火鍋底料中去甲烏藥堿和曲托喹酚的測定

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

編制說明

1

目錄

1工作簡況........................................................................................................4

1.1標(biāo)準(zhǔn)制定的任務(wù)來源......................................................................................4

1.2主要工作過程..................................................................................................4

1.3標(biāo)準(zhǔn)起草單位和編制組成員..........................................................................4

2標(biāo)準(zhǔn)制定的必要性和預(yù)期效果....................................................................5

2.1標(biāo)準(zhǔn)編制的必要性..........................................................................................5

2.2標(biāo)準(zhǔn)編制的預(yù)期效果......................................................................................6

3標(biāo)準(zhǔn)制定的原則和依據(jù)................................................................................6

4主要技術(shù)內(nèi)容的論據(jù)....................................................................................6

5主要內(nèi)容和主要試驗....................................................................................7

5.1試驗試劑與材料..............................................................................................7

5.2儀器與設(shè)備......................................................................................................7

5.3標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制..............................................................................................7

5.3.1標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制...............................................................................7

5.3.2混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制.......................................................................8

5.3.3外標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)中間液的配制...............................................................8

5.3.4內(nèi)標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液的配制...........................................................8

5.3.5標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的配制...........................................................................8

5.4試驗樣品的處理..............................................................................................8

5.4.1提取.......................................................................................................8

5.4.2凈化.......................................................................................................8

5.4.3空白試驗...............................................................................................8

5.5儀器分析條件..................................................................................................9

5.5.1液相色譜條件.......................................................................................9

5.5.2質(zhì)譜條件...............................................................................................9

2

5.6結(jié)果與結(jié)論.....................................................................................................9

5.6.1儀器條件選擇......................................................................................9

5.6.2提取溶劑的選擇.................................................................................11

5.6.3線性范圍、基質(zhì)效應(yīng)以及定量限的考察........................................12

5.6.4方法準(zhǔn)確度和精密度........................................................................13

5.7實際樣品的測定............................................................................................15

5.8實驗室間驗證結(jié)果........................................................................................15

6采用國際標(biāo)準(zhǔn)的程度與水平的簡要說明...................................................18

7標(biāo)準(zhǔn)涉及的專利及相關(guān)知識產(chǎn)權(quán)說明.......................................................18

8重大意見分歧的處理經(jīng)過和依據(jù)...............................................................18

9與現(xiàn)行法律法規(guī)和強制性標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系.......................................................18

3

1工作簡況

1.1標(biāo)準(zhǔn)制定的任務(wù)來源

為了調(diào)查調(diào)味品中食源性興奮劑的含量以評估運動員食品的風(fēng)險，北京市科學(xué)技

術(shù)研究院分析測試研究所（北京市理化分析測試中心）（原北京市理化分析測試中心，

以下簡稱“分析測試所”）自立改革與發(fā)展課題《調(diào)味品中食源性興奮劑定量及確證

方法研究》（課題編號：2021ZL0115），執(zhí)行期為2021年3月-2022年2月。

1.2主要工作過程

2023年2月立項申請書提交至北京預(yù)防醫(yī)學(xué)會；3月27日，參加了北京預(yù)防醫(yī)

學(xué)會團體標(biāo)準(zhǔn)立項論證會，學(xué)術(shù)委員會專家聽取了立項報告，審閱了相關(guān)申報材料，

經(jīng)質(zhì)詢和討論，學(xué)術(shù)委員會建議將立項標(biāo)準(zhǔn)名稱改為“火鍋底料中去甲烏藥堿和曲托

喹酚的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法”，并一致同意通過了該課題的立項評審。本項目按

照以下技術(shù)路線開展工作，見圖1。

2021年3月到2022年3月，課題組經(jīng)過大量的實驗研究，完成了“液相色譜質(zhì)譜法

調(diào)味品中去甲烏藥堿和曲托喹酚”的方法開發(fā)，2022年2月，北京市疾病預(yù)防控制中

心對該方法進行了驗證，并于當(dāng)月收回了驗證報告，在此基礎(chǔ)上進行了數(shù)據(jù)的匯總和

分析整理工作，完成了項目技術(shù)報告，制定了方法的操作規(guī)程。分析測試所于2022

年3月對該項目進行的驗收，專家對操作規(guī)程提出建議，最終形成團體標(biāo)準(zhǔn)草案。2023

年3月立項論證會結(jié)束后，項目組成員又對火鍋底料基質(zhì)進行細化，于2023年7-9月邀

請2家單位對不同火鍋底料基質(zhì)進行方法驗證，進一步完善了標(biāo)準(zhǔn)文本和團標(biāo)草案。

1.3標(biāo)準(zhǔn)起草單位和編制組成員

本團體標(biāo)準(zhǔn)由分析測試所項目研究團隊起草，起草人王建鳳（高級工程師），馮

月超（副研究員）、劉艷（研究員），編制組成員還包括北京市疾病預(yù)防控制中心的

郭巧珍（副研究員）、姚凱（助理研究員）、張晶（研究員），北京市延慶區(qū)疾病預(yù)

防控制中心林強（副研究員）。

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圖1技術(shù)路線圖

2標(biāo)準(zhǔn)制定的必要性和預(yù)期效果

2.1標(biāo)準(zhǔn)編制的必要性

興奮劑的使用在現(xiàn)在體育賽事中時有發(fā)生，嚴(yán)重困擾和阻礙著競技體育的健康發(fā)

展。常有報道運動員被動攝入食源性興奮劑，導(dǎo)致其興奮劑檢測呈陽性，被迫中斷運

動生涯，因此檢測并杜絕食源性興奮劑不僅是運動員日常管理服務(wù)的重要內(nèi)容，更是

大型體育賽事活動食品安全保障的重要任務(wù)。

5

曲托喹酚具有罌粟堿樣解痙作用，作用與沙丁胺醇相似；去甲烏藥堿（HG）屬

于芐基異喹啉類生物堿，是一種天然的生物堿，能夠刺激β受體，常被用作強心劑、

利尿劑等，廣泛存在于花椒、胡椒、桂皮、八角等天然植物中，而這些植物是日常使

用調(diào)味品的組成成分，因此可能導(dǎo)致運動員誤食這些植物而出現(xiàn)興奮劑事件。在《2017

年禁用清單國際標(biāo)準(zhǔn)》和《2019年禁用清單國際標(biāo)準(zhǔn)》中，世界反興奮劑機構(gòu)（WADA）

分別將去甲烏藥堿和曲托喹酚明確列為新增禁用物質(zhì)。上述2種物質(zhì)均被國家體育總

局辦公廳列入《2020年興奮劑目錄》中，目前火鍋底料中甲烏藥堿和曲托喹酚的測定

尚無標(biāo)準(zhǔn)方法。

2.2標(biāo)準(zhǔn)編制的預(yù)期效果

結(jié)合WADA的《禁用清單國際標(biāo)準(zhǔn)》，以及國內(nèi)相關(guān)法規(guī)，以曲托喹酚和去甲

烏藥堿為研究對象，結(jié)合QuEChERS樣品前處理技術(shù)，完成了《火鍋底料中去甲烏

藥堿和曲托喹酚的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》團體標(biāo)準(zhǔn)草案征集，所開發(fā)的方法具

有靈敏度高、分析速度快、穩(wěn)定性好和通用性強的特點，適合于火鍋底料中去甲烏藥

堿和曲托喹酚的分析。該標(biāo)準(zhǔn)方法的建立能夠為火鍋底料中去甲烏藥堿和曲托喹酚的

殘留現(xiàn)狀調(diào)研提供方法支撐，同時為大型體育賽事運動員的食品安全提供數(shù)據(jù)參考，

彌補現(xiàn)有國標(biāo)的不足。

3標(biāo)準(zhǔn)制定的原則和依據(jù)

在實施過程中，本項目組按照《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測》（GB/T

27404-2008）對方法學(xué)進行了考察，并選擇食品檢測機構(gòu)對該方法進行了驗證。兼顧

國內(nèi)監(jiān)測分析實際情況，確保本標(biāo)準(zhǔn)的先進性、可操作性和實用性。

（1）先進性：其準(zhǔn)確度、精密度和靈敏度達到國外同類方法的同等水平。

（2）可操作性：符合我國目前檢測儀器設(shè)備和試劑、材料的供應(yīng)條件。

（3）實用性：符合檢測從業(yè)人員的技術(shù)水平，能被國內(nèi)分析實驗室所使用并達

到所規(guī)定的要求。

4主要技術(shù)內(nèi)容的論據(jù)

無

6

5主要內(nèi)容和主要試驗

5.1試驗試劑與材料

除另有說明外，所用試劑均為優(yōu)級純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。

甲醇、乙醇、乙腈(色譜純)；甲酸(色譜純)；石墨化碳黑(Graphitizedcarbonblack,

GCB,120~400μm)、十八烷基鍵合硅膠(octadecylsilanechemicallybondedsilica,C18,

40~60μm)、EMR(1g,6cc,美國Waters公司)；甲酸銨、乙酸銨(色譜純)；實驗室用水

為Milli-Q超純水制備系統(tǒng)制備。針筒式濾膜（有機系，0.22μm）；FaVEx-NM50獸

藥殘留快速柱。

標(biāo)準(zhǔn)品：去甲烏藥堿(純度99.2%,CAS:5843-65-2,上海安譜實驗科技股份有限公

司);曲托喹酚鹽酸鹽(純度99.07%,CAS:18559-59-6,加拿大Torontoresearch

chemicals公司);去甲烏藥堿-D4(純度99.1%,100μg/mL,CAS:2249814-83-1)、曲托喹

酚鹽酸鹽-D9(純度99.6%,100μg/mL,CAS:18559-63-2)(天津阿爾塔科技有限公司);

5.2儀器與設(shè)備

XevoTQ-S超高效液相色譜儀串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜儀(美國Waters公司);GR22G

Ⅲ高速冷凍離心機(日本HITACHI公司);N-EVAPTM112恒溫水浴氮吹儀配備

OA-SYSTM水浴加熱裝置(美國Organomation公司);MS200多管渦旋混勻儀(杭州瑞

誠儀器有限公司);多管渦旋混勻儀MS200(杭州瑞誠儀器有限公司)；Vortex-genie2

渦旋混合器(美國ScientificIndustries公司);KQ-500DE數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲

儀器有限公司)；純水儀Milli-QIntegral5(德國默克公司)。色譜柱AcquityUPLC

BEHC18(100mm×2.1mm,1.7μm)(美國Waters公司);色譜柱AcquityUPLCHSS

T3(100mm×2.1mm,1.8μm)(美國Waters公司);色譜柱AcquityUPLCBEHHILIC

(100mm×2.1mm,1.7μm)(美國Waters公司);色譜柱AcquityUPLCBEH

Amide(100mm×3.0mm,1.7μm)(美國Waters公司)。

5.3標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

5.3.1標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制

分別準(zhǔn)確稱取按其純度折算為100%的去甲烏藥堿、曲托喹酚鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)10

mg，用甲醇溶解并定容于10mL容量瓶，得到1000mg/L標(biāo)準(zhǔn)儲備液，-20℃避光保

7

存。

5.3.2混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制

分別準(zhǔn)確移取去甲烏藥堿、曲托喹酚鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)儲備液各100μL于10mL容量

瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成10μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。

準(zhǔn)確移取去甲烏藥堿-D4和曲托喹酚鹽酸鹽-D9標(biāo)準(zhǔn)溶液各100μL于10mL容量

瓶中，用甲醇定容至刻度，得到10mg/L混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。

5.3.3外標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)中間液的配制

混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（100ng/mL）：分別準(zhǔn)確移取兩種標(biāo)準(zhǔn)儲備液各100μL于10

mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成100ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。

混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（10ng/mL）：分別準(zhǔn)確移取兩種標(biāo)準(zhǔn)儲備液各1.0mL于10mL

容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成10ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。

5.3.4內(nèi)標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液的配制

混合內(nèi)標(biāo)中間溶液（1mg/L）：準(zhǔn)確移取10mg/L混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液1.0mL

于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到1mg/L混合內(nèi)標(biāo)工作溶液。

混合內(nèi)標(biāo)中間溶液（100ng/mL）：準(zhǔn)確移取10mg/L混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液100

μL于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到100ng/mL混合內(nèi)標(biāo)工作溶液。

5.3.5標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的配制

移取一定量外標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)中間液用甲醇+10mmol/L甲酸銨水溶液(含0.1%甲酸)

（1+1）逐級稀釋，并向其中添加等量的內(nèi)標(biāo)中間溶液。

5.4試驗樣品的處理

5.4.1提取

稱取試樣2g(精確到0.01g)于50mL的具塞螺旋蓋聚丙烯離心管中，準(zhǔn)確加入

100μL1mg/L混合內(nèi)標(biāo)工作溶液，加入20mL含5%甲酸的乙醇溶液，渦旋混勻，振

蕩提取30min，8000r/min離心5min。

5.4.2凈化

移取上清液2.0mL于另一事先裝入65mgGCB、65mgC18和65mgEMR的10mL

螺蓋離心管中，2500r/min振蕩混勻10min，8000r/min離心5min，移取1.0mL上

清液，氮氣吹至近干，用1.0mL甲醇+10mmol/L甲酸銨水溶液(含0.1%甲酸)（1+1）

定容，渦旋30s，用0.22μm微孔濾膜過濾，待上機測定。

5.4.3空白試驗

8

不稱取試樣，按上述步驟做空白實驗。

5.5儀器分析條件

5.5.1液相色譜條件

色譜條件：ACQUITYUPLCHSST3色譜柱(100mm×2.1mm,1.8μm);流動相:甲

醇(A),10mmol/L甲酸銨水溶液(含0.1%甲酸)(B),流速:0.3mL/min;進樣量:5μL;柱

溫:30℃,梯度洗脫程序:0~1.5min,3%A;1.5~5.5min,3%~95%A;5.5~5.6min,

95%~3%A;5.6~7.5min,3%A。

5.5.2質(zhì)譜條件

電離源：電噴霧正離子模式（ESI+）；檢測方式：多重反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；毛

細管電壓：3.0kV；離子源溫度：150℃；脫溶劑氣流速度：800L/h；脫溶劑氣溫度：

500℃；錐孔反吹氣流速：50L/h。其它主要參數(shù)等見表1。

表1去甲烏藥堿和曲托喹酚的MRM參數(shù)

被測物定量離子對(m/z)CV/CE定性離子對(m/z)CV/CE

去甲烏藥堿272.4>107.240/20272.4>161.240/18

去甲烏藥堿-D4276.5>108.340/20276.5>164.340/18

曲托喹酚346.5>164.26/14346.5>149.16/5

曲托喹酚-D9355.6>164.112/16355.6>137.112/46

注:錐孔電壓(conevoltage,CV),V;碰撞能量(collisionenergy,CE),eV。

5.6結(jié)果與結(jié)論

5.6.1儀器條件選擇

5.6.1.1質(zhì)譜條件優(yōu)化

采用流動注射泵連續(xù)進樣，對2種目標(biāo)化合物的質(zhì)譜條件進行優(yōu)化調(diào)諧。采用電

噴霧離子源，2種目標(biāo)物在正離子模式下有較好的響應(yīng)。所有被測物均選定[M+H]+

為母離子，進一步進行二級質(zhì)譜掃描，尋找子離子碎片。選擇響應(yīng)較高的2個子離子

分別作為定性和定量離子，并優(yōu)化其相應(yīng)的碰撞能量，建立質(zhì)譜方法。

5.6.1.2色譜條件優(yōu)化

9

色譜柱的選擇：由于興奮劑種類較多,選擇一種通用的色譜柱對于將來建立高通

量興奮劑檢測技術(shù)尤為重要,本研究考察了C18(100mm×2.1mm,1.7μm)、HSS

T3(100mm×2.1mm,1.8μm)、HILIC(100mm×2.1mm,1.7μm)和Amide(100mm×3.0

mm,1.7μm)4種不同極性的超高效液相色譜柱對2種物質(zhì)的保留行為。

采用C18色譜柱分離時，去甲烏藥堿和曲托喹酚峰形對稱性和分離效果好;當(dāng)采

用極性較強的HILIC色譜柱分離時,兩種物質(zhì)分離度差,峰形嚴(yán)重拖尾；采用Amide

色譜柱分離時，曲托喹酚和去甲烏藥堿的色譜峰出現(xiàn)峰展寬現(xiàn)象，且當(dāng)運用于實際樣

品的測定時，物質(zhì)的色譜峰保留時間會出現(xiàn)前移，懷疑可能由于樣品中存在部分凈化

不完全的極性小分子，在通過色譜柱時與本身具有極性的Amide填料發(fā)生相互作用，

短時間范圍內(nèi)遮擋了填料表面的活性位點，從而減小待測物與填料的接觸面積，降低

色譜保留行為，進而導(dǎo)致出峰時間提前；而考察HSST3柱時，兩種物質(zhì)的色譜峰峰

形對稱性好、分離度好，與C18色譜柱比較，該色譜柱對于曲托喹酚和去甲烏藥堿的

響應(yīng)較強，同時對于強極性的化合物也有一定的保留效果。因此，為了與高通量興奮

劑的分析方法兼容，本研究選擇了HSST3(100mm×2.1mm,1.8μm)作為最佳色譜柱。

流動相的選擇：對不同體系的流動相進行優(yōu)化，結(jié)果見圖3。當(dāng)甲醇和乙腈分別

作為流動相的有機相時，曲托喹酚和去甲烏藥堿的峰形對稱性較好，但在甲醇中兩種

物質(zhì)的響應(yīng)明顯增強；緩沖鹽體系作為流動相時，可以改善物質(zhì)的峰形，而加入酸則

可以增強化合物的電離，通過比較甲醇-水溶液體系、甲醇-水(含0.1%甲酸)體系和甲

醇-10mmol/L甲酸銨水溶液(含0.1%甲酸)體系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，甲醇-10mmol/L甲酸銨水

溶液(含0.1%甲酸)體系下2種物質(zhì)的響應(yīng)最高，峰形最好，在此基礎(chǔ)上優(yōu)化洗脫條件，

得到2種物質(zhì)的最佳色譜圖，其MRM色譜圖見附錄。

10

圖2不同流動相體系對曲托喹酚和去甲烏藥堿響應(yīng)的影響(n=3)。

圖3去甲烏藥堿和曲托喹酚以及內(nèi)標(biāo)的MRM選擇離子流色譜圖

5.6.2提取溶劑的選擇

待測物的結(jié)構(gòu)式中均含有酚羥基,酸性條件可以抑制酚羥基的電離，使化合物呈

現(xiàn)分子狀態(tài),更容易被有機物提取出來。項目組前期分別采用0.5%甲酸-甲醇(FM)、

0.5%甲酸-乙醇(FE)、0.5%乙酸-甲醇(HM)、0.5%乙酸-乙腈(HA)、0.5%乙酸-乙醇(HE)5

種不同提取溶劑對辣椒中去甲烏藥堿和曲托喹酚進行提取，結(jié)果如圖3所示，5種提

取液均能將待測物質(zhì)提取出來，F(xiàn)E提取溶劑中，曲托喹酚和去甲烏藥堿的提取效率

最高,同時《SN/T5171-2019出口植物源性食品中去甲烏藥堿的測定液相色譜-質(zhì)譜/

質(zhì)譜法》中也采用了FE的提取液，因此，本標(biāo)準(zhǔn)方法中選擇FE為提取溶液。

11

圖3提取溶劑對曲托喹酚和去甲烏藥堿回收率的影響(n=3)

5.6.3線性范圍、基質(zhì)效應(yīng)以及定量限的考察

分別用甲醇+10mmol/L甲酸銨水溶液(含0.1%甲酸)（1+1）和基質(zhì)空白液對標(biāo)準(zhǔn)

溶液逐級稀釋，配置成標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。注入質(zhì)譜儀后記錄峰面積值，以被測物定量

離子對的峰面積與內(nèi)標(biāo)定量離子對峰面積比為縱坐標(biāo)（y），以被測物的濃度（x，

ng/mL）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。在試驗線性濃度0.1~10ng/mL范圍內(nèi)，去甲烏

藥堿和曲托喹酚線性關(guān)系良好，線性相關(guān)系數(shù)（R2）均大于0.99。

參照《SN/T5171-2019出口植物源性食品中去甲烏藥堿的測定液相色譜-質(zhì)譜/

質(zhì)譜法》以及研究團隊前期研究成果，在此基礎(chǔ)上考察基質(zhì)效應(yīng)，本研究依據(jù)火鍋底

料的分類，分別考察清湯、清油、牛油三種不同基質(zhì)對目標(biāo)分析的影響。采用基質(zhì)標(biāo)

準(zhǔn)曲線斜率與溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率的比值考察了目標(biāo)物在火鍋底料基質(zhì)中的信號增強

或抑制的程度(signalsuppression/enhancement,SSE)。SSE值70%~120%之間表明基

質(zhì)效應(yīng)影響不大，當(dāng)其高于120%時顯示基質(zhì)增強效應(yīng)，當(dāng)其低于70%時顯示基質(zhì)抑

制效應(yīng)，實驗結(jié)果見表2。

表2三種火鍋底料中去甲烏藥堿和曲托喹酚的基質(zhì)效應(yīng)

基質(zhì)待測物溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線基質(zhì)效應(yīng)（%）

曲托喹酚y=1.7542x-0.0692y=1.8224x-0.0659104

清湯

去甲烏藥堿y=1.9961x-0.0532y=2.0757x+0.0283103

清油曲托喹酚y=1.6565x-0.0337y=1.5579x-0.054394.0

12

去甲烏藥堿y=1.7759x-0.0140y=1.9334x+0.0050109

曲托喹酚y=1.6565x-0.0337y=1.7393x-0.1038105

牛油

去甲烏藥堿y=1.7759x-0.0140y=1.5806x-0.067389.0

結(jié)果表明，去甲烏藥堿和曲托喹酚受基質(zhì)影響不大，SSE均分布在89.0%~109%。

因此本研究采用溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線法。

制備不同濃度的添加樣品，以能夠準(zhǔn)確定量的最小濃度作為定量限，采用本方法

測定后，去甲烏藥堿和曲托喹酚的定量限均為1.0μg/kg。

5.6.4方法準(zhǔn)確度和精密度

方法準(zhǔn)確度由回收率來評價，在進行添加回收實驗中，加標(biāo)量過大或過小均會對

回收率的結(jié)果產(chǎn)生較大的影響，參照GB/T27404-2008，對回收率試驗的添加水平規(guī)

定，對于禁用物質(zhì)，回收率應(yīng)在方法定量限、兩倍方法定量限和十倍方法定量限進行

三水平試驗，本項目中被測物為禁用物質(zhì)，因此本試驗的添加水平按照上述三個加標(biāo)

水平進行。分別向清湯、清油、牛油樣品中加入被測物質(zhì)的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，使其含量

分別為1.0μg/kg、2.0μg/kg、10μg/kg，按照本實驗方法測定（n=6），計算測定結(jié)

果的回收率和精密度，見表5至表7。所有被測物在線性范圍內(nèi)的加標(biāo)回收率的結(jié)果

范圍是86.2~117%，精密度范圍是1.9~11.6%。

表5清湯火鍋底料中去甲烏藥堿和曲托喹酚的回收率、精密度結(jié)果（n=6）

曲托喹酚去甲烏藥堿

平均回平均回

添加量測得值平均值RSD添加量測得值平均值RSD

收率收率

（μg/kg）（μg/kg）（μg/kg）(%)（μg/kg）（μg/kg）（μg/kg）(%)

（%）（%）

1.141.10

1.190.96

1.161.13

1.01.161162.01.01.061067.2

1.121.11

1.161.08

1.160.96

2.112.03

2.102.04

2.02.021014.22.02.041028.1

1.931.93

1.912.33

13

2.041.84

2.022.08

10.3410.27

10.4010.68

8.468.59

1010.0710111.61010.0410010.9

8.948.74

11.6511.00

10.6110.96

表6清油火鍋底料中去甲烏藥堿和曲托喹酚的回收率、精密度結(jié)果（n=6）

曲托喹酚去甲烏藥堿

平均回平均回

添加量測得值平均值RSD添加量測得值平均值RSD

收率收率

（μg/kg）（μg/kg）（μg/kg）(%)（μg/kg）（μg/kg）（μg/kg）(%)

（%）（%）

1.191.15

1.131.07

1.191.18

1.01.171171.91.01.131133.8

1.171.10

1.161.11

1.171.17

2.232.00

2.161.89

2.191.99

2.02.191102.02.02.0099.83.5

2.162.11

2.161.98

2.262.00

10.359.11

10.579.66

11.4010.68

1010.561067.1109.5996.06.7

11.479.92

9.709.16

9.848.98

表7牛油火鍋底料中去甲烏藥堿和曲托喹酚的回收率、精密度結(jié)果（n=6）

曲托喹酚去甲烏藥堿

添加量測得值平均值平均回RSD添加量測得值平均值平均回RSD

14

（μg/kg）（μg/kg）（μg/kg）收率(%)（μg/kg）（μg/kg）（μg/kg）收率(%)

（%）（%）

1.191.12

1.101.04

1.050.99

1.01.111114.41.01.041044.4

1.091.03

1.091.01

1.141.06

1.821.82

1.771.82

1.631.57

2.01.7487.14.82.01.7286.26.8

1.641.58

1.801.75

1.791.80

9.348.92

9.078.93

9.129.47

109.1091.03.7108.8288.25.6

9.489.07

9.068.10

8.508.40

5.7實際樣品的測定

采用本方法測定了市售的清湯、清油、牛油的火鍋底料樣品各1份，采用本方法

檢測了2種被測化合物，曲托喹酚均未檢出，去甲烏藥堿均有不同程度的檢出，該結(jié)

果表明所測的三個樣品中均未有非法添加的曲托喹酚，而去甲烏藥堿存在于花椒、胡

椒等香辛料中，在火鍋底料的制作過程中可能會有添加，因此有陽性檢出。

5.8實驗室間驗證結(jié)果

本課題邀請了2家與食品檢測相關(guān)的機構(gòu)對所建立的方法進行了實驗室間方法

驗證，2家參與驗證的監(jiān)測機構(gòu)分別為北京市疾病預(yù)防控制中心和北京市延慶區(qū)疾病

預(yù)防控制中心。

2家驗證單位均在規(guī)定的時間完成了驗證報告，表9-表11所列數(shù)據(jù)，是將分析

15

測試所的方法學(xué)結(jié)果與2家的驗證報告數(shù)據(jù)進行了比對。在低、中、高三個濃度水平

的加標(biāo)回收率和精密度均符合《GB/T27404-2008實驗室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測》

中附錄F的要求，表明本方法在實驗室間得到了重現(xiàn)，本方法可靠。進一步對重復(fù)性

限r(nóng)和再現(xiàn)性限R進行考察。

表9三家機構(gòu)的清湯基質(zhì)實驗結(jié)果數(shù)據(jù)統(tǒng)計

被測加標(biāo)水平平均值重復(fù)性再現(xiàn)性

22222

實驗室Si∑SiSr