LKB1蛋白表達：解析中國人胃癌發(fā)生發(fā)展與預后的關(guān)鍵密碼一、引言1.1研究背景與意義胃癌是一種起源于胃黏膜上皮的惡性腫瘤，在全球范圍內(nèi)具有較高的發(fā)病率和死亡率，嚴重威脅人類健康。國際癌癥研究機構(gòu)（IARC）發(fā)布的2020年全球癌癥統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，當年全世界胃癌新發(fā)病例約108.9萬，居惡性腫瘤發(fā)病人數(shù)的第五位；死亡病例數(shù)約76.9萬，居惡性腫瘤死亡人數(shù)的第四位。中國作為人口大國，也是胃癌高發(fā)國家，同年中國的發(fā)病病例數(shù)占全球的43.9%，死亡病例數(shù)占全球的48.6%，胃癌的發(fā)病率和死亡率分別位于所有惡性腫瘤的第二位和第三位，是發(fā)病率第一的消化道惡性腫瘤，遠高于世界平均水平。胃癌的發(fā)生發(fā)展是一個多階段、多基因參與的復雜過程，涉及癌基因的激活、抑癌基因的失活以及多種信號通路的異常調(diào)節(jié)。早期胃癌患者經(jīng)過積極治療，預后相對較好；然而，由于早期胃癌癥狀隱匿，缺乏特異性臨床表現(xiàn)，多數(shù)患者確診時已處于進展期，此時癌細胞往往已經(jīng)發(fā)生浸潤和轉(zhuǎn)移，治療手段有限，預后較差，5年生存率僅為20%以下。因此，尋找有效的早期診斷標志物和預后評估指標，對于提高胃癌患者的生存率和改善預后至關(guān)重要。LKB1（liverkinaseB1）基因，全名為肝激酶B1基因，位于人類染色體19p13.3，編碼一個蛋白激酶。LKB1激酶在細胞中起著重要的調(diào)控作用，通過磷酸化底物蛋白影響多個信號通路的活性，其主要底物包括AMP激活的蛋白激酶（AMPK），而AMPK信號通路是人體能量平衡的關(guān)鍵調(diào)控機制之一。已有研究表明，LKB1基因突變或失活與多種癌癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，在胃癌組織中，LKB1基因突變較為常見，可導致LKB1蛋白表達水平下降或喪失功能。多項研究發(fā)現(xiàn)，LKB1在胃癌組織中的表達水平普遍低于正常胃組織，且其表達水平與胃癌的臨床病理特征，如腫瘤大小、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)。LKB1表達水平低的胃癌患者5年生存率明顯低于表達水平高的患者，提示LKB1與胃癌的轉(zhuǎn)移和復發(fā)風險相關(guān)。此外，LKB1還通過調(diào)控AMPK信號通路、mTOR信號通路和p53信號通路等，影響胃癌細胞的增殖、存活和凋亡。盡管已有上述相關(guān)研究，但目前關(guān)于LKB1蛋白在中國人胃癌組織中的表達情況及臨床意義，仍存在一些有待深入探究的問題。不同地區(qū)、種族人群的胃癌發(fā)病機制和生物學行為可能存在差異，中國人群具有獨特的遺傳背景、生活習慣和環(huán)境因素，研究LKB1蛋白在中國人胃癌組織中的表達及其與臨床病理參數(shù)和預后的關(guān)系，對于進一步明確LKB1在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用機制，為中國胃癌患者提供更精準的診斷和治療策略具有重要的理論和實際意義。本研究旨在通過免疫組化等方法，檢測LKB1蛋白在中國人胃癌組織中的表達，分析其與臨床病理因素及預后的相關(guān)性，以期為胃癌的早期診斷、預后評估和靶向治療提供新的理論依據(jù)和潛在靶點。1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀在國際上，LKB1蛋白與胃癌的關(guān)聯(lián)研究已取得了一定成果。早期研究就已明確LKB1基因位于人類染色體19p13.3，編碼的蛋白激酶在細胞關(guān)鍵調(diào)控中發(fā)揮作用，其底物AMPK參與人體能量平衡調(diào)控。眾多研究表明，LKB1基因突變在胃癌組織中較為常見，導致其蛋白表達水平下降或功能喪失。如一項對大量胃癌患者組織標本的分析顯示，LKB1在胃癌組織中的陽性表達率遠低于正常胃組織，且其表達水平與胃癌的多項臨床病理特征緊密相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)LKB1表達水平與腫瘤大小相關(guān)，腫瘤越大，LKB1表達往往越低；浸潤深度方面，隨著胃癌浸潤深度的增加，LKB1表達逐漸降低；在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移上，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌患者LKB1表達明顯低于無轉(zhuǎn)移者。還有研究關(guān)注到LKB1在胃癌遠處轉(zhuǎn)移中的作用，發(fā)現(xiàn)LKB1低表達的胃癌患者更易發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移，進而影響患者的預后，LKB1表達水平低的患者5年生存率顯著低于表達水平高的患者。在信號通路調(diào)控機制研究上，國際上已證實LKB1通過磷酸化激活AMPK，調(diào)控細胞能量代謝，影響胃癌細胞的增殖和存活。在mTOR信號通路中，LKB1也發(fā)揮著重要的調(diào)控作用，影響胃癌細胞的生長和凋亡。國內(nèi)對于LKB1蛋白在胃癌中的研究也在逐步深入。國內(nèi)學者通過免疫組化等方法，同樣證實了LKB1蛋白在胃癌組織中表達下調(diào)，且與腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移相關(guān)。部分研究還探討了LKB1與其他分子或信號通路在胃癌發(fā)生發(fā)展中的協(xié)同作用。然而，目前國內(nèi)針對LKB1蛋白在中國人胃癌組織中的研究，在樣本的廣泛性和研究的系統(tǒng)性上仍存在不足。不同地區(qū)的研究樣本相對局限，未能全面涵蓋中國不同地域、不同生活習慣和遺傳背景的人群，導致研究結(jié)果可能存在一定的偏差。在研究內(nèi)容上，對于LKB1蛋白表達與中國人胃癌患者預后的相關(guān)性研究，缺乏長期、大樣本的隨訪數(shù)據(jù)支持。在LKB1蛋白影響胃癌發(fā)生發(fā)展的分子機制研究方面，雖然有一定的探索，但相較于國際研究，深度和廣度仍有待提高，尚未形成完整的理論體系。此外，針對中國人群特點，將LKB1蛋白作為潛在治療靶點的研究也相對較少，缺乏基于中國人群數(shù)據(jù)的臨床應用探索。綜上所述，國內(nèi)外在LKB1蛋白與胃癌的研究上已取得一定進展，但針對中國人群胃癌組織中LKB1蛋白的研究仍存在空白和不足。深入研究LKB1蛋白在中國人胃癌組織中的表達及其臨床意義，對于完善胃癌發(fā)病機制理論，提高中國胃癌患者的診療水平具有重要價值，這也是本研究開展的重要意義所在。1.3研究目的與創(chuàng)新點本研究旨在深入探究LKB1蛋白在中國人胃癌組織中的表達情況，全面分析其與臨床病理參數(shù)及患者預后之間的相關(guān)性，進而揭示LKB1蛋白在中國人胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用機制，為胃癌的早期診斷、精準預后評估以及靶向治療提供堅實可靠的理論依據(jù)和極具潛力的分子靶點。在研究創(chuàng)新點方面，首先在樣本選取上，本研究將廣泛收集來自中國不同地區(qū)的胃癌組織樣本，涵蓋北方、南方、東部、西部等多個地域，充分考慮不同地區(qū)人群的遺傳背景、生活習慣和環(huán)境因素差異。相較于以往局限于單一地區(qū)樣本的研究，本研究的樣本更具代表性，能夠更全面、準確地反映LKB1蛋白在中國人胃癌組織中的表達特征，減少地域因素對研究結(jié)果的影響。其次，在研究內(nèi)容上，不僅關(guān)注LKB1蛋白表達與常見臨床病理參數(shù)（如腫瘤大小、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等）的關(guān)聯(lián)，還將深入探討其與一些特殊病理類型胃癌（如印戒細胞癌、低分化腺癌等）的關(guān)系，以及在不同分子分型胃癌中的表達差異。此外，本研究還將結(jié)合患者的生存數(shù)據(jù)，通過構(gòu)建多因素預后模型，更精確地評估LKB1蛋白對中國人胃癌患者預后的預測價值，彌補以往研究在這方面的不足。再者，在研究方法上，本研究將采用多種先進的檢測技術(shù)相結(jié)合，如免疫組化、蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）、實時熒光定量聚合酶鏈式反應（qRT-PCR）等。免疫組化用于直觀地檢測LKB1蛋白在組織中的定位和表達水平；Westernblot進一步定量分析LKB1蛋白的表達量；qRT-PCR則從基因水平檢測LKB1的轉(zhuǎn)錄情況。多種技術(shù)相互驗證，能夠更準確、全面地獲取LKB1蛋白在中國人胃癌組織中的表達信息，提高研究結(jié)果的可靠性。同時，本研究還將運用生物信息學分析方法，整合已有的胃癌基因表達數(shù)據(jù)庫，挖掘LKB1蛋白與其他基因或信號通路的潛在關(guān)聯(lián)，從系統(tǒng)生物學角度深入解析LKB1蛋白在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用機制，為后續(xù)的臨床研究和治療提供更深入的理論支持。二、LKB1蛋白與胃癌的理論基礎(chǔ)2.1胃癌概述胃癌是一種嚴重威脅人類健康的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，它起源于胃黏膜上皮細胞，是胃腺癌中最為常見的類型。在全球范圍內(nèi)，胃癌的發(fā)病率和死亡率均位居前列。據(jù)世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構(gòu)（IARC）發(fā)布的2020年全球癌癥數(shù)據(jù)顯示，胃癌新發(fā)病例數(shù)在所有惡性腫瘤中排第五位，新發(fā)病例約108.9萬；死亡病例數(shù)位居第四位，約76.9萬。在不同地區(qū)，胃癌的發(fā)病率和死亡率存在顯著差異。東亞地區(qū)，如中國、日本和韓國，是胃癌的高發(fā)區(qū)域，這可能與該地區(qū)人群的飲食習慣、幽門螺桿菌感染率以及遺傳背景等因素密切相關(guān)。在中國，胃癌同樣是發(fā)病率和死亡率較高的惡性腫瘤之一，2020年中國胃癌發(fā)病病例數(shù)占全球的43.9%，死亡病例數(shù)占全球的48.6%，發(fā)病率和死亡率分別位于所有惡性腫瘤的第二位和第三位，是發(fā)病率最高的消化道惡性腫瘤。胃癌的發(fā)病是一個多因素、多步驟的復雜過程，多種因素相互作用，共同促進了胃癌的發(fā)生發(fā)展。幽門螺桿菌（Helicobacterpylori，Hp）感染被認為是胃癌發(fā)生的主要危險因素之一。大量研究表明，Hp感染能夠引發(fā)胃黏膜的慢性炎癥，長期的炎癥刺激可導致胃黏膜上皮細胞增殖異常，進而增加胃癌的發(fā)病風險。Hp產(chǎn)生的毒素和酶，如細胞毒素相關(guān)蛋白A（CagA）和空泡毒素A（VacA），能夠干擾胃上皮細胞的正常生理功能，破壞細胞間的連接，誘導細胞凋亡和增殖失衡，促進胃癌的發(fā)生。飲食習慣對胃癌的發(fā)生也有著重要影響。高鹽飲食是胃癌的重要危險因素之一，高鹽食物可直接損傷胃黏膜，使胃黏膜上皮細胞通透性增加，導致致癌物更容易進入細胞內(nèi)，從而引發(fā)細胞癌變。腌制、熏制和油炸食品中含有大量的亞硝酸鹽、多環(huán)芳烴等致癌物質(zhì)，這些物質(zhì)在體內(nèi)可轉(zhuǎn)化為亞硝胺類化合物，具有強烈的致癌作用。長期食用此類食物，會顯著增加胃癌的發(fā)病風險。此外，飲食中缺乏新鮮蔬菜水果，導致維生素C、維生素E、β-胡蘿卜素等抗氧化劑攝入不足，也可能削弱胃黏膜的抗氧化防御能力，增加胃癌的發(fā)生風險。遺傳因素在胃癌的發(fā)生中也起著關(guān)鍵作用。研究發(fā)現(xiàn)，約10%的胃癌患者具有家族遺傳傾向。遺傳性彌漫性胃癌（HDGC）是一種常染色體顯性遺傳疾病，主要由E-鈣黏蛋白（E-cadherin）基因（CDH1）的胚系突變引起。攜帶CDH1基因突變的個體，一生中患胃癌的風險高達70%-80%。除了HDGC，還有其他一些遺傳綜合征與胃癌的發(fā)生相關(guān)，如林奇綜合征（Lynchsyndrome），該綜合征患者由于錯配修復基因（如MLH1、MSH2、MSH6和PMS2）的突變，導致細胞DNA錯配修復功能缺陷，進而增加了胃癌及其他多種惡性腫瘤的發(fā)病風險。某些癌前病變也是胃癌發(fā)生的重要危險因素。慢性萎縮性胃炎是一種常見的胃癌前疾病，其特征是胃黏膜固有腺體萎縮，伴有腸上皮化生和異型增生。隨著病情的進展，慢性萎縮性胃炎患者發(fā)生胃癌的風險逐漸增加。胃息肉，特別是腺瘤性息肉，被認為是一種癌前病變，其癌變率較高。胃潰瘍長期不愈合，也可能導致胃黏膜上皮細胞發(fā)生異型增生，進而發(fā)展為胃癌。胃癌的高發(fā)病率和高死亡率給患者及其家庭帶來了沉重的負擔，也對社會的醫(yī)療資源造成了巨大的壓力。由于早期胃癌癥狀隱匿，缺乏特異性臨床表現(xiàn)，多數(shù)患者確診時已處于進展期，此時癌細胞往往已經(jīng)發(fā)生浸潤和轉(zhuǎn)移，治療效果不佳，5年生存率較低。因此，深入了解胃癌的發(fā)病機制，尋找有效的早期診斷標志物和預后評估指標，對于提高胃癌患者的生存率和改善預后具有重要意義。2.2LKB1蛋白相關(guān)理論2.2.1LKB1蛋白的結(jié)構(gòu)與功能LKB1基因，又被稱為絲氨酸/蘇氨酸激酶11（STK11）基因，定位于人類染色體19p13.3區(qū)域。該基因包含10個外顯子，其編碼產(chǎn)物為LKB1蛋白，由433個氨基酸組成，分子量約為50kDa。LKB1蛋白結(jié)構(gòu)較為獨特，包含激酶區(qū)域（44-309氨基酸位點）、N端調(diào)節(jié)域和C端調(diào)節(jié)域。其中，激酶區(qū)域是LKB1蛋白發(fā)揮功能的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域，它具有典型的絲氨酸/蘇氨酸激酶活性中心，能夠特異性地識別并結(jié)合底物蛋白，通過磷酸化作用調(diào)節(jié)底物蛋白的活性。N端調(diào)節(jié)域含有一個核定位序列，這一序列使得LKB1蛋白能夠定位于細胞核中，在細胞核內(nèi)發(fā)揮對基因轉(zhuǎn)錄等過程的調(diào)控作用。C端調(diào)節(jié)域則參與了LKB1蛋白與其他蛋白質(zhì)之間的相互作用，通過與不同的蛋白質(zhì)結(jié)合，調(diào)節(jié)LKB1蛋白的穩(wěn)定性、活性以及細胞內(nèi)定位。LKB1蛋白在細胞內(nèi)發(fā)揮著多種重要的生物學功能，其主要功能之一是調(diào)控細胞能量代謝。當細胞內(nèi)能量水平下降時，如ATP含量減少、AMP/ATP比值升高，LKB1蛋白能夠感知這一變化，并通過磷酸化激活下游的AMP激活的蛋白激酶（AMPK）。AMPK被激活后，會進一步磷酸化一系列底物蛋白，從而調(diào)節(jié)細胞內(nèi)的代謝途徑。AMPK可以抑制脂肪酸合成酶（FAS）和乙酰輔酶A羧化酶（ACC）的活性，減少脂肪酸的合成，降低細胞內(nèi)脂質(zhì)的積累；同時，AMPK還能激活磷酸果糖激酶-1（PFK-1），促進糖酵解過程，增加ATP的生成，以維持細胞的能量平衡。通過這一系列的調(diào)節(jié)作用，LKB1-AMPK信號通路在細胞能量代謝中發(fā)揮著關(guān)鍵的調(diào)控作用，確保細胞在不同的能量狀態(tài)下都能維持正常的生理功能。LKB1蛋白對細胞增殖和凋亡也有著重要的調(diào)節(jié)作用。在正常細胞中，LKB1蛋白能夠通過激活AMPK，抑制哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信號通路的活性。mTOR是細胞生長和增殖的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，它可以促進蛋白質(zhì)合成、細胞周期進程以及細胞生長。當LKB1蛋白正常表達并發(fā)揮功能時，通過抑制mTOR信號通路，能夠阻止細胞過度增殖，維持細胞生長和增殖的平衡。在腫瘤細胞中，LKB1基因常常發(fā)生突變或缺失，導致LKB1蛋白功能喪失，mTOR信號通路被異常激活，從而促進腫瘤細胞的增殖和生長。此外，LKB1蛋白還參與了細胞凋亡的調(diào)節(jié)過程。研究表明，LKB1蛋白可以通過激活p53信號通路，促進細胞凋亡。當細胞受到DNA損傷等應激刺激時，LKB1蛋白能夠磷酸化激活p53蛋白，使其穩(wěn)定性增加并轉(zhuǎn)位到細胞核內(nèi)，進而誘導細胞凋亡相關(guān)基因的表達，促進細胞凋亡，清除受損細胞，防止腫瘤的發(fā)生發(fā)展。2.2.2LKB1蛋白在細胞信號通路中的作用LKB1蛋白在多個重要的細胞信號通路中扮演著核心角色，其中最為關(guān)鍵的是AMPK信號通路。如前文所述，當細胞處于能量應激狀態(tài)時，LKB1蛋白能夠迅速感知細胞內(nèi)AMP/ATP比值的變化，并通過其激酶活性，使AMPKα亞基上的Thr172位點發(fā)生磷酸化，從而激活AMPK。激活后的AMPK作為細胞內(nèi)的能量感受器和代謝調(diào)節(jié)樞紐，能夠?qū)毎麅?nèi)的代謝途徑進行廣泛而精細的調(diào)節(jié)。在脂質(zhì)代謝方面，AMPK通過磷酸化抑制ACC的活性，減少丙二酰輔酶A的生成，從而抑制脂肪酸的合成；同時，AMPK還能激活肉堿/有機陽離子轉(zhuǎn)運體2（OCTN2），促進脂肪酸的β-氧化，為細胞提供能量。在糖代謝方面，AMPK可以激活磷酸果糖激酶-2（PFK-2），增加果糖-2,6-二磷酸的生成，從而激活PFK-1，加速糖酵解過程，促進葡萄糖的攝取和利用；此外，AMPK還能抑制糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）的活性，激活糖原合成酶，促進糖原合成。通過這些調(diào)節(jié)作用，LKB1-AMPK信號通路能夠有效地維持細胞內(nèi)的能量平衡，確保細胞在能量匱乏的情況下仍能正常生存和發(fā)揮功能。在細胞周期調(diào)控方面，LKB1蛋白通過激活AMPK，間接影響細胞周期進程。當細胞能量不足時，LKB1-AMPK信號通路被激活，AMPK可以磷酸化視網(wǎng)膜母細胞瘤蛋白（Rb），使其處于低磷酸化狀態(tài)。低磷酸化的Rb能夠與E2F轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，抑制E2F介導的基因轉(zhuǎn)錄，從而使細胞周期停滯在G1期，阻止細胞進入S期進行DNA復制和細胞分裂。這樣可以避免細胞在能量不足的情況下進行增殖，保證細胞有足夠的能量和物質(zhì)基礎(chǔ)來完成細胞周期進程。在腫瘤細胞中，LKB1基因突變或缺失導致其無法正常激活AMPK，Rb蛋白持續(xù)處于高磷酸化狀態(tài)，E2F轉(zhuǎn)錄因子被釋放，促進細胞周期相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，使腫瘤細胞能夠不受控制地進行增殖。LKB1蛋白還參與了mTOR信號通路的調(diào)節(jié)。mTOR是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，它可以整合細胞內(nèi)的營養(yǎng)、能量和生長因子等信號，調(diào)節(jié)細胞的生長、增殖、代謝和存活。在正常生理狀態(tài)下，LKB1通過激活AMPK，抑制mTOR復合物1（mTORC1）的活性。具體來說，AMPK可以磷酸化結(jié)節(jié)性硬化復合物2（TSC2），使其活性增強。TSC2是一種GTP酶激活蛋白，它可以促進Ras同源物富集于大腦（Rheb）上的GTP水解為GDP，從而使Rheb失活。Rheb是mTORC1的上游激活因子，Rheb失活后，mTORC1的活性受到抑制，進而抑制細胞的生長和增殖。當LKB1基因發(fā)生突變或缺失時，AMPK無法被正常激活，mTORC1活性失控，導致細胞過度生長和增殖，這在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用。此外，LKB1蛋白在細胞自噬和凋亡信號通路中也發(fā)揮著一定的作用。在細胞自噬方面，LKB1-AMPK信號通路可以通過調(diào)節(jié)自噬相關(guān)蛋白的活性來影響細胞自噬的發(fā)生。當細胞受到營養(yǎng)缺乏或其他應激刺激時，LKB1-AMPK信號通路被激活，AMPK可以磷酸化Unc-51樣自噬激活激酶1（ULK1），促進自噬體的形成，啟動細胞自噬過程。細胞自噬是一種細胞內(nèi)的自我保護機制，它可以清除細胞內(nèi)受損的細胞器和蛋白質(zhì)聚集物，維持細胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。在細胞凋亡方面，如前文所述，LKB1蛋白可以通過激活p53信號通路，促進細胞凋亡。p53是一種重要的腫瘤抑制蛋白，它可以在細胞受到DNA損傷、氧化應激等刺激時被激活，進而誘導細胞凋亡相關(guān)基因的表達，如Bax、Puma等，促進細胞凋亡。LKB1蛋白通過調(diào)節(jié)這些信號通路，維持細胞的正常生理功能，當LKB1蛋白功能異常時，這些信號通路的失衡可能導致腫瘤等疾病的發(fā)生。2.3LKB1蛋白與腫瘤的關(guān)系LKB1基因作為重要的抑癌基因，其編碼的LKB1蛋白在維持細胞正常生理功能、抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在多種腫瘤中，LKB1基因的突變或缺失都較為常見，這直接導致LKB1蛋白表達異常，進而破壞細胞內(nèi)的信號通路平衡，促進腫瘤細胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。在肺癌中，研究發(fā)現(xiàn)約30%的肺腺癌患者存在LKB1基因突變。LKB1基因的失活會導致其無法正常激活AMPK，使得細胞內(nèi)的能量代謝調(diào)節(jié)紊亂。腫瘤細胞在這種情況下能夠不受限制地攝取營養(yǎng)物質(zhì)，加速自身的生長和增殖。LKB1基因突變還會影響細胞的極性和遷移能力，使肺癌細胞更容易突破基底膜，發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移。在結(jié)直腸癌中，LKB1蛋白的表達缺失與腫瘤的分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及患者的不良預后密切相關(guān)。當LKB1蛋白表達降低時，mTOR信號通路被過度激活，促進細胞的蛋白質(zhì)合成和細胞周期進程，導致腫瘤細胞的快速增殖。LKB1蛋白的缺失還會影響細胞間的黏附作用，使得腫瘤細胞更容易脫離原發(fā)灶，進入血液循環(huán)，進而發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移。在胃癌的發(fā)生發(fā)展過程中，LKB1蛋白同樣起著至關(guān)重要的抑制作用。大量研究表明，LKB1蛋白通過調(diào)控多個關(guān)鍵信號通路來抑制胃癌細胞的生長和轉(zhuǎn)移。在AMPK信號通路中，LKB1蛋白作為上游激酶，能夠在細胞能量水平下降時迅速激活AMPK。激活后的AMPK通過抑制mTORC1的活性，減少蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的合成，抑制胃癌細胞的增殖。AMPK還可以調(diào)節(jié)細胞的代謝途徑，促進葡萄糖的攝取和利用，維持細胞的能量平衡。當LKB1蛋白表達缺失或功能異常時，AMPK無法被正常激活，mTORC1活性失控，導致胃癌細胞過度增殖。在p53信號通路中，LKB1蛋白可以通過激活p53，促進細胞凋亡。在正常情況下，當細胞受到DNA損傷或其他應激刺激時，LKB1蛋白能夠磷酸化激活p53，使其穩(wěn)定性增加并轉(zhuǎn)位到細胞核內(nèi)。在細胞核中，p53可以結(jié)合到細胞凋亡相關(guān)基因的啟動子區(qū)域，促進這些基因的轉(zhuǎn)錄和表達，從而誘導胃癌細胞凋亡。若LKB1蛋白功能喪失，p53信號通路無法正常激活，受損的胃癌細胞不能及時被清除，這為腫瘤的發(fā)生發(fā)展提供了條件。此外，LKB1蛋白還可以通過調(diào)節(jié)細胞的代謝重編程來抑制胃癌的發(fā)展。腫瘤細胞的代謝具有特殊性，它們往往表現(xiàn)出有氧糖酵解增強的現(xiàn)象，即即使在有氧條件下也優(yōu)先利用糖酵解來獲取能量。LKB1蛋白可以通過激活AMPK，抑制磷酸果糖激酶2（PFK2）的活性，減少果糖-2,6-二磷酸的生成，從而抑制糖酵解過程。LKB1蛋白還能促進脂肪酸的β-氧化，為細胞提供更多的能量。通過這些代謝調(diào)節(jié)作用，LKB1蛋白能夠抑制胃癌細胞的代謝重編程，限制腫瘤細胞的生長和存活。在細胞骨架調(diào)節(jié)方面，LKB1蛋白參與調(diào)控細胞的極性和遷移能力。它可以通過調(diào)節(jié)一些細胞骨架相關(guān)蛋白的活性，如Rho家族小GTP酶，來維持細胞的正常形態(tài)和極性。在胃癌細胞中，當LKB1蛋白表達缺失時，細胞的極性被破壞，遷移能力增強，使得腫瘤細胞更容易發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移。三、研究設(shè)計與方法3.1實驗材料3.1.1樣本來源本研究樣本來自于[具體時間段]期間，在中國[多個地區(qū)名稱，如北京、上海、廣州、成都、哈爾濱等]的[多家醫(yī)院名稱]就診并接受手術(shù)治療的胃癌患者。共收集到胃癌組織樣本[X]例，轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)樣本[X]例，以及距離腫瘤邊緣至少5cm的正常胃組織樣本[X]例作為對照。納入標準為：經(jīng)病理確診為胃癌；患者術(shù)前未接受過放療、化療或其他抗腫瘤治療；臨床資料完整，包括患者的年齡、性別、腫瘤部位、病理類型、腫瘤大小、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等。排除標準為：合并其他惡性腫瘤；存在嚴重的肝、腎功能障礙或其他嚴重的全身性疾??；標本質(zhì)量不佳，無法進行有效檢測。在收集樣本時，嚴格遵循隨機抽樣原則，確保樣本的隨機性和代表性。對于每一位入選患者，在手術(shù)切除腫瘤組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)后，立即將標本置于預先準備好的4%多聚甲醛固定液中，固定時間為12-24小時，以確保組織形態(tài)和抗原性的保存。正常胃組織樣本同樣在手術(shù)中獲取，并進行相同的固定處理。固定后的標本經(jīng)石蠟包埋、切片等常規(guī)病理處理，制成厚度為4μm的石蠟切片，用于后續(xù)的免疫組化檢測。3.1.2主要試劑與儀器免疫組化檢測所需的主要試劑包括：兔抗人LKB1單克隆抗體（購自[抗體公司名稱]，貨號[具體貨號]），該抗體經(jīng)過嚴格的質(zhì)量驗證，特異性高，能夠準確識別LKB1蛋白；即用型二抗（購自[二抗公司名稱]，貨號[具體貨號]），其純度高，可有效減少非特異性染色；免疫組化試劑盒（包含生物素標記的二抗、辣根過氧化物酶標記的鏈霉卵白素等，購自[試劑盒公司名稱]，貨號[具體貨號]）；DAB顯色試劑盒（購自[顯色劑公司名稱]，貨號[具體貨號]），用于免疫組化染色后的顯色反應，其顯色效果穩(wěn)定、清晰；蘇木精染液（購自[染液公司名稱]，貨號[具體貨號]），用于細胞核復染，使組織結(jié)構(gòu)更加清晰可見；枸櫞酸抗原修復液（pH6.0，購自[修復液公司名稱]，貨號[具體貨號]），用于修復石蠟切片中被掩蓋的抗原表位，提高檢測的靈敏度；3%過氧化氫溶液，用于滅活內(nèi)源性過氧化物酶，減少背景染色；PBS緩沖液（pH7.4，購自[緩沖液公司名稱]，貨號[具體貨號]），用于稀釋抗體、沖洗切片等，其pH值穩(wěn)定，能有效維持實驗體系的穩(wěn)定性。主要儀器包括：石蠟切片機（型號[具體型號]，品牌[切片機品牌]），其切片厚度均勻，精度高，可確保切片質(zhì)量；自動脫水機（型號[具體型號]，品牌[脫水機品牌]），能夠?qū)崿F(xiàn)組織脫水過程的自動化，提高工作效率和脫水效果；包埋機（型號[具體型號]，品牌[包埋機品牌]），用于將脫水后的組織進行石蠟包埋，保證組織的形態(tài)完整；烤箱（型號[具體型號]，品牌[烤箱品牌]），用于烤片，使切片牢固附著在載玻片上；光學顯微鏡（型號[具體型號]，品牌[顯微鏡品牌]），配備高分辨率的鏡頭和成像系統(tǒng)，可清晰觀察免疫組化染色結(jié)果；圖像分析系統(tǒng)（型號[具體型號]，品牌[圖像分析系統(tǒng)品牌]），能夠?qū)︼@微鏡下的圖像進行定量分析，準確測定LKB1蛋白的表達水平。這些試劑和儀器的純度和精準度直接影響實驗結(jié)果的準確性和可靠性，在實驗前均進行了嚴格的質(zhì)量檢測和調(diào)試，確保其性能符合實驗要求。3.2實驗方法3.2.1免疫組化檢測LKB1蛋白表達采用免疫組化過氧化物酶標記鏈霉卵白素法（SP法）檢測LKB1蛋白在胃癌組織、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)及正常胃組織中的表達。具體操作步驟如下：切片處理：將石蠟切片置于68℃烤箱中烤片20分鐘，使切片牢固附著在載玻片上。隨后進行常規(guī)二甲苯脫蠟，依次將切片放入二甲苯I中浸泡20分鐘，二甲苯II中浸泡20分鐘，以充分去除石蠟。之后進行梯度酒精脫水，將切片依次放入100%酒精I中10分鐘、100%酒精II中10分鐘、95%酒精中5分鐘、80%酒精中5分鐘、70%酒精中5分鐘，使組織逐漸適應水性環(huán)境?？乖迯停簩⒚撍蟮那衅糜?.01M枸櫞酸緩沖液（pH6.0）中，用煮沸法進行抗原修復，95℃煮沸15-20分鐘。修復完成后，自然冷卻20分鐘以上，再用冷水沖洗切片缸，加快冷卻至室溫，以充分暴露抗原表位，提高檢測的靈敏度。滅活內(nèi)源性過氧化物酶：將冷卻后的切片用PBS沖洗3次，每次5分鐘，以去除殘留的枸櫞酸緩沖液。然后將切片放入3%過氧化氫溶液中，37℃孵育10分鐘，以滅活內(nèi)源性過氧化物酶，減少背景染色。孵育結(jié)束后，再次用PBS沖洗3次，每次5分鐘。封閉：在切片上滴加正常羊血清工作液，37℃封閉10分鐘，以封閉非特異性結(jié)合位點，減少非特異性染色。封閉結(jié)束后，傾去多余液體，無需沖洗。一抗孵育：在切片上滴加適量稀釋好的兔抗人LKB1單克隆抗體（按照抗體說明書進行稀釋），4℃冰箱孵育過夜，使一抗與組織中的LKB1蛋白特異性結(jié)合。第二天取出切片，用PBS沖洗3次，每次5分鐘，以去除未結(jié)合的一抗。二抗孵育：在切片上滴加生物素標記的二抗，37℃孵育30分鐘，使二抗與一抗特異性結(jié)合。孵育結(jié)束后，用PBS沖洗3次，每次5分鐘。鏈霉卵白素-過氧化物酶復合物孵育：滴加辣根過氧化物酶標記的鏈霉卵白素工作液，37℃孵育30分鐘。孵育完成后，用PBS沖洗3次，每次5分鐘。顯色：使用DAB顯色試劑盒進行顯色反應。將DAB顯色劑A、B、C按照說明書比例混合均勻后，滴加在切片上，室溫顯色5-10分鐘，在顯微鏡下觀察顯色情況，當陽性部位呈現(xiàn)棕黃色時，立即用自來水充分沖洗，終止顯色反應。復染：將顯色后的切片用蘇木精染液復染2分鐘，使細胞核著色，然后用鹽酸酒精分化數(shù)秒，再用自來水沖洗10-15分鐘，使細胞核顏色清晰。脫水、透明、封片：將復染后的切片依次放入70%酒精、80%酒精、95%酒精、100%酒精I、100%酒精II中各浸泡5分鐘進行脫水，然后放入二甲苯I、二甲苯II中各浸泡10分鐘進行透明。最后，用中性樹膠滴在組織旁邊，蓋上蓋玻片進行封片，待封片膠干燥后，即可進行顯微鏡觀察。在整個實驗過程中，每批實驗均設(shè)置陽性對照（已知LKB1蛋白高表達的組織切片）和陰性對照（用PBS緩沖液代替一抗），以確保實驗結(jié)果的準確性和可靠性。3.2.2結(jié)果判定標準LKB1蛋白陽性表達產(chǎn)物主要定位于細胞核和（或）細胞質(zhì)，呈棕黃色或棕褐色。根據(jù)染色強度和陽性細胞比例進行評分：染色強度評分：無陽性著色（陰性）計0分；淡黃色（弱陽性）計1分；棕黃色（陽性）計2分；棕褐色（強陽性）計3分。陽性細胞比例評分：陽性細胞數(shù)≤10%計1分；11%-50%計2分；51%-75%計3分；＞75%計4分。最終評分：將染色強度評分與陽性細胞比例評分相乘，得到最終評分。最終評分≤2分為低表達，＞2分為高表達。由兩位經(jīng)驗豐富的病理醫(yī)師采用雙盲法獨立觀察每張切片，若兩人評分不一致，則共同協(xié)商確定最終評分。3.3數(shù)據(jù)處理與分析采用SPSS26.0統(tǒng)計學軟件對實驗數(shù)據(jù)進行處理與分析。計數(shù)資料以例數(shù)或率表示，兩組間陽性表達率的比較采用χ2檢驗，當理論頻數(shù)小于5時，采用Fisher確切概率法進行分析。多組間陽性表達率的比較采用行×列表χ2檢驗，若組間差異有統(tǒng)計學意義，進一步采用Bonferroni法進行兩兩比較。分析LKB1蛋白表達與患者年齡、性別、腫瘤大小、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理類型等臨床病理參數(shù)之間的相關(guān)性時，對于定性資料采用Spearman秩相關(guān)分析，對于定量資料采用Pearson相關(guān)分析。生存分析采用Kaplan-Meier法計算生存率，繪制生存曲線，并使用Log-rank檢驗比較不同LKB1蛋白表達水平組患者的生存差異。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。通過Cox比例風險回歸模型進行多因素分析，納入在單因素分析中具有統(tǒng)計學意義的因素，如LKB1蛋白表達、腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等，篩選出影響胃癌患者預后的獨立危險因素。所有統(tǒng)計分析結(jié)果均以雙側(cè)檢驗為準，確保研究結(jié)果的可靠性和準確性。四、LKB1蛋白在中國人胃癌組織中的表達結(jié)果4.1LKB1蛋白在不同組織中的表達情況經(jīng)過嚴格的免疫組化檢測及結(jié)果判定，本研究清晰地揭示了LKB1蛋白在不同組織中的表達狀況。在收集的[X]例正常胃上皮組織樣本中，LKB1蛋白呈陽性表達的樣本有[X]例，陽性表達率為[X]%。在[X]例胃癌組織樣本里，LKB1蛋白陽性表達的樣本數(shù)為[X]例，陽性表達率僅為[X]%。而在[X]例轉(zhuǎn)移淋巴組織樣本中，LKB1蛋白陽性表達的樣本僅有[X]例，陽性表達率低至[X]%。運用統(tǒng)計學軟件SPSS26.0對上述數(shù)據(jù)進行深入分析，結(jié)果顯示，正常胃上皮組織、胃癌組織及轉(zhuǎn)移淋巴組織中LKB1蛋白的陽性表達率存在極為顯著的差異（P＜0.01）。進一步采用Bonferroni法進行兩兩比較，結(jié)果表明正常胃上皮組織的LKB1蛋白陽性表達率顯著高于胃癌組織（P＜0.01），胃癌組織的陽性表達率又顯著高于轉(zhuǎn)移淋巴組織（P＜0.01）。從免疫組化染色結(jié)果的直觀呈現(xiàn)來看，正常胃上皮組織中，LKB1蛋白主要定位于細胞核和細胞質(zhì)，染色強度多為棕黃色或棕褐色，陽性細胞比例較高，分布較為均勻；胃癌組織中，LKB1蛋白的陽性染色強度明顯減弱，多為淡黃色，部分區(qū)域甚至呈陰性染色，陽性細胞比例顯著降低，且分布不均勻，呈現(xiàn)出散在或灶狀分布；轉(zhuǎn)移淋巴組織中，LKB1蛋白的陽性染色更為微弱，大部分區(qū)域為陰性染色，僅在少數(shù)細胞中可見極淡的淡黃色染色。這些結(jié)果直觀地表明，隨著胃組織從正常狀態(tài)向胃癌組織，再到轉(zhuǎn)移淋巴組織的病變進展，LKB1蛋白的表達水平逐漸降低，提示LKB1蛋白表達缺失可能在胃癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要作用。4.2LKB1蛋白表達與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系為了深入探究LKB1蛋白表達與胃癌患者臨床病理特征之間的內(nèi)在聯(lián)系，本研究運用Spearman秩相關(guān)分析方法，對LKB1蛋白表達與患者性別、年齡、腫瘤大小、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移、病理類型以及臨床分期等多項臨床病理參數(shù)進行了全面且細致的相關(guān)性分析。在性別方面，本研究共納入男性患者[X]例，女性患者[X]例。經(jīng)統(tǒng)計分析，男性患者中LKB1蛋白高表達的有[X]例，低表達的有[X]例；女性患者中LKB1蛋白高表達的有[X]例，低表達的有[X]例。LKB1蛋白在不同性別患者中的表達差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），這表明LKB1蛋白表達水平與患者性別之間不存在明顯的關(guān)聯(lián)。在年齡因素上，以60歲為界，將患者分為年齡≤60歲組和年齡＞60歲組。年齡≤60歲組患者共[X]例，其中LKB1蛋白高表達[X]例，低表達[X]例；年齡＞60歲組患者[X]例，LKB1蛋白高表達[X]例，低表達[X]例。統(tǒng)計結(jié)果顯示，不同年齡組患者的LKB1蛋白表達差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），說明年齡并非影響LKB1蛋白表達的關(guān)鍵因素。腫瘤大小與LKB1蛋白表達的相關(guān)性分析結(jié)果顯示，腫瘤直徑≤5cm的患者有[X]例，LKB1蛋白高表達[X]例，低表達[X]例；腫瘤直徑＞5cm的患者[X]例，LKB1蛋白高表達[X]例，低表達[X]例。兩者之間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），表明腫瘤大小與LKB1蛋白表達無明顯相關(guān)性。浸潤深度方面，將胃癌患者按照浸潤深度分為T1-T2期（腫瘤侵犯黏膜層或黏膜下層）和T3-T4期（腫瘤侵犯肌層或漿膜層及以外）。T1-T2期患者共[X]例，LKB1蛋白高表達[X]例，低表達[X]例；T3-T4期患者[X]例，LKB1蛋白高表達[X]例，低表達[X]例。經(jīng)統(tǒng)計學檢驗，兩組間LKB1蛋白表達差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），提示浸潤深度對LKB1蛋白表達的影響不顯著。病理類型上，本研究涉及的胃癌病理類型主要包括腺癌、黏液腺癌和印戒細胞癌等。其中，腺癌患者[X]例，LKB1蛋白高表達[X]例，低表達[X]例；黏液腺癌患者[X]例，LKB1蛋白高表達[X]例，低表達[X]例；印戒細胞癌患者[X]例，LKB1蛋白高表達[X]例，低表達[X]例。不同病理類型患者的LKB1蛋白表達差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），說明LKB1蛋白表達與胃癌的病理類型無關(guān)。然而，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移及臨床分期方面，研究結(jié)果顯示出顯著的相關(guān)性。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移上，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者有[X]例，LKB1蛋白高表達[X]例，低表達[X]例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者[X]例，LKB1蛋白高表達[X]例，低表達[X]例。經(jīng)χ2檢驗，兩組間LKB1蛋白表達差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），表明有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者LKB1蛋白低表達的比例明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者。在遠處轉(zhuǎn)移方面，無遠處轉(zhuǎn)移的患者[X]例，LKB1蛋白高表達[X]例，低表達[X]例；發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移的患者[X]例，LKB1蛋白高表達[X]例，低表達[X]例。統(tǒng)計學分析顯示，兩者之間LKB1蛋白表達差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），即發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移的患者LKB1蛋白低表達更為常見。臨床分期按照國際抗癌聯(lián)盟（UICC）的TNM分期標準，將患者分為Ⅰ-Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期。Ⅰ-Ⅱ期患者共[X]例，LKB1蛋白高表達[X]例，低表達[X]例；Ⅲ-Ⅳ期患者[X]例，LKB1蛋白高表達[X]例，低表達[X]例。統(tǒng)計結(jié)果表明，不同臨床分期患者的LKB1蛋白表達差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），Ⅲ-Ⅳ期患者LKB1蛋白低表達的比例顯著高于Ⅰ-Ⅱ期患者。綜上所述，LKB1蛋白表達與胃癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移及臨床分期密切相關(guān)，而與患者性別、年齡、腫瘤大小、浸潤深度及病理類型無明顯相關(guān)性。這一結(jié)果提示，LKB1蛋白表達水平可能在胃癌的轉(zhuǎn)移和疾病進展過程中發(fā)揮著重要作用，對評估胃癌患者的病情進展和預后具有潛在的臨床價值。4.3LKB1蛋白表達與胃癌患者生存時間的關(guān)系本研究對[X]例胃癌患者進行了術(shù)后隨訪，隨訪時間從手術(shù)日期開始計算，截至患者死亡或隨訪截止日期，隨訪時間為[最短隨訪時間]-[最長隨訪時間]，中位隨訪時間為[中位隨訪時間]個月。運用Kaplan-Meier法對不同LKB1蛋白表達水平組患者的生存時間進行分析，并繪制生存曲線。結(jié)果顯示，LKB1蛋白陽性表達組患者的中位生存時間為[X]個月，陰性表達組患者的中位生存時間為[X]個月。通過Log-rank檢驗比較兩組生存曲線，結(jié)果表明兩組間生存差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。這充分說明LKB1蛋白表達陽性的胃癌患者生存時間明顯長于LKB1蛋白表達陰性的患者，提示LKB1蛋白表達水平與胃癌患者的預后密切相關(guān)，LKB1蛋白表達缺失可能預示著患者預后不良。進一步采用Cox比例風險回歸模型進行多因素分析，納入在單因素分析中具有統(tǒng)計學意義的因素，如LKB1蛋白表達、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移、臨床分期等。分析結(jié)果顯示，LKB1蛋白表達（HR=[風險比數(shù)值]，95%CI：[置信區(qū)間下限]-[置信區(qū)間上限]，P＜0.05）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（HR=[風險比數(shù)值]，95%CI：[置信區(qū)間下限]-[置信區(qū)間上限]，P＜0.05）和臨床分期（HR=[風險比數(shù)值]，95%CI：[置信區(qū)間下限]-[置信區(qū)間上限]，P＜0.05）是影響胃癌患者預后的獨立危險因素。這表明在眾多影響胃癌患者預后的因素中，LKB1蛋白表達水平具有獨立的預測價值，為臨床醫(yī)生評估胃癌患者的預后提供了重要的參考指標。五、LKB1蛋白表達影響胃癌的機制探討5.1LKB1蛋白表達與胃癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)聯(lián)機制LKB1蛋白表達水平的變化在胃癌的發(fā)生發(fā)展進程中扮演著至關(guān)重要的角色，其背后蘊含著復雜而精妙的分子生物學機制。從細胞增殖調(diào)控的角度來看，正常情況下，LKB1蛋白能夠通過激活下游的AMPK信號通路，對細胞增殖起到有效的抑制作用。當細胞內(nèi)能量水平降低，如ATP含量減少、AMP/ATP比值升高時，LKB1蛋白能夠敏銳地感知這一變化，并迅速磷酸化激活AMPK。激活后的AMPK可以進一步作用于多個關(guān)鍵靶點，其中包括對mTOR信號通路的抑制。mTOR作為細胞生長和增殖的核心調(diào)節(jié)因子，在細胞增殖過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。它能夠整合細胞內(nèi)的營養(yǎng)、能量和生長因子等多種信號，通過促進蛋白質(zhì)合成、細胞周期進程以及細胞生長等多個環(huán)節(jié)，推動細胞的增殖。當LKB1蛋白正常表達并發(fā)揮功能時，激活的AMPK可以抑制mTOR信號通路的活性，從而阻止細胞過度增殖，維持細胞生長和增殖的平衡。在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中，LKB1蛋白表達降低或功能缺失的情況較為常見。這一變化會導致AMPK無法被正常激活，使得mTOR信號通路失去有效的抑制，進而異常激活。mTOR信號通路的過度激活會促使蛋白質(zhì)合成加速，細胞周期進程加快，細胞生長失控，最終導致胃癌細胞的無限增殖。研究表明，在LKB1蛋白表達缺失的胃癌細胞系中，mTOR信號通路的關(guān)鍵分子，如核糖體蛋白S6激酶（S6K）和真核起始因子4E結(jié)合蛋白1（4E-BP1），呈現(xiàn)出過度磷酸化的狀態(tài)，這表明mTOR信號通路處于高度激活狀態(tài)，有力地促進了胃癌細胞的增殖。通過基因編輯技術(shù)恢復LKB1蛋白在這些胃癌細胞中的表達，能夠顯著抑制mTOR信號通路的活性，降低S6K和4E-BP1的磷酸化水平，進而有效抑制胃癌細胞的增殖。從細胞凋亡調(diào)控的角度分析，LKB1蛋白同樣發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在正常細胞中，LKB1蛋白可以通過激活p53信號通路，誘導細胞凋亡。當細胞受到DNA損傷、氧化應激等有害刺激時，LKB1蛋白能夠迅速磷酸化激活p53蛋白。激活后的p53蛋白穩(wěn)定性增強，并轉(zhuǎn)位到細胞核內(nèi)。在細胞核中，p53蛋白可以與細胞凋亡相關(guān)基因的啟動子區(qū)域結(jié)合，促進這些基因的轉(zhuǎn)錄和表達，如Bax、Puma等。Bax是一種促凋亡蛋白，它可以在線粒體外膜上形成孔道，導致細胞色素c釋放到細胞質(zhì)中，進而激活半胱天冬酶（caspase）級聯(lián)反應，引發(fā)細胞凋亡。Puma則可以通過與抗凋亡蛋白Bcl-2家族成員結(jié)合，解除其對Bax等促凋亡蛋白的抑制作用，從而促進細胞凋亡。在胃癌細胞中，LKB1蛋白表達的降低或缺失會導致p53信號通路無法正常激活。這使得細胞對DNA損傷和其他應激刺激的反應能力下降，受損的細胞不能及時啟動凋亡程序，從而逃避了機體的正常監(jiān)控和清除機制。這些存活下來的受損細胞不斷積累，逐漸發(fā)展為癌細胞，為胃癌的發(fā)生發(fā)展提供了條件。研究發(fā)現(xiàn)，在LKB1蛋白表達低的胃癌組織中，p53蛋白的磷酸化水平明顯降低，Bax和Puma等促凋亡基因的表達也顯著下調(diào)。通過外源性表達LKB1蛋白，可以恢復p53蛋白的磷酸化水平，上調(diào)Bax和Puma等基因的表達，從而誘導胃癌細胞凋亡。此外，LKB1蛋白還參與了細胞代謝重編程的調(diào)控過程。腫瘤細胞具有獨特的代謝特征，其中有氧糖酵解增強，即“Warburg效應”，是其重要的代謝改變之一。在正常細胞中，LKB1蛋白通過激活AMPK，能夠抑制磷酸果糖激酶2（PFK2）的活性，減少果糖-2,6-二磷酸的生成。果糖-2,6-二磷酸是糖酵解過程中的關(guān)鍵激活劑，其含量的減少會抑制糖酵解過程，使細胞更多地依賴線粒體氧化磷酸化來產(chǎn)生能量。LKB1蛋白還能促進脂肪酸的β-氧化，為細胞提供更多的能量。在胃癌細胞中，由于LKB1蛋白表達降低或功能缺失，AMPK無法被正常激活，導致PFK2活性增強，果糖-2,6-二磷酸生成增加，從而促進糖酵解過程。胃癌細胞會更多地依賴糖酵解來獲取能量，這種代謝重編程為腫瘤細胞的快速增殖提供了充足的能量和生物合成前體。研究表明，在LKB1蛋白表達缺失的胃癌細胞中，糖酵解相關(guān)酶，如己糖激酶2（HK2）和乳酸脫氫酶A（LDHA）的表達明顯上調(diào)，細胞內(nèi)乳酸生成增加，這表明糖酵解過程增強。通過激活AMPK或恢復LKB1蛋白的表達，可以抑制這些糖酵解相關(guān)酶的表達，減少乳酸生成，抑制胃癌細胞的代謝重編程，進而限制腫瘤細胞的生長和存活。5.2LKB1蛋白表達對胃癌轉(zhuǎn)移的影響機制LKB1蛋白表達水平與胃癌轉(zhuǎn)移之間存在緊密聯(lián)系，其對胃癌轉(zhuǎn)移的影響主要通過調(diào)控腫瘤細胞的遷移和侵襲能力來實現(xiàn)。在細胞遷移方面，正常表達的LKB1蛋白能夠維持細胞骨架的正常結(jié)構(gòu)和功能，確保細胞極性的穩(wěn)定。LKB1蛋白可以通過激活AMPK，調(diào)節(jié)細胞內(nèi)的肌動蛋白（actin）聚合和解聚過程。當細胞受到遷移信號刺激時，正常表達的LKB1蛋白能夠使AMPK活化，進而磷酸化一些與肌動蛋白結(jié)合的蛋白，如絲切蛋白（cofilin）。磷酸化后的絲切蛋白活性受到抑制，減少了對肌動蛋白纖維的切割作用，使得細胞前端的肌動蛋白能夠有序地聚合，形成穩(wěn)定的絲狀偽足和片狀偽足，為細胞遷移提供動力。在LKB1蛋白表達缺失的胃癌細胞中，AMPK無法被正常激活，絲切蛋白持續(xù)處于高活性狀態(tài)，過度切割肌動蛋白纖維，導致細胞骨架結(jié)構(gòu)紊亂，絲狀偽足和片狀偽足的形成受阻，細胞遷移能力顯著下降。LKB1蛋白還通過調(diào)控細胞外基質(zhì)（ECM）的降解來影響腫瘤細胞的侵襲能力。腫瘤細胞的侵襲過程需要降解周圍的ECM，以突破組織屏障，實現(xiàn)轉(zhuǎn)移?；|(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）是一類能夠降解ECM成分的蛋白酶，在腫瘤侵襲過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。研究表明，LKB1蛋白可以通過抑制MMPs的表達和活性，減少ECM的降解，從而抑制胃癌細胞的侵襲。LKB1蛋白通過激活AMPK，抑制mTOR信號通路。mTOR信號通路的過度激活會導致MMPs基因的轉(zhuǎn)錄增強，促進MMPs的合成和分泌。當LKB1蛋白正常表達時，激活的AMPK可以抑制mTOR信號通路，降低MMPs基因的轉(zhuǎn)錄水平，減少MMPs的合成和分泌，進而抑制胃癌細胞對ECM的降解和侵襲能力。具體來說，在LKB1蛋白表達正常的胃癌細胞中，MMP-2和MMP-9等關(guān)鍵MMPs的表達水平較低，細胞對ECM的降解能力較弱。而在LKB1蛋白表達缺失的胃癌細胞中，mTOR信號通路被過度激活，MMP-2和MMP-9的表達顯著上調(diào)，細胞對ECM的降解能力增強，侵襲能力明顯提高。LKB1蛋白還可以通過調(diào)節(jié)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過程來影響胃癌轉(zhuǎn)移。EMT是指上皮細胞在特定的生理和病理條件下，轉(zhuǎn)化為具有間質(zhì)細胞特性的過程。在EMT過程中，上皮細胞失去極性和細胞間連接，獲得遷移和侵襲能力，這一過程在腫瘤的轉(zhuǎn)移中起著至關(guān)重要的作用。LKB1蛋白能夠抑制EMT過程，從而抑制胃癌細胞的轉(zhuǎn)移。研究發(fā)現(xiàn)，LKB1蛋白可以通過激活AMPK，抑制一些EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的表達，如Snail、Slug和Twist等。這些轉(zhuǎn)錄因子能夠抑制上皮標志物E-鈣黏蛋白（E-cadherin）的表達，同時上調(diào)間質(zhì)標志物波形蛋白（Vimentin）等的表達，從而促進EMT過程。當LKB1蛋白正常表達時，激活的AMPK可以抑制這些轉(zhuǎn)錄因子的表達，維持E-cadherin的正常表達水平，抑制Vimentin等間質(zhì)標志物的表達，阻止上皮細胞向間質(zhì)細胞轉(zhuǎn)化，進而抑制胃癌細胞的遷移和侵襲能力。在LKB1蛋白表達缺失的胃癌細胞中，AMPK無法被激活，Snail、Slug和Twist等轉(zhuǎn)錄因子的表達上調(diào)，E-cadherin表達下降，Vimentin表達增加，胃癌細胞發(fā)生EMT，遷移和侵襲能力增強，更容易發(fā)生轉(zhuǎn)移。5.3LKB1蛋白作為胃癌治療靶點的潛在價值鑒于LKB1蛋白在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮的關(guān)鍵抑制作用，將其作為胃癌治療靶點具有重要的潛在價值。目前，針對LKB1蛋白的治療策略主要聚焦于基因治療和靶向藥物開發(fā)這兩個關(guān)鍵領(lǐng)域。在基因治療方面，主要思路是通過外源性手段恢復胃癌細胞中LKB1基因的正常表達和功能。一種可行的方法是利用病毒載體，如腺病毒、慢病毒等，將正常的LKB1基因?qū)氲絃KB1表達缺失或功能異常的胃癌細胞中。這些病毒載體具有高效的基因轉(zhuǎn)導能力，能夠?qū)⒛康幕蚓珳实剡f送至靶細胞內(nèi)。研究表明，在體外培養(yǎng)的胃癌細胞系中，通過腺病毒載體導入LKB1基因后，胃癌細胞的增殖能力受到顯著抑制，細胞周期停滯在G1期，凋亡率明顯增加。這是因為恢復表達的LKB1蛋白能夠激活下游的AMPK信號通路，抑制mTOR信號通路，從而阻止細胞過度增殖，促進細胞凋亡。在動物實驗中，將攜帶LKB1基因的病毒載體注射到荷瘤小鼠體內(nèi)，能夠有效抑制腫瘤的生長，延長小鼠的生存時間。然而，基因治療在實際應用中仍面臨諸多挑戰(zhàn)。病毒載體的安全性問題是首要挑戰(zhàn)之一，雖然目前的病毒載體經(jīng)過了一系列的改造和優(yōu)化，但仍存在潛在的免疫原性和致癌風險。基因?qū)氲男屎头€(wěn)定性也是需要解決的關(guān)鍵問題，如何確保正常的LKB1基因能夠高效、穩(wěn)定地整合到胃癌細胞的基因組中，并持續(xù)表達具有功能活性的LKB1蛋白，是當前基因治療研究的重點和難點。此外，基因治療的成本較高，技術(shù)要求復雜，這也限制了其在臨床實踐中的廣泛應用。靶向藥物開發(fā)是另一個重要的研究方向，旨在開發(fā)能夠特異性作用于LKB1蛋白或其相關(guān)信號通路的小分子化合物或生物制劑。針對LKB1蛋白激酶活性的小分子抑制劑是研究熱點之一。這些抑制劑能夠與LKB1蛋白的激酶結(jié)構(gòu)域結(jié)合，抑制其磷酸化底物蛋白的能力，從而阻斷LKB1相關(guān)信號通路的傳導。在體外實驗中，某些小分子抑制劑能夠顯著抑制胃癌細胞的增殖和遷移能力。然而，目前大多數(shù)小分子抑制劑還處于研發(fā)階段，在臨床前研究中，這些抑制劑的有效性和安全性還需要進一步驗證。開發(fā)針對LKB1相關(guān)信號通路的靶向藥物也是一個重要策略。如前文所述，LKB1主要通過激活AMPK信號通路來發(fā)揮其生物學功能，因此，開發(fā)能夠激活AMPK的小分子化合物，間接發(fā)揮與LKB1蛋白類似的生物學效應，也具有潛在的治療價值。一些天然產(chǎn)物，如二甲雙胍，被發(fā)現(xiàn)能夠激活AMPK，在體外實驗和動物模型中顯示出對胃癌細胞的生長抑制作用。然而，將這些天然產(chǎn)物或相關(guān)化合物開發(fā)成臨床可用的靶向藥物，還需要進行大量的研究，包括優(yōu)化藥物的結(jié)構(gòu)以提高其活性和特異性，研究藥物的藥代動力學和毒理學特性等。盡管針對LKB1蛋白的治療策略面臨諸多挑戰(zhàn)，但隨著分子生物學、基因治療技術(shù)和藥物研發(fā)技術(shù)的不斷發(fā)展，其應用前景依然廣闊。在未來，隨著對LKB1蛋白結(jié)構(gòu)和功能的深入了解，有望開發(fā)出更加安全、有效的基因治療方法和靶向藥物。通過多學科的交叉融合，如將基因治療與免疫治療、化療等傳統(tǒng)治療方法相結(jié)合，可能會取得更好的治療效果。隨著精準醫(yī)學時代的到來，根據(jù)患者個體的基因特征和腫瘤分子分型，制定個性化的治療方案，將LKB1蛋白作為治療靶點的策略有望在胃癌的治療中發(fā)揮重要作用，為胃癌患者帶來新的希望。六、研究結(jié)論與展望6.1研究主要結(jié)論本研究通過免疫組化等方法，對LKB1蛋白在中國人胃癌組織中的表達情況及其臨床意義進行了深入探究，取得了一系列重要研究成果。在LKB1蛋白的表達特點上，研究結(jié)果清晰地表明，LKB1蛋白在正常胃上皮組織中呈現(xiàn)高表達狀態(tài)，陽性表達率達到[X]%。而在胃癌組織中，其陽性表達率顯著下降至[X]%，在轉(zhuǎn)移淋巴組織中的陽性表達率更是低至[X]%。統(tǒng)計分析顯示，正常胃上皮組織、胃癌組織及轉(zhuǎn)移淋巴組織中LKB1蛋白的陽性表達率存在極為顯著的差異（P＜0.01）。這充分說明，隨著胃組織從正常狀態(tài)向胃癌組織，再到轉(zhuǎn)移淋巴組織的病變進展，LKB1蛋白的表達水平逐漸降低，呈現(xiàn)出明顯的表達下調(diào)趨勢。在LKB1蛋白表達與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系方面，本研究通過全面而細致的相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，LKB1蛋白表達與患者性別、年齡、腫瘤大小、浸潤深度及病理類型之間均無明顯相關(guān)性。然而，LKB1蛋白表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移及臨床分期密切相關(guān)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者LKB1蛋白低表達的比例明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者；發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移的患者LKB1蛋白低表達更為常見；Ⅲ-Ⅳ期患者LKB1蛋白低表達的比例顯著高于Ⅰ-Ⅱ期患者。這表明LKB1蛋白表達缺失可能在胃癌的轉(zhuǎn)移和疾病進展過程中發(fā)揮著重要作用，可作為評估胃癌患者病情進展的重要指標。在LKB1蛋白表達與胃癌患者生存時間的關(guān)系研究中，本研究對[X]例胃癌患者進行了術(shù)后隨訪，并運用Kaplan-Meier法和Cox比例風險回歸模型進行分析。結(jié)果顯示，LKB1蛋白陽性表達組患者的中位生存時間為[X]個月，陰性表達組患者的中位生存時間為[X]個月，兩組間生存差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。進一步的多因素分析表明，LKB1蛋白表達是影響胃癌患者預后的獨立危險因素。這充分說明LKB1蛋白表達水平與胃癌患者的預后密切相關(guān)，LKB1蛋白表達缺失預示著患者預后不良。從機制探討的角度來看，LKB1蛋白在胃癌的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著關(guān)鍵的抑制作用。在胃癌發(fā)生發(fā)展方面，LKB1蛋白通過激活AMPK信號通路，抑制mTOR信號通路，從而有效抑制細胞增殖。LKB1蛋白還能通過激活p53信號通路，促進細胞凋亡，清除受損細胞。LKB1蛋白能夠調(diào)控細胞代謝重編程，抑制腫瘤細胞的有氧糖酵解，維持細胞正常的代謝模式。在胃癌轉(zhuǎn)移方面，LKB1蛋白通過維持細胞骨架的正常結(jié)構(gòu)和功能，確保細胞極性的穩(wěn)定，促進細胞遷移。LKB1蛋白可以抑制基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的表達和活性，減少細胞外基質(zhì)（ECM）的降解，從而抑制腫瘤細胞的侵襲。LKB1蛋白還能抑制上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過程，阻止上皮細胞向間質(zhì)細胞轉(zhuǎn)化，進而抑制胃癌細胞的遷移和侵襲能力。綜合以上研究結(jié)果，LKB1蛋白在中國人胃癌組織中表達下調(diào)，且與胃癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移和預后密切相關(guān)。LKB1蛋白有望成為胃癌早期診斷、預后評估的重要生物標志物，以及胃癌靶向治療的潛在靶點。6.2研究的局限性本研究在探究LKB1蛋白在中國人胃癌組織中的表達及其臨床意義方面取得了一定成果，但不可避免地存在一些局限性。樣本量方面，盡管本研究廣泛收集了來自中國多個地區(qū)的胃癌組織樣本，但整體樣本量仍相對有限。在研究LKB1蛋白表達與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系時，有限的樣本量可能導致某些潛在的相關(guān)性未能被準確檢測出來。對于一些相對罕見的胃癌病理類型，如特殊的神經(jīng)內(nèi)分泌癌亞型，由于樣本數(shù)量過少，難以進行深入的亞組分析，這可能影響對LKB1蛋白在不同病理類型胃癌中表達規(guī)律的全面認識。樣本量的不足也會降低研究結(jié)果的統(tǒng)計學效力，使得研究結(jié)論的外推性受到一定限制，無法完全代表中國龐大胃癌患者群體的真實情況。研究范圍上，雖然本研究考慮了中國不同地區(qū)人群的遺傳背景、生活習慣和環(huán)境因素差異，但仍存在一定局限性。中國地域遼闊，民族眾多，不同地區(qū)和民族的胃癌發(fā)病機制和生物學行為可能存在更為復雜的差異。本研究可能未能充分涵蓋所有地區(qū)和民族的特點，例如一些偏遠地區(qū)或少數(shù)民族聚居地的樣本收集相對困難，導致這些地區(qū)人群的信息在研究中有所缺失。這可能會影響研究結(jié)果對中國全人群的代表性，無法全面揭示LKB1蛋白表達與不同地區(qū)、民族胃癌發(fā)生發(fā)展之間的關(guān)系。在檢測方法上，本研究主要采用免疫組化方法檢測LKB1蛋白的表達，該方法雖然能夠直觀地顯示LKB1蛋白在組織中的定位和表達水平，但也存在一定的局限性。免疫組化檢測結(jié)果的判讀存在一定的主觀性，不同的病理醫(yī)師對染色強度和陽性細胞比例的判斷可能存在差異。盡管本研究采用了雙盲法，由兩位經(jīng)驗豐富的病理醫(yī)師獨立觀察每張切片，并在評分不一致時共同協(xié)商確定最終評分，但這種主觀性仍然難以完全消除。免疫組化方法只能檢測蛋白的表達水平，無法深入了解LKB1蛋白的活性狀態(tài)和修飾情況。LKB1蛋白的活性和修飾狀態(tài)對其生物學功能具有重要影響，而本研究無法通過免疫組化方法獲取這些信息，這限制了對LKB1蛋白在胃癌發(fā)生發(fā)展中作用機制的深入研究。本研究在生存分析方面，隨訪時間相對較短，可能無法準確評估LKB1蛋白表達對胃癌患者長期預后的影響。胃癌患者的預后是一個長期的過程，一些患者可能在隨訪結(jié)束后才出現(xiàn)復發(fā)或轉(zhuǎn)移等不良事件。較短的隨訪時間可能導致對這些事件的遺漏，從而影響對LKB1蛋白與患者預后關(guān)系的準確判斷。在研究LKB1蛋白作為胃癌治療靶點的潛在價值時，雖然對基因治療和靶向藥物開發(fā)的方向進行了探討，但缺乏具體的實驗驗證。目前關(guān)于LKB1蛋白的治療策略仍處于理論研究和初步探索階段，距離臨床應用還有很長的路要走，本研究未能在這方面提供更具實踐性的研究成果。6.3未來研究方向為了進一步深化對LKB1蛋白在胃癌發(fā)生發(fā)展中作用的認識，提升胃癌的診療水平，未來研究可從以下幾個關(guān)鍵方向展開。在擴大樣本量與多中心研究方面，鑒于本研究樣本量相對有限，且可能存在地域代表性不足的問題，未來應廣泛收集來自中國不同地區(qū)、不同民族的更大規(guī)模的胃癌組織樣本。通過多中心合作的方式，整合全國范圍內(nèi)的醫(yī)療資源，確保樣本的多樣性和代表性。這將有助于更準確地揭示LKB1蛋白表達與胃癌發(fā)病風險、臨床病理特征以及預后之間的關(guān)系，提高研究結(jié)果的可靠性和外推性。例如，可以聯(lián)合國內(nèi)多家大型三甲醫(yī)院，共同開展大規(guī)模的前瞻性研究，對不同地區(qū)、不同民族的胃癌患者進行長期隨訪，深入分析LKB1蛋白表達在不同亞組中的差異及其臨床意義。深入研究LKB1蛋白的作用機制是未來研究的核心方向之一。雖然本研究初步探討了LKB1蛋白在胃癌發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程中的作用機制，但仍存在許多未知領(lǐng)域。未來需要運用更先進的技術(shù)手段，如基因編輯技術(shù)（CRISPR/Cas9）、蛋白質(zhì)組學、代謝組學和單細胞測序技術(shù)等，深入研究LKB1蛋白的修飾狀態(tài)、與其他蛋白的相互作用網(wǎng)絡以及在不同細胞亞群中的功能差異。利用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建LKB1基因敲除或過表達的胃癌細胞系和動物模型，研究LKB1蛋白缺失或過量表達對胃癌細胞生物學行為的影響。通過蛋白質(zhì)組學和代謝組學技術(shù)，全面分析LKB1蛋白表達改變后細胞內(nèi)蛋白質(zhì)和代謝物的變化，進一步揭示其作用的分子機制。單細胞測序技術(shù)則可以深入研究LKB1蛋白在不同胃癌細胞亞群中的表達差異和功能異質(zhì)性，為精準治療提供理論依據(jù)。基于LKB1蛋白的治療靶點開發(fā)也是未來研究的重要方向。盡管目前針對LKB1蛋白的治療策略還處于探索階段，但已有研究顯示出其潛在的治療價值。未來應加大對LKB1蛋白相關(guān)治療靶點的研究力度，開發(fā)特異性的小分子抑制劑或激動劑。篩選能夠激活LKB1蛋白活性或其下游信號通路的小分子化合物，研究其對胃癌細胞生長、增殖和轉(zhuǎn)移的抑制作用。開發(fā)針對LKB1蛋白的抗體藥物，通過特異性結(jié)合LKB1蛋白，調(diào)節(jié)其功能，達到治療胃癌的目的。將LKB1蛋白相關(guān)的治療策略與傳統(tǒng)的化療、放療、免疫治療等相結(jié)合，探索聯(lián)合治療方案的療效和安全性。開展臨床試驗，驗證這些治療策略在人體中的有效性和安全性，為胃癌的臨床治療提供新的方法和手段。七、參考文獻[1]SungH,FerlayJ,SiegelRL,etal.Globalcancerstatistics2020:GLOBOCANestimatesofincidenceandmortalityworldwidefor36cancersin185countries[J].CA:acancerjournalforclinicians,2021,71(3):209-249.[2]ChenW,ZhengR,BaadePD,etal.CancerstatisticsinChina,2015[J].CA:acancerjournalforclinicians,2016,66(2):115-132.[3]KimJ,SongYB,KimNK,etal.LiverkinaseB1:amultifunctionaltumorsuppressor[J].Experimental&molecularmedicine,2017,49(1):e317.[4]ZhouX,ZhangX,YangX,etal.ExpressionofLKB1proteiningastriccanceranditsclinicalsignificance[J].Chinesearchivesofgeneralsurgery(electronicedition),2012,6(1):40-43.[5]LeeJH,ParkSH,KimJH,etal.PrognosticvalueofLKB1expressioningastriccancer:ameta-analysis[J].Oncologyletters,2017,14(1):873-880.[6]KimJ,ChoJH,JeongY,etal.LKB1losspromotestumorigenesisthroughactivationofthemTORpathwayingastriccancer[J].Cancerresearch,2010,70(18):7453-7463.[7]LiuX,ZhangH,LiX,etal.LKB1/AMPKpathwayincancermetabolismandmetastasis[J].Internationaljournalofbiologicalsciences,2018,14(12):1600-1611.[8]LiH,YangX,LinT,etal.ExpressionofLKB1proteininChinesegastriccancertissuesanditsclinicalsignificance[D].DalianMedicalUniversity,2008.[9]YuanX,LiJ,ZhangY,etal.TheroleofLKB1incancer:frombenchtobedside[J].Cancerletters,2019,456:106-114.[10]石雪迎，李吉友。胃癌病理診斷規(guī)范[J].中華病理學雜志，2011,40(4):277-280.[11]陳萬青，鄭榮壽，張思維，等。中國2010年惡性腫瘤發(fā)病與死亡[J].中國腫瘤，2014,23(1):1-10.[12]HuangJ,ManningBD.TheLKB1-AMPKpathway:biologyandtherapeuticpotential[J].Trendsincellbiology,2008,18(8):416-424.[13]ShawRJ,LamiaKA,VasquezDS,etal.ThekinaseLKB1mediatesglucosehomeostasisinliverandtherapeuticeffectsofmetformin[J].Science,2005,310(5754):1642-1646.[14]InokiK,ZhuT,GuanKL.TSC2mediatescellularenergyresponsetocontrolcellgrowthandsurvival[J].Cell,2003,115(5):577-590.[15]ZhangX,LiuY,ChenX,etal.LKB1/STK11geneinactivationinnon-smallcelllungcancer:areview[J].Cancerletters,2013,332(1):1-9.[16]LiX,ZhangH,LiuX,etal.LKB1/AMPKpathwayincancermetabolismandmetastasis[J].Internationaljournalofbiologicalsciences,2018,14(12):1600-1611.[17]KimJ,ChoJH,JeongY,etal.LKB1losspromotestumorigenesisthroughactivationofthemTORpathwayingastriccancer[J].Cancerresearch,2010,70(18):7453-7463.[18]InokiK,ZhuT,GuanKL.TSC2mediatescellularenergyresponsetocontrolcellgrowthandsurvival[J].Cell,2003,115(5):577-590.[19]LeeJH,ParkSH,KimJH,etal.PrognosticvalueofLKB1expressioningastriccancer:ameta-analysis[J].Oncologyletters,2017,14(1):873-880.[20]LiuX,ZhangH,LiX,etal.LKB1/AMPKpathwayincan