BRCA1與Ki-67在原發(fā)性上皮性卵巢癌中的表達(dá)特征及臨床意義探究一、引言1.1研究背景原發(fā)性上皮性卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)中最為常見且危害極大的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅著女性的生命健康。在全球范圍內(nèi)，卵巢癌的發(fā)病率在女性惡性腫瘤中位居前列，而原發(fā)性上皮性卵巢癌又占據(jù)了卵巢癌病例的大部分。據(jù)世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的全球癌癥統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，每年新診斷的卵巢癌病例數(shù)眾多，且其死亡率在婦科惡性腫瘤中居高不下。在我國(guó)，卵巢癌發(fā)病率為7.95/10萬，死亡率為3.44/10萬，上皮性卵巢癌約占卵巢惡性腫瘤的90%。由于卵巢位于盆腔深處，起病隱匿，早期常無特殊癥狀，70%的上皮性卵巢癌確診時(shí)已屬晚期，3年內(nèi)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率在70%左右，5年生存率III期約40%，IV期約19%。卵巢癌的高度異質(zhì)性和化療耐藥性是導(dǎo)致其高致死率的主要原因。高度異質(zhì)性意味著卵巢癌在細(xì)胞形態(tài)、基因表達(dá)、生物學(xué)行為等方面存在極大的差異，這使得每一位患者的病情都具有獨(dú)特性，增加了診斷和治療的難度。而化療耐藥性則是限制治療效果和提高生存率的主要障礙。大部分卵巢癌患者在初次化療時(shí)對(duì)藥物有一定的反應(yīng)，但隨著治療的進(jìn)行，腫瘤細(xì)胞往往會(huì)逐漸產(chǎn)生耐藥性，導(dǎo)致化療藥物無法有效地殺死癌細(xì)胞，腫瘤復(fù)發(fā)和進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)大大增加。目前，臨床上對(duì)于原發(fā)性上皮性卵巢癌的治療主要包括手術(shù)切除、化療和放療等手段。手術(shù)切除是治療的基礎(chǔ)，通過手術(shù)盡可能地切除腫瘤組織，但對(duì)于晚期患者，由于腫瘤的廣泛轉(zhuǎn)移，很難實(shí)現(xiàn)完全切除?；焺t是術(shù)后輔助治療的重要手段，常用的化療藥物包括鉑類、紫杉醇等，但化療耐藥問題嚴(yán)重影響了治療效果。放療在卵巢癌的治療中應(yīng)用相對(duì)較少，主要用于局部控制腫瘤或緩解癥狀。因此，深入研究卵巢癌的分子機(jī)制，尋找新的治療靶點(diǎn)，對(duì)于改善卵巢癌患者的治療效果和預(yù)后具有至關(guān)重要的意義。在眾多與腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)的分子中，BRCA1和Ki-67逐漸引起了研究者的關(guān)注。BRCA1是乳腺癌基因1的縮寫，它編碼一個(gè)重要的蛋白，有助于維持基因組穩(wěn)定性，缺失或突變會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞DNA損傷修復(fù)的紊亂。Ki-67是一種與細(xì)胞增殖相關(guān)的核抗原，其抗體的表達(dá)范圍覆蓋除G0期以外的各增殖周期細(xì)胞，通常用于評(píng)估腫瘤細(xì)胞的增殖率。近年來，BRCA1和Ki-67在卵巢癌的研究方面受到了廣泛關(guān)注，對(duì)它們的深入研究可能為原發(fā)性上皮性卵巢癌的診治帶來新的突破。1.2研究目的本研究旨在深入探討B(tài)RCA1和Ki-67在原發(fā)性上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)情況，分析其表達(dá)水平與患者臨床病理參數(shù)（如年齡、臨床分期、病理類型、組織分級(jí)等）之間的關(guān)聯(lián)，以及二者聯(lián)合檢測(cè)在原發(fā)性上皮性卵巢癌診斷、治療效果評(píng)估和預(yù)后預(yù)測(cè)方面的潛在價(jià)值，為原發(fā)性上皮性卵巢癌的臨床診療提供新的理論依據(jù)和思路。具體而言，通過檢測(cè)BRCA1和Ki-67在卵巢癌組織中的表達(dá)，明確其在卵巢癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用機(jī)制；通過分析它們與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性，為臨床醫(yī)生判斷病情、制定個(gè)性化治療方案提供參考；通過研究二者聯(lián)合檢測(cè)的價(jià)值，探索更有效的卵巢癌診斷和預(yù)后評(píng)估方法，以期提高卵巢癌患者的生存率和生活質(zhì)量。1.3研究意義原發(fā)性上皮性卵巢癌嚴(yán)重威脅女性健康，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，早期診斷困難，治療效果和預(yù)后不佳。本研究聚焦BRCA1和Ki-67在原發(fā)性上皮性卵巢癌中的表達(dá)，對(duì)揭示卵巢癌發(fā)病機(jī)制、提升臨床診療水平具有重要意義。在理論研究方面，有助于進(jìn)一步明確卵巢癌的分子生物學(xué)機(jī)制。BRCA1基因編碼的蛋白參與DNA損傷修復(fù)和細(xì)胞周期調(diào)控，維持基因組穩(wěn)定性。其缺失或突變會(huì)導(dǎo)致DNA損傷修復(fù)紊亂，增加細(xì)胞癌變風(fēng)險(xiǎn)。Ki-67作為細(xì)胞增殖相關(guān)核抗原，能反映腫瘤細(xì)胞增殖活性。深入研究二者在卵巢癌中的表達(dá)及相互作用，可從分子層面揭示卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過程，豐富對(duì)卵巢癌發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)，為后續(xù)基礎(chǔ)研究奠定基礎(chǔ)。在臨床實(shí)踐方面，本研究具有多方面應(yīng)用價(jià)值。在早期診斷方面，目前卵巢癌早期癥狀隱匿，缺乏有效的篩查手段，多數(shù)患者確診時(shí)已屬晚期。若能證實(shí)BRCA1和Ki-67的異常表達(dá)與卵巢癌早期發(fā)生密切相關(guān)，可將其作為潛在生物標(biāo)志物，聯(lián)合其他檢測(cè)方法，提高卵巢癌早期診斷率，為患者爭(zhēng)取早期治療機(jī)會(huì)。在治療方案選擇方面，不同患者對(duì)治療的反應(yīng)存在差異，探尋BRCA1和Ki-67表達(dá)與卵巢癌對(duì)化療藥物敏感性的關(guān)系，有助于醫(yī)生根據(jù)患者分子特征制定個(gè)體化治療方案。對(duì)于BRCA1缺陷的患者，可考慮使用PARP抑制劑等靶向藥物；對(duì)于Ki-67高表達(dá)、增殖活性強(qiáng)的腫瘤，可加強(qiáng)化療強(qiáng)度或聯(lián)合其他治療手段。在預(yù)后評(píng)估方面，準(zhǔn)確判斷卵巢癌患者預(yù)后對(duì)制定隨訪計(jì)劃和后續(xù)治療策略至關(guān)重要。通過分析BRCA1和Ki-67表達(dá)與患者生存率、復(fù)發(fā)率等預(yù)后指標(biāo)的關(guān)聯(lián)，可建立有效的預(yù)后評(píng)估模型，幫助醫(yī)生更準(zhǔn)確預(yù)測(cè)患者預(yù)后，對(duì)高風(fēng)險(xiǎn)患者加強(qiáng)監(jiān)測(cè)和干預(yù)，改善患者生存狀況。綜上所述，本研究對(duì)原發(fā)性上皮性卵巢癌的理論研究和臨床實(shí)踐具有重要意義，有望為卵巢癌患者帶來更好的診療效果和生存質(zhì)量。二、材料與方法2.1實(shí)驗(yàn)材料2.1.1研究對(duì)象選取[具體醫(yī)院名稱]在[具體時(shí)間段]收治的原發(fā)性上皮性卵巢癌患者[X]例。納入標(biāo)準(zhǔn)為：經(jīng)手術(shù)病理確診為原發(fā)性上皮性卵巢癌；術(shù)前未接受化療、放療或其他抗腫瘤治療；患者簽署知情同意書，自愿參與本研究。排除標(biāo)準(zhǔn)包括：合并其他惡性腫瘤；存在嚴(yán)重的肝、腎功能障礙或其他系統(tǒng)性疾病，影響研究結(jié)果的判斷；病理資料不完整。同時(shí)，選取同期因良性卵巢疾病行手術(shù)切除的卵巢組織[X]例作為對(duì)照組，如卵巢囊腫、卵巢良性畸胎瘤等患者的正常卵巢組織。這些對(duì)照樣本同樣要求患者無其他惡性腫瘤病史，且手術(shù)前未接受可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的治療。2.1.2主要試劑和儀器免疫組化實(shí)驗(yàn)所需的主要試劑包括：鼠抗人BRCA1單克隆抗體、兔抗人Ki-67多克隆抗體，購(gòu)自[具體公司1]；即用型二抗試劑盒（包含辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗及其他配套試劑），購(gòu)自[具體公司2]；DAB顯色試劑盒，購(gòu)自[具體公司3]；蘇木精染液、伊紅染液，用于復(fù)染細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)，購(gòu)自[具體公司4]；檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0），用于抗原修復(fù)，購(gòu)自[具體公司5]。實(shí)驗(yàn)中使用的主要儀器有：石蠟切片機(jī)，型號(hào)為[具體型號(hào)1]，產(chǎn)自[具體廠家1]，用于將石蠟包埋的組織切成薄片；自動(dòng)脫水機(jī)，型號(hào)為[具體型號(hào)2]，產(chǎn)自[具體廠家2]，用于對(duì)組織樣本進(jìn)行脫水處理；恒溫烤箱，型號(hào)為[具體型號(hào)3]，產(chǎn)自[具體廠家3]，用于烘烤切片，增強(qiáng)組織與玻片的黏附力；光學(xué)顯微鏡，型號(hào)為[具體型號(hào)4]，產(chǎn)自[具體廠家4]，配備專業(yè)的圖像采集系統(tǒng)，用于觀察免疫組化染色結(jié)果并拍照記錄；微量移液器，品牌為[具體品牌]，規(guī)格包括10μL、100μL、1000μL等，用于準(zhǔn)確移取各種試劑。2.2實(shí)驗(yàn)方法2.2.1組織標(biāo)本采集與處理手術(shù)過程中，迅速獲取原發(fā)性上皮性卵巢癌患者的腫瘤組織標(biāo)本以及對(duì)照組的正常卵巢組織標(biāo)本。所取標(biāo)本大小約為1cm×1cm×0.5cm，以確保足夠的組織用于后續(xù)檢測(cè)。獲取后的標(biāo)本立即放入10%中性福爾馬林溶液中進(jìn)行固定，固定時(shí)間為12-24小時(shí)，以防止組織自溶和腐敗，保持組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)和抗原性。固定完成后，將組織依次放入不同濃度的酒精（70%、80%、90%、95%、100%）中進(jìn)行脫水處理，每個(gè)濃度的酒精中浸泡時(shí)間為1-2小時(shí)，使組織中的水分被酒精充分置換。隨后，將脫水后的組織置于二甲苯中進(jìn)行透明處理，每次浸泡30分鐘，共進(jìn)行2-3次，使組織變得透明，便于后續(xù)石蠟的浸入。接著，將透明后的組織放入融化的石蠟中進(jìn)行包埋，包埋過程在60℃左右的恒溫條件下進(jìn)行，使石蠟充分滲透到組織中，待石蠟?zāi)毯?，形成含有組織的石蠟塊。使用石蠟切片機(jī)將石蠟塊切成厚度為4μm的薄片，將切好的薄片展平后，貼附在經(jīng)多聚賴氨酸處理的載玻片上，以增強(qiáng)組織與玻片的黏附力，防止在后續(xù)實(shí)驗(yàn)過程中組織脫落。將貼有組織切片的載玻片放入60℃恒溫烤箱中烘烤1-2小時(shí)，進(jìn)一步增強(qiáng)組織與玻片的結(jié)合。2.2.2免疫組化檢測(cè)BRCA1和Ki-67表達(dá)將制備好的組織切片從烤箱中取出，冷卻至室溫后，放入二甲苯中進(jìn)行脫蠟處理，每次10分鐘，共進(jìn)行3次，以去除組織中的石蠟。脫蠟后的切片依次放入100%、95%、90%、80%、70%的酒精中進(jìn)行梯度水化，每個(gè)濃度的酒精中浸泡5分鐘，使組織恢復(fù)到含水狀態(tài)。將水化后的切片放入檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）中，采用微波抗原修復(fù)法進(jìn)行抗原修復(fù)。將切片置于微波爐中，先用高火加熱至緩沖液沸騰，然后轉(zhuǎn)用中火維持沸騰狀態(tài)10-15分鐘，使被封閉的抗原決定簇重新暴露出來，以提高抗原與抗體的結(jié)合能力。修復(fù)完成后，取出切片，自然冷卻至室溫，用PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘，以去除緩沖液和雜質(zhì)。在切片上滴加5%牛血清白蛋白（BSA）封閉液，室溫下孵育30分鐘，以封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)，減少背景染色。孵育結(jié)束后，傾去封閉液，不洗，直接在切片上滴加適當(dāng)稀釋的鼠抗人BRCA1單克隆抗體（稀釋比例根據(jù)抗體說明書確定，一般為1:50-1:100），將切片放入濕盒中，4℃冰箱孵育過夜，使抗體與組織中的BRCA1抗原充分結(jié)合。第二天，從冰箱中取出切片，用PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘，以去除未結(jié)合的一抗。在切片上滴加適量的即用型二抗（辣根過氧化物酶標(biāo)記），室溫下孵育30-45分鐘，使二抗與一抗特異性結(jié)合，形成抗原-一抗-二抗復(fù)合物。孵育結(jié)束后，再次用PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。將DAB顯色試劑盒中的A、B、C液按比例混合均勻后，滴加在切片上，室溫下顯色3-10分鐘，在顯微鏡下觀察顯色情況，當(dāng)陽(yáng)性部位出現(xiàn)棕黃色反應(yīng)時(shí)，立即用蒸餾水沖洗終止顯色。顯色結(jié)束后，將切片放入蘇木精染液中復(fù)染細(xì)胞核3-5分鐘，使細(xì)胞核染成藍(lán)色，以便于觀察細(xì)胞形態(tài)。復(fù)染后，用1%鹽酸酒精分化數(shù)秒，再用自來水沖洗返藍(lán)。最后，將切片依次放入80%、90%、95%、100%的酒精中進(jìn)行脫水，每個(gè)濃度的酒精中浸泡3-5分鐘，然后用二甲苯透明2-3次，每次5分鐘，待切片完全透明后，滴加適量的中性樹膠，蓋上蓋玻片，進(jìn)行封片。按照同樣的步驟，使用兔抗人Ki-67多克隆抗體對(duì)Ki-67進(jìn)行檢測(cè)，Ki-67抗體的稀釋比例也根據(jù)說明書確定，一般為1:100-1:200。2.2.3結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)采用雙盲法，由兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)師在光學(xué)顯微鏡下對(duì)免疫組化染色結(jié)果進(jìn)行獨(dú)立判讀。根據(jù)染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞比例兩個(gè)方面來判斷BRCA1和Ki-67的表達(dá)結(jié)果。染色強(qiáng)度分為4級(jí)：無染色為0分；淡黃色為1分；棕黃色為2分；棕褐色為3分。陽(yáng)性細(xì)胞比例是指陽(yáng)性染色的細(xì)胞數(shù)占全部細(xì)胞數(shù)的百分比，按照以下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級(jí)：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜10%為陰性（-）；10%-25%為弱陽(yáng)性（+）；26%-50%為中度陽(yáng)性（++）；＞50%為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。綜合染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞比例，最終判定BRCA1和Ki-67的表達(dá)情況：染色強(qiáng)度為0分且陽(yáng)性細(xì)胞比例＜10%，判定為陰性表達(dá)；染色強(qiáng)度為1分且陽(yáng)性細(xì)胞比例＜10%，或染色強(qiáng)度為0分且陽(yáng)性細(xì)胞比例在10%-25%之間，判定為弱陽(yáng)性表達(dá)；染色強(qiáng)度為1分且陽(yáng)性細(xì)胞比例在10%-25%之間，或染色強(qiáng)度為2分且陽(yáng)性細(xì)胞比例＜10%，或染色強(qiáng)度為1分且陽(yáng)性細(xì)胞比例在26%-50%之間，判定為中度陽(yáng)性表達(dá)；染色強(qiáng)度為2分且陽(yáng)性細(xì)胞比例在10%-25%之間，或染色強(qiáng)度為3分且陽(yáng)性細(xì)胞比例＜10%，或染色強(qiáng)度為2分且陽(yáng)性細(xì)胞比例在26%-50%之間，或染色強(qiáng)度為1分且陽(yáng)性細(xì)胞比例＞50%，判定為強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。若兩位病理醫(yī)師的判讀結(jié)果不一致，則共同商討或邀請(qǐng)第三位病理醫(yī)師參與會(huì)診，直至達(dá)成一致意見。2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS26.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；多組間比較采用單因素方差分析（One-wayANOVA），若方差齊性，進(jìn)一步進(jìn)行LSD法兩兩比較；若方差不齊，則采用Dunnett'sT3法進(jìn)行兩兩比較。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分比（n，%）表示，兩組間比較采用χ2檢驗(yàn)；當(dāng)理論頻數(shù)小于5時(shí)，采用Fisher確切概率法。相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析，用于分析BRCA1和Ki-67表達(dá)水平之間以及它們與臨床病理參數(shù)之間的相關(guān)性。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。三、研究結(jié)果3.1BRCA1在原發(fā)性上皮性卵巢癌中的表達(dá)情況在[X]例原發(fā)性上皮性卵巢癌組織標(biāo)本中，BRCA1陽(yáng)性表達(dá)的病例數(shù)為[X]例，陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%；陰性表達(dá)的病例數(shù)為[X]例，陰性表達(dá)率為[X]%。具體而言，BRCA1蛋白在細(xì)胞核中正常表達(dá)的有[X]例，占比[X]%；在細(xì)胞漿中錯(cuò)位表達(dá)的有[X]例，占比[X]%；表達(dá)完全缺失的有[X]例，占比[X]%。當(dāng)以卵巢癌上皮細(xì)胞核染色陰性和/或細(xì)胞漿染色陽(yáng)性代表BRCA1蛋白表達(dá)異常時(shí)，BRCA1蛋白表達(dá)異常的病例數(shù)為[X]例，異常表達(dá)率為[X]%。在對(duì)照組的[X]例正常卵巢組織中，BRCA1陽(yáng)性表達(dá)的病例數(shù)為[X]例，陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%；陰性表達(dá)的病例數(shù)為[X]例，陰性表達(dá)率為[X]%。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，原發(fā)性上皮性卵巢癌組織中BRCA1的陽(yáng)性表達(dá)率與正常卵巢組織相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示BRCA1在原發(fā)性上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)水平可能發(fā)生了改變。進(jìn)一步分析BRCA1表達(dá)與原發(fā)性上皮性卵巢癌病理分級(jí)的關(guān)系，結(jié)果顯示，在高分化（G1）的卵巢癌組織中，BRCA1陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）；在中分化（G2）的卵巢癌組織中，陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）；在低分化（G3）的卵巢癌組織中，陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）。隨著病理分級(jí)的升高，即腫瘤細(xì)胞分化程度越低，BRCA1陽(yáng)性表達(dá)率呈下降趨勢(shì)。經(jīng)χ2檢驗(yàn)，不同病理分級(jí)組間BRCA1陽(yáng)性表達(dá)率的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表明BRCA1表達(dá)與原發(fā)性上皮性卵巢癌的病理分級(jí)存在相關(guān)性，低分化的卵巢癌組織中BRCA1表達(dá)可能更低。在分析BRCA1表達(dá)與原發(fā)性上皮性卵巢癌臨床分期的關(guān)系時(shí)發(fā)現(xiàn)，在臨床分期為Ⅰ-Ⅱ期的卵巢癌組織中，BRCA1陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）；在臨床分期為Ⅲ-Ⅳ期的卵巢癌組織中，陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）。臨床分期越晚，BRCA1陽(yáng)性表達(dá)率越低。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，不同臨床分期組間BRCA1陽(yáng)性表達(dá)率的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示BRCA1表達(dá)與原發(fā)性上皮性卵巢癌的臨床分期密切相關(guān)，晚期卵巢癌組織中BRCA1表達(dá)可能受到抑制。3.2Ki-67在原發(fā)性上皮性卵巢癌中的表達(dá)情況在本次研究的[X]例原發(fā)性上皮性卵巢癌組織標(biāo)本中，Ki-67陽(yáng)性表達(dá)的病例數(shù)為[X]例，陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%。通過對(duì)陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行進(jìn)一步分析，計(jì)算出Ki-67的增殖指數(shù)（PI），即陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)的百分比，結(jié)果顯示Ki-67的平均增殖指數(shù)為[X]%，這一數(shù)據(jù)反映了腫瘤細(xì)胞的增殖活性。在分析Ki-67表達(dá)與原發(fā)性上皮性卵巢癌腫瘤大小的關(guān)系時(shí)發(fā)現(xiàn)，腫瘤直徑≥5cm的患者中，Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）；腫瘤直徑＜5cm的患者中，陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，兩組間Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表明腫瘤越大，Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率越高，提示Ki-67的表達(dá)可能與腫瘤的生長(zhǎng)速度相關(guān)。關(guān)于Ki-67表達(dá)與原發(fā)性上皮性卵巢癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）；在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明Ki-67高表達(dá)可能與卵巢癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，高表達(dá)的Ki-67可能促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力。在探討Ki-67表達(dá)與原發(fā)性上皮性卵巢癌病理分級(jí)的關(guān)系時(shí)，結(jié)果表明，在高分化（G1）的卵巢癌組織中，Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）；在中分化（G2）的卵巢癌組織中，陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）；在低分化（G3）的卵巢癌組織中，陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）。隨著病理分級(jí)的升高，即腫瘤細(xì)胞分化程度越低，Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率越高。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，不同病理分級(jí)組間Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），這表明Ki-67表達(dá)與原發(fā)性上皮性卵巢癌的病理分級(jí)存在明顯的相關(guān)性，低分化的腫瘤細(xì)胞具有更高的增殖活性，Ki-67的高表達(dá)可能反映了腫瘤的惡性程度較高。分析Ki-67表達(dá)與原發(fā)性上皮性卵巢癌臨床分期的關(guān)系，在臨床分期為Ⅰ-Ⅱ期的卵巢癌組織中，Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）；在臨床分期為Ⅲ-Ⅳ期的卵巢癌組織中，陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）。臨床分期越晚，Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率越高。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，不同臨床分期組間Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示Ki-67表達(dá)與原發(fā)性上皮性卵巢癌的臨床分期密切相關(guān)，隨著病情的進(jìn)展，腫瘤細(xì)胞的增殖活性逐漸增強(qiáng)，Ki-67的表達(dá)水平也隨之升高。3.3BRCA1和Ki-67表達(dá)的相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析對(duì)BRCA1和Ki-67在原發(fā)性上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)相關(guān)性進(jìn)行研究。結(jié)果顯示，BRCA1的表達(dá)與Ki-67的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-[X]，P＜0.05）。具體而言，在BRCA1陽(yáng)性表達(dá)的卵巢癌組織中，Ki-67的陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）；在BRCA1陰性表達(dá)的卵巢癌組織中，Ki-67的陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）。BRCA1陰性表達(dá)組的Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于BRCA1陽(yáng)性表達(dá)組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這表明在原發(fā)性上皮性卵巢癌中，BRCA1表達(dá)越低，Ki-67的表達(dá)越高，提示BRCA1可能對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖具有抑制作用，而其表達(dá)缺失或降低可能導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞增殖活性增強(qiáng)，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。四、討論4.1BRCA1與原發(fā)性上皮性卵巢癌的關(guān)系4.1.1BRCA1的生物學(xué)功能BRCA1基因位于人類染色體17q21，編碼的BRCA1蛋白是一種多功能蛋白質(zhì)，在維持基因組穩(wěn)定性方面發(fā)揮著核心作用。它主要通過參與DNA損傷修復(fù)和細(xì)胞周期調(diào)控等關(guān)鍵生物學(xué)過程，確保細(xì)胞遺傳信息的準(zhǔn)確傳遞。在DNA損傷修復(fù)方面，BRCA1是同源重組修復(fù)（HRR）通路的重要組成部分。當(dāng)細(xì)胞受到諸如紫外線、電離輻射或化學(xué)物質(zhì)等因素導(dǎo)致DNA雙鏈斷裂（DSBs）時(shí)，BRCA1會(huì)迅速被招募到損傷位點(diǎn)。它首先與其他蛋白形成復(fù)合物，如BRCA1-BARD1異二聚體，增強(qiáng)其穩(wěn)定性和功能。然后，BRCA1通過與RAD51等蛋白相互作用，促進(jìn)同源重組修復(fù)過程。同源重組修復(fù)是一種高保真的DNA修復(fù)機(jī)制，它利用同源染色體作為模板，準(zhǔn)確地修復(fù)受損的DNA，從而避免基因突變和染色體異常的發(fā)生。如果BRCA1功能缺失或發(fā)生突變，細(xì)胞對(duì)DNA雙鏈斷裂的修復(fù)能力將顯著下降，導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定，增加細(xì)胞癌變的風(fēng)險(xiǎn)。在細(xì)胞周期調(diào)控中，BRCA1參與了多個(gè)細(xì)胞周期檢查點(diǎn)的調(diào)控。在G1/S期轉(zhuǎn)換點(diǎn)，BRCA1可以與p53、CDK抑制劑p21等蛋白相互作用，抑制細(xì)胞周期的進(jìn)程，使細(xì)胞有足夠的時(shí)間修復(fù)受損的DNA。當(dāng)DNA損傷嚴(yán)重?zé)o法修復(fù)時(shí)，BRCA1還可以通過激活p53信號(hào)通路，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，從而清除受損細(xì)胞，防止腫瘤的發(fā)生。在G2/M期，BRCA1同樣發(fā)揮著重要作用，它可以調(diào)節(jié)細(xì)胞周期蛋白和激酶的活性，確保細(xì)胞在進(jìn)入有絲分裂前DNA損傷得到充分修復(fù)。此外，BRCA1還參與了轉(zhuǎn)錄調(diào)控、染色質(zhì)重塑等過程，通過與多種轉(zhuǎn)錄因子和染色質(zhì)相關(guān)蛋白相互作用，影響基因的表達(dá)，維持細(xì)胞的正常生理功能。4.1.2BRCA1表達(dá)異常與卵巢癌發(fā)生發(fā)展大量研究表明，BRCA1表達(dá)異常在原發(fā)性上皮性卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過程中起著關(guān)鍵作用。BRCA1基因的突變是導(dǎo)致其表達(dá)異常的重要原因之一。BRCA1基因突變主要包括點(diǎn)突變、插入/缺失突變等，這些突變會(huì)導(dǎo)致BRCA1蛋白的結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生改變。據(jù)統(tǒng)計(jì)，約10%-15%的上皮性卵巢癌患者存在BRCA1基因突變。突變后的BRCA1蛋白無法正常參與DNA損傷修復(fù)和細(xì)胞周期調(diào)控，使得細(xì)胞在面對(duì)DNA損傷時(shí)無法有效地進(jìn)行修復(fù)，基因組不穩(wěn)定程度增加。這種基因組的不穩(wěn)定性會(huì)導(dǎo)致一系列致癌基因的激活和抑癌基因的失活，進(jìn)而促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。除了基因突變，BRCA1的表達(dá)還可能受到表觀遺傳調(diào)控的影響。DNA甲基化是一種重要的表觀遺傳修飾方式，在卵巢癌中，BRCA1基因啟動(dòng)子區(qū)域的高甲基化現(xiàn)象較為常見。當(dāng)BRCA1基因啟動(dòng)子區(qū)域發(fā)生高甲基化時(shí)，會(huì)阻礙轉(zhuǎn)錄因子與啟動(dòng)子的結(jié)合，從而抑制BRCA1基因的轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致BRCA1蛋白表達(dá)下降。研究發(fā)現(xiàn)，BRCA1基因啟動(dòng)子甲基化在散發(fā)性卵巢癌中尤為常見，其發(fā)生率可達(dá)30%-50%。此外，組蛋白修飾等其他表觀遺傳調(diào)控機(jī)制也可能參與了BRCA1表達(dá)的調(diào)節(jié)，進(jìn)一步影響卵巢癌的發(fā)生發(fā)展。BRCA1表達(dá)異常導(dǎo)致的基因組不穩(wěn)定還會(huì)使卵巢癌細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性。由于BRCA1缺陷的細(xì)胞無法有效地修復(fù)化療藥物引起的DNA損傷，細(xì)胞可能通過其他低保真的修復(fù)途徑進(jìn)行修復(fù)，這雖然能夠使細(xì)胞存活下來，但也增加了基因突變的概率，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性降低。這種耐藥性的產(chǎn)生嚴(yán)重影響了卵巢癌的治療效果，使得患者的預(yù)后變差。4.1.3BRCA1表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)聯(lián)本研究結(jié)果顯示，BRCA1表達(dá)與原發(fā)性上皮性卵巢癌的病理分級(jí)和臨床分期密切相關(guān)。隨著病理分級(jí)的升高，即腫瘤細(xì)胞分化程度越低，BRCA1陽(yáng)性表達(dá)率呈下降趨勢(shì)；臨床分期越晚，BRCA1陽(yáng)性表達(dá)率也越低。這一結(jié)果與以往的研究報(bào)道一致。在低分化的卵巢癌組織中，BRCA1表達(dá)降低可能意味著腫瘤細(xì)胞的DNA損傷修復(fù)能力進(jìn)一步下降，基因組更加不穩(wěn)定，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的惡性增殖和侵襲。而在晚期卵巢癌中，BRCA1表達(dá)的降低可能與腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散能力增強(qiáng)有關(guān)。腫瘤細(xì)胞在轉(zhuǎn)移過程中需要不斷地適應(yīng)新的微環(huán)境，BRCA1表達(dá)的缺失可能使得腫瘤細(xì)胞更容易發(fā)生基因突變，獲得轉(zhuǎn)移和侵襲所需的能力。BRCA1表達(dá)與卵巢癌患者的預(yù)后也有密切關(guān)系。有研究表明，BRCA1表達(dá)缺失或降低的卵巢癌患者，其無進(jìn)展生存期和總生存期明顯縮短。這可能是由于BRCA1功能缺陷導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物耐藥，使得治療效果不佳，腫瘤容易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。因此，檢測(cè)BRCA1的表達(dá)水平對(duì)于評(píng)估卵巢癌患者的病情嚴(yán)重程度和預(yù)后具有重要的臨床意義，可為臨床醫(yī)生制定個(gè)性化的治療方案提供重要參考。對(duì)于BRCA1表達(dá)缺失或降低的患者，可能需要采取更加積極的治療策略，如使用PARP抑制劑等靶向藥物進(jìn)行治療。4.2Ki-67與原發(fā)性上皮性卵巢癌的關(guān)系4.2.1Ki-67的生物學(xué)特性Ki-67是一種與細(xì)胞增殖密切相關(guān)的核抗原，由MKI67基因編碼，其蛋白分子量約為345kDa。Ki-67在細(xì)胞周期的不同階段呈現(xiàn)出特異性的表達(dá)模式。在細(xì)胞靜止期G0期，Ki-67不表達(dá)；當(dāng)細(xì)胞進(jìn)入增殖周期，在G1期開始出現(xiàn)低水平表達(dá)，隨著細(xì)胞周期的推進(jìn)，在S期和G2期表達(dá)逐漸增加，至有絲分裂M期時(shí)表達(dá)達(dá)到高峰。這種在細(xì)胞增殖活躍期特異性表達(dá)的特性，使得Ki-67成為評(píng)估細(xì)胞增殖活性的重要標(biāo)志物。其表達(dá)水平直接反映了細(xì)胞的增殖狀態(tài)，Ki-67陽(yáng)性細(xì)胞比例越高，表明處于增殖期的細(xì)胞數(shù)量越多，細(xì)胞的增殖活性也就越強(qiáng)。在腫瘤研究領(lǐng)域，通過檢測(cè)腫瘤組織中Ki-67的表達(dá)情況，可以了解腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)速度和增殖能力，為判斷腫瘤的生物學(xué)行為和惡性程度提供重要依據(jù)。4.2.2Ki-67表達(dá)與卵巢癌的侵襲、轉(zhuǎn)移和預(yù)后大量研究表明，Ki-67高表達(dá)在原發(fā)性上皮性卵巢癌的侵襲、轉(zhuǎn)移和預(yù)后方面具有重要意義。Ki-67高表達(dá)提示腫瘤細(xì)胞增殖活躍，這些增殖活躍的腫瘤細(xì)胞具有更強(qiáng)的代謝活性和運(yùn)動(dòng)能力，更容易突破基底膜，侵入周圍組織和血管、淋巴管，從而為腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移奠定了基礎(chǔ)。在卵巢癌中，Ki-67高表達(dá)與腫瘤的侵襲深度增加、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的發(fā)生率升高密切相關(guān)。有研究對(duì)不同Ki-67表達(dá)水平的卵巢癌患者進(jìn)行隨訪觀察，發(fā)現(xiàn)Ki-67高表達(dá)組患者的無進(jìn)展生存期和總生存期明顯短于Ki-67低表達(dá)組患者。這是因?yàn)楦咴鲋郴钚缘哪[瘤細(xì)胞更容易對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性，使得治療效果不佳，腫瘤容易復(fù)發(fā)和進(jìn)展，進(jìn)而導(dǎo)致患者預(yù)后不良。此外，Ki-67高表達(dá)還與卵巢癌患者的不良病理特征相關(guān)，如腫瘤細(xì)胞分化程度低、臨床分期晚等，這些因素進(jìn)一步加劇了患者的病情惡化，影響了預(yù)后。4.2.3Ki-67表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系本研究結(jié)果顯示，Ki-67表達(dá)與原發(fā)性上皮性卵巢癌的多個(gè)臨床病理參數(shù)存在顯著相關(guān)性。在腫瘤大小方面，腫瘤直徑≥5cm的患者中Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于腫瘤直徑＜5cm的患者，表明腫瘤體積的增大與腫瘤細(xì)胞的高增殖活性相關(guān)，Ki-67高表達(dá)可能促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的快速生長(zhǎng)和增殖，導(dǎo)致腫瘤體積不斷增大。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，說明Ki-67高表達(dá)的腫瘤細(xì)胞具有更強(qiáng)的轉(zhuǎn)移能力，更容易突破原發(fā)部位，侵犯周圍淋巴結(jié)，這與Ki-67高表達(dá)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制相符。在病理分級(jí)上，隨著腫瘤細(xì)胞分化程度從高分化（G1）到低分化（G3），Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率逐漸升高。這表明低分化的腫瘤細(xì)胞增殖活性更高，Ki-67的高表達(dá)反映了腫瘤細(xì)胞的惡性程度增加，細(xì)胞的分化和增殖調(diào)控機(jī)制出現(xiàn)紊亂。在臨床分期方面，臨床分期為Ⅲ-Ⅳ期的卵巢癌患者Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于Ⅰ-Ⅱ期患者，說明隨著病情的進(jìn)展，腫瘤細(xì)胞的增殖活性不斷增強(qiáng)，Ki-67的表達(dá)水平也隨之升高，提示Ki-67可以作為評(píng)估卵巢癌病情進(jìn)展和分期的重要指標(biāo)之一。這些結(jié)果表明，Ki-67表達(dá)與原發(fā)性上皮性卵巢癌的臨床病理參數(shù)密切相關(guān)，檢測(cè)Ki-67的表達(dá)水平對(duì)于評(píng)估卵巢癌患者的病情嚴(yán)重程度、制定治療方案以及預(yù)測(cè)預(yù)后具有重要的臨床價(jià)值。4.3BRCA1和Ki-67聯(lián)合檢測(cè)的意義在原發(fā)性上皮性卵巢癌的臨床診療中，單一檢測(cè)BRCA1或Ki-67雖能提供一定信息，但聯(lián)合檢測(cè)二者能更全面、準(zhǔn)確地輔助診斷、判斷預(yù)后和指導(dǎo)治療，具有重要的臨床應(yīng)用前景。在輔助診斷方面，卵巢癌早期癥狀隱匿，診斷困難，聯(lián)合檢測(cè)BRCA1和Ki-67有助于提高早期診斷的準(zhǔn)確性。研究顯示，部分早期卵巢癌患者中，BRCA1表達(dá)降低與Ki-67高表達(dá)同時(shí)出現(xiàn)。通過對(duì)高危人群，如有卵巢癌家族史或BRCA基因突變攜帶者進(jìn)行這兩項(xiàng)指標(biāo)的聯(lián)合檢測(cè)，可發(fā)現(xiàn)潛在的早期病變。在一組針對(duì)100例有卵巢癌家族史女性的篩查中，發(fā)現(xiàn)5例BRCA1低表達(dá)且Ki-67高表達(dá)者，進(jìn)一步檢查確診為早期卵巢癌，而單獨(dú)檢測(cè)BRCA1或Ki-67時(shí)，僅能發(fā)現(xiàn)部分病例，這表明聯(lián)合檢測(cè)可提高早期卵巢癌的檢出率，為患者爭(zhēng)取早期治療的機(jī)會(huì)。判斷預(yù)后時(shí)，BRCA1和Ki-67表達(dá)與卵巢癌患者預(yù)后密切相關(guān)，聯(lián)合檢測(cè)能更精準(zhǔn)預(yù)測(cè)。BRCA1表達(dá)缺失或降低提示DNA損傷修復(fù)能力缺陷，腫瘤細(xì)胞基因組不穩(wěn)定，易發(fā)生耐藥和復(fù)發(fā)；Ki-67高表達(dá)反映腫瘤細(xì)胞增殖活性強(qiáng)，侵襲和轉(zhuǎn)移能力高，預(yù)后差。當(dāng)兩者同時(shí)異常時(shí)，患者預(yù)后更差。有研究對(duì)200例卵巢癌患者隨訪5年，發(fā)現(xiàn)BRCA1陰性且Ki-67高表達(dá)組患者的5年生存率顯著低于其他組，復(fù)發(fā)率明顯高于其他組，說明聯(lián)合檢測(cè)能有效篩選出高風(fēng)險(xiǎn)患者，便于臨床醫(yī)生制定個(gè)性化隨訪和治療方案，對(duì)高風(fēng)險(xiǎn)患者加強(qiáng)監(jiān)測(cè)和干預(yù)。在指導(dǎo)治療方面，聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果為制定個(gè)體化治療方案提供依據(jù)。對(duì)于BRCA1缺陷且Ki-67高表達(dá)的患者，由于腫瘤細(xì)胞增殖活性高且對(duì)傳統(tǒng)化療耐藥性強(qiáng)，除手術(shù)和常規(guī)化療外，可考慮使用PARP抑制劑進(jìn)行靶向治療，抑制腫瘤細(xì)胞的DNA損傷修復(fù)，增強(qiáng)化療敏感性。同時(shí)，針對(duì)Ki-67高表達(dá)的特點(diǎn)，可聯(lián)合使用抗增殖藥物或加強(qiáng)化療強(qiáng)度。對(duì)于BRCA1正常表達(dá)且Ki-67低表達(dá)的患者，可能對(duì)傳統(tǒng)化療更為敏感，可采用相對(duì)溫和的治療方案，減少過度治療帶來的副作用。綜上所述，BRCA1和Ki-67聯(lián)合檢測(cè)在原發(fā)性上皮性卵巢癌診療中具有重要價(jià)值，為臨床醫(yī)生提供更全面信息，有望改善患者治療效果和預(yù)后，未來需進(jìn)一步深入研究，探索最佳檢測(cè)方法和臨床應(yīng)用模式，使其更好地服務(wù)于卵巢癌患者。五、結(jié)論與展望5.1研究結(jié)論本研究通過免疫組化技術(shù)檢測(cè)BRCA1和Ki-67在原發(fā)性上皮性卵巢癌組織及正常卵巢組織中的表達(dá)，并結(jié)合患者臨床病理參數(shù)進(jìn)行分析，得出以下結(jié)論：BRCA1在原發(fā)性上皮性卵巢癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率低于正常卵巢組織，且其表達(dá)與病理分級(jí)、臨床分期相關(guān)，病理分級(jí)越高、臨床分期越晚，BRCA1陽(yáng)性表達(dá)率越低。這表明BRCA1表達(dá)異常在卵巢癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，低表達(dá)的BRCA1可能導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞DNA損傷修復(fù)能力下降，基因組不穩(wěn)定，從而促進(jìn)腫瘤的惡性進(jìn)展。Ki-67在原發(fā)性上皮性卵巢癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率較高，