率約為25%，D正確，故選A。搞清模擬的是一對基因還是兩對基因是關(guān)鍵，一對按基因分離定律解答，兩對按基因自由組合定律解答。3、B【解析】

動植物細(xì)胞有絲分裂的異同點：（1）前期紡錘體的形成不同：植物細(xì)胞的紡錘體是由細(xì)胞質(zhì)兩極發(fā)出紡錘絲形成的，而動物細(xì)胞的紡錘體是由中心體發(fā)出的星射線形成的；（2）末期子細(xì)胞形成的方式不同：動物細(xì)胞是由細(xì)胞膜在細(xì)胞中央向內(nèi)凹陷，一個細(xì)胞縊裂成兩個細(xì)胞；植物細(xì)胞在分裂末期細(xì)胞中央出現(xiàn)細(xì)胞板，細(xì)胞板由中央向四周延展，最后形成細(xì)胞壁，一個細(xì)胞分裂成兩個細(xì)胞；（3）共同點：間期都進(jìn)行染色體的復(fù)制，各時期染色體的行為變化相同?！驹斀狻恐参锛?xì)胞有絲分裂末期在赤道板的位置出現(xiàn)細(xì)胞板，動物細(xì)胞則無此現(xiàn)象，A正確；洋蔥根尖分生區(qū)細(xì)胞有絲分裂有關(guān)的膜性細(xì)胞器有線粒體、高爾基體，無膜性細(xì)胞器有核糖體、中心體，B錯誤；動物細(xì)胞分裂時中心體在間期進(jìn)行復(fù)制，并于分裂前期進(jìn)行均勻分配，C正確；高等動植物細(xì)胞有絲分裂時紡錘體的形成方式是不同的，D正確；故選B。本題主要考察動植物細(xì)胞有絲分裂的相關(guān)知識，意在考查學(xué)生對知識點識記、理解與運(yùn)用能力，相關(guān)的基礎(chǔ)知識要牢記。4、D【解析】

加酶洗衣粉是指含有酶制劑的洗衣粉，固定化酶是指在一定的空間范圍內(nèi)起催化作用，并能反復(fù)和連續(xù)使用的酶?！驹斀狻緼、加酶洗衣粉不能反復(fù)、連續(xù)使用，不是添加了固定化酶的洗衣粉，A錯誤；B、酶具有專一性，加酶洗衣粉中的某種酶只可以清除某種污漬，B錯誤；C項和D項、酶的催化需要適宜的溫度、pH，加酶洗衣粉在溫度過高、過酸、過堿的條件下洗滌效果不比普通洗衣粉好，水質(zhì)、水量、水溫、水的酸堿度都會影響加酶洗衣粉的洗滌效果，C錯誤，D正確。故選D。5、B【解析】

因為該酶僅在野生型和突變體①中有活性，說明編碼該酶的基因存在于野生型和突變體①中，且不存在于突變體②和突變體③中，由圖比較觀察知，野生型和突變體①同時含有且突變體②和突變體③同時不含有的基因為基因b。所以，答案為基因b，正確選項是B。6、C【解析】

種群的數(shù)量特征包括：種群密度、出生率和死亡率、遷入率和遷出率、年齡組成及性別比例。生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性主要包括抵抗力穩(wěn)定性和恢復(fù)力穩(wěn)定性。生產(chǎn)者同化量的去向包括：流向下一營養(yǎng)級、流向分解者、用于呼吸散失的能量?！驹斀狻緼、若X表示種群數(shù)量，則①代表出生率或遷入率，②可以表示死亡率或遷出率，A正確；B、若X表示生態(tài)系統(tǒng)抵抗力穩(wěn)定性，則①可能代表物種豐富度，物種豐富度越高，抵抗力穩(wěn)定性越強(qiáng)，B正確；C、若X表示捕食鏈中第二營養(yǎng)級的總能量，則②應(yīng)該代表第二營養(yǎng)級同化量的去向，可以表示第三營養(yǎng)級的同化量等，C錯誤；D、若X表示無機(jī)環(huán)境中的碳元素，則②表示光合作用，①可以表示呼吸作用，D正確。故選C。碳元素主要通過光合作用進(jìn)入生物群落，通過呼吸作用進(jìn)入無機(jī)環(huán)境。7、D【解析】

1、細(xì)胞分化是指在個體發(fā)育中，由一個或一種細(xì)胞增殖產(chǎn)生的后代，在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上發(fā)生穩(wěn)定性差異的過程；細(xì)胞分化發(fā)生在生物體的整個生命進(jìn)程中，是一種持久性變化，分化導(dǎo)致的穩(wěn)定性差異一般是不可逆轉(zhuǎn)的。2、衰老細(xì)胞的特征：（1）細(xì)胞內(nèi)水分減少，細(xì)胞萎縮，體積變小，但細(xì)胞核體積增大，染色質(zhì)固縮，染色加深；（2）細(xì)胞膜通透性功能改變，物質(zhì)運(yùn)輸功能降低；（3）細(xì)胞色素隨著細(xì)胞衰老逐漸累積；（4）有些酶的活性降低；（5）呼吸速度減慢，新陳代謝減慢。3、細(xì)胞凋亡是由基因決定的細(xì)胞自動結(jié)束生命的過程，細(xì)胞壞死是在種種不利因素影響下，由于細(xì)胞正常代謝活動受損或中斷引起的細(xì)胞損傷和死亡。【詳解】A、細(xì)胞衰老導(dǎo)致細(xì)胞代謝水平降低，大多數(shù)酶活性都降低，但有些水解酶的活性升高，A錯誤；B、分化的細(xì)胞的遺傳物質(zhì)不會發(fā)生改變，其實質(zhì)是基因的選擇性表達(dá)，B錯誤；C、燙傷引起的細(xì)胞死亡屬于細(xì)胞壞死，C錯誤；D、植物具有大量細(xì)胞間隙的薄壁組織，稱為通氣組織，是細(xì)胞凋亡的結(jié)果，D正確。故選D。本題考查有關(guān)細(xì)胞生命歷程的相關(guān)知識，意在考查考生的識記能力和理解所學(xué)知識要點，把握知識間內(nèi)在聯(lián)系，形成知識網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的能力；能運(yùn)用所學(xué)知識，準(zhǔn)確判斷問題的能力。8、C【解析】

本實驗的自變量有泥土含水量、溫度，處理時間屬于無關(guān)變量；實驗組是經(jīng)過處理的；對照組是未經(jīng)過處理的；實驗過程中可變化的因素稱之為變量；想研究并可人為改變的變量稱為自變量；隨著自變量的變化而變化的變量稱為因變量；在實驗中存在的一些可變因素，能對結(jié)果造成影響，這些變量稱為無關(guān)變量?！驹斀狻緼、本實驗的自變量有泥土含水量、溫度，處理時間屬于無關(guān)變量，A錯誤；B、本實驗設(shè)置的對照有不同溫度的相互對照，不同泥土含量的相互對照，沒有設(shè)置空白對照，B錯誤；C、由圖可知本實驗需要測定樂果在泥土中的初始含量以及三天后的含量，C正確；D、由圖可知，20℃的情況下三天后泥土中的樂果含量最低，可知該細(xì)菌分解泥土中樂果效果最好的條件是20攝氏度左右，但是由于缺少泥土含水量低于20%和高于80%的實驗數(shù)據(jù)，無法確認(rèn)何種情況下效果最好，D錯誤。故選：C。二、非選擇題9、氧氣e、f<34=＜44.5O增加19【解析】

分析題圖可知，甲圖中a、c、f是二氧化碳，b、d、e是氧氣。圖乙中葉綠體產(chǎn)生氧氣總量為總光合速率，二氧化碳釋放量為凈光合速率，二氧化碳釋放量大于3，說明呼吸速率大于總光合速率。圖丙中A點開始進(jìn)行光合作用，H點為光合作用消失點，BO段凈光合速率大于3，存在有機(jī)物的積累?！驹斀狻浚?）圖甲中線粒體消耗氧氣，產(chǎn)生二氧化碳，葉綠體消耗二氧化碳，產(chǎn)生氧氣，所以b代表氧氣。（4）圖乙中光照強(qiáng)度為a時，葉綠體不產(chǎn)生氧氣，細(xì)胞釋放二氧化碳，說明細(xì)胞只進(jìn)行呼吸作用，線粒體消耗的氧氣從外界吸收，產(chǎn)生的二氧化碳釋放到外界環(huán)境，所以可以發(fā)生圖甲中e、f過程；光照強(qiáng)度為b時，該葉肉細(xì)胞產(chǎn)生氧氣總量大于3，且CO4釋放量大于3，說明此時呼吸速率＞光合速率；光照強(qiáng)度為c時，單位時間內(nèi)該葉肉細(xì)胞產(chǎn)生O4總量為6個單位，由光照強(qiáng)度為a點對應(yīng)的狀態(tài)分析可知，細(xì)胞呼吸需要的O4量也為6個單位，即此時光合速率等于呼吸速率，單位時間內(nèi)該葉肉細(xì)胞從周圍吸收3單位CO4。光照強(qiáng)度為d時，單位時間內(nèi)該葉肉細(xì)胞呼吸速率與光照強(qiáng)度為a時相同，為6個單位，凈光合作用速率為8-6=4個單位，所以該葉肉細(xì)胞呼吸作用速率是凈光合作用速率的6÷4=4倍。（4）呼吸速率=實際光合速率-凈光合速率，以二氧化碳釋放量表示，A點呼吸速率為8，C點的凈光合速率為46，F(xiàn)點的凈光合速率為44，C、F時間所合成的葡萄糖速率相等，均為43mg/dm4·h，根據(jù)每消耗6molCO4產(chǎn)生1mol葡萄糖，可將葡萄糖的量轉(zhuǎn)化為二氧化碳的量為（6×44×43）÷183=44mg/dm4·h，故C點的呼吸速率為44-46=8，F(xiàn)點呼吸速率為44-44=14，故A、C、F三點的呼吸強(qiáng)度的比較結(jié)果是F>C=A。若E點時間的呼吸速率與F點相同，用二氧化碳表示為14mg/dm4·h，E點的凈光合速率用二氧化碳表示為44mg/dm4·h，則E點的總光合速率為44+14=46mg/dm4·h，轉(zhuǎn)換為合成葡萄糖的速率為（183×46）÷（6×44）≈44.5mg/dm4h。BO時間段內(nèi)凈光合速率大于3，而O點之后凈光合速率小于3，所以一天中到O時間該植物積累的有機(jī)物總量最多。（4）①光照條件下CO4釋放速率表示凈光合速率，黑暗條件下CO4釋放速率表示呼吸速率，實際光合速率=呼吸速率+凈光合速率，所以45℃時固定CO4的量為4.7+4.4=6mg·h–1，43℃時固定CO4的量為4.5+4=6.5mg·h–1，固定CO4的量大，制造的有機(jī)物多，所以溫度由45℃升高為43℃后光合作用制造的有機(jī)物總量增加。②假設(shè)細(xì)胞呼吸晝夜不變，植物在43℃時，一晝夜中給植物光照14h，則細(xì)胞呼吸釋放的CO4量為4×44=74mg，總光合作用消耗CO4量為（4.5+4）×14=91mg，所以一晝夜凈吸收CO4的量=總光合作用消耗CO4量-細(xì)胞呼吸釋放的CO4量=91-74=19mg。解答本題的關(guān)鍵是理解實際光合速率、凈光合速率與呼吸速率的指標(biāo)及其相應(yīng)關(guān)系，確定甲圖中各個字母的含義以及在不同的生理條件下可以發(fā)生的字母，并能夠判斷乙圖中各個字母或者線段的含義。10、基因組文庫cDNA文庫解旋酶加熱至90-95℃氫鍵Taq酶熱穩(wěn)定性高，而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會失活【解析】

基因工程的操作步驟：目的基因的獲?。ɑ蛭膸飓@取、PCR、人工合成）；構(gòu)建基因表達(dá)載體（含目的基因、標(biāo)記基因、啟動子、終止子、復(fù)制原點）；把目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞（顯微注射法、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、鈣離子處理法）；目的基因的檢測和鑒定（分子水平—DNA分子雜交法、分子雜交法、抗原抗體雜交法和個體水平—抗蟲、抗病接種實驗等）?！驹斀狻浚?）基因文庫包括基因組文庫和部分基因文庫(CDNA文庫)，前者包括一種生物的全部基因，后者只包括一種生物的部分基因。（2）體內(nèi)進(jìn)行DNA復(fù)制時，需要解旋酶和DNA聚合酶，解旋酶可以打開雙鏈之間的氫鍵，DNA聚合酶可以催化磷酸二酯鍵的形成。在體外進(jìn)行PCR擴(kuò)增時，利用高溫變性即加熱至90-95℃，破壞雙鏈之間的氫鍵，使DNA成為單鏈。解旋酶和高溫處理都破壞了DNA雙鏈中堿基對之間的氫鍵。（3）由于在PCR過程中，需要不斷的改變溫度，該過程中涉及較高溫度處理變性，大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)的DNA聚合酶在高溫處理下會變性失活，因此PCR過程中需要用耐高溫的TaqDNA聚合酶催化。PCR的原理是DNA雙鏈的復(fù)制，故類似于細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制過程，需要模板、原料等條件。由于該過程中特殊的高溫條件，需要用耐高溫的DNA聚合酶。11、逆轉(zhuǎn)錄熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）、兩種引物、四種脫氧核苷酸不同的限制性核酸內(nèi)切（限制）不同的黏性末端抗生素DNA分子雜交增殖和遷移【解析】

基因工程的基本步驟是：①目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成；②基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因；③將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。④目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測，檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體DNA是否插入目的基因，可以用DNA分子雜交技術(shù)；檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，可以用分子雜交技術(shù)；檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，可以用抗原—抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。【詳解】（1）構(gòu)建分泌型內(nèi)皮抑素基因表達(dá)載體①采用相關(guān)技術(shù)提取1日齡SD大鼠大腦半球組織中的總RNA，檢測RNA質(zhì)量和濃度。②內(nèi)皮抑素cDNA的獲得：遺傳信息從RNA到DNA的過程叫逆轉(zhuǎn)錄。以上述提取的RNA為模板，通過逆轉(zhuǎn)錄過程獲得cDNA，并利用PCR技術(shù)體外擴(kuò)增cDNA。PCR技術(shù)中除需目的基因作為模板外，還需要的條件有熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）、兩種引物、四種脫氧核苷酸和控制溫度等。③為避免目的基因和載體自身環(huán)化，酶切目的基因和載體時，可用雙酶切法，即不同的限制性核酸內(nèi)切（限制）酶切割，以保證目的基因兩側(cè)和載體上具有不同的黏性末端。（2）目的基因在C6細(xì)胞中表達(dá)（將目的基因?qū)隒6細(xì)胞中，并表達(dá)）①培養(yǎng)C6細(xì)胞時，為防止雜菌污染，可在培養(yǎng)基中加入一定量的抗生素。②據(jù)分析可知，若要檢測目的基因是否成功整合到受體細(xì)胞的DNA上，可采用DNA分子雜交技術(shù)。③根據(jù)題干中信息可知，導(dǎo)入C6細(xì)胞中的目的基因成功表達(dá)后，會使C6細(xì)胞在大鼠體內(nèi)的增殖和遷移可能會受到抑制。解答本題的關(guān)鍵是