34DB34/T1373—2025動(dòng)物組織中氯丙嗪的殘留測(cè)定酶聯(lián)免疫DeterminationofchlorpromazineresiduesinanimaltissuesEnzyme-linkedimmunosorbentassay2025-01-24發(fā)布2025-02-24實(shí)施安徽省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I本文件代替DB34/T1373-2011）；）；）；）；）；f)更改了“結(jié)果判定和表述”（見(jiàn)第9章，2011版的1％）：％）：26.5離心機(jī)：≥4000g。6.9微量加樣器及配套吸頭：(單道20μL,50μL,100μL,多道57.1.1畜禽肌肉、肝臟、腎臟去筋膜切成小塊，粉碎機(jī)制成糜狀，10000rpm均質(zhì)2min。稱取2.0±0.05g均質(zhì)或攪拌均勻后組織樣品于50mL離心管中，分別加入2mL三氯乙酸溶液 (5.2)、6mL乙腈(5.3),渦動(dòng)5min,室溫4000g離心5min后，取2mL上層液于另一50mL離心管中，依次加入2mL氫氧化鈉溶液(5.4)和4.5mL正已烷(5.5),渦動(dòng)5min,4000g離心5min,取上層有機(jī)相3mL于離心管中，50℃~60℃氮?dú)獯蹈?，加?.5mL復(fù)溶工作液(5.1.9),制備好的試樣按檢樣和備樣置于4℃下可保存3天～4天，或于-18℃以下保存6個(gè)月。8.1測(cè)定在室溫(20℃~25℃)條件下操作，測(cè)定之前將試劑盒以及所有試劑恢復(fù)至室溫(約1h～28.2按標(biāo)準(zhǔn)工作液和供試樣品數(shù)量取孔條插入酶標(biāo)板(5.1.1),標(biāo)準(zhǔn)工作液和供試樣品做兩孔平行，8.3分別在各孔中加入50μL標(biāo)準(zhǔn)工作液(5.1.2)或7.3項(xiàng)下待測(cè)試樣溶液，每孔加入50μL抗體工作液(5.1.3),用蓋板膜封板，輕輕振蕩酶標(biāo)板10s,充分混勻，室溫下避光反應(yīng)60min。8.4揭開(kāi)蓋板膜，傾出板孔中的液體，在所有微孔中加260μL洗滌工作液(5.6),輕輕振蕩酶標(biāo)板復(fù)洗板4遍。8.5每孔加100μL底物A、B混合液(5.7)用蓋板膜封板，輕輕振蕩酶標(biāo)板10s,充分混勻，室溫下避光反應(yīng)15min～20min。8.6揭開(kāi)蓋板膜，每孔加50μL終止液(5.1.8),輕輕振蕩酶標(biāo)板10s,充分混勻，5min內(nèi)在4509.1用獲得的標(biāo)準(zhǔn)工作液和供試樣品溶液吸光度值的比值進(jìn)行計(jì)算，見(jiàn)式(1):3Bo—0濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液的平均吸光度值。9.2將計(jì)算的相對(duì)吸光度值(%)對(duì)應(yīng)氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(μg/L)的自然對(duì)數(shù)作半對(duì)數(shù)坐標(biāo)系統(tǒng)曲算見(jiàn)式(2):X—供試樣中氯丙嗪的含量，單位為微克/千克(μg/kg);A—供試樣的相對(duì)吸光度值(%)對(duì)應(yīng)的氯丙嗪的含量，單位為微克/升(μg/L);V—加入復(fù)溶工作液體積，單位為毫升(mL);m—試樣的取樣量，單位為克(g)。9.3檢測(cè)結(jié)果小于檢出限時(shí)判為未檢出，大于或等于檢出限時(shí)，應(yīng)使用色譜質(zhì)譜聯(lián)用法進(jìn)行確認(rèn)。本方法在畜禽肌肉、肝臟、腎臟及禽蛋的檢出限為0.5μg/kg。本方法在2～5倍檢出限添加濃度水平上的回收率為80%～120%。本方法的批內(nèi)變異系數(shù)CV%≤30%,