第58講基因工程的基本工具和基本操作程序高中總復(fù)習(xí)·生物課程標(biāo)準(zhǔn)1.

闡明DNA重組技術(shù)的實(shí)現(xiàn)需要利用限制性內(nèi)切核酸酶、DNA連接酶和

載體三種基本工具。2.

闡明基因工程的基本操作程序主要包括目的基因的篩選與獲取、基

因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞和目的基因的檢測(cè)與鑒

定等步驟。3.

DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)。4.

利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）擴(kuò)增DNA片段并完成電泳鑒定，或運(yùn)用軟

件進(jìn)行虛擬PCR實(shí)驗(yàn)。1.破考點(diǎn)·抓必備2.研真題·扣教材3.驗(yàn)收效·提能力目錄Contents01破考點(diǎn)·抓必備梳理歸納，鞏固基本知識(shí)考點(diǎn)一基因工程的基本工具1.

基因工程的概念cc提醒基因工程的理論基礎(chǔ)2.

基因工程的基本工具（1）限制性內(nèi)切核酸酶（簡(jiǎn)稱限制酶）cccc提醒

①將一個(gè)基因從DNA分子上切割下來需要切兩處，同時(shí)產(chǎn)生四個(gè)黏性

末端或平末端。②原核生物的限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物DNA分子中不存在

該酶的識(shí)別序列或識(shí)別序列已經(jīng)被修飾。（2）DNA連接酶【教材拾遺】

（選擇性必修3

P72旁欄思考）DNA連接酶和DNA聚合酶不

是一回事。原因是①DNA連接酶連接的是兩個(gè)DNA片段，而DNA聚合酶

是把單個(gè)的脫氧核苷酸連接到已有的DNA片段上。②DNA聚合酶起作用時(shí)

需要以一條DNA鏈為模板，而DNA連接酶不需要模板。（3）基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體ccccc

1.

（選擇性必修3

P71正文）切割質(zhì)粒的限制性內(nèi)切核酸酶均能特異性地

識(shí)別6個(gè)核苷酸序列。

（

×

）提示：不同種類限制酶識(shí)別序列不同?！?.

（選擇性必修3

P71正文）限制酶在識(shí)別序列中心軸線兩側(cè)將DNA分子

的兩條鏈分別切開形成的是黏性末端，在識(shí)別序列中心軸線處切開形成的

是平末端。

（

√

）√3.

（選擇性必修3

P71正文）E.

coli

DNA連接酶既可連接平末端，又可連

接黏性末端。

（

√

）4.

（選擇性必修3

P71～72正文）基因工程中用到的工具酶有限制酶、

DNA連接酶、載體。

（

×

）提示：限制性內(nèi)切核酸酶、DNA連接酶和質(zhì)粒是基因工程中常用的三種工

具，前兩者屬于工具酶，質(zhì)粒屬于載體。5.

（選擇性必修3

P72正文）質(zhì)粒上標(biāo)記基因的存在，是便于重組DNA分

子的篩選。

（

√

）√×√

1.

（2024·江西上饒期末）基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行的操作，需要有專門的工具。下列關(guān)于基因工程所需基本工具的敘述，錯(cuò)誤的是（

）A.

用不同的限制酶分別切割含目的基因的DNA和質(zhì)?？赡墚a(chǎn)生相同的末端B.T4

DNA連接酶可以催化磷酸二酯鍵形成進(jìn)而連接黏性末端或平末端C.

作為載體的質(zhì)粒上通常有抗生素合成基因作為標(biāo)記基因，以便于重組

DNA的篩選D.

原核細(xì)胞內(nèi)的限制酶可切割入侵的DNA分子，通常不切割細(xì)菌自身的

DNA分子√解析：

不同限制酶識(shí)別的堿基序列一般不同，但切割后所產(chǎn)生的黏

性末端可能是一樣的，像這種能切割不同的DNA片段但產(chǎn)生相同黏性

末端的一類限制酶稱為同尾酶，A正確；T4

DNA連接酶既可以連接雙

鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端，也可以連接雙鏈DNA片段的平末端，催

化磷酸二酯鍵形成，B正確；作為載體的質(zhì)粒上通常有抗生素抗性基因

作為標(biāo)記基因，以便于重組DNA的篩選，不是抗生素合成基因，C錯(cuò)

誤；原核生物內(nèi)的限制酶可切割入侵的DNA分子而保護(hù)自身，一般不

切割自身的DNA分子，D正確。2.

（2025·山東濟(jì)南高三期末）下列關(guān)于生物學(xué)中常見的幾種酶的敘述，

正確的是（

）A.DNA連接酶將目的基因的黏性末端與載體的黏性末端之間的堿基黏合B.

用限制性內(nèi)切核酸酶從質(zhì)粒上切下一個(gè)目的基因需消耗4個(gè)水分子C.

利用PCR儀擴(kuò)增DNA分子時(shí)常用一種耐高溫的DNA連接酶D.

在解離根尖分生區(qū)細(xì)胞時(shí)加入纖維素酶有利于提高解離的效果√解析：

黏性末端與黏性末端之間的互補(bǔ)配對(duì)的堿基自動(dòng)形成氫鍵，

DNA連接酶催化形成磷酸二酯鍵，A錯(cuò)誤；切下一個(gè)目的基因需要打開2個(gè)

切口，水解4個(gè)磷酸二酯鍵，故需消耗4個(gè)水分子，B正確；利用PCR儀擴(kuò)

增DNA分子時(shí)常用耐高溫的DNA聚合酶，C錯(cuò)誤；對(duì)根尖分生區(qū)細(xì)胞進(jìn)行

解離時(shí)用解離液處理，不需要纖維素酶，D錯(cuò)誤。題后歸納與DNA有關(guān)的幾種酶的比較3.

限制酶和DNA連接酶是基因工程的工具酶，以下說法正確的是（

）A.

限制酶只能切割雙鏈DNA片段，不能切割煙草花葉病毒的核酸B.DNA連接酶能將單個(gè)核苷酸加到已有的核苷酸片段上形成磷酸二酯鍵C.

E.

coli

DNA連接酶只能連接黏性末端，不能連接平末端D.

限制酶主要從原核生物中分離純化而來，所以也能剪切自身的DNA解析：

限制酶只能切割DNA分子，煙草花葉病毒的核酸是RNA，不能

切割，A正確；DNA連接酶連接的是兩個(gè)DNA片段，B錯(cuò)誤；E.

coli

DNA

連接酶能連接黏性末端，也能連接平末端，C錯(cuò)誤；限制酶主要從原核生

物中分離純化而來，但是因?yàn)樵松顳NA分子中不存在該酶的識(shí)別序列

或識(shí)別序列已經(jīng)被修飾，所以不能剪切自身的DNA，D錯(cuò)誤?！炭键c(diǎn)二基因工程的基本操作程序1.

目的基因的篩選與獲?。?）篩選合適的目的基因①目的基因：在基因工程的設(shè)計(jì)和操作中，用于改變受體細(xì)胞性狀或獲得

預(yù)期表達(dá)產(chǎn)物等的基因。主要是指

的基因。②篩選目的基因的方法編碼蛋白質(zhì)

cc（2）利用PCR獲取和擴(kuò)增目的基因

提醒

①在PCR過程中實(shí)際加入的原料為dNTP（即dATP、dGTP、dTTP、

dCTP），既可作為合成DNA子鏈的原料，又可為DNA的合成提供能量。②引物是一小段能與DNA母鏈的一段堿基序列互補(bǔ)配對(duì)的短單鏈核酸，作

為新子鏈的合成起點(diǎn)，只能結(jié)合在母鏈的3'端，使DNA聚合酶能夠從引物

的3'端開始連接脫氧核苷酸。③復(fù)性溫度過高，則引物難以與模板鏈結(jié)合；溫度過低則易使兩條母鏈配

對(duì)結(jié)合，均無法獲得PCR產(chǎn)物。④真核細(xì)胞和細(xì)菌的DNA聚合酶都需要Mg2＋激活。因此，PCR反應(yīng)緩沖液

中一般要添加Mg2＋。2.

基因表達(dá)載體的構(gòu)建（核心）

提醒啟動(dòng)子、起始密碼子、終止子、終止密碼子的區(qū)別3.

將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞ccccccc提醒

①農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法中的兩次拼接和兩次導(dǎo)入：第一次拼接是將目的基因

拼接到Ti質(zhì)粒的T-DNA上，第二次拼接（非人工操作）是指插入目的基因

的T-DNA拼接到受體細(xì)胞的染色體DNA上；兩次導(dǎo)入：第一次導(dǎo)入是將含

目的基因的Ti質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌，第二次導(dǎo)入（非人工操作）是指含目的基

因的T-DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞。②導(dǎo)入的目的基因，可能存在于細(xì)胞質(zhì)中，也可能整合到染色體DNA上。

存在于染色體DNA上的目的基因有可能通過花粉傳播進(jìn)入雜草或其他作物

中，造成“基因污染”。4.

目的基因的檢測(cè)與鑒定cccccc

1.

（選擇性必修3

P77正文）目的基因一定是編碼蛋白質(zhì)的基因。

（

×

）提示：目的基因主要是指編碼蛋白質(zhì)的基因，也可以是一些具有調(diào)控作用

的因子。2.

（選擇性必修3

P77相關(guān)信息）利用PCR擴(kuò)增目的基因時(shí)，要用2種不同

但能夠互補(bǔ)配對(duì)的引物。

（

×

）提示：PCR擴(kuò)增目的基因時(shí)，2種不同的引物不能互補(bǔ)配對(duì)?！痢?.

（選擇性必修3

P79旁欄思考）PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)不必知道基因的

全部序列，該技術(shù)既可以擴(kuò)增DNA又可以擴(kuò)增mRNA。

（

×

）4.

（選擇性必修3

P80正文）基因表達(dá)載體中的啟動(dòng)子和終止子決定著翻

譯的開始與結(jié)束。

（

×

）提示：?jiǎn)?dòng)子和終止子決定著轉(zhuǎn)錄的開始與結(jié)束。××5.

（選擇性必修3

P80旁欄思考）生物的所有DNA通過注射或花粉管通道

法轉(zhuǎn)入植物細(xì)胞中，就可獲得具有理想性狀的轉(zhuǎn)基因植物。

（

×

）6.

（選擇性必修3

P81資料卡）Ti質(zhì)粒上的T-DNA可攜帶目的基因進(jìn)入宿主

細(xì)胞，并可將目的基因整合到該細(xì)胞的染色體DNA中。

（

√

）7.

（選擇性必修3

P83練習(xí)與應(yīng)用）應(yīng)用PCR技術(shù)，可以檢測(cè)轉(zhuǎn)基因抗凍番

茄植株中目的基因是否存在及其是否表達(dá)。

（

×

）×√×

1.

（2024·重慶期末）利用PCR技術(shù)可以獲取如圖中的目的基因。下列敘

述正確的是（

）

A.

用圖中引物②和引物⑤至少要經(jīng)過3次循環(huán)才能獲得目的基因B.

用圖中引物③和引物④至少要經(jīng)過2次循環(huán)才能獲得目的基因C.

合成新鏈?zhǔn)菑囊锏?'開始延伸D.

用圖中引物①和引物⑤經(jīng)過2次循環(huán)可獲得4種雙鏈DNA分子√解析：

用圖中引物②和引物⑤經(jīng)過1次循環(huán)能獲得含母鏈和引物②、母

鏈和引物⑤的兩種雙鏈DNA，經(jīng)過2次循環(huán)能獲得一條鏈為目的基因的堿

基序列的雙鏈DNA，經(jīng)過3次循環(huán)能獲得兩條鏈均為目的基因的DNA片

段，A正確；用圖中引物③和引物④循環(huán)不能獲得目的基因，因?yàn)楹铣傻?/p>

新鏈?zhǔn)菑囊锏?'開始延伸，用引物③和引物④延伸不包含目的基因的堿

基序列，B錯(cuò)誤；合成新鏈?zhǔn)菑囊锏?'開始延伸，C錯(cuò)誤；用圖中引物①

和引物⑤經(jīng)過2次循環(huán)可獲得3種雙鏈DNA分子，D錯(cuò)誤。題后歸納PCR擴(kuò)增過程中的循環(huán)圖示與規(guī)律循環(huán)次數(shù)123nDNA分子數(shù)2482n含引物A（或B）的

DNA分子數(shù)1372n－1同時(shí)含引物A、B的

DNA分子數(shù)0＝21－22＝22－26＝23－22n－2共消耗的引物數(shù)量2＝21＋1－26＝22＋1－214＝23＋1－

22n＋1－22.

（2024·福建廈門期末）研究人員擬利用如圖所示的目的基因片段和質(zhì)

粒構(gòu)建基因表達(dá)載體。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）名稱識(shí)別序列及切割位點(diǎn)名稱識(shí)別序列及切割位點(diǎn)SmaⅠCCC↓GGGGGG↑CCCEcoRⅠG↓AATTCCTTAA↑GAvrⅡC↓CTAGGGGATC↑CXbalⅠT↓CTAGAAGATC↑TA.

應(yīng)選用SmaⅠ和XbalⅠ切割目的基因，SmaⅠ和AvrⅡ切割質(zhì)粒B.

應(yīng)選用T4

DNA連接酶連接目的基因與質(zhì)粒C.

重組表達(dá)載體能被XbalⅠ識(shí)別并切割D.

目的基因以β鏈為模板鏈進(jìn)行轉(zhuǎn)錄√解析：

據(jù)表可知，AvrⅡ和XbalⅠ切割后可產(chǎn)生相同的黏性末端，由圖可

知，為了保證目的基因能正向接入載體，應(yīng)選用SmaⅠ和XbalⅠ切割目的基

因，SmaⅠ和AvrⅡ切割質(zhì)粒，A正確；圖中用SmaⅠ切割后產(chǎn)生平末端，用

AvrⅡ和XbalⅠ切割后產(chǎn)生黏性末端，所以應(yīng)用T4

DNA連接酶目的基因與質(zhì)

粒，B正確；重組表達(dá)載體序列不能被AvrⅡ、XbalⅠ識(shí)別，不能被二者切

割，C錯(cuò)誤；轉(zhuǎn)錄的方向?yàn)?'→3'端，據(jù)圖可知，目的基因以β鏈為模板鏈

進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，D正確。題后歸納限制酶的選擇（1）不破壞目的基因原則：如圖甲中可選擇PstⅠ，而不選擇SmaⅠ。（2）保留標(biāo)記基因、啟動(dòng)子、終止子、復(fù)制原點(diǎn)原則：質(zhì)粒作為載體必

須具備標(biāo)記基因，所選擇的限制酶盡量不要破壞這些結(jié)構(gòu)，如圖乙中不選

擇SmaⅠ。若載體上有兩個(gè)及以上的標(biāo)記基因，則可合理對(duì)其中一些標(biāo)記基

因進(jìn)行酶切破壞，從而達(dá)到比一個(gè)標(biāo)記基因更高的篩選成功率，防止只有

一個(gè)標(biāo)記基因時(shí)出現(xiàn)的“假陽性”（即未成功導(dǎo)入目的基因的載體也能正

常表達(dá)標(biāo)記基因，造成無效篩選）。（3）善用“雙酶切”，注意方向性：目的基因所在序列和載體上存在多

種酶切位點(diǎn)時(shí)，一般需要選擇在目的基因所在序列和載體上都存在切割位

點(diǎn)的兩種不同的限制酶，對(duì)目的基因所在序列和載體進(jìn)行剪切，即“雙酶

切法”。其優(yōu)點(diǎn)和作用是：①防止目的基因環(huán)化；②避免目的基因與載體

反向連接，即用DNA連接酶連接后形成的重組DNA分子上，目的基因和載

體啟動(dòng)子的方向（或描述為“RNA聚合酶的移動(dòng)方向”）必須是相同的，

否則目的基因?qū)牒鬅o法正常表達(dá)。如圖甲、乙也可選擇PstⅠ和EcoRⅠ兩

種限制酶。（4）巧用“同尾酶”：同尾酶指來源不同，但能產(chǎn)生相同黏性末端的限

制酶。當(dāng)不適合選擇某種限制酶時(shí)，可用其同尾酶替換，以獲得相同的黏

性末端。3.

（2025·廣東廣州一模）為使玉米獲得抗除草劑性狀，科研人員進(jìn)行了相關(guān)操作（如圖所示）。含有內(nèi)含子的報(bào)告基因不能在原核生物中正確表達(dá)，其正確表達(dá)產(chǎn)物能催化無色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色。轉(zhuǎn)化過程中愈傷組織表面常殘留農(nóng)桿菌，會(huì)導(dǎo)致未轉(zhuǎn)化的愈傷組織可能在含除草劑的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A.T-DNA可將基因G轉(zhuǎn)移并整合到愈傷組織細(xì)胞的染色體DNA上B.

利用物質(zhì)K和抗生素進(jìn)行篩選1，可獲得農(nóng)桿菌的藍(lán)色菌落C.

利用物質(zhì)K和除草劑進(jìn)行篩選2，更易于獲得抗除草劑的轉(zhuǎn)基因植株D.

愈傷組織重新分化為芽、根等器官的過程中，需要添加植物激素√解析：

將目的基因（基因G）插入Ti質(zhì)粒的T-DNA上，通過農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)

化作用，可以把目的基因（基因G）整合到愈傷組織細(xì)胞的染色體DNA

上，A正確；含有內(nèi)含子的報(bào)告基因不能在原核生物中正確表達(dá)，農(nóng)桿菌

屬于原核生物，無法正確表達(dá)出產(chǎn)物，也就無法催化無色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)

色，B錯(cuò)誤；含有內(nèi)含子的報(bào)告基因的產(chǎn)物在愈傷組織細(xì)胞中能催化無色

物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色，而愈傷組織表面殘留的農(nóng)桿菌，會(huì)導(dǎo)致未轉(zhuǎn)化的愈傷組

織可能在含除草劑的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，因此利用物質(zhì)K和除草劑進(jìn)行篩選2，

更易于獲得抗除草劑的轉(zhuǎn)基因植株，C正確；植物組織培養(yǎng)過程需要添加

植物激素誘導(dǎo)愈傷組織重新分化為芽、根等器官，D正確。歸納總結(jié)如何篩選出含有目的基因的受體細(xì)胞（1）原理：將目的基因插入含有兩種抗生素抗性基因的載體時(shí)，如果目

的基因插入某種抗生素抗性基因內(nèi)部，則會(huì)導(dǎo)致該抗生素抗性基因失活。

如圖，目的基因插入了四環(huán)素抗性基因內(nèi)部，則四環(huán)素抗性基因失活。（2）被轉(zhuǎn)化的細(xì)菌有三種：含目的基因的細(xì)菌、含重組質(zhì)粒的細(xì)菌、含

質(zhì)粒的細(xì)菌。（3）篩選方法：將細(xì)菌先放在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，能生長(zhǎng)的

是含重組質(zhì)粒的細(xì)菌和含質(zhì)粒的細(xì)菌，如圖中1、2、3、4、5菌落，再利

用滅菌的絨布影印到含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上，如圖能生長(zhǎng)的菌落為2、3、

4，則在含四環(huán)素培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)的即含有目的基因的菌落，如圖中1、5

菌落。最后，可在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上挑取1、5菌落進(jìn)行培養(yǎng)?？键c(diǎn)三DNA的粗提取與鑒定和DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定1.

DNA的粗提取與鑒定（1）實(shí)驗(yàn)原理cc（2）實(shí)驗(yàn)步驟c提醒

①加入酒精和用玻璃棒攪拌時(shí)，動(dòng)作要輕緩，以免加劇DNA分子的斷

裂，導(dǎo)致DNA分子不能形成絲狀沉淀。②本實(shí)驗(yàn)不能用哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)材料，原因是哺乳動(dòng)物成

熟的紅細(xì)胞無細(xì)胞核（無DNA）。可選用雞血細(xì)胞作為材料。③DNA的粗提取實(shí)驗(yàn)中過濾不能用濾紙代替紗布，因?yàn)镈NA會(huì)被吸附到濾

紙上而大量損失，影響最終提取的DNA量。2.

DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定（1）實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)cccc（2）PCR實(shí)驗(yàn)操作步驟（3）DNA的電泳鑒定c

1.

（選擇性必修3

P74正文）DNA在2

mol/L的NaCl溶液中溶解度大。

（

√

）2.

（選擇性必修3

P74正文）可用濾紙過濾洋蔥研磨液以除去其中的雜

質(zhì)。

（

×

）3.

（選擇性必修3

P84正文）在凝膠中DNA分子的遷移速率只與DNA分子

的大小相關(guān)。

（

×

）提示：在凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠濃度、DNA分子的大小和構(gòu)象

等有關(guān)。√××4.

（選擇性必修3

P85正文）進(jìn)行DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定實(shí)驗(yàn)所需的

緩沖液和酶應(yīng)分裝成小份，并在20

℃儲(chǔ)存。

（

×

）提示：緩沖液和酶應(yīng)在－20

℃條件下儲(chǔ)存。5.

（選擇性必修3

P85正文）為了節(jié)約資源，移液器上的槍頭在實(shí)驗(yàn)過程

中不必更換。

（

×

）提示：移液器上的槍頭在實(shí)驗(yàn)過程中必須更換，避免試劑的污染?！痢?/p>

1.

（2023·廣東高考11題）“DNA粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)的基本過程是：裂

解→分離→沉淀→鑒定。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A.

裂解：使細(xì)胞破裂釋放出DNA等物質(zhì)B.

分離：可去除混合物中的多糖、蛋白質(zhì)等C.

沉淀：可反復(fù)多次以提高DNA的純度D.

鑒定：加入二苯胺試劑后即呈現(xiàn)藍(lán)色√解析：

裂解的目的是使細(xì)胞破裂，釋放出DNA等物質(zhì)，A正確；DNA

不溶于酒精，但某些蛋白質(zhì)溶于酒精，利用這一原理，可以初步分離DNA

與蛋白質(zhì)等，DNA分離過程中混合物中的多糖、蛋白質(zhì)等可被去除，B正

確；DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，通過控制NaCl溶液的濃度

去除雜質(zhì)，可反復(fù)多次以提高DNA的純度，C正確；進(jìn)行DNA鑒定時(shí)可以

使用二苯胺試劑，但要進(jìn)行沸水浴加熱后才能觀察到顏色變化，D錯(cuò)誤。2.

（2025·山東日照高三模擬）某生物興趣小組利用蘋果進(jìn)行“DNA的粗

提取與鑒定”的實(shí)驗(yàn)，下列操作正確的是（

）A.

蘋果組織研磨前經(jīng)冷凍處理可以提高DNA的提取量B.

研磨液離心，保留沉淀物并加入酒精去除蛋白質(zhì)等雜質(zhì)C.

將預(yù)冷酒精溶液加入上清液，攪拌后可析出純凈的DNAD.

將絲狀物溶于NaCl溶液，加入二苯胺試劑振蕩后呈藍(lán)色√解析：

由于冷凍后的細(xì)胞易破碎，所以將蘋果組織研磨前經(jīng)液氮冷

凍處理，可以提高DNA的提取量，A正確。提取DNA時(shí)，研磨液離

心，過濾并取濾液。由于DNA不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些蛋

白質(zhì)則溶于酒精，在濾液中加入酒精去除蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，B錯(cuò)誤。

DNA不溶于酒精，因此可用體積分?jǐn)?shù)為95％的冷酒精析出DNA，靜置

2～3分鐘，可見絲狀物即為DNA的粗提取物，C錯(cuò)誤。鑒定DNA時(shí)，

應(yīng)將絲狀物溶解在2

mol/L的NaCl溶液中，加入二苯胺試劑并進(jìn)行沸水

浴，冷卻后才可出現(xiàn)藍(lán)色，D錯(cuò)誤。3.

（2025·江蘇淮安期中）關(guān)于“DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定”實(shí)驗(yàn)，下

列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）A.

凝膠中的DNA分子通過染色，可以在紫外燈下被檢測(cè)出來B.

微量離心管、蒸餾水和移液器在使用前均需進(jìn)行高壓蒸汽滅菌處理C.DNA向著與其所帶電荷相反的電極移動(dòng)，遷移速率與凝膠濃度、DNA

的大小和構(gòu)象有關(guān)D.PCR所用的緩沖液從冰箱拿出之后，應(yīng)放在冰塊上緩慢融化，目的是不

破壞穩(wěn)定性較差的成分解析：

PCR實(shí)驗(yàn)中使用的微量離心管、槍頭、蒸餾水在使用前都必須

進(jìn)行高壓蒸汽滅菌處理，移液器不需要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌處理，B錯(cuò)誤?！?2研真題·扣教材探究分析，培養(yǎng)核心技能1.

（2024·湖南高考5題）某同學(xué)將質(zhì)粒DNA進(jìn)行限制酶酶切時(shí)，發(fā)現(xiàn)DNA

完全沒有被酶切，分析可能的原因并提出解決方法。下列敘述錯(cuò)誤的是

（

）A.

限制酶失活，更換新的限制酶B.

酶切條件不合適，調(diào)整反應(yīng)條件如溫度和酶的用量等C.

質(zhì)粒DNA突變導(dǎo)致酶識(shí)別位點(diǎn)缺失，更換正常質(zhì)粒DNAD.

酶切位點(diǎn)被甲基化修飾，換用對(duì)DNA甲基化不敏感的限制酶√解析：

限制酶失活會(huì)使DNA完全不被酶切，此時(shí)應(yīng)更換新的限制酶，

A正確；酶切條件不合適通常會(huì)使切割效果下降，調(diào)整反應(yīng)條件如溫度和

pH等，調(diào)整酶的用量沒有作用，B錯(cuò)誤；質(zhì)粒DNA突變會(huì)導(dǎo)致限制酶識(shí)別

位點(diǎn)缺失，進(jìn)而造成限制酶無法對(duì)質(zhì)粒DNA進(jìn)行切割，此時(shí)應(yīng)更換為正常

質(zhì)粒DNA，C正確；質(zhì)粒DNA上酶切位點(diǎn)被甲基化修飾，會(huì)導(dǎo)致對(duì)DNA甲

基化敏感的限制酶無法進(jìn)行酶切，此時(shí)應(yīng)換用對(duì)DNA甲基化不敏感的限制

酶，D正確。2.

（2024·安徽高考14題）下列關(guān)于“DNA粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)的敘述，

錯(cuò)誤的是（

）A.

實(shí)驗(yàn)中如果將研磨液更換為蒸餾水，DNA提取的效率會(huì)降低B.

利用DNA和蛋白質(zhì)在酒精中的溶解度差異，可初步分離DNAC.DNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同，該原理可用于純化DNA粗提物D.

將溶解的DNA粗提物與二苯胺試劑反應(yīng)，可檢測(cè)溶液中是否含有蛋白

質(zhì)雜質(zhì)√解析：

研磨液有利于DNA的溶解，換為蒸餾水，DNA提取的效率會(huì)降

低，A正確；DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精，可

初步分離DNA，B正確；DNA在NaCl溶液中的溶解度隨著NaCl濃度的變化

而改變，因此可用不同濃度的NaCl溶液對(duì)DNA進(jìn)行粗提取，C正確；在沸

水浴的條件下，DNA遇二苯胺會(huì)被染成藍(lán)色，二苯胺試劑用于鑒定DNA，

D錯(cuò)誤。溯源教材（1）DNA不溶于酒精，但某些蛋白質(zhì)溶于酒精。

（見選擇性必修3

P74

正文）（2）DNA在不同濃度NaC1溶液中溶解度不同，它能溶于2

mol/L的NaCl溶

液。

（見選擇性必修3

P74正文）（3）在一定溫度下，DNA與二苯胺試劑會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色。

（見選擇性必修3

P74正文）3.

（2024·黑吉遼高考7題）關(guān)于采用瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR產(chǎn)物的實(shí)

驗(yàn)，下列敘述正確的是（

）A.

瓊脂糖凝膠濃度的選擇需考慮待分離DNA片段的大小B.

凝膠載樣緩沖液中指示劑的作用是指示DNA分子的具體位置C.

在同一電場(chǎng)作用下，DNA片段越長(zhǎng)，向負(fù)極遷移速率越快D.

瓊脂糖凝膠中的DNA分子可在紫光燈下被檢測(cè)出來√解析：

應(yīng)根據(jù)待分離DNA片段的大小，用電泳緩沖液配制瓊脂糖溶

液，一般配制質(zhì)量體積比為0.8％～1.2％的瓊脂糖溶液，A正確；凝膠載

樣緩沖液中指示劑的作用是指示電泳的進(jìn)度，而不是指示DNA分子的具體

位置，B錯(cuò)誤；在凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠的濃度、DNA分子的

大小和構(gòu)象等有關(guān)，在同一電場(chǎng)作用下，DNA片段（帶負(fù)電）越長(zhǎng)，DNA

向正極遷移的速率越慢，C錯(cuò)誤；凝膠中的DNA分子通過染色，可以在波

長(zhǎng)為300

nm的紫外燈下被檢測(cè)出來，D錯(cuò)誤。4.

（2024·江西高考12題）γ-氨基丁酸在醫(yī)藥等領(lǐng)域有重要的應(yīng)用價(jià)值。利用L-谷氨酸脫羧酶（GadB）催化L-谷氨酸脫羧是高效生產(chǎn)γ-氨基丁酸的重要途徑之一。研究人員采用如圖方法將釀酒酵母S的L-谷氨酸脫羧酶基因（gadB）導(dǎo)入生產(chǎn)菌株E.coli

A，構(gòu)建了以L-谷氨酸鈉為底物高效生產(chǎn)γ-氨基丁酸的菌株E.coli

B。下列敘述正確的是（

）A.

上圖表明，可以從釀酒酵母S中分離得到目的基因gadBB.E.coli

B發(fā)酵生產(chǎn)γ-氨基丁酸時(shí)，L-谷氨酸鈉的作用是供能C.E.coli

A和E.coli

B都能高效降解γ-氨基丁酸D.

可以用其他酶替代NcoⅠ和KpnⅠ構(gòu)建重組質(zhì)?！探馕觯?/p>

不能直接從釀酒酵母S中分離得到目的基因gadB，只能分離得

到含有目的基因gadB序列的染色體DNA，如題圖所示，若要獲取目的基

因，需要進(jìn)行PCR，A錯(cuò)誤；由題意知L-谷氨酸鈉是合成γ-氨基丁酸的底

物，用L-谷氨酸脫羧酶（GadB）催化L-谷氨酸（或L-谷氨酸鹽）脫羧（谷

氨酸→氨基丁酸＋CO2）生產(chǎn)γ-氨基丁酸，該過程L-谷氨酸鈉的作用是底物

而不是供能，B錯(cuò)誤；菌株E.coli

A中沒有L-谷氨酸脫羧酶基因（gadB），不能表達(dá)產(chǎn)生L-谷氨酸脫羧酶（GadB），因而不能降解L-谷氨酸，而E.

coli

B中導(dǎo)下L-谷氨酸脫羧酶基因（gadB），L-谷氨酸脫羧酶基因（gadB）

表達(dá)產(chǎn)生L-谷氨酸脫羧酶（gadB），能高效降解L-谷氨酸鈉生成γ-氨基丁

酸，而不是高效降解γ-氨基丁酸，C錯(cuò)誤；圖中質(zhì)粒下方括號(hào)內(nèi)備注含多克

隆位點(diǎn)，表明質(zhì)粒上含有多種限制酶的識(shí)別序列，除了Nco

Ⅰ和Kpn

Ⅰ外還

有其他的限制酶可選，D正確。5.

（2024·全國(guó)甲卷38題）某同學(xué)采用基因工程技術(shù)在大腸桿菌中表達(dá)蛋

白E?；卮鹣铝袉栴}。（1）該同學(xué)利用PCR擴(kuò)增目的基因。PCR的每次循環(huán)包括變性、復(fù)性、延

伸3個(gè)階段，其中DNA雙鏈打開成為單鏈的階段是

，引物與模板

DNA鏈堿基之間的化學(xué)鍵是

?。解析：PCR的每次循環(huán)包括變性、復(fù)性、延伸3個(gè)階段，其中DNA雙鏈打開為單鏈的階段是變性，引物與模板DNA鏈堿基之間的化學(xué)鍵是氫鍵。變性氫鍵（2）質(zhì)粒載體上有限制酶a、b、c的酶切位點(diǎn)，限制酶的切割位點(diǎn)如圖所

示。構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，與用酶a單酶切相比，用酶a和酶b雙酶切的優(yōu)點(diǎn)體現(xiàn)

在

?

（答出2點(diǎn)即可）；使用酶c單酶切構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)宜選用的連接酶是

??。用酶a和酶b雙酶切可防止載體和目的基因自身環(huán)化以及目的基因的反

向連接，保證目的基因和載體正確連接，從而提高重組率T4

DNA連接酶

解析：用酶a和酶b雙酶切可防止載體和目的基因自身環(huán)化以及目的基因的反向連接，保證目的基因和載體正確連接，從而提高重組率。使用酶c單酶切只能形成平末端，T4

DNA連接酶可以“縫合”雙鏈DNA片段的平末端。（3）將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌前，通常先將受體細(xì)胞處理成感受態(tài)，感

受態(tài)細(xì)胞的特點(diǎn)是

。若要驗(yàn)證轉(zhuǎn)化的大腸

桿菌中含有重組質(zhì)粒，簡(jiǎn)要的實(shí)驗(yàn)思路和預(yù)期結(jié)果是

?

?

?

?。能吸收周圍環(huán)境中DNA分子將轉(zhuǎn)化的大腸桿菌

的基因組DNA提取出來，在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素等

作標(biāo)記，以此作為探針，使探針與基因組DNA雜交，如果顯示雜交帶，就

表明轉(zhuǎn)化的大腸桿菌中含有重組質(zhì)粒（合理即可）解析：感受態(tài)細(xì)胞的特點(diǎn)是能吸收周圍環(huán)境中DNA分子。欲驗(yàn)證轉(zhuǎn)化的大腸桿菌中含有重組質(zhì)粒，可將轉(zhuǎn)化的大腸桿菌的基因組DNA提取出來，在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素等作標(biāo)記，以此為探針，使探針與基因組DNA雜交，如果顯示雜交帶，就表明轉(zhuǎn)化的大腸桿菌中含有重組質(zhì)粒。（4）蛋白E基因中的一段DNA編碼序列（與模板鏈互補(bǔ)）是

GGGCCCAAGCTGAGATGA，編碼從GGG開始，部分密碼子見表。若第

一個(gè)核苷酸G缺失，則突變后相應(yīng)肽鏈的序列是

??。氨基酸賴氨酸精氨酸絲氨酸脯氨酸亮氨酸甘氨酸終止密碼子AAGAGAAGCCCACCCCUGGGC

GGGUGA甘氨酸—脯氨酸—絲氨酸

解析：依據(jù)DNA分子模板鏈和編碼鏈的堿基配對(duì)情況、轉(zhuǎn)錄過程的堿基配對(duì)情況，可推出轉(zhuǎn)錄形成的mRNA上的堿基序列和編碼鏈相近，只存在T和U的差別，即正常mRNA堿基序列為GGGCCCAAGCUGAGAUGA，編碼序列缺失第一個(gè)核苷酸G后，產(chǎn)生的異常mRNA堿基序列為GGCCCAAGCUGAGAUGA，對(duì)應(yīng)的密碼子依次是GGC（甘氨酸）、CCA（脯氨酸）、AGC（絲氨酸）、UGA（終止密碼子），即突變后相應(yīng)肽鏈的序列是甘氨酸—脯氨酸—絲氨酸。6.

（2024·新課標(biāo)卷35題）某研究小組將纖維素酶基因（N）插入某種細(xì)菌

（B1）的基因組中，構(gòu)建高效降解纖維素的菌株（B2）。該小組在含有N

基因的質(zhì)粒中插入B1基因組的M1與M2片段；再經(jīng)限制酶切割獲得含N基

因的片段甲，片段甲兩端分別為M1與M2；利用CRISPR/Cas9基因組編輯

技術(shù)將片段甲插入B1的基因組，得到菌株B2。酶切位點(diǎn)（Ⅰ～Ⅳ）、引物

（P1～P4）的結(jié)合位置、片段甲替換區(qū)如圖所示，→表示引物5'→3'方

向?；卮鹣铝袉栴}。（1）限制酶切割的化學(xué)鍵是

。為保證N基因能在菌株B2中

表達(dá)，在構(gòu)建片段甲時(shí)，應(yīng)將M1與M2片段分別插入質(zhì)粒的Ⅰ和Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ

酶切位點(diǎn)之間，原因是

?。解析：

限制酶能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的磷酸二酯鍵斷開。在構(gòu)建片段甲時(shí)，將M1與M2片段分別插入質(zhì)粒的Ⅰ和Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ酶切位點(diǎn)之間，可保證片段甲含有啟動(dòng)子和終止子，且不破壞N基因，從而使N基因能在菌株B2中表達(dá)。磷酸二酯鍵不破壞N基因，且能保證N基因正常表達(dá)

（2）CRISPR/Cas9技術(shù)可以切割細(xì)菌B1基因組中與向?qū)NA結(jié)合的

DNA。向?qū)NA與B1基因組DNA互補(bǔ)配對(duì)可以形成的堿基對(duì)有G—C

和

?。解析：

向?qū)NA為核糖核苷酸序列，含有堿基A、U、C、G；B1基因組DNA為脫氧核苷酸序列，含有堿基A、T、C、G。故向?qū)NA與B1基因組DNA互補(bǔ)配對(duì)可形成的堿基對(duì)有G—C和C—G、A—T、U—A。C—G、U—A、A—T（3）用引物P1和P2進(jìn)行PCR可驗(yàn)證片段甲插入了細(xì)菌B1基因組，所用的

模板是

；若用該模板與引物P3和P4進(jìn)行PCR，實(shí)驗(yàn)結(jié)

果是

?。解析：

由題中信息“利用CRISPR/Cas9基因組編輯技術(shù)將片段甲插入

B1的基因組，得到菌株B2”可知，用引物P1和P2進(jìn)行PCR驗(yàn)證片段甲插入

了細(xì)菌B1基因組所用的模板為N基因的兩條鏈。結(jié)合題圖分析可知，P4是

以細(xì)菌B1基因組DNA為模板設(shè)計(jì)的引物，故N基因的兩條鏈為模板，以P3

和P4為引物進(jìn)行PCR，不能擴(kuò)增出目的條帶。N基因的兩條鏈無擴(kuò)增產(chǎn)物（4）與秸稈焚燒相比，利用高效降解纖維素的細(xì)菌處理秸稈的優(yōu)點(diǎn)

是

（答出2點(diǎn)即可）。解析：

焚燒秸稈會(huì)污染環(huán)境，利用高效降解纖維素的細(xì)菌處理秸稈

可實(shí)現(xiàn)廢物利用，減少環(huán)境污染。實(shí)現(xiàn)廢物利用，減少環(huán)境污染

（1）通過基因工程技術(shù)引入外源基因可改變中國(guó)水仙花色。

（2024·福

建高考）

（

√

）（2）使用不同的限制酶也能產(chǎn)生相同的黏性末端。

（2024·貴州高考）

（

√

）（3）PCR技術(shù)中的DNA延伸過程無需引物參與即可完成半保留復(fù)制。

（2022·遼寧高考）

（

×

）提示：DNA聚合酶不能從頭開始合成DNA鏈，只能催化單個(gè)的脫氧核苷酸

添加到已有的核酸片段的3'端，故延伸過程需要引物參與?！獭獭粒?）粗提取DNA時(shí)的過濾液沉淀過程在4

℃冰箱中進(jìn)行是為了防止DNA

降解。

（2022·山東高考）

（

√

）（5）動(dòng)、植物細(xì)胞DNA的提取必須在無菌條件下進(jìn)行。

（2022·湖北高

考）

（

×

）提示：動(dòng)、植物細(xì)胞的DNA提取不需要在無菌條件下進(jìn)行?！獭?3驗(yàn)收效·提能力跟蹤訓(xùn)練，檢驗(yàn)學(xué)習(xí)效果一、選擇題1.

（2025·江蘇南通統(tǒng)考）如圖所示三個(gè)DNA片段依次表示EcoRⅠ、BamH

Ⅰ和Sau3AⅠ三種限制酶的識(shí)別序列與切割位點(diǎn)。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是

（

）A.

三種限制酶切割產(chǎn)生的末端的長(zhǎng)度大小相同B.

這三種限制酶切割后形成的都是黏性末端C.

BamH

Ⅰ和Sau3AⅠ切割DNA片段形成的末端不能彼此連接D.

圖中的DNA片段被EcoRⅠ切割后，會(huì)增加兩個(gè)游離的磷酸基團(tuán)12345678910√解析：

根據(jù)題圖并結(jié)合三種限制酶的切割位點(diǎn)可知，這三種限制酶切

割后形成的都是黏性末端，且長(zhǎng)度大小相同，A、B正確；用BamH

Ⅰ和

Sau3AⅠ切割DNA片段會(huì)形成相同的黏性末端，故BamH

Ⅰ和Sau3AⅠ切割

DNA片段形成的末端能按照堿基互補(bǔ)配對(duì)彼此連接，C錯(cuò)誤；圖中的DNA

片段被EcoRⅠ切割后，會(huì)斷裂兩個(gè)磷酸二酯鍵，從而增加兩個(gè)游離的磷酸

基團(tuán)，D正確。123456789102.

（2025·吉林四平高三聯(lián)考）科學(xué)家利用PCR技術(shù)擴(kuò)增人乳頭瘤病毒

HPV-16L1基因，構(gòu)建了含HPV-16L1基因的表達(dá)載體pBI-L1，經(jīng)根瘤農(nóng)桿

菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化，獲得了轉(zhuǎn)基因煙草植株。該技術(shù)利用轉(zhuǎn)基因煙草作為生物反

應(yīng)器，生產(chǎn)出了純度較高的HPV-16L1蛋白。下列說法錯(cuò)誤的是（

）A.

利用PCR擴(kuò)增HPV-16L1基因的前提是已知該基因的一段堿基序列B.

構(gòu)建表達(dá)載體pBI-L1時(shí)可使用兩種不同限制酶以確保正確連接C.

必須選用煙草的受精卵作為受體細(xì)胞才能保證每個(gè)細(xì)胞中含有目的基因D.

可以用抗原—抗體雜交法檢測(cè)再生植株是否表達(dá)出HPV-16L1蛋白√12345678910解析：

利用PCR擴(kuò)增HPV-16L1基因的前提是已知該基因的一段堿基序

列，根據(jù)該序列制作引物，A正確；用兩種不同限制酶，可保證目的基因

和載體定向連接，且不發(fā)生自身環(huán)化，B正確；除選用煙草的受精卵作為

受體細(xì)胞外，也可選用煙草的根尖分生區(qū)細(xì)胞作為受體細(xì)胞，然后通過植

物組織培養(yǎng)使每個(gè)細(xì)胞中均含有目的基因，C錯(cuò)誤；分子水平對(duì)目的基因

進(jìn)行檢測(cè)，可根據(jù)抗原—抗體雜交技術(shù)檢測(cè)相應(yīng)蛋白質(zhì)，D正確。123456789103.

（2025·山東聊城一模）下列關(guān)于DNA的提取和DNA片段的擴(kuò)增及電泳

鑒定的敘述，正確的是（

）A.

利用DNA和蛋白質(zhì)在冷酒精中溶解性的差異可將DNA進(jìn)一步純化分離B.

在提取白色絲狀物時(shí)雙向攪拌比單向攪拌更有利于獲得結(jié)構(gòu)完整的

DNAC.PCR實(shí)驗(yàn)中使用的微量離心管、槍頭、蒸餾水和移液器等在使用前都必

須進(jìn)行高壓蒸汽滅菌處理D.PCR的產(chǎn)物一般通過瓊脂糖凝膠電泳來鑒定，電泳時(shí)電泳緩沖液不能沒

過凝膠√12345678910解析：

DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精，可利

用這個(gè)特性將DNA與蛋白質(zhì)分離，A正確；在提取白色絲狀物時(shí)用玻璃棒

輕輕單向攪拌更有利于獲得結(jié)構(gòu)完整的DNA，B錯(cuò)誤；PCR實(shí)驗(yàn)中使用的

微量離心管、槍頭、蒸餾水在使用前都必須進(jìn)行高壓蒸汽滅菌處理，移液

器不需要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌處理，C錯(cuò)誤；通過瓊脂糖凝膠電泳來鑒定

PCR的產(chǎn)物時(shí)，電泳緩沖液沒過凝膠1

mm為宜，D錯(cuò)誤。123456789104.

（2025·遼寧沈陽模擬）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法是植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)中常用的轉(zhuǎn)化

方法之一。下列與該方法相關(guān)的敘述，錯(cuò)誤的是（

）A.

土壤農(nóng)桿菌是重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞B.T-DNA是擬核DNA上的一段序列C.

農(nóng)桿菌能侵染雙子葉植物和裸子植物D.

新鮮葉圓片與農(nóng)桿菌在適宜條件下共培養(yǎng)，部分細(xì)胞會(huì)被轉(zhuǎn)化√12345678910解析：

將目的基因與載體相連形成重組質(zhì)粒后，要導(dǎo)入土壤農(nóng)桿菌

內(nèi)，再讓農(nóng)桿菌去侵染植物細(xì)胞，A正確；T-DNA是位于Ti質(zhì)粒中的一段

序列，不位于擬核，B錯(cuò)誤；農(nóng)桿菌能在自然條件下侵染雙子葉植物和裸

子植物，對(duì)大多數(shù)單子葉植物沒有侵染能力，C正確；農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的轉(zhuǎn)

化效率不是100％，因此適宜條件下，新鮮葉圓片與農(nóng)桿菌共培養(yǎng)后，部

分細(xì)胞會(huì)被轉(zhuǎn)化，D正確。123456789105.

（2025·廣東深圳光明區(qū)高三檢測(cè)）如圖為某種質(zhì)粒的簡(jiǎn)圖，小箭頭所

指分別為限制性內(nèi)切核酸酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位點(diǎn)，P為轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng)

部位。已知目的基因的兩端有EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位點(diǎn)，受體細(xì)胞為無

任何抗藥性的原核細(xì)胞。下列有關(guān)敘述正確的是（

）A.

將含有目的基因的DNA與質(zhì)粒分別用EcoRⅠ酶

切，在DNA連接酶作用下，生成的由兩個(gè)DNA片

段連接形成的產(chǎn)物有兩種B.DNA連接酶的作用是將酶切后得到的黏性末端連

接起來，形成一個(gè)重組質(zhì)粒時(shí)形成兩個(gè)磷酸二酯鍵C.

為了防止目的基因反向連接和質(zhì)粒自身環(huán)化，酶切

時(shí)可選用的酶是EcoRⅠ和BamH

ⅠD.

受體細(xì)胞能在含青霉素的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，表明目

的基因已成功導(dǎo)入該細(xì)胞√12345678910解析：

根據(jù)題意可知，目的基因的兩端有EcoR

Ⅰ、BamH

Ⅰ的酶切位

點(diǎn)，將含有目的基因的DNA用EcoR

Ⅰ酶切，會(huì)得到目的基因片段；根據(jù)質(zhì)

粒的簡(jiǎn)圖可知，將質(zhì)粒用EcoR

Ⅰ酶切，會(huì)得到與質(zhì)粒周長(zhǎng)等長(zhǎng)的鏈狀

DNA，因此將含有目的基因的DNA與質(zhì)粒分別用EcoR

Ⅰ酶切，在DNA連

接酶作用下，可生成目的基因—目的基因片段、目的基因—質(zhì)粒片段、質(zhì)

?！|(zhì)粒片段三種產(chǎn)物，A錯(cuò)誤。DNA連接酶的作用是將酶切后得到的黏

性末端連接起來形成一個(gè)重組質(zhì)粒，該過程形成四個(gè)磷酸二酯鍵，B錯(cuò)誤。EcoR

Ⅰ和BamH

Ⅰ的識(shí)別序列不同，獲取目的基因和切割質(zhì)粒時(shí)，同時(shí)選

用EcoR

Ⅰ和BamH

Ⅰ切割，目的基因兩端形成的末端不同，切割后的質(zhì)粒

兩端形成的末端也不同，再用DNA連接酶連接，可以防止目的基因反向連

接和質(zhì)粒自身環(huán)化，C正確。導(dǎo)入普通質(zhì)粒的受體細(xì)胞和導(dǎo)入重組質(zhì)粒的

受體細(xì)胞都能在含青霉素的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，因此能在含青霉素的培養(yǎng)基中

生長(zhǎng)的受體細(xì)胞不一定含有目的基因，D錯(cuò)誤。123456789106.

（2025·廣東梅州聯(lián)考）PCR引物的3'端為結(jié)合模板DNA的關(guān)鍵，5'端無

嚴(yán)格限制，可用于添加限制酶切點(diǎn)等序列，dNTP（四種脫氧核苷三磷酸）

是DNA合成的原料。下列相關(guān)說法錯(cuò)誤的是（

）A.

圖示環(huán)節(jié)所需的溫度比上一個(gè)環(huán)節(jié)的低B.dNTP作為擴(kuò)增的原料會(huì)依次連接到3'端C.

Taq

DNA聚合酶催化磷酸二酯鍵的形成D.

經(jīng)過1個(gè)循環(huán)后，獲得的子代DNA的雙鏈中脫氧核苷酸數(shù)量相同√12345678910解析：

題圖中環(huán)節(jié)為引物與模板堿基互補(bǔ)配對(duì)，表示的是復(fù)性環(huán)節(jié)，

復(fù)性的上一環(huán)節(jié)為變性，復(fù)性的溫度（50

℃左右）比變性的溫度（90

℃

以上）低，A正確；在PCR擴(kuò)增中，子鏈延伸的方向是從5'端到3'端，所以

dNTP作為擴(kuò)增的原料會(huì)依次連接到3'端，B正確；Taq

DNA聚合酶能催化

磷酸二酯鍵的形成，C正確；由于兩個(gè)引物均不在該片段的端點(diǎn)，因此一

個(gè)循環(huán)后，得到的兩個(gè)DNA片段中脫氧核苷酸的數(shù)量不一定相同，一般

PCR第三輪才可以擴(kuò)增出雙鏈脫氧核苷酸數(shù)量相同的子代DNA，D錯(cuò)誤。123456789107.

（2025·廣東肇慶調(diào)研）在基因工程操作中，科研人員利用識(shí)別兩種不

同序列的限制酶（R1和R2）處理基因載體，進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳檢

測(cè)，結(jié)果如圖所示。以下相關(guān)敘述中，錯(cuò)誤的是（

）A.

該載體最可能為環(huán)形DNA分子B.

兩種限制酶在載體上各有一個(gè)酶切位點(diǎn)C.

限制酶R1與R2的切割位點(diǎn)最短相距200

bpD.

限制酶作用位點(diǎn)會(huì)導(dǎo)致氫鍵和肽鍵斷裂√12345678910解析：

單用限制酶R1或R2切割均只得到一段序列（兩種限制酶切割產(chǎn)

生的DNA片段等長(zhǎng)），可知載體可能是環(huán)狀DNA分子，當(dāng)用兩種限制酶R1

和R2同時(shí)切割載體時(shí)，產(chǎn)生兩種長(zhǎng)度的DNA片段，則這兩種限制酶在載體

上各有一個(gè)酶切位點(diǎn)，兩種限制酶同時(shí)切割可得到200

bp和600

bp的DNA

分子片段，可知限制酶R1和R2的酶切位點(diǎn)最短相距200

bp，A、B、C正

確；限制酶是切割DNA的工具，能夠特異性識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定

核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵

斷裂，D錯(cuò)誤。123456789108.

（2025·湖南衡陽月考）戊型肝炎病毒是一種RNA病毒，ORF2基因編碼的結(jié)構(gòu)蛋白（pORF2）位于病毒表面，構(gòu)成病毒的衣殼。我國(guó)科研人員利用基因工程技術(shù)，在大腸桿菌中表達(dá)pORF2，制備戊型肝炎疫苗，過程如圖。下列關(guān)于該疫苗的敘述錯(cuò)誤的是（

）A.

過程①需要的酶是RNA聚合酶，原料是A、U、G、CB.

重組基因表達(dá)載體上的啟動(dòng)子需來源于大腸桿菌C.

過程⑤需要用Ca2＋處理大腸桿菌使其處于一種能吸收周圍環(huán)境中

DNA分子的生理狀態(tài)D.

過程⑥大量制備pORF2蛋白前應(yīng)做相應(yīng)的檢測(cè)與鑒定√12345678910解析：

戊型肝炎病毒是一種RNA病毒，過程①是以病毒RNA為模板合成DNA，獲取目的基因的過程，需要的酶是逆轉(zhuǎn)錄酶，原料是四種脫氧核苷酸，A錯(cuò)誤；啟動(dòng)子是一段有特殊序列結(jié)構(gòu)的DNA片段，其作用是供RNA聚合酶的識(shí)別結(jié)合以驅(qū)動(dòng)目的基因的轉(zhuǎn)錄，啟動(dòng)子具有物種或組織特異性，構(gòu)建在大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)特異表達(dá)pORF2的載體時(shí)，需要選擇大腸桿菌細(xì)胞的啟動(dòng)子，而不能選擇其他物種的啟動(dòng)子，B正確；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是Ca2＋處理法，需要用Ca2＋處理大腸桿菌，使其處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀