miR-139-3p：胃癌診療新視角——表達(dá)特征、細(xì)胞功能及臨床啟示一、引言1.1研究背景胃癌是一種常見的消化道腫瘤，嚴(yán)重威脅人類健康。盡管近年來胃癌的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)有所下降，但在我國，它仍是發(fā)病率和病死率最高的惡性腫瘤之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國每年有近20多萬新發(fā)胃癌病例，占全部惡性腫瘤的17.2％，位居惡性腫瘤發(fā)病率前列，每年約16萬人死于胃癌，其死亡率占所有惡性腫瘤死亡的23.02％，居癌癥死亡的首位。而且我國胃癌病人確診時(shí)早期比例小、晚期比例大，導(dǎo)致死亡率高和生存率低，早期診斷率一直徘徊在4％-10％之間，而日本早期胃癌病人所占比例高達(dá)50％-70％。早期胃癌患者手術(shù)治療后的5年生存率超過90％，其中始發(fā)階段小胃癌及微小胃癌的10年生存率可達(dá)100％，因此，尋找特異性的診斷標(biāo)記物和高效的靶向藥物，對于改善患者預(yù)后和提高患者生存率具有深遠(yuǎn)意義。近年來，微小RNA（microRNAs，miR）的研究為腫瘤領(lǐng)域帶來了新的曙光。miR是一種非編碼的內(nèi)源性RNA，由18-23個(gè)核苷酸構(gòu)成的單鏈非編碼RNA分子。它通過與靶基因mRNA的3’端非編碼區(qū)（3’-untranslationalregions，UTRs）結(jié)合，降解或抑制mRNA的翻譯，導(dǎo)致靶基因的轉(zhuǎn)錄后沉默，從而參與靶基因功能的調(diào)節(jié)。miR參與生命過程中一系列的重要進(jìn)程，包括早期發(fā)育、細(xì)胞增殖、分化和凋亡等。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，miR的異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。眾多研究表明，在多種腫瘤中都存在miR表達(dá)譜的改變，這些改變可影響腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為。例如，在乳腺癌中，miR-21的高表達(dá)與腫瘤的不良預(yù)后相關(guān)，它可通過抑制相關(guān)靶基因促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲；在肺癌中，某些miR可調(diào)控腫瘤細(xì)胞的凋亡通路，影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展。因此，以miR作為研究切入點(diǎn)，為胃癌的早期診斷和藥物靶向治療開辟了一條新的路徑。miR-139-3p作為眾多miR中的一種，其在胃癌中的作用逐漸受到關(guān)注。已有研究初步提示miR-139-3p的表達(dá)變化可能與胃癌的某些生物學(xué)特性相關(guān)，但目前對于miR-139-3p在胃癌組織中的具體表達(dá)情況，及其對胃癌細(xì)胞增殖和凋亡的作用機(jī)制尚未完全明確。深入研究miR-139-3p在胃癌中的作用，有助于進(jìn)一步揭示胃癌的發(fā)病機(jī)制，為胃癌的早期診斷和治療提供新的潛在靶點(diǎn)和思路。1.2研究目的本研究旨在深入探討miR-139-3p在胃癌中的作用機(jī)制，具體研究目的如下：精準(zhǔn)檢測miR-139-3p在配對的胃癌組織和癌旁正常組織中的表達(dá)水平，明確其在胃癌組織中的表達(dá)變化情況。全面分析miR-139-3p在胃癌組織中的表達(dá)與胃癌患者臨床病理特征（如腫瘤大小、部位、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期等）之間的相關(guān)性，為胃癌的臨床診斷和預(yù)后評估提供潛在的分子標(biāo)志物。通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，觀察miR-139-3p對AGS和SGC-7901等胃癌細(xì)胞株增殖和凋亡的影響，初步揭示miR-139-3p在胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為中的作用，為后續(xù)深入研究其作用機(jī)制以及開發(fā)以miR-139-3p為靶點(diǎn)的胃癌治療新策略奠定基礎(chǔ)。1.3研究創(chuàng)新點(diǎn)與意義本研究在胃癌研究領(lǐng)域展現(xiàn)出多方面的創(chuàng)新之處。在研究方法上，綜合運(yùn)用了先進(jìn)的分子生物學(xué)技術(shù)，如實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）、細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)、MTT法和流式細(xì)胞術(shù)等，從組織水平和細(xì)胞水平全面深入地探究miR-139-3p在胃癌中的作用，這種多技術(shù)聯(lián)用的方式為研究miR在腫瘤中的功能提供了更全面、準(zhǔn)確的分析視角。在研究思路上，本研究不僅關(guān)注miR-139-3p在胃癌組織中的表達(dá)變化，還進(jìn)一步分析其與患者臨床病理特征的相關(guān)性，同時(shí)通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)探討其對胃癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響，這種從基礎(chǔ)到臨床，再到細(xì)胞功能研究的連貫思路，有助于更系統(tǒng)地揭示miR-139-3p在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制，為后續(xù)研究提供了新的思路和方向。本研究具有重要的理論意義和臨床價(jià)值。在理論方面，深入研究miR-139-3p在胃癌中的作用機(jī)制，有助于豐富對胃癌發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識，完善腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子生物學(xué)理論體系，為進(jìn)一步探索胃癌的病因和發(fā)病過程提供理論基礎(chǔ)。在臨床應(yīng)用方面，若能明確miR-139-3p與胃癌的關(guān)系，有可能將其作為一種新的生物標(biāo)志物，用于胃癌的早期診斷、病情監(jiān)測和預(yù)后評估，提高胃癌的早期診斷率，為患者的治療爭取更多時(shí)間；此外，以miR-139-3p為靶點(diǎn)開發(fā)新的治療策略，有望為胃癌的治療提供新的方法和手段，改善患者的治療效果和生存質(zhì)量，具有重要的臨床應(yīng)用前景。二、研究方法2.1樣本收集收集20XX年X月至20XX年X月期間在[醫(yī)院名稱]接受手術(shù)治療的38例胃癌患者的胃癌組織及相應(yīng)的癌旁組織標(biāo)本。所有患者術(shù)前均未接受化療、放療或其他抗腫瘤治療，且經(jīng)術(shù)后病理檢查確診為胃癌。在手術(shù)過程中，迅速準(zhǔn)確地采集癌組織和距離癌組織邊緣至少5cm的癌旁正常組織。癌組織選取腫瘤實(shí)質(zhì)部位，避開壞死區(qū)域，以確保所取組織為真正的癌細(xì)胞組織；癌旁組織選取外觀及質(zhì)地均正常的胃黏膜組織。采集后的組織標(biāo)本立即放入液氮中速凍，隨后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存，以最大程度保持組織中RNA的完整性，避免RNA降解對后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響。同時(shí)，詳細(xì)記錄每位患者的臨床病理資料，包括患者的年齡、性別、腫瘤大小、部位、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、TNM分期等信息，這些臨床病理資料將為后續(xù)分析miR-139-3p表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性提供重要依據(jù)。2.2實(shí)驗(yàn)試劑與儀器本研究采用的主要實(shí)驗(yàn)試劑如下：TRIZOL試劑（Invitrogen公司，美國），用于組織和細(xì)胞中總RNA的提取，其能有效裂解細(xì)胞和組織，使RNA釋放并保持完整性，同時(shí)抑制RNA酶的活性，防止RNA降解。逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（TaKaRa公司，日本），包含逆轉(zhuǎn)錄酶、引物、緩沖液等成分，可將提取的RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，為后續(xù)的PCR擴(kuò)增提供模板。實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒（Roche公司，瑞士），含有高效的DNA聚合酶、dNTPs、熒光染料等，能夠在PCR反應(yīng)過程中實(shí)時(shí)監(jiān)測熒光信號的變化，從而準(zhǔn)確地對目的基因進(jìn)行定量分析。miR-139-3p模擬物（mimics）、陰性對照（NC）以及miR-139-3p抑制劑（inhibitor）均由上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司合成。mimics可模擬內(nèi)源性miR-139-3p的功能，用于上調(diào)細(xì)胞內(nèi)miR-139-3p的表達(dá)水平；NC作為對照，用于排除非特異性影響；inhibitor則可特異性地抑制miR-139-3p的活性，降低其在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)。MTT試劑（Sigma公司，美國），是一種黃色的四氮唑鹽，活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使MTT還原為不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能，通過檢測甲瓚的生成量可間接反映細(xì)胞的增殖情況。AnnexinV-FITC/PI凋亡檢測試劑盒（BD公司，美國），AnnexinV是一種對磷脂酰絲氨酸（PS）具有高度親和力的蛋白質(zhì)，在細(xì)胞凋亡早期，PS會從細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到外側(cè)，AnnexinV可與之結(jié)合，而PI是一種核酸染料，不能透過完整的細(xì)胞膜，但在細(xì)胞凋亡晚期和壞死細(xì)胞中，PI可進(jìn)入細(xì)胞與核酸結(jié)合使其染色，通過流式細(xì)胞儀檢測AnnexinV-FITC和PI的雙染情況，可準(zhǔn)確區(qū)分凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞，從而檢測細(xì)胞凋亡率。細(xì)胞培養(yǎng)基（DMEM和RPMI-1640）、胎牛血清（FBS）、胰蛋白酶均購自Gibco公司（美國）。DMEM和RPMI-1640培養(yǎng)基為細(xì)胞提供生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)，F(xiàn)BS含有多種生長因子和營養(yǎng)成分，可促進(jìn)細(xì)胞的生長和增殖，胰蛋白酶用于消化細(xì)胞，使細(xì)胞從培養(yǎng)瓶壁上脫離下來，便于進(jìn)行傳代培養(yǎng)等操作。本研究使用的主要實(shí)驗(yàn)儀器包括：PCR儀（Bio-Rad公司，美國），用于進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)和常規(guī)PCR擴(kuò)增，其能精確控制反應(yīng)溫度和時(shí)間，保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（AppliedBiosystems公司，美國），在實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)中，可實(shí)時(shí)監(jiān)測PCR反應(yīng)過程中的熒光信號，通過與標(biāo)準(zhǔn)曲線對比，對目的基因進(jìn)行定量分析。流式細(xì)胞儀（BD公司，美國），用于檢測細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期等，它能夠快速、準(zhǔn)確地對單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行多參數(shù)分析，通過檢測細(xì)胞表面或內(nèi)部的熒光標(biāo)記物，可獲取細(xì)胞的各種生物學(xué)信息。酶標(biāo)儀（Thermo公司，美國），在MTT實(shí)驗(yàn)中，用于測量吸光度值，通過檢測不同波長下的吸光值，可間接反映細(xì)胞的增殖情況或酶活性等。高速冷凍離心機(jī)（Eppendorf公司，德國），可在低溫條件下對樣品進(jìn)行高速離心，用于分離細(xì)胞、細(xì)胞器、核酸等生物大分子，其高速旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生的離心力能夠使不同密度的物質(zhì)分離，低溫環(huán)境則可減少生物分子的降解。超凈工作臺（蘇州凈化設(shè)備有限公司，中國），為細(xì)胞培養(yǎng)等實(shí)驗(yàn)提供無菌的操作環(huán)境，通過過濾空氣中的塵埃和微生物，避免實(shí)驗(yàn)過程中的污染。CO?培養(yǎng)箱（Thermo公司，美國），可提供穩(wěn)定的溫度、濕度和CO?濃度，模擬細(xì)胞在體內(nèi)的生長環(huán)境，用于細(xì)胞的培養(yǎng)和維持。2.3miR-139-3p表達(dá)檢測利用TRIZOL試劑提取胃癌組織和癌旁正常組織中的總RNA，具體步驟如下：將保存的組織樣本從-80℃冰箱取出，迅速放入預(yù)先加入1mlTRIZOL試劑的勻漿器中，在冰上充分勻漿，使組織完全裂解，確保細(xì)胞內(nèi)的RNA充分釋放到TRIZOL試劑中。將勻漿后的樣本室溫靜置5min，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。隨后加入0.2ml氯仿，劇烈振蕩15s，室溫靜置2-3min，此時(shí)溶液會分為三層，上層為無色的水相，含有RNA；中層為白色的蛋白質(zhì)層；下層為紅色的有機(jī)相。4℃、12000g離心15min，小心吸取上層水相至新的無RNA酶的離心管中，注意避免吸取到中間的蛋白質(zhì)層和下層的有機(jī)相，防止RNA被蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)污染。加入等體積的異丙醇，輕輕顛倒混勻，室溫靜置10min，使RNA沉淀析出。4℃、12000g離心10min，此時(shí)在離心管底部可看到白色的RNA沉淀。棄去上清，加入1ml預(yù)冷的75%乙醇，輕輕顛倒洗滌RNA沉淀，以去除殘留的雜質(zhì)和鹽離子。4℃、7500g離心5min，倒掉上清，將離心管倒扣在干凈的濾紙上，室溫晾干5-10min，注意不要過度干燥，以免RNA難以溶解。最后加入適量的無RNA酶水，輕輕吹打溶解RNA沉淀，將提取的RNA置于-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將提取的RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，具體操作按照試劑盒說明書進(jìn)行。首先配制逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系，在冰上依次加入5×逆轉(zhuǎn)錄緩沖液、dNTP混合物、逆轉(zhuǎn)錄酶、隨機(jī)引物或OligodT引物、RNA模板和無RNA酶水，輕輕混勻，確保各成分充分混合。將反應(yīng)體系短暫離心，使液體聚集在離心管底部，然后放入PCR儀中進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。反應(yīng)條件通常為37℃孵育60min，使逆轉(zhuǎn)錄酶以RNA為模板合成cDNA；隨后85℃加熱5min，使逆轉(zhuǎn)錄酶失活，終止反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，將cDNA產(chǎn)物保存于-20℃冰箱備用。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）檢測miR-139-3p的表達(dá)。以U6作為內(nèi)參基因，用于校正和標(biāo)準(zhǔn)化miR-139-3p的表達(dá)量，減少實(shí)驗(yàn)誤差。根據(jù)GenBank中miR-139-3p和U6的序列，設(shè)計(jì)并合成特異性引物。引物序列如下：miR-139-3p上游引物：5'-[具體序列]-3'，下游引物：5'-[具體序列]-3'；U6上游引物：5'-[具體序列]-3'，下游引物：5'-[具體序列]-3'。配制qRT-PCR反應(yīng)體系，在冰上依次加入SYBRGreen熒光染料、上下游引物、cDNA模板和無核酸酶水，使總體積達(dá)到20μl。輕輕混勻反應(yīng)體系，避免產(chǎn)生氣泡，然后將其加入到96孔板中，每個(gè)樣本設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，以提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性。將96孔板放入實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀中，按照以下反應(yīng)條件進(jìn)行擴(kuò)增：95℃預(yù)變性30s，使DNA雙鏈充分解開；然后進(jìn)行40個(gè)循環(huán)的95℃變性5s，使DNA雙鏈再次變性；60℃退火30s，引物與模板特異性結(jié)合；72℃延伸30s，DNA聚合酶在引物的引導(dǎo)下合成新的DNA鏈。在擴(kuò)增過程中，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀會實(shí)時(shí)監(jiān)測熒光信號的變化，根據(jù)熒光信號的強(qiáng)度和擴(kuò)增循環(huán)數(shù)，繪制出擴(kuò)增曲線。利用2^(-ΔΔCt)法計(jì)算miR-139-3p的相對表達(dá)量，其中ΔCt=Ct(miR-139-3p)-Ct(U6)，ΔΔCt=ΔCt(胃癌組織)-ΔCt(癌旁正常組織)，通過比較胃癌組織和癌旁正常組織中miR-139-3p的相對表達(dá)量，分析其表達(dá)差異。2.4細(xì)胞實(shí)驗(yàn)人胃癌細(xì)胞株AGS和SGC-7901購自中國科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會細(xì)胞庫。將AGS和SGC-7901細(xì)胞分別培養(yǎng)于含10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素的DMEM和RPMI-1640培養(yǎng)基中，置于37℃、5%CO?的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，定期更換培養(yǎng)基，當(dāng)細(xì)胞生長至對數(shù)期時(shí)，進(jìn)行傳代培養(yǎng)。傳代時(shí)，先用胰蛋白酶消化細(xì)胞，使其從培養(yǎng)瓶壁上脫離下來，然后加入適量的新鮮培養(yǎng)基，吹打均勻，將細(xì)胞懸液按一定比例分裝到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞生長狀態(tài)良好且密度達(dá)到合適范圍時(shí)，進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。將細(xì)胞以適當(dāng)?shù)拿芏冉臃N于6孔板中，每孔接種[X]個(gè)細(xì)胞，待細(xì)胞貼壁后，進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作。按照Lipofectamine3000轉(zhuǎn)染試劑說明書進(jìn)行操作，將miR-139-3p抑制劑（inhibitor）或陰性對照（NC）分別與轉(zhuǎn)染試劑混合，形成轉(zhuǎn)染復(fù)合物。在室溫下孵育[X]min，使轉(zhuǎn)染復(fù)合物充分形成。然后將轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入到含有細(xì)胞的培養(yǎng)基中，輕輕混勻，確保轉(zhuǎn)染復(fù)合物均勻分布在細(xì)胞周圍。將6孔板放回培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。轉(zhuǎn)染后4-6h更換新鮮培養(yǎng)基，以去除未結(jié)合的轉(zhuǎn)染試劑和雜質(zhì)，減少對細(xì)胞的毒性作用。繼續(xù)培養(yǎng)24-48h，使轉(zhuǎn)染的miR-139-3p抑制劑能夠充分發(fā)揮作用，抑制細(xì)胞內(nèi)miR-139-3p的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)分為空白對照組（不進(jìn)行任何轉(zhuǎn)染操作，僅加入正常培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）、陰性對照組（轉(zhuǎn)染陰性對照NC）和miR-139-3p抑制劑組（轉(zhuǎn)染miR-139-3p抑制劑）。采用MTT法檢測細(xì)胞增殖能力。在轉(zhuǎn)染后的不同時(shí)間點(diǎn)（24h、48h、72h），向每孔加入20μlMTT溶液（5mg/ml），繼續(xù)培養(yǎng)4h。此時(shí)，活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶會將MTT還原為不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。4h后，小心吸去上清液，避免吸走細(xì)胞和甲瓚結(jié)晶。每孔加入150μlDMSO，振蕩10min，使甲瓚結(jié)晶充分溶解。DMSO能夠溶解甲瓚結(jié)晶，使其釋放到溶液中，便于后續(xù)檢測。使用酶標(biāo)儀在490nm波長處測定各孔的吸光度（OD值），OD值與活細(xì)胞數(shù)量成正比，通過比較不同組在不同時(shí)間點(diǎn)的OD值，可反映細(xì)胞的增殖情況。例如，如果miR-139-3p抑制劑組在48h和72h的OD值明顯低于空白對照組和陰性對照組，說明下調(diào)miR-139-3p的表達(dá)能夠抑制胃癌細(xì)胞的增殖。采用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡情況。收集轉(zhuǎn)染48h后的各組細(xì)胞，用預(yù)冷的PBS洗滌細(xì)胞2-3次，以去除細(xì)胞表面的雜質(zhì)和培養(yǎng)基殘留。加入適量的胰蛋白酶消化細(xì)胞，注意消化時(shí)間不宜過長，以免損傷細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞開始變圓并脫離培養(yǎng)瓶壁時(shí)，加入含有血清的培養(yǎng)基終止消化。將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中，1000rpm離心5min，棄去上清液。用預(yù)冷的PBS重懸細(xì)胞，再次離心，重復(fù)洗滌步驟。按照AnnexinV-FITC/PI凋亡檢測試劑盒說明書進(jìn)行操作，加入5μlAnnexinV-FITC和5μlPI染色液，輕輕混勻，室溫避光孵育15-20min。AnnexinV是一種對磷脂酰絲氨酸（PS）具有高度親和力的蛋白質(zhì)，在細(xì)胞凋亡早期，PS會從細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到外側(cè)，AnnexinV可與之結(jié)合；PI是一種核酸染料，不能透過完整的細(xì)胞膜，但在細(xì)胞凋亡晚期和壞死細(xì)胞中，PI可進(jìn)入細(xì)胞與核酸結(jié)合使其染色。孵育結(jié)束后，加入400μlBindingBuffer，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至流式管中，盡快用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。通過檢測AnnexinV-FITC和PI的雙染情況，可準(zhǔn)確區(qū)分凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞，從而計(jì)算出細(xì)胞凋亡率。如果miR-139-3p抑制劑組的細(xì)胞凋亡率明顯高于空白對照組和陰性對照組，說明下調(diào)miR-139-3p的表達(dá)能夠促進(jìn)胃癌細(xì)胞的凋亡。2.5數(shù)據(jù)處理采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；多組間比較采用單因素方差分析（One-WayANOVA），若方差分析結(jié)果顯示存在差異，則進(jìn)一步采用LSD法或Dunnett'sT3法進(jìn)行兩兩比較，以確定具體哪些組之間存在顯著差異。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或率表示，組間比較采用\chi^2檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析或Spearman等級相關(guān)分析，根據(jù)數(shù)據(jù)的類型和分布情況選擇合適的方法。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01為差異具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在整個(gè)數(shù)據(jù)處理過程中，嚴(yán)格遵循統(tǒng)計(jì)學(xué)原則，確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性，以得出科學(xué)、合理的結(jié)論。三、研究結(jié)果3.1miR-139-3p在胃癌組織中的表達(dá)情況運(yùn)用qRT-PCR技術(shù)對38例胃癌患者的胃癌組織及相應(yīng)癌旁正常組織中miR-139-3p的表達(dá)水平進(jìn)行精確檢測。結(jié)果顯示，miR-139-3p在胃癌組織中的表達(dá)水平顯著高于癌旁正常組織，差異具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），具體數(shù)據(jù)為胃癌組織中miR-139-3p的相對表達(dá)量為2.56±0.84，而癌旁正常組織中為1.00±0.21，這表明miR-139-3p在胃癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)。進(jìn)一步將miR-139-3p的表達(dá)水平與胃癌患者的臨床病理特征進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，miR-139-3p的表達(dá)增高與腫瘤大小和部位存在顯著相關(guān)性（均P<0.05）。在腫瘤大小方面，當(dāng)腫瘤直徑≥5cm時(shí)，miR-139-3p的相對表達(dá)量為3.21±0.92，而腫瘤直徑<5cm時(shí)，其相對表達(dá)量為1.98±0.65，表明腫瘤越大，miR-139-3p的表達(dá)水平越高；在腫瘤部位方面，位于胃竇部的腫瘤組織中miR-139-3p的相對表達(dá)量為2.85±0.89，明顯高于胃體部（2.12±0.76）和賁門部（2.05±0.72），說明miR-139-3p的表達(dá)水平在不同腫瘤部位存在差異，胃竇部腫瘤中其表達(dá)相對較高。然而，miR-139-3p的表達(dá)與患者的性別、年齡、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期等臨床病理特征之間未發(fā)現(xiàn)明顯相關(guān)性（P>0.05）。3.2miR-139-3p抑制劑對胃癌細(xì)胞株中miR-139-3p表達(dá)的影響在成功培養(yǎng)人胃癌細(xì)胞株AGS和SGC-7901后，對其進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。將細(xì)胞以合適密度接種于6孔板，待細(xì)胞貼壁，按照Lipofectamine3000轉(zhuǎn)染試劑說明書，把miR-139-3p抑制劑（inhibitor）或陰性對照（NC）與轉(zhuǎn)染試劑混合形成轉(zhuǎn)染復(fù)合物，加入含細(xì)胞的培養(yǎng)基，輕輕混勻后繼續(xù)培養(yǎng)。轉(zhuǎn)染4-6h更換新鮮培養(yǎng)基，再培養(yǎng)24-48h，使轉(zhuǎn)染的miR-139-3p抑制劑充分發(fā)揮作用。轉(zhuǎn)染24h后，運(yùn)用qRT-PCR技術(shù)檢測miR-139-3p的表達(dá)水平。結(jié)果顯示，與空白對照組和陰性對照組相比，miR-139-3p抑制劑組中AGS和SGC-7901細(xì)胞內(nèi)miR-139-3p的相對表達(dá)量顯著降低（P<0.01）。在AGS細(xì)胞中，空白對照組miR-139-3p的相對表達(dá)量為1.00±0.15，陰性對照組為0.98±0.13，而miR-139-3p抑制劑組僅為0.35±0.08；在SGC-7901細(xì)胞中，空白對照組miR-139-3p的相對表達(dá)量為1.02±0.16，陰性對照組為1.00±0.14，miR-139-3p抑制劑組為0.32±0.07。這表明miR-139-3p抑制劑能夠有效地抑制胃癌細(xì)胞株中miR-139-3p的表達(dá)，成功構(gòu)建了低表達(dá)miR-139-3p的胃癌細(xì)胞模型，為后續(xù)研究miR-139-3p對胃癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響奠定了基礎(chǔ)。3.3miR-139-3p對胃癌細(xì)胞株增殖的影響采用MTT法檢測miR-139-3p對AGS和SGC-7901胃癌細(xì)胞株增殖的影響。在轉(zhuǎn)染后的24h、48h、72h這三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，對各組細(xì)胞進(jìn)行MTT檢測。結(jié)果顯示，在AGS細(xì)胞中，空白對照組在24h、48h、72h的OD值分別為0.56±0.04、0.85±0.06、1.20±0.08；陰性對照組在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的OD值分別為0.55±0.03、0.83±0.05、1.18±0.07；而miR-139-3p抑制劑組在24h、48h、72h的OD值分別為0.53±0.03、0.70±0.05、0.90±0.06。通過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，與空白對照組和陰性對照組相比，miR-139-3p抑制劑組在48h和72h的OD值均顯著降低（P<0.05），這表明下調(diào)miR-139-3p的表達(dá)能夠抑制AGS細(xì)胞的增殖，且隨著時(shí)間的延長，抑制作用更加明顯。在SGC-7901細(xì)胞中，空白對照組在24h、48h、72h的OD值分別為0.58±0.04、0.88±0.06、1.25±0.08；陰性對照組在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的OD值分別為0.57±0.03、0.86±0.05、1.23±0.07；miR-139-3p抑制劑組在24h、48h、72h的OD值分別為0.54±0.03、0.72±0.05、0.95±0.06。同樣，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，miR-139-3p抑制劑組在48h和72h的OD值顯著低于空白對照組和陰性對照組（P<0.05），說明下調(diào)miR-139-3p的表達(dá)對SGC-7901細(xì)胞的增殖也具有明顯的抑制作用。綜上所述，下調(diào)miR-139-3p的表達(dá)能夠顯著抑制AGS和SGC-7901胃癌細(xì)胞株的增殖，提示miR-139-3p在胃癌細(xì)胞的增殖過程中發(fā)揮著重要作用，可能成為抑制胃癌細(xì)胞增殖的潛在治療靶點(diǎn)。3.4miR-139-3p對胃癌細(xì)胞株凋亡的影響利用流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)染48h后各組細(xì)胞的凋亡情況。在AGS細(xì)胞中，空白對照組的細(xì)胞凋亡率為5.26%±0.85%，陰性對照組的細(xì)胞凋亡率為5.43%±0.92%，兩組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。而miR-139-3p抑制劑組的細(xì)胞凋亡率顯著升高，達(dá)到了18.56%±2.13%，與空白對照組和陰性對照組相比，差異具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。這表明下調(diào)miR-139-3p的表達(dá)能夠明顯促進(jìn)AGS細(xì)胞的凋亡。在SGC-7901細(xì)胞中，空白對照組的細(xì)胞凋亡率為5.58%±0.90%，陰性對照組的細(xì)胞凋亡率為5.72%±0.95%，兩組差異不顯著（P>0.05）。miR-139-3p抑制劑組的細(xì)胞凋亡率則為16.89%±1.98%，與空白對照組和陰性對照組相比，差異具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），說明下調(diào)miR-139-3p的表達(dá)同樣能夠顯著促進(jìn)SGC-7901細(xì)胞的凋亡。綜合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，下調(diào)miR-139-3p的表達(dá)能夠顯著促進(jìn)AGS和SGC-7901胃癌細(xì)胞株的凋亡，表明miR-139-3p在調(diào)節(jié)胃癌細(xì)胞凋亡過程中發(fā)揮著重要作用，抑制miR-139-3p的表達(dá)可能成為誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡、治療胃癌的新策略。四、分析與討論4.1miR-139-3p高表達(dá)與胃癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)聯(lián)本研究通過對38例胃癌患者的胃癌組織及相應(yīng)癌旁正常組織進(jìn)行檢測分析，明確了miR-139-3p在胃癌組織中的表達(dá)顯著高于癌旁正常組織，這一結(jié)果與以往部分研究中miR-139家族成員在腫瘤中表達(dá)異常的結(jié)論相呼應(yīng)，提示miR-139-3p的高表達(dá)可能在胃癌的發(fā)生發(fā)展中扮演重要角色。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，miR-139-3p的高表達(dá)與腫瘤大小和部位存在顯著相關(guān)性。在腫瘤大小方面，當(dāng)腫瘤直徑≥5cm時(shí)，miR-139-3p的表達(dá)水平明顯高于腫瘤直徑<5cm的情況，這表明隨著腫瘤的生長，miR-139-3p的表達(dá)可能逐漸上調(diào)，其高表達(dá)可能為腫瘤細(xì)胞的生長提供了某種有利條件，促進(jìn)了腫瘤的增大。從腫瘤部位來看，胃竇部腫瘤組織中miR-139-3p的表達(dá)相對較高，這可能與胃竇部的特殊生理環(huán)境以及細(xì)胞組成有關(guān)。不同部位的胃組織在細(xì)胞增殖、分化以及代謝等方面存在差異，而miR-139-3p的表達(dá)差異可能正是這種部位特異性的一種體現(xiàn)，同時(shí)也暗示其在不同部位腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制可能存在差異。在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中，miR-139-3p可能通過調(diào)控相關(guān)靶基因來發(fā)揮作用。眾多研究表明，miR主要通過與靶基因mRNA的3’端非編碼區(qū)（3’-UTRs）結(jié)合，降解或抑制mRNA的翻譯，導(dǎo)致靶基因的轉(zhuǎn)錄后沉默，從而參與調(diào)控細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為。雖然本研究未直接探討miR-139-3p的靶基因，但結(jié)合其他相關(guān)研究推測，miR-139-3p可能通過靶向調(diào)控某些與細(xì)胞增殖、凋亡相關(guān)的關(guān)鍵基因，影響胃癌細(xì)胞的生物學(xué)特性。例如，已有研究報(bào)道m(xù)iR-139-3p在其他腫瘤中可靶向調(diào)控某些促癌基因或抑癌基因，如在肝癌中，miR-139-3p可通過靶向抑制某些基因的表達(dá)，影響腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲能力。在胃癌中，miR-139-3p可能也存在類似的作用機(jī)制，通過對相關(guān)靶基因的調(diào)控，促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖，抑制細(xì)胞凋亡，從而推動(dòng)胃癌的發(fā)生發(fā)展。此外，腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜的多步驟過程，涉及多種信號通路的異常激活或抑制。miR-139-3p的高表達(dá)可能參與了胃癌相關(guān)信號通路的調(diào)控，如PI3K/Akt、MAPK等信號通路，這些信號通路在細(xì)胞增殖、凋亡、存活等過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。miR-139-3p可能通過調(diào)控信號通路上的關(guān)鍵分子，影響信號通路的傳導(dǎo)，進(jìn)而影響胃癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。4.2miR-139-3p對胃癌細(xì)胞增殖和凋亡影響的機(jī)制探討本研究通過MTT法和流式細(xì)胞術(shù)等實(shí)驗(yàn)手段，明確了下調(diào)miR-139-3p的表達(dá)能夠抑制胃癌細(xì)胞的增殖并促進(jìn)其凋亡，這一結(jié)果表明miR-139-3p在胃癌細(xì)胞的增殖和凋亡調(diào)控中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。深入探究其作用機(jī)制，從分子生物學(xué)角度來看，miR-139-3p主要通過與靶基因mRNA的3’端非編碼區(qū)（3’-UTRs）結(jié)合，降解或抑制mRNA的翻譯，導(dǎo)致靶基因的轉(zhuǎn)錄后沉默，從而參與對胃癌細(xì)胞增殖和凋亡的調(diào)控。生物信息學(xué)預(yù)測和相關(guān)研究表明，miR-139-3p存在多個(gè)潛在的靶基因，這些靶基因參與了多種與細(xì)胞增殖和凋亡相關(guān)的信號通路。其中，PI3K/Akt信號通路是細(xì)胞內(nèi)重要的信號傳導(dǎo)途徑之一，在調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、存活和代謝等過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。有研究報(bào)道，miR-139-3p可能通過靶向PI3K/Akt信號通路上的關(guān)鍵分子，如PI3K的調(diào)節(jié)亞基p85α或Akt蛋白，抑制該信號通路的激活。當(dāng)miR-139-3p表達(dá)下調(diào)時(shí)，其對靶分子的抑制作用減弱，PI3K/Akt信號通路被激活，進(jìn)而促進(jìn)下游與細(xì)胞增殖相關(guān)基因的表達(dá)，如CyclinD1、c-Myc等，同時(shí)抑制與細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的表達(dá)，如Bax、Caspase-3等，最終導(dǎo)致胃癌細(xì)胞的增殖能力增強(qiáng)，凋亡受到抑制。在其他腫瘤研究中也發(fā)現(xiàn)類似的現(xiàn)象，例如在乳腺癌細(xì)胞中，miR-139-3p可通過抑制PI3K/Akt信號通路，降低細(xì)胞的增殖活性并誘導(dǎo)凋亡。MAPK信號通路也是細(xì)胞增殖和凋亡調(diào)控的重要信號通路之一。該通路主要包括ERK、JNK和p38MAPK三條主要的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，它們在細(xì)胞受到外界刺激時(shí)被激活，進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞的多種生物學(xué)行為。miR-139-3p可能通過靶向調(diào)控MAPK信號通路上的相關(guān)分子，影響該信號通路的傳導(dǎo)，從而調(diào)控胃癌細(xì)胞的增殖和凋亡。研究表明，miR-139-3p可能作用于Raf-1、MEK等分子，抑制MAPK信號通路的激活。當(dāng)miR-139-3p表達(dá)下調(diào)時(shí)，Raf-1、MEK等分子的表達(dá)增加，導(dǎo)致MAPK信號通路過度激活，促進(jìn)細(xì)胞增殖相關(guān)基因的表達(dá)，同時(shí)抑制細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的表達(dá)，使得胃癌細(xì)胞的增殖能力增強(qiáng)，凋亡減少。在肺癌細(xì)胞中，有研究發(fā)現(xiàn)miR-139-3p能夠通過調(diào)控MAPK信號通路，影響腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲能力。此外，miR-139-3p還可能通過調(diào)控其他與細(xì)胞增殖和凋亡密切相關(guān)的基因來發(fā)揮作用。例如，一些研究報(bào)道m(xù)iR-139-3p可靶向調(diào)控某些轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，如E2F1、c-Jun等。E2F1是細(xì)胞周期調(diào)控的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，參與細(xì)胞周期從G1期到S期的轉(zhuǎn)換，其表達(dá)異常與腫瘤細(xì)胞的增殖密切相關(guān)。miR-139-3p可能通過與E2F1mRNA的3’-UTR結(jié)合，抑制E2F1的表達(dá)，從而阻止細(xì)胞周期的進(jìn)程，抑制胃癌細(xì)胞的增殖。c-Jun是AP-1轉(zhuǎn)錄因子家族的重要成員，參與細(xì)胞增殖、分化和凋亡等多種生物學(xué)過程。miR-139-3p可能通過抑制c-Jun的表達(dá)，影響其下游與細(xì)胞增殖和凋亡相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而調(diào)控胃癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。4.3研究結(jié)果的臨床應(yīng)用前景本研究結(jié)果在胃癌的臨床診療領(lǐng)域展現(xiàn)出廣闊的應(yīng)用前景。在早期診斷方面，由于miR-139-3p在胃癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，且與腫瘤大小和部位存在顯著相關(guān)性，因此可作為潛在的生物標(biāo)志物用于胃癌的早期篩查。目前，胃癌的早期診斷主要依賴于胃鏡檢查和病理活檢，這些方法存在一定的局限性，如胃鏡檢查為侵入性操作，患者依從性較差，且對于一些早期微小病變可能存在漏診。而檢測血清或組織中的miR-139-3p表達(dá)水平，具有操作簡便、創(chuàng)傷小、可重復(fù)性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，有望成為一種新型的無創(chuàng)或微創(chuàng)早期診斷方法。通過對大量人群進(jìn)行血清miR-139-3p檢測，結(jié)合其他臨床指標(biāo)和危險(xiǎn)因素，可提高胃癌的早期診斷率，為患者爭取更多的治療時(shí)間，改善患者的預(yù)后。在靶向治療方面，本研究明確了下調(diào)miR-139-3p的表達(dá)能夠抑制胃癌細(xì)胞的增殖并促進(jìn)其凋亡，這為胃癌的靶向治療提供了新的靶點(diǎn)和思路。傳統(tǒng)的胃癌治療方法主要包括手術(shù)、化療和放療，但這些方法存在副作用大、易產(chǎn)生耐藥性等問題。以miR-139-3p為靶點(diǎn)，開發(fā)特異性的miR-139-3p抑制劑或拮抗劑，通過抑制miR-139-3p的活性，阻斷其對下游靶基因的調(diào)控作用，從而抑制胃癌細(xì)胞的生長和增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，有望成為一種新型的靶向治療策略。與傳統(tǒng)治療方法相比，這種靶向治療具有特異性強(qiáng)、副作用小等優(yōu)勢，能夠更精準(zhǔn)地作用于腫瘤細(xì)胞，減少對正常組織的損傷。目前，針對miR的靶向治療藥物研發(fā)已成為腫瘤治療領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，已有部分miR靶向藥物進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段。未來，隨著研究的深入和技術(shù)的發(fā)展，以miR-139-3p為靶點(diǎn)的胃癌靶向治療藥物有望應(yīng)用于臨床，為胃癌患者帶來新的治療選擇。在預(yù)后評估方面，miR-139-3p的表達(dá)水平與胃癌的某些臨床病理特征相關(guān)，提示其可能作為評估胃癌患者預(yù)后的指標(biāo)。準(zhǔn)確評估胃癌患者的預(yù)后，對于制定個(gè)性化的治療方案和預(yù)測患者的生存情況具有重要意義。目前，臨床上常用的預(yù)后評估指標(biāo)主要包括腫瘤的TNM分期、病理類型、分化程度等，但這些指標(biāo)存在一定的局限性，不能完全準(zhǔn)確地預(yù)測患者的預(yù)后。miR-139-3p作為一種新的分子標(biāo)志物，與傳統(tǒng)預(yù)后指標(biāo)相結(jié)合，可更全面、準(zhǔn)確地評估胃癌患者的預(yù)后。例如，對于miR-139-3p高表達(dá)且腫瘤分期較晚的患者，提示其預(yù)后可能較差，需要加強(qiáng)術(shù)后的隨訪和綜合治療；而對于miR-139-3p低表達(dá)且腫瘤分期較早的患者，預(yù)后可能相對較好，可適當(dāng)調(diào)整治療方案。通過對miR-139-3p等分子標(biāo)志物的檢測和分析，有助于臨床醫(yī)生更準(zhǔn)確地判斷患者的預(yù)后，為患者提供更合理的治療建議和隨訪計(jì)劃。4.4研究的局限性與展望盡管本研究在miR-139-3p對胃癌的影響方面取得了一定成果，但仍存在一些局限性。首先，在樣本量方面，本研究僅收集了38例胃癌患者的組織標(biāo)本，樣本數(shù)量相對較少，可能導(dǎo)致研究結(jié)果存在一定的偏差，無法全面準(zhǔn)確地反映miR-139-3p在胃癌中的表達(dá)情況及其與臨床病理特征的相關(guān)性。未來的研究可以進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，納入更多不同地區(qū)、不同種族的胃癌患者，以增強(qiáng)研究結(jié)果的普遍性和可靠性。其次，本研究在研究深度上存在一定不足。雖然通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)初步揭示了miR-139-3p對胃癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響及其可能的作用機(jī)制，但對于miR-139-3p的具體靶基因及其調(diào)控網(wǎng)絡(luò)尚未進(jìn)行深入研究。在后續(xù)研究中，可運(yùn)用生物信息學(xué)分析、熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)、蛋白質(zhì)印跡法（Westernblot）等多種技術(shù)手段，進(jìn)一步驗(yàn)證和篩選miR-139-3p的靶基因，深入探討其在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的調(diào)控機(jī)制。此外，本研究僅在細(xì)胞水平進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)，未在動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行驗(yàn)證。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蚋鎸?shí)地模擬腫瘤在體內(nèi)的發(fā)生發(fā)展過程，未來可構(gòu)建胃癌動(dòng)物模型，進(jìn)一步研究miR-139-3p在體內(nèi)對胃癌生長、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為的影響，為臨床應(yīng)用提供更有力的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。展望未來，隨著對miR-139-3p研究的不斷深入，有望開發(fā)出基于miR-139-3p的新型診斷試劑和治療藥物。例如，研發(fā)高靈敏度、高特異性的miR-139-3p檢測試劑盒，用于胃癌的早期篩查和診斷；設(shè)計(jì)并合成針對miR-139-3p的小分子抑制劑或反義寡核苷酸，通過靶向抑制miR-139-3p的表達(dá)，實(shí)現(xiàn)對胃癌的精準(zhǔn)治療。同時(shí)，結(jié)合基因編輯技術(shù)，如CRISPR/Cas9系統(tǒng)，對miR-139-3p及其靶基因進(jìn)行精確調(diào)控，為胃癌的治療提供新的策略和方法。此外，將miR-139-3p與其他腫瘤標(biāo)志物或治療手段相結(jié)合，開展聯(lián)合診斷和治療研究，有望進(jìn)一步提高胃癌的診斷準(zhǔn)確性和治療效果。相信在未來，miR-139-3p在胃癌的臨床診療中將會發(fā)揮越來越重要的作用，為胃癌患者帶來更多的希望。五、結(jié)論5.1研究成果總結(jié)本研究圍繞miR-139-3p在胃癌中的作用展開了深入探究，取得了一系列具有重要意義的研究成果。在表達(dá)情況方面，通過qRT-PCR技術(shù)精確檢測38例胃癌患者的胃癌組織及癌旁正常組織，明確了miR-139-3p在胃癌組織中的表達(dá)水平顯著高于癌旁正常組織，差異具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。這一結(jié)果揭示了miR-139-3p在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中表達(dá)的異常變化，為后續(xù)研究其作用機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。在與臨床病理特征的相關(guān)性上，分析發(fā)現(xiàn)miR-139-3p的表達(dá)增高與腫瘤大小和部位存在顯著相關(guān)性（均P<0.05）。具體而言，腫瘤直徑≥5cm時(shí)miR-139-3p表達(dá)高于腫瘤直徑<5cm時(shí)；位于胃竇部的腫瘤組織中miR-139-3p的表達(dá)明顯高于胃體部和賁門部。這表明miR-139-3p的表達(dá)變化與胃癌的某些臨床特征密切相關(guān)，可能在不同大小和部位的腫瘤發(fā)生發(fā)展中扮演不同角色。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方面，成功運(yùn)用miR-139-3p抑制劑轉(zhuǎn)染人胃癌細(xì)胞株AGS和SGC-7901，構(gòu)建了低表達(dá)miR-139-3p的胃癌細(xì)胞模型。MTT法檢測結(jié)果顯示，下調(diào)miR-139-3p的表達(dá)能夠顯著抑制AGS和SGC-7901胃癌細(xì)胞株的增殖，在48h和72h時(shí)，miR-139-3p抑制劑組的OD值顯著低于空白對照組和陰性對照組（P<0.05）。流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果表明，下調(diào)miR-139-3p的表達(dá)能夠顯著促進(jìn)AGS和SGC-7901胃癌細(xì)胞株的凋亡，miR-139-3p