1本團體標準制定了一種同時測定26種細胞毒性藥物及鉑類藥物醫(yī)療機構物體表面污染的技術要求，進行了方法學驗證（方法學驗證過程參照《中國藥典》2020版第四部通則中的“9012生物樣品定量分析方法指導原則”），規(guī)范了檢測方法、運輸、貯存、保質期等內容。本團體標準包括的26種細胞毒性藥物及鉑類藥物：阿扎胞苷、氟尿嘧啶、阿柔比星、培美曲塞、苯達莫司汀、白消安、卡莫司汀、環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、柔紅霉素、地西他濱、多柔比星、表柔比星、依托泊苷、吉西他濱、伊達比星、異環(huán)磷酰胺、伊立替康、甲氨蝶呤、尼莫司汀、吡柔比星、替加氟、替尼泊苷、托泊替康、長春新堿、長春瑞濱及鉑類藥物。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件?！吨腥A人民共和國藥典》2020年版3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。細胞毒性藥物鉑類藥物含金屬鉑類的絡合物，其鉑原子具有抗腫瘤作用。目前上市的鉑類藥物有順鉑、卡鉑、奈達鉑、奧沙利鉑。4原理樣品提取后，采用高效液相色譜儀分離，質譜檢測器檢測。根據保留時間和特征離子對的相對豐度比定性、定量離子對峰面積定量，以標準曲線法計算含量。25主要技術內容5.1試劑和材料本標準所用試劑和水，在沒有注明其他要求時，均指分析純試劑和GB/T6682規(guī)定的一級水。5.1.1試劑甲醇（色譜純），甲酸（色譜純），乙酸銨（色譜純），二乙基二硫代氨基甲酸鈉（色譜純），稀鹽酸（色譜純），二甲基亞砜（色譜純）5.1.2標準品阿扎胞苷、氟尿嘧啶、阿柔比星、培美曲塞、苯達莫司汀、白消安、卡莫司汀、環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、柔紅霉素、地西他濱、多柔比星、表柔比星、依托泊苷、吉西他濱、伊達比星、異環(huán)磷酰胺、伊立替康、甲氨蝶呤、尼莫司汀、吡柔比星、替加氟、替尼泊苷、托泊替康、長春新堿、長春瑞濱。5.1.3對照品溶液的配置分別精密稱取上述26種對照品適量，其中甲氨蝶呤、阿扎胞苷先加入少量0.5mol/L稀鹽酸使其溶解，再用純甲醇定容為1mg/mL的標準儲備液，培美曲塞、氟尿嘧啶、替尼泊苷、托泊替康、白消安、異環(huán)磷酰胺先加入少量二甲亞砜使其溶解，再用純甲醇定容為1mg/mL的標準儲備液，其余18種直接使用純甲醇溶解并定容為1mg/mL的標準儲備液。每次配置兩份，于-20℃冰箱中儲存，有效期一個月。取其中一份儲備液用于標準曲線樣品的配置：先將每種藥物濃度為1mg/mL的儲備液，用甲醇稀釋配制成每種藥物濃度均為100μg/mL的26種藥物混合溶液，再逐級稀釋得到濃度分別為5000、2500、1000、500、200、100、50、20、10、5、2ng/mL的標準系列液。取另外一份用于質控樣品的配置。精密稱取順鉑對照品適量，先加入少量二甲基亞砜使其充分溶解，再用純甲醇定容至刻度得到濃度為1mg/mL的順鉑標準儲備液，用純甲醇逐級稀釋得到200、100、50、25、12、6、3、1.5ng/mL的標準系列液。5.1.4標準樣品的制備取數份100μL系列對照品標準溶液，分別加入至含空白采樣棉簽的10mL離心管中，制備得含培美曲塞、卡莫司汀、柔紅霉素為1~250ng（即濃度為10~2500ng/mL），苯達莫司汀、白消安、環(huán)磷酰胺、多柔比星、依托泊苷、托泊替康、長春新堿為0.2~100ng（即濃度為2~1000ng/mL氟尿嘧啶、地西他濱為0.2~50ng（即濃度為2~500ng/mL），吉西他濱、伊達比星、伊立替康、甲氨蝶呤、吡柔比星、替加氟、替尼泊苷為2~250ng（即濃度為20~2500ng/mL），表柔比星為0.3~150ng（即濃度為3~1500ng/mL），阿扎胞苷為0.4~100ng（即濃度為4~1000ng/mL），阿柔比星、阿糖胞苷、尼莫司汀、長春瑞濱為0.4~200ng（即濃度為4~2000ng/mL異環(huán)磷酰胺為0.4~50ng（即濃度為4~500ng/mL）的標準樣品。35.1.5質控樣品的制備同法分別制備采樣棉簽中含量為阿扎胞苷0.8、80和160ng（即濃度為8、800和1600ng/mL），氟尿嘧啶、地西他濱0.8、20和40ng（即濃度為8、200和400ng/mL），阿柔比星、阿糖胞苷、尼莫司汀、長春瑞濱1.6、80和160ng（即濃度為16、800和1600ng/mL培美曲塞、卡莫司汀、柔紅霉素4、100和200ng（即濃度為40、1000和2000ng/mL），苯達莫司汀、白消安、多柔比星、依托泊苷、托泊替康、長春新堿0.8、40、80ng（即濃度為8、400和800ng/mL），環(huán)磷酰胺1.6、40和80（即濃度為16、400和800ng/mL），表柔比星1.2、60和120ng（即濃度為12、600和1200ng/mL），吉西他濱、伊達比星、伊立替康、甲氨蝶呤、吡柔比星、替加氟、替尼泊苷8、100、200ng（即濃度為80、1000和2000ng/mL異環(huán)磷酰胺3.2、20和40（即濃度為32、200和400ng/mL）的低、中、高質控樣品。5.1.6衍生化試劑的制備本標準選用LC-MS/MS，以順鉑作為代表藥物，利用衍生化試劑二乙基二硫代氨基甲酸鈉（DDTC）使鉑離子生成絡合物，實現取樣棉簽中鉑類藥物的含量檢測。配制0.1mol/LNaOH溶液：準確稱量1g氫氧化鈉，置于25mL小燒杯中，用純化水溶解后，轉移至250mL容量瓶中，加水定容至刻度線，即得250mL濃度為0.1mol/L的NaOH溶液。配制含5%DDTC的0.1mol/LNaOH溶液：準確稱量12.55g二乙基二硫代氨基甲酸鈉（DDTC），置于25mL小燒杯中，用上述配制好的0.1mol/LNaOH溶液溶解后，轉移至250mL容量瓶中，加剩余0.1mol/LNaOH溶液定容至刻度線，即得250mL含5%DDTC的0.1mol/LNaOH衍生化試劑。配制完成后，使用0.25μm水系微孔濾膜對衍生化試劑進行真空抽濾，以去除不溶性雜質，濾液備用，檢測時需現配現用。含量計算公式質量(g)=濃度(mol/L)×體積(mL)×分子量(g/mol)5.2儀器與設備液相色譜三重四極桿質譜聯用儀（LC-QQQ-MSAgilent1290InfinityⅡ/G6470A美國AgilentTechnologies公司）；CPA225D型電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司，上海）；VORTEX-5型渦旋混合儀（海門市其林貝爾儀器制造有限公司5430型高速離心機（德國Eppendorf股份公司MG-2200氮氣吹掃儀（TOKYORIKAKIKAICO,.LTD/EYELYF-100SD型超聲波清洗機（深圳福洋科技集團有限公司）；VentFilerMPK01超純水機（德國MerckKGaA公司）；生物安全柜（型號：11229BBC86，山東博科生物有限公司Eppendorf可調式移液器（規(guī)格：10μL，50μL，100μL，200μL，1000μL，德國）。5.3采樣方法本團體標準使用0.05%甲酸-甲醇溶液作為26種細胞毒性藥物及鉑類藥物的提取溶劑，使用頭部尺寸為2.6cm×1.2cm的無塵布寬頭取樣棉簽蘸取提取溶劑后對醫(yī)療機構物體表面進行擦拭采樣。4取樣過程分為兩個步驟。第一步，使用蘸有擦拭液（0.05%甲酸甲醇）的取樣棉簽，按照Z字形與井字形相結合的方式，對指定區(qū)域進行定面積擦拭。第二步，使用干燥的棉簽，以相同的方式對同一區(qū)域進行擦拭。取樣完成后將兩根棉簽的棉簽頭折斷放入10mLEP離心管中，并置于-20℃冰箱中保存。5.4采樣時間及頻次于采樣當日醫(yī)療機構藥品調配工作結束后進行采樣，采樣頻次1~2月一次或根據醫(yī)療機構自身情況決定。5.5精密度與準確度26種細胞毒性藥物及鉑類藥物的定量下限符合表1要求，定量下限相對標準偏差均小于4.16%（n=6相對誤差均在0.27%~7.15%范圍內。中、高濃度相對標準偏差均≤13.80%。表126種細胞毒性藥物及鉑類藥物的定量下限藥物定量下限（ng/mL）藥物定量下限（ng/mL）阿扎胞苷4異環(huán)磷酰胺4氟尿嘧啶2伊立替康20阿柔比星4甲氨蝶呤20培美曲塞尼莫司汀4苯達莫司汀2吡柔比星202替加氟20卡莫司汀替尼泊苷20環(huán)磷酰胺2托泊替康2阿糖胞苷4長春新堿2柔紅霉素長春瑞濱4地西他濱2吉西他濱20多柔比星2伊達比星20表柔比星3鉑2依托泊苷25.6標志、運輸及貯存5.6.1標志標注內容為：采樣單位名稱、采樣人、采樣日期、及根據樣本特點所應標注的其他內容。5.6.2運輸樣本屬于非危險品，任何運輸工具可采用，在運輸時應防火、防熱、防雨淋、防受潮。55.6.3貯存-20℃條件下密封保存。6檢測方法本標準所用試劑和水，在沒有注明其他要求時，均指分析純試劑和GB/T6682規(guī)定的三級水。6.126種細胞毒性藥物的檢測方法6.1.1色譜條件色譜柱：AgilentEclipsePlusC18(1.8μm2.1*100mm)；預柱：AgilentEclipsePlusC18(1.8μm2.1*50mm)水相：含0.1%甲酸的5mmol/L乙酸銨水溶液（A）；有機相：80%甲醇（B）；流速：0.3mL/min；運行時間：9min；柱溫：30℃,進樣量：10μL。梯度洗脫程序見表2。表2梯度洗脫程序時間（min）流速（ml/min）有機相（%）0.000.34.500.390%6.1.2質譜條件采用電噴霧離子源（ESI），正負離子同時監(jiān)測掃描，多反應監(jiān)測模式檢測（MRM）；正離子模式噴霧電壓為4000V，負離子模式噴霧電壓為-3500V；霧化氣和去溶劑氣均為氮氣，霧化壓力為30psi，去溶劑氣流速為11L/min，溫度300℃；高純氮氣為碰撞氣，其壓力值為0.1MPa。表3待測化合物的最優(yōu)MRM參數化合物母離子子離子FragmentorDwellCECA離子模式阿扎胞苷267.22205正離子氟尿嘧啶131.0354正離子阿柔比星812.4332.92422正離子培美曲塞455.6308.42204正離子苯達莫司汀393.1353.62214正離子264.150294正離子卡莫司汀62.9495205正離子環(huán)磷酰胺2615214正離子阿糖胞苷244.15024正離子柔紅霉素545.2285.32205正離子地西他濱229.12002414正離子多柔比星544.2413.724正離子表柔比星544.2360.9502294正離子6依托泊苷588.22002414正離子吉西他濱264.124正離子伊達比星498.250294正離子異環(huán)磷酰胺26192.12294正離子伊立替康587.32002414正離子甲氨蝶呤455.2307.9506正離子尼莫司汀308.1263.350544正離子吡柔比星628.2213.950294正離子替加氟201.150244正離子替尼泊苷657.2229.324正離子托泊替康422.246.224正離子長春新堿825.42702402正離子長春瑞濱826.1766.92655402正離子6.1.3樣品的前處理選擇用0.05%甲酸-甲醇溶液作為26種細胞毒性藥物的提取溶劑，具體步驟如下：向裝有寬頭取樣棉簽的10mL離心管中，加入0.05%甲酸-甲醇溶液3mL，超聲提取15min，渦旋震蕩5min，取1mL溶液于2mL離心管中，于氮氣下吹干，用300μL的80%甲醇復溶，渦旋混勻5min，10000r/min高速離心10min，取200μL上清液于色譜瓶中，進樣10μL對26種細胞毒性藥物進行分析。6.2鉑類藥物的檢測方法6.2.1色譜條件色譜柱：AgilentEclipsePlusC18(1.8μm2.1*100mm)；預柱：AgilentEclipsePlusC18(1.8μm運行時間：5min；柱溫：30℃,進樣量：10μL。A：B=20：80，等度洗脫。6.2.2質譜條件采用電噴霧離子源（ESI），正負離子同時監(jiān)測掃描，多反應監(jiān)測模式檢測（MRM）；正離子模式噴霧電壓為4000V，負離子模式噴霧電壓為-3500V；霧化氣和去溶劑氣均為氮氣，霧化壓力為30psi，去溶劑氣流速11L/min，溫度300℃；源溫度為100℃；高純氮氣為碰撞氣，其壓力值為0.1MPa。表4待測化合物Pt（DDTC）3的最優(yōu)MRM參數化合物母離子子離子FragmentorDwellCECA離子模式Pt（DDTC）3640200200294正離子76.2.3樣品的前處理選擇使用含5%DDTC的0.1mol/L的NaOH溶液將順鉑衍生化后經乙酸乙酯液液萃取得到的衍生化產物Pt（DDTC）3作為目標待測物。具體操作步驟：向裝有寬頭取樣棉簽的10mL離心管中，加入0.5%甲酸甲醇3mL，渦旋5min，超聲提取10min，加入微量0.5mol/L稀硫酸，渦旋混勻后靜置10min，加入含5%DDTC的0.1mol/LNaOH衍生化試劑1mL，渦旋混勻在40℃水浴中孵化40min后取出，加入1mL乙酸乙酯進行液液萃?。簻u旋5min，靜置5min分層，取上層乙酸乙酯層于40℃氮氣下吹干，用300μL的純甲醇復溶，渦旋5min，10000r/min高速離心10min，取上清液200μL于色譜瓶中，進樣10μL分析。7數據解釋和風險評估檢測結果的判定按GB/T8170數值修約值比較法進行，保留兩位小數。根據檢測結果，評估暴露水平以確定是否存在風險，根據暴露評估結果制定相應的風險控制措施，降低風險。89（10）（12）（13）（14）（15）（16）（17）（18）T/YHPACIA0—0000（19）（20）（21）（22）（23）（24）（25）（26）（27）