ICS65.020

CCSB00

DB51

四川省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB51/T2966—2022

瀕危野生植物及其制品物種鑒定規(guī)范

Specificationforspeciesidentificationofendangeredwildplantandtheir

prudocts

2022-12-27發(fā)布2023-02-01實(shí)施

四川省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB51/T2966—2022

目次

前言..........................................................................III

1范圍................................................................................1

2規(guī)范性引用文件......................................................................1

3術(shù)語(yǔ)和定義..........................................................................1

4縮略語(yǔ)..............................................................................2

5物種鑒定指標(biāo)........................................................................2

宏觀形態(tài)學(xué)指標(biāo)..................................................................2

微觀形態(tài)學(xué)指標(biāo)..................................................................2

生物化學(xué)指標(biāo)....................................................................2

分子生物學(xué)指標(biāo)..................................................................2

6物種鑒定原則........................................................................2

7儀器和試劑要求......................................................................2

儀器............................................................................2

實(shí)驗(yàn)室耗材和試劑................................................................3

8實(shí)驗(yàn)室區(qū)域設(shè)置......................................................................3

實(shí)驗(yàn)室基本要求..................................................................3

實(shí)驗(yàn)室區(qū)域設(shè)置原則..............................................................3

9人員要求及管理......................................................................3

10樣品鑒定...........................................................................4

樣品受理.......................................................................4

檢驗(yàn)鑒定原則...................................................................4

檢驗(yàn)鑒定.......................................................................4

結(jié)果分析.......................................................................5

復(fù)檢...........................................................................5

鑒定的復(fù)核.....................................................................5

鑒定質(zhì)量控制...................................................................5

鑒定報(bào)告起草...................................................................5

鑒定報(bào)告的審核、簽發(fā)...........................................................5

11檢驗(yàn)方法的認(rèn)可.....................................................................5

認(rèn)可的或有效驗(yàn)證的標(biāo)準(zhǔn).........................................................5

新方法的使用...................................................................6

標(biāo)準(zhǔn)方法確認(rèn)...................................................................6

非標(biāo)方法確認(rèn)...................................................................6

12檔案資料...........................................................................6

檢驗(yàn)檔案.......................................................................6

操作手冊(cè).......................................................................6

說明書類.......................................................................6

I

DB51/T2966—2022

方法認(rèn)可記錄...................................................................7

管理檔案.......................................................................7

其他資料.......................................................................7

電子化管理.....................................................................7

保密...........................................................................7

13生物安全預(yù)防與處理.................................................................7

檢測(cè)樣品.......................................................................7

檢驗(yàn)人員.......................................................................7

檢驗(yàn)區(qū)域.......................................................................7

14檔案資料...........................................................................8

14.1急救裝置...................................................................8

化學(xué)藥品.......................................................................8

儀器操作.......................................................................8

14.4檢驗(yàn)人員...................................................................8

樣品處置.......................................................................8

15國(guó)際國(guó)內(nèi)合作與援助.................................................................8

16持續(xù)能力提升.......................................................................8

附錄A(資料性附錄)PCR基本資料................................................10

附錄B（資料性附錄)CITES公約目錄植物部分....................................12

II

DB51/T2966—2022

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由中華人民共和國(guó)成都海關(guān)提出、歸口并解釋。

本文件起草單位：成都海關(guān)技術(shù)中心、四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物研究所、成都大學(xué)、中華人民共和國(guó)

成都海關(guān)、中國(guó)海關(guān)科學(xué)技術(shù)研究中心。

本文件主要起草人：張婧、邵寶林、安微、萬洪深、肖艷、林華、蒲靜、楊苗、鄭晶、劉露希、高

志強(qiáng)、楊益芬、謝禮、杜思樂、陳世界、嚴(yán)玉寶。

本文件為首次發(fā)布。

III

DB51/T2966—2022

瀕危野生植物及其制品物種鑒定規(guī)范

1范圍

本文件規(guī)定了定瀕危野生植物及其制品物種鑒定時(shí)物種鑒定的一般原則、物種鑒定指標(biāo)、實(shí)驗(yàn)室區(qū)

域設(shè)置、崗位設(shè)置、人員資質(zhì)要求與管理、檢驗(yàn)鑒定程序、檢驗(yàn)方法的認(rèn)可、污染預(yù)防與處理、安全防

護(hù)、際國(guó)內(nèi)合作與援助、持續(xù)能力提升等內(nèi)容。

本文件適用于瀕危野生植物及其制品物種的鑒定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB15569農(nóng)業(yè)植物調(diào)運(yùn)檢疫規(guī)程

GB19489實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求

GB/T19495.3轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)核酸提取純化方法

GB/T27025檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力的通用要求

GB/T27403實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品分子生物學(xué)檢測(cè)

GA/T382法庭科學(xué)DNA實(shí)驗(yàn)室規(guī)范

LY/T2501野生動(dòng)物及其產(chǎn)品的物種鑒定規(guī)范

SN/T1193基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)要求

SN/T3689植物檢疫性有害生物實(shí)驗(yàn)室生物安全操作規(guī)范

SN/T4626DNA條形碼物種鑒定操作規(guī)程

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

瀕危野生植物endangeredwildplant

指瀕危野生動(dòng)植物種國(guó)際貿(mào)易公約cites目錄及國(guó)家保護(hù)植物目錄里的植物。

瀕危野生植物制品endangeredwildplantproducts

前款所指瀕危野生植物的任何部分及其衍生物。

物種鑒定speciesIdentification

采用形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)等檢驗(yàn)技術(shù)，對(duì)瀕危野生植物及其產(chǎn)品進(jìn)行生物學(xué)分類（科、

屬、種）的認(rèn)定。

檢測(cè)樣品checksamples

1

DB51/T2966—2022

委托單位（人）提供的、用作物種鑒定的瀕危野生植物及其產(chǎn)品。

對(duì)照control

用一組或一類已知樣品用于瀕危野生植物及其產(chǎn)品鑒定的有效性和準(zhǔn)確性的監(jiān)測(cè)。

4縮略語(yǔ)

BOLD：生命條形碼數(shù)據(jù)系統(tǒng)(TheBarcodeofLifeDataSystem)

NCBI：美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心(NationalCenterforBiotechnologyInformation)

CITES：瀕危野生動(dòng)植物種國(guó)際貿(mào)易公約（theConventiononInternationalTradeinEndangered

SpeciesofWildFaunaandFlora）

5物種鑒定指標(biāo)

宏觀形態(tài)學(xué)指標(biāo)

以物種典型或特異的形態(tài)特征作為鑒定指標(biāo)（參見中國(guó)植物志)。

微觀形態(tài)學(xué)指標(biāo)

根據(jù)種子、花、等組織的典型或特異性的微觀形態(tài)學(xué)指標(biāo)。

生物化學(xué)指標(biāo)

以物種典型或特異的生化特征、在陰性和陽(yáng)性嚴(yán)格對(duì)照下作為鑒定指標(biāo)。

分子生物學(xué)指標(biāo)

以物種典型或特異的生化特征、在陰性和陽(yáng)性嚴(yán)格對(duì)照下作為鑒定指標(biāo)。

6物種鑒定原則

根據(jù)具體案（事)件縮小目標(biāo)物種的范圍、確定適用的檢驗(yàn)鑒定方法。

形態(tài)特征完整、物種特征鮮明的檢測(cè)樣品，采用宏觀形態(tài)學(xué)方法進(jìn)行檢驗(yàn)鑒定。

具有物種特異性的微觀結(jié)構(gòu)特征的檢測(cè)樣品，采用微觀形態(tài)學(xué)方法進(jìn)行檢驗(yàn)。

具有物種特異性生化成分的檢測(cè)樣品，可采用生物化學(xué)方法進(jìn)行檢驗(yàn)鑒定。

采用宏觀形態(tài)學(xué)方法無法進(jìn)行物種鑒定（但能夠提取DNA的檢測(cè)樣品）可采用生化和分子生物學(xué)

方法進(jìn)行檢驗(yàn)鑒定。

宏觀形態(tài)學(xué)方法中具有物種唯一性的特征指標(biāo)可以單獨(dú)使用，如指標(biāo)特征不具有物種唯一性，則

應(yīng)聯(lián)合使用2個(gè)以上指標(biāo)做出鑒定結(jié)論。

當(dāng)單獨(dú)使用一種分子生物學(xué)方法不能可靠地確認(rèn)來源物種，則應(yīng)使用兩種以上方法進(jìn)行聯(lián)合印證。

7儀器和試劑要求

儀器

7.1.1實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配置與其所應(yīng)用的檢驗(yàn)方法所必需的儀器設(shè)備，且應(yīng)是具有資質(zhì)的實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備廠家

2

DB51/T2966—2022

生產(chǎn)的合格產(chǎn)品。

7.1.2檢驗(yàn)方法所必需的關(guān)鍵(核心)設(shè)備所產(chǎn)生的數(shù)據(jù)或結(jié)果應(yīng)能夠被同行認(rèn)可。

7.1.3儀器設(shè)備應(yīng)定期進(jìn)行檢查、保養(yǎng)和校正。

7.1.4新購(gòu)置的儀器設(shè)備、或原有儀器設(shè)備維修保養(yǎng)后，在使用前應(yīng)當(dāng)校準(zhǔn)或測(cè)試。

實(shí)驗(yàn)室耗材和試劑

7.2.1實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配置與其所應(yīng)用的檢驗(yàn)方法所必需的實(shí)驗(yàn)耗材和試劑，且應(yīng)是具有資質(zhì)的廠家生產(chǎn)的

合格產(chǎn)品。

7.2.2所有實(shí)驗(yàn)耗材和試劑應(yīng)處于保質(zhì)期或有效期內(nèi)。

7.2.3商品試劑盒應(yīng)標(biāo)明到貨日期和有效期。實(shí)驗(yàn)室自行配制的試劑應(yīng)在容器上標(biāo)明名稱、濃度、配

制時(shí)間、配制人、保存條件、失效日期等相關(guān)內(nèi)容。

7.2.4每一批次購(gòu)進(jìn)的耗材和試劑應(yīng)進(jìn)行符合性驗(yàn)證等質(zhì)控檢驗(yàn)。

8實(shí)驗(yàn)室區(qū)域設(shè)置

實(shí)驗(yàn)室基本要求

8.1.1實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)立完善的組織機(jī)構(gòu)、質(zhì)量保障和管理體系。

8.1.2實(shí)驗(yàn)室的各功能分區(qū)應(yīng)布局合理，通風(fēng)良好、光線適度、設(shè)備完善，達(dá)到檢驗(yàn)鑒定的要求。

8.1.3配備生物安全設(shè)施，確保環(huán)境不受瀕危野生植物攜帶病原的污染。

實(shí)驗(yàn)室區(qū)域設(shè)置原則

8.2.1實(shí)驗(yàn)室區(qū)域設(shè)置的一般原則

區(qū)域設(shè)置應(yīng)符合實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)過程中檢測(cè)樣品和試劑受到污染，保障結(jié)果的可靠性。

8.2.2基本區(qū)域設(shè)置

8.2.2.1宏觀形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)、微觀形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)、生物化學(xué)檢驗(yàn)和分子生物學(xué)檢驗(yàn)應(yīng)分別設(shè)置檢驗(yàn)區(qū)域。

8.2.2.2微觀形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)室和生物化學(xué)檢驗(yàn)室應(yīng)分別設(shè)置樣品制備和檢驗(yàn)兩個(gè)基本區(qū)域。

8.2.2.3分子生物學(xué)的DNA檢驗(yàn)室應(yīng)設(shè)置樣品前處理、核酸提取、試劑配置、PCR擴(kuò)增加樣、PCR擴(kuò)

增、產(chǎn)物分析七個(gè)基本區(qū)域。

8.2.3其他區(qū)域設(shè)置

8.2.3.1檢測(cè)樣品貯存室：主要用于送檢測(cè)樣品料的妥善保管和貯存。

8.2.3.2初檢室：主要用于案件的登記、檢測(cè)樣品的初檢和照相、錄相、固定等。

8.2.3.3試劑貯存和配制室：主要用于試劑的貯存、配制、消耗品的消毒等。

8.2.3.4數(shù)據(jù)分析室：主要用于檢驗(yàn)結(jié)果的分析、比對(duì)、鑒定報(bào)告的形成等。

8.2.3.5檔案室：主要用于案件資料、實(shí)驗(yàn)操作相關(guān)資料的存檔保存等。

9人員要求及管理

工作人員包實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人、技術(shù)負(fù)責(zé)人、質(zhì)量負(fù)責(zé)人、鑒定人和鑒定助理等應(yīng)遵守國(guó)家有關(guān)法律

法規(guī)，誠(chéng)實(shí)守信，有良好的職業(yè)道德操守，嚴(yán)格遵守行業(yè)主管部門相關(guān)規(guī)定和要求，嚴(yán)格保守秘密。

3

DB51/T2966—2022

技術(shù)負(fù)責(zé)人應(yīng)具備博士學(xué)位或中級(jí)以上專業(yè)技術(shù)職稱，相關(guān)專業(yè)，五年以上相關(guān)工作經(jīng)驗(yàn)，具備

生物學(xué)、分子生物學(xué)與生物化學(xué)相關(guān)專業(yè)背景和熟練操作技能，了解瀕危動(dòng)物物證鑒定領(lǐng)域的前沿技術(shù)。

鑒定人應(yīng)具備生物學(xué)、分子生物學(xué)與生物化學(xué)相關(guān)專業(yè)背景，在相關(guān)實(shí)驗(yàn)室工作一年以上，并通

過考核后上崗。

鑒定助理應(yīng)具備相關(guān)專業(yè)背景，具有6個(gè)月以上相關(guān)技術(shù)培訓(xùn)的經(jīng)歷。

必要時(shí)，技術(shù)負(fù)責(zé)人和鑒定人按照有關(guān)要求有配合相關(guān)部門履行結(jié)果解釋和出庭義務(wù)。

10樣品鑒定

樣品受理

10.1.1鑒定受理應(yīng)由專門人員負(fù)責(zé)，受理人應(yīng)驗(yàn)明委托單位的有效證明材料。

10.1.2送檢人應(yīng)填寫送檢登記表，詳細(xì)填寫送檢單位、送檢人姓名、送檢日期、檢測(cè)樣品類型、數(shù)量

及特征、鑒定要求等基本情況，并進(jìn)行檢測(cè)樣品的交接、拍照或錄像存檔。

10.1.3檢測(cè)樣品應(yīng)提取實(shí)物樣品以備復(fù)核檢驗(yàn)，并告知。

10.1.4檢驗(yàn)鑒定如需對(duì)檢測(cè)樣品進(jìn)行破壞性取樣而嚴(yán)重改變其原有價(jià)值的，應(yīng)征得委托單位同意。

10.1.5無法鑒定的，經(jīng)技術(shù)主管同意后方可退回委托單位。

10.1.6檢測(cè)樣品進(jìn)人實(shí)驗(yàn)室后應(yīng)貼上標(biāo)簽并填寫檢測(cè)樣品處理表，由專人管理；待檢、在檢和巳檢的

檢測(cè)樣品應(yīng)分別存放；轉(zhuǎn)移檢測(cè)樣品或使用時(shí)經(jīng)手人應(yīng)簽名。

檢驗(yàn)鑒定原則

本著由簡(jiǎn)單到復(fù)雜、由無損到有損的原則，確定檢驗(yàn)鑒定方法。

檢驗(yàn)鑒定

10.3.1宏觀形態(tài)學(xué)方法

根據(jù)檢測(cè)樣品的形態(tài)特征，進(jìn)行判別。

10.3.2微觀形態(tài)學(xué)方法

根據(jù)檢測(cè)樣品類別，選擇適當(dāng)?shù)臋z驗(yàn)方法，并確定樣品制備方法。顯微圖片應(yīng)標(biāo)注放大倍數(shù)。

10.3.3生物化學(xué)方法

根據(jù)檢測(cè)樣品類別，選擇適當(dāng)?shù)臋z驗(yàn)方法，確定樣品制備方法，檢驗(yàn)時(shí)應(yīng)設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)樣品對(duì)照。實(shí)驗(yàn)

應(yīng)重復(fù)1次以上。

10.3.4分子生物學(xué)方法（見附錄A）

10.3.4.1DNA提取

根據(jù)鑒定目標(biāo)選擇的檢驗(yàn)方案確定DNA提取的方法，應(yīng)設(shè)置空白對(duì)照并嚴(yán)格防止樣品相互污染。需

要純化的DNA，可選擇高質(zhì)量純化試劑盒或其他純化方法。對(duì)于DNA提取區(qū),檢測(cè)樣品和比對(duì)樣本的DNA提

取應(yīng)在時(shí)間或空間進(jìn)行分離；涉及微量腐敗檢測(cè)樣品檢驗(yàn)的DNA實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)另設(shè)專門區(qū)域進(jìn)行DNA提取，

應(yīng)減少潛在的對(duì)樣本的污染。

10.3.4.2PCR擴(kuò)增

嚴(yán)格設(shè)置陽(yáng)性（巳知的DNA樣品）和陰性（不加DNA的空白）對(duì)照。

4

DB51/T2966—2022

10.3.4.3擴(kuò)增產(chǎn)物的純化

采用純化試劑盒或其他同行公認(rèn)的純化方法。

10.3.4.4基因測(cè)序

PCR擴(kuò)增產(chǎn)物應(yīng)雙向測(cè)序，采用克隆測(cè)序時(shí)每個(gè)PCR產(chǎn)物應(yīng)測(cè)定5個(gè)以上。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)純化后可直接

用于序列測(cè)定。PCR產(chǎn)物純化和測(cè)序可分包給已獲認(rèn)可的權(quán)威專業(yè)技術(shù)機(jī)構(gòu)來進(jìn)行。將平行樣本分別送

2家測(cè)序機(jī)構(gòu)進(jìn)行比對(duì)測(cè)序。

10.3.5檢測(cè)樣品的后處理

10.3.5.1檢驗(yàn)鑒定結(jié)束后，除留存?zhèn)浞輼悠芬酝?，剩余的檢測(cè)樣品返還委托單位。

10.3.5.2變質(zhì)和超過保留時(shí)限的檢測(cè)樣品應(yīng)及時(shí)告知委托單位。攜帶疫病的檢測(cè)樣品應(yīng)進(jìn)行無害化

處理。

結(jié)果分析

檢驗(yàn)后，對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析，能夠明確給出認(rèn)定或否定結(jié)論的，形成鑒定意見。

復(fù)檢

檢驗(yàn)應(yīng)保證兩次重復(fù)檢驗(yàn)。

鑒定的復(fù)核

對(duì)鑒定結(jié)果不明確或其他特殊需要，按有關(guān)程序經(jīng)同意可送相關(guān)權(quán)威機(jī)構(gòu)進(jìn)行復(fù)核鑒定。

鑒定質(zhì)量控制

10.7.1對(duì)鑒定過程中出現(xiàn)結(jié)果明顯偏離和錯(cuò)誤，鑒定人應(yīng)立即報(bào)告技術(shù)負(fù)責(zé)人，并停止鑒定工作。技

術(shù)負(fù)責(zé)人應(yīng)與鑒定人一起對(duì)影響鑒定的各個(gè)環(huán)節(jié)（包括樣品、儀器、試劑、分析方法、實(shí)驗(yàn)環(huán)境和污染

等）逐一排查，確定問題來源，并整改。整改應(yīng)有記錄，并存檔。

10.7.2對(duì)影響鑒定結(jié)果的關(guān)鍵設(shè)備和試劑，實(shí)驗(yàn)室除定期進(jìn)行校準(zhǔn)、驗(yàn)證和維護(hù)外，還應(yīng)進(jìn)行期間核

查。期間核查應(yīng)有計(jì)劃，并記錄存檔。

10.7.3實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定計(jì)劃組織內(nèi)部評(píng)審、質(zhì)量評(píng)審、管理評(píng)審、參加能力驗(yàn)證和實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)等，以

確保對(duì)鑒定質(zhì)量的有效控制。評(píng)審過程和評(píng)審發(fā)現(xiàn)的問題應(yīng)形成評(píng)審報(bào)告，并存檔。

鑒定報(bào)告起草

形成明確鑒定結(jié)論的，起草鑒定報(bào)告。報(bào)告應(yīng)有一定的格式（可參照有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)）。鑒定人對(duì)鑒定結(jié)

果負(fù)責(zé)，須在鑒定報(bào)告書上簽名。

鑒定報(bào)告的審核、簽發(fā)

技術(shù)負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)鑒定報(bào)告內(nèi)容的審核，實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)鑒定報(bào)告的簽發(fā)。最后，鑒定報(bào)告加蓋公

章后生效。

11檢驗(yàn)方法的認(rèn)可

認(rèn)可的或有效驗(yàn)證的標(biāo)準(zhǔn)

5

DB51/T2966—2022

11.1.1有選定的標(biāo)準(zhǔn)樣品。

11.1.2靈敏度檢驗(yàn)：確定能可靠鑒定所需的最小樣本量。

11.1.3物種群體遺傳學(xué)調(diào)查適用性。

11.1.4具有特異性、適用性、穩(wěn)定性或通用性。

11.1.5PCR及相關(guān)檢驗(yàn)方法的認(rèn)可見GA/T382。

新方法的使用

在現(xiàn)有方法無法解決的情況下，需采用新方法進(jìn)行檢驗(yàn)鑒定時(shí)，應(yīng)由同行專家組成的專家組認(rèn)可。

標(biāo)準(zhǔn)方法確認(rèn)

11.3.1根據(jù)檢測(cè)樣品的需要和實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際情況優(yōu)先選擇使用標(biāo)準(zhǔn)方法。

11.3.2實(shí)驗(yàn)室在采用標(biāo)準(zhǔn)方法之前，應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室能否正確執(zhí)行該標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行確認(rèn)。具體確認(rèn)要求按

GB/T27025執(zhí)行。

11.3.3如實(shí)驗(yàn)室采用的標(biāo)準(zhǔn)方法發(fā)生了改變，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)重新進(jìn)行確認(rèn)。

非標(biāo)方法確認(rèn)

非標(biāo)方法包括各部委下發(fā)的技術(shù)文件、其他實(shí)驗(yàn)室采用、權(quán)威刊物發(fā)表和實(shí)驗(yàn)室自行研制的尚未形

成標(biāo)準(zhǔn)的鑒定方法。非標(biāo)方法應(yīng)符合GB/T17401要求。

實(shí)驗(yàn)室在沒有標(biāo)準(zhǔn)方法或現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)方法無法完成鑒定的情況下可考慮采用非標(biāo)方法，但必須經(jīng)過

如下驗(yàn)證確認(rèn)。

其他實(shí)驗(yàn)室采用、權(quán)威刊物發(fā)表非標(biāo)方法須經(jīng)至少3家實(shí)驗(yàn)室聯(lián)合驗(yàn)證確認(rèn)。

實(shí)驗(yàn)室自行研制的鑒定方法須經(jīng)同行專家組成的專家組審核，并經(jīng)至少3家實(shí)驗(yàn)室聯(lián)合驗(yàn)證確認(rèn)。

12檔案資料

檢驗(yàn)檔案

12.1.1登記資料：包括受理記錄、送檢單位的委托證明材料、檢測(cè)樣品照片、檢測(cè)樣品保管或返回記

錄、檢驗(yàn)中交接記錄、鑒定文書的發(fā)放記錄等。

12.1.2檢驗(yàn)記錄資料：根據(jù)不同檢驗(yàn)方法所需要的不同資料，如形態(tài)學(xué)的各種量度、檢驗(yàn)記錄，生化

檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)記錄，分子生物學(xué)的DNA提取記錄、PCR反應(yīng)記錄、電泳檢驗(yàn)記錄、測(cè)序結(jié)果、數(shù)據(jù)處理

等。

12.1.3圖譜圖片：包括掃描電鏡照片、顯微鏡照片、儀器分析圖表、普通相機(jī)照片、自顯影圖、干燥

膠等。

12.1.4鑒定文件：包括鑒定意見書或檢驗(yàn)報(bào)告、檢驗(yàn)結(jié)果圖譜等。

操作手冊(cè)

12.2.1實(shí)驗(yàn)方法類：植物及其器官的制備方法及程序；掃描電鏡樣品的制備方法及程序；特殊成分的

生化檢驗(yàn)方法；各種DNA提取方法、DNA定量方法、檢驗(yàn)方法和各種物種鑒定方法及程序等。

12.2.2儀器操作類：各種儀器的操作使用方法、維護(hù)方法。

12.2.3試劑配制類：各種試劑的配制方法、貯存方法。

說明書類

重要儀器設(shè)備說明書、特殊試劑盒操作說明書、特殊試劑說明書等應(yīng)留檔備查。

6

DB51/T2966—2022

方法認(rèn)可記錄

檢驗(yàn)方法等的認(rèn)可程序、專家會(huì)議紀(jì)要、認(rèn)可過程記錄等。

管理檔案

實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制守則、實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)則、安全操作守則、人員培訓(xùn)記錄、實(shí)驗(yàn)室核查記錄、資格測(cè)

試記錄、實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行記錄（包括主要儀器設(shè)備的使用記錄、保修和維修記錄、突發(fā)事件處理記錄等)等。

其他資料

物種檢驗(yàn)鑒定工作流程圖、儀器設(shè)備清單、儲(chǔ)存試劑的清單等。

電子化管理

對(duì)檢驗(yàn)鑒定文書、備份樣品名錄等建立數(shù)據(jù)庫(kù)，進(jìn)行電子化管理。

保密

凡檢驗(yàn)鑒定文書應(yīng)在指定地點(diǎn)由專人負(fù)責(zé)保管，未經(jīng)主管領(lǐng)導(dǎo)書面同意不能復(fù)制、外借，更不可遺

失。主管領(lǐng)導(dǎo)簽發(fā)的復(fù)制和外借憑證應(yīng)與檢驗(yàn)鑒定文書一起存檔保存。

13生物安全預(yù)防與處理

檢測(cè)樣品

13.1.1取樣時(shí)，根據(jù)樣品特點(diǎn)，應(yīng)取深層組織、或清洗掉外層附著物，減少外源性污染。

13.1.2各樣品應(yīng)標(biāo)記清楚，防止各樣品間的混淆、以及與巳知樣品的污染。

檢驗(yàn)人員

13.2.1檢驗(yàn)人員應(yīng)嚴(yán)格按檢驗(yàn)規(guī)程操作。

13.2.2進(jìn)人實(shí)驗(yàn)室應(yīng)穿實(shí)驗(yàn)室工作服和工作鞋。

13.2.3檢驗(yàn)操作中應(yīng)戴一次性手套，一旦手套被污染應(yīng)馬上更換。

13.2.4根據(jù)檢驗(yàn)的需要應(yīng)戴實(shí)驗(yàn)室專用帽子、口罩和防護(hù)眼鏡。

檢驗(yàn)區(qū)域

13.3.1檢驗(yàn)開始前應(yīng)用75%乙醇將工作臺(tái)擦洗干凈，檢驗(yàn)結(jié)束后用10%次氯酸鈉再擦洗所有的工作臺(tái)

面。

13.3.2檢驗(yàn)室應(yīng)定期清潔并進(jìn)行紫外燈照射消毒。

13.3.3PCR區(qū)域應(yīng)使用專用清潔工具。

檢驗(yàn)器材

13.4.1各區(qū)域應(yīng)配置專用的移液器、試劑架等，不應(yīng)拿到其他區(qū)域使用。

13.4.2試管使用前應(yīng)高壓滅菌。

13.4.3可高壓滅菌的移液器等在使用前應(yīng)高壓滅菌；無法高壓滅菌的應(yīng)定期用75%乙醇和純水清洗，

使用前再用紫外燈照射。

檢驗(yàn)過程

7

DB51/T2966—2022

13.5.1開啟試管前應(yīng)瞬時(shí)離心。

13.5.2應(yīng)使用一次性移液吸頭。

13.5.3蛋白質(zhì)類生化試劑應(yīng)分裝成小包裝。

13.5.4分子生物學(xué)檢驗(yàn)應(yīng)設(shè)置陽(yáng)性和陰性對(duì)照。

14檔案資料

急救裝置

在實(shí)驗(yàn)室的固定位置應(yīng)設(shè)急救箱和緊急噴淋裝置，并有明確標(biāo)識(shí)，所有人員應(yīng)掌握使用方法。

化學(xué)藥品

14.2.1化學(xué)藥品應(yīng)標(biāo)記清楚，應(yīng)有專門存放程序和記錄。

14.2.2化學(xué)藥品的棄置應(yīng)按專門程序進(jìn)行，并備詳細(xì)記錄。

14.2.3特殊藥品使用前應(yīng)有專門培訓(xùn)。

儀器操作

14.3.1儀器操作說明中應(yīng)注明該儀器操作中發(fā)生事故或故障的可能性及原因，并注明預(yù)防和處理的

方法。

14.3.2應(yīng)按規(guī)定對(duì)儀器定期進(jìn)行檢查、保養(yǎng)。

檢驗(yàn)人員

14.4.1檢驗(yàn)人員必須認(rèn)真學(xué)習(xí)檢驗(yàn)規(guī)程和有關(guān)的安全技術(shù)規(guī)程。

14.4.2在使用前應(yīng)了解化學(xué)藥品的毒性，并清楚急救方法。

14.4.3在使用前應(yīng)了解設(shè)備性能及操作中可能發(fā)生事故的原因，掌握預(yù)防和處理事故的方法。

14.4.4接收樣品及處理各環(huán)節(jié)需要按照一級(jí)以上防護(hù)。

14.4.5檢驗(yàn)室內(nèi)禁止吸煙、進(jìn)食，嚴(yán)禁用試驗(yàn)器皿處理食物。

14.4.6離開檢驗(yàn)室前用清潔用品洗手。

樣品處置

14.5.1樣品接收后再紫外照射30min以上再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室間傳遞。

14.5.2植物疫病處理來自野生瀕危植物檢測(cè)樣品時(shí)，應(yīng)考慮到檢測(cè)樣品可能攜帶病原體，并注意防范

疫病的傳染、傳播。取樣可按照SN/T3689進(jìn)行植物檢疫性有害生物實(shí)驗(yàn)室生物安全操作規(guī)范

14.5.3廢棄物處置、電氣設(shè)備、放火、紫外光源和激光光源按照GB19489的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。

15國(guó)際國(guó)內(nèi)合作與援助

建立國(guó)內(nèi)外瀕危植物鑒定實(shí)驗(yàn)室間合作機(jī)制。

經(jīng)主管部門同意，允許在國(guó)內(nèi)和國(guó)際合作伙伴間共享數(shù)據(jù)，以便在必要時(shí)進(jìn)行解釋分析，協(xié)助國(guó)

際調(diào)查。

收集用于鑒定分析瀕危植物的技術(shù)文獻(xiàn)資料。

與技術(shù)先進(jìn)的研究機(jī)構(gòu)和犯罪調(diào)查專家合作開展能力建設(shè)和培訓(xùn)。

16持續(xù)能力提升

8

DB51/T2966—2022

對(duì)參與鑒定過程的鑒定工作人員進(jìn)行培訓(xùn)，以不斷提高鑒定人員的技術(shù)能力。

實(shí)驗(yàn)室每年至少一次參加由權(quán)威機(jī)構(gòu)組織的能力驗(yàn)證。

實(shí)驗(yàn)室制定計(jì)劃開展實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)。

A

A

9

DB51/T2966—2022

附錄A

(資料性)

PCR基本資料

A.1概述

對(duì)較短的DNA序列來進(jìn)行物種鑒定的一種分子生物學(xué)技術(shù)，是傳統(tǒng)形態(tài)鑒別方法的有效補(bǔ)充。由于

不同物種的DNA序列是由腺嘌呤(A)、鳥嘌呤(G)、胞嘧啶(C)、胸腺嘧啶(T)四種堿基以不同順序排列組

成，因此對(duì)某一特定DNA片段序列進(jìn)行分析即能夠區(qū)分不同物種。DNA條形碼分子鑒定通常是選用

ITS2/ITS為主體序列，以葉綠體為輔助序列。

A.2儀器的一般要求

所用儀器有電子天平、離心機(jī)、PCR儀、電泳儀和測(cè)序儀DNA序列測(cè)定用測(cè)序儀，是一臺(tái)具有自

動(dòng)灌膠、自動(dòng)進(jìn)樣、自動(dòng)數(shù)據(jù)收集分析等全自動(dòng)電腦控制的測(cè)定DNA片段中堿基順序或大小，以及定量

用精密儀器,測(cè)序方法主要采用雙脫氧鏈終止法，又稱Sanger法。4種雙脫氧核酸(ddNTP)的堿基分別用

不同的熒光進(jìn)行標(biāo)記，在通過毛細(xì)管時(shí)，不同長(zhǎng)度的DNA片段上的4種熒光基團(tuán)被激光激發(fā)，發(fā)出不同顏

色的熒光，被電荷耦合元件圖像傳感器檢測(cè)系統(tǒng)識(shí)別，并直接翻譯成?DNA序列，獲得供試品的峰圖文件

和序列文件。

A.3測(cè)定步驟

A.3.1檢測(cè)樣品處理

為防止外源微生物污染，檢測(cè)樣品使75%乙醇擦拭表面后晾干，或采取其他有效去除微生物污染的

方法。稱取10mg～l00mg備用。

A.3.2核酸提取

提取核酸

A.3.3PCR擴(kuò)增

A.3.3.1引物序列

植物物種擴(kuò)增ITS2或psbA-trnH序列，通用引物及擴(kuò)增條件如下；

ITS2序列擴(kuò)增正向引物ITS2F：5′-ATGCGATACTTGGTGTGAAT-3′；反向引物ITS3R：5′-

GACGCTTCTCCAGACTACAAT-3′。

psbA-trnH序列擴(kuò)增正向引物psbAF：5′-GTTATGCATGAACGTAATGCTC-3′；反向引物trnHR：5′-

CGCGCATGGTGGATTCACAATCC-3′。

A.3.3.2反應(yīng)體系

PCR反應(yīng)體系以25μl為參照，包括：1×PCR緩沖液（不含MgCl2），2.0mmol/LMgCl2，0.2mmol/LdNTPs，

0.1μmol/L引物對(duì)，模板DNA，1.0UTaqDNA聚合酶，加滅菌雙蒸水至25μl。設(shè)置未加模板DNA的PCR反

應(yīng)為陰性對(duì)照。

A.3.3.3擴(kuò)增程序

10

DB51/T2966—2022

ITS2序列擴(kuò)增程序：94℃5分鐘；94℃30秒，56℃30秒，72℃45秒，35～40個(gè)循環(huán)；72℃10分鐘。

psbA-trnH序列擴(kuò)增程序：94℃5分鐘；94℃1分鐘，55℃1分鐘，72℃1.5分鐘，30個(gè)循環(huán)；72℃7

分鐘。

A.3.3.4PCR產(chǎn)物檢測(cè)

采取1%瓊脂糖，100V，電泳方法檢測(cè)PCR產(chǎn)物。電泳后，PCR產(chǎn)物應(yīng)在相應(yīng)的DNA條形碼序列長(zhǎng)度位

置出現(xiàn)一條目的條帶，陰性對(duì)照應(yīng)無條帶。

A.3.3.5測(cè)序

切取目的條帶所在位置的在紫外燈下迅速凝膠,采用瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒進(jìn)行純化。使用DNA

測(cè)序儀對(duì)目的條帶進(jìn)行雙向測(cè)序,PCR擴(kuò)增引物作為測(cè)序引物,測(cè)序原理同Sanger測(cè)序法。有目的條帶的

樣品在測(cè)序儀上進(jìn)行雙向測(cè)序。

A.3.3.6DNA條形碼序列獲得

序列拼接對(duì)雙向測(cè)序峰圖應(yīng)用有序列拼接功能的專業(yè)軟件進(jìn)行序列拼接,去除引物區(qū)；

序列質(zhì)量與方向?yàn)榇_保DNA條形碼序列的可靠性,需去除測(cè)序結(jié)果兩端信號(hào)弱或重疊峰區(qū)域,序列方

向應(yīng)與PCR擴(kuò)增正向引物方向一致,獲得相應(yīng)的DNA序列。

A.3.3.7結(jié)果判定

將獲得的序列與NCBI及BOLD中DNA條形碼標(biāo)準(zhǔn)序列比對(duì)。

11

DB51/T2966—2022

附錄B

（資料性)

CITES公約目錄植物部分

CITES公約目錄植物部分見表B.1。

表B.1CITES公約目錄植物部分

附錄Ⅰ附錄Ⅱ附錄Ⅲ

植物FLORA

龍舌蘭科AGAVACEAE

小花龍舌蘭(姬亂雪)Agaveparviflora皇后龍舌蘭Agavevictoriae-

reginae#4

間型酒瓶蘭Nolinainterrata

克雷塔羅絲蘭Yucca

queretaroensis

石蒜科AMARYLLIDACEAE

雪花蓮屬所有種

Galanthusspp.

黃花石蒜屬所有種

Sternbergiaspp.

漆樹科ANACARDIACEAE

德氏漆Operculicaryadecaryi

織冠漆Operculicarya

hyphaenoides

象腿漆Operculicarya

pachypus

夾竹桃科APOCYNACEAE

安博棒錘樹Pachypodiumambongense火地亞屬所有種

巴氏棒錘樹PachypodiumbaroniiHoodiaspp.

德氏棒錘樹Pachypodiumdecaryi棒錘樹屬所有種

Pachypodiumspp.(除被列入

附錄Ⅰ的物種)

★蛇根木(印度蘿芙木)Rauvolfia

serpentina

五加科ARALIACEAE

★人參Panaxginseng(僅俄羅

斯聯(lián)邦種群；其他種群都未被列

入附錄)

西洋參Panaxquinquefolius

南洋杉科ARAUCARIACEAE

12

DB51/T2966—2022

附錄Ⅰ附錄Ⅱ附錄Ⅲ

智利南洋杉Araucariaaraucana

天門冬科ASPARAGACEAE

酒瓶蘭屬所有種

Beaucarneaspp.

小蘗科BERBERIDACEAE

★桃兒七Podophyllumhexandrum

鳳梨科BROMELIACEAE

哈氏老人須Tillandsia

harrisii

卡氏老人須Tillandsia

kammii

旱生老人須Tillandsia

xerographica

仙人掌科CACTACEAE

巖牡丹屬所有種Ariocarpusspp.仙人掌科所有種CACTACEAE

星冠Astrophytumasteriasspp.9(除被列入附錄Ⅰ的物種和木

花籠Aztekiumritteri麒麟屬所有種Pereskiaspp.、

精美球Coryphanthawerdermannii麒麟掌屬所有種

孔雀花屬所有種Discocactusspp.Pereskiopsisspp.和頂花掌屬所

林氏鹿角掌Echinocereus有種Quiabentiaspp.)

ferreirianusssp.lindsayorum

珠毛柱Echinocereusschmollii

小極光球Escobariaminima

須彌山Escobariasneedii

白斜子Mammillariapectinifera(包括亞種

solisioides)

圓錐花座球Melocactusconoideus

晚刺花座球Melocactusdeinacanthus

蒼白花座球Melocactusglaucescens

疏刺花座球Melocactuspaucispinus

帝冠Obregoniadenegrii

金毛翁Pachycereusmilitaris

布氏月華玉Pediocactusbradyi

銀河玉Pediocactusknowltonii

雛鷺球Pediocactusparadinei

斑鳩球Pediocactuspeeblesianus

天狼Pediocactussileri

斧突球?qū)偎蟹NPelecyphoraspp.

布氏白虹山Sclerocactusblainei

13

DB51/T2966—2022

附錄Ⅰ附錄Ⅱ附錄Ⅲ

突氏玄武玉Sclerocactus

brevihamatusssp.tobuschii

短刺白虹山Sclerocactusbrevispinus

新墨西哥鯱玉Sclerocactuscloverae

白瑯玉Sclerocactuserectocentrus

蒼白玉Sclerocactusglaucus

藤榮球Sclerocactusmariposensis

月想曲Sclerocactusmesae-verdae

尼氏鯱玉Sclerocactusnyensis

月童Sclerocactuspapyracanthus

毛刺球Sclerocactuspubispinus

塞氏鯱玉Sclerocactussileri

猶他球Sclerocactuswetlandicus

懷氏虹山Sclerocactuswrightiae

鱗莖玉屬所有種Strombocactusspp.

姣麗球?qū)偎蟹NTurbinicarpusspp.

尤伯球?qū)偎蟹NUebelmanniaspp.

多柱樹科CARYOCARACEAE

多柱樹Caryocarcostaricense

菊科COMPOSITAE(Asteraceae)

云木香Saussureacostus

葫蘆科CUCURBITACEAE

柔毛沙葫蘆Zygosicyos

pubescens

沙葫蘆Zygosicyos

tripartitus

柏科CUPRESSACEAE

智利肖柏Fitzroyacupressoides姆蘭杰南非柏Widdringtonia

皮爾格柏Pilgerodendronuviferumwhytei

桫欏科CYATHEACEAE

★桫欏屬所有種Cyatheaspp.

蘇鐵科CYCADACEAE

印度蘇鐵Cycasbeddomei★蘇鐵科所有種CYCADACEAE

spp.(除被列入附錄Ⅰ的物種)

蚌殼蕨科DICKSONIACEAE

★金毛狗脊Cibotiumbarometz

蚌殼蕨屬所有種

Dicksoniaspp.(僅包括美洲

種群。其他種群未被列入附錄)